Name: פנוטיפי אנליזה פונקציונלית של תאים תקינה T הופעל מבודדת מן עכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית Choriomeningitis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: למדו להעריך את הפעילות המדכאת של תאי T רגולטוריים מבודדים מעכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית. שיטה זו מאפשרת ניתוח פנוטיפי ופונקציונלי של תאי T reg בתרבית in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המחקר המדעי הבסיסי באמצעות קרן המחקר הלאומית של קוריאה (NRF) במימון משרד החינוך (2015R1A6A3A01020610 ל-HJP) ומענק מפרויקט המו"פ של טכנולוגיית הבריאות הקוריאנית, משרד הבריאות, הרווחה וענייני המשפחה, הרפובליקה של קוריאה (HI15C0493 ל-SJH).

<ol><li>Hori, S., Nomura, T., Sakaguchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+regulatory+T+cell+development+by+the+transcription+factor+Foxp3%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3.</a> Science. 299 (5609), 1057-1061 (2003).</li>
<li>Sakaguchi, S., Sakaguchi, N., Asano, M., Itoh, M., Toda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+self-tolerance+maintained+by+activated+T+cells+expressing+IL-2+receptor+alpha-chains+%28CD25%29.+Breakdown+of+a+single+mechanism+of+self-tolerance+causes+various+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases.</a> J Immunol. 155 (3), 1151-1164 (1995).</li>
<li>Huang, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+LAG-3+in+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Role of LAG-3 in regulatory T cells.</a> Immunity. 21 (4), 503-513 (2004).</li>
<li>McHugh, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29CD25%28%2B%29+immunoregulatory+T+cells%3A+gene+expression+analysis+reveals+a+functional+role+for+the+glucocorticoid-induced+TNF+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CD4(+)CD25(+) immunoregulatory T cells: gene expression analysis reveals a functional role for the glucocorticoid-induced TNF receptor.</a> Immunity. 16 (2), 311-323 (2002).</li>
<li>Takahashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+self-tolerance+maintained+by+CD25%28%2B%29CD4%28%2B%29+regulatory+T+cells+constitutively+expressing+cytotoxic+T+lymphocyte-associated+antigen+4%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Immunologic self-tolerance maintained by CD25(+)CD4(+) regulatory T cells constitutively expressing cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4.</a> J Exp Med. 192 (2), 303-310 (2000).</li>
<li>Manigold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxp3%2BCD4%2BCD25%2B+T+cells+control+virus-specific+memory+T+cells+in+chimpanzees+that+recovered+from+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22C.+Blood%22%5BJournal%5D)">Foxp3+CD4+CD25+ T cells control virus-specific memory T cells in chimpanzees that recovered from hepatitis.</a> C. Blood. 107 (11), 4424-4432 (2006).</li>
<li>Andersson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+regulatory+T+cells+in+lymphoid+tissue+is+correlated+with+viral+load+in+HIV-infected+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The prevalence of regulatory T cells in lymphoid tissue is correlated with viral load in HIV-infected patients.</a> J Immunol. 174 (6), 3143-3147 (2005).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29CD25%28%2B%29FoxP3%28%2B%29+regulatory+T+cells+suppress+Mycobacterium+tuberculosis+immunity+in+patients+with+active+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD4(+)CD25(+)FoxP3(+) regulatory T cells suppress Mycobacterium tuberculosis immunity in patients with active disease.</a> Clin Immunol. 123 (1), 50-59 (2007).</li>
<li>Shafiani, S., Tucker-Heard, G., Kariyone, A., Takatsu, K., Urdahl, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-specific+regulatory+T+cells+delay+the+arrival+of+effector+T+cells+in+the+lung+during+early+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Pathogen-specific regulatory T cells delay the arrival of effector T cells in the lung during early tuberculosis.</a> J Exp Med. 207 (7), 1409-1420 (2010).</li>
<li>Belkaid, Y., Piccirillo, C. A., Mendez, S., Shevach, E. M., Sacks, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2B+regulatory+T+cells+control+Leishmania+major+persistence+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+ regulatory T cells control Leishmania major persistence and immunity.</a> Nature. 420 (6915), 502-507 (2002).</li>
<li>Grainger, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helminth+secretions+induce+de+novo+T+cell+Foxp3+expression+and+regulatory+function+through+the+TGF-beta+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Helminth secretions induce de novo T cell Foxp3 expression and regulatory function through the TGF-beta pathway.</a> J Exp Med. 207 (11), 2331-2341 (2010).</li>
<li>cells in helminth infection: the regulators and the regulated. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Trends+Immunol%22">Trends Immunol</a>. Taylor, M. D., van der Werf, N., Maizels, R. M. 33 (4), 181-189 (2012).</li>
<li>You, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+regulatory+T+cells+potently+abrogate+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor regulatory T cells potently abrogate antitumor immunity.</a> J Immunol. 182 (10), 6160-6167 (2009).</li>
<li>Curiel, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+recruitment+of+regulatory+T+cells+in+ovarian+carcinoma+fosters+immune+privilege+and+predicts+reduced+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival.</a> Nat Med. 10 (9), 942-949 (2004).</li>
<li>Dittmer, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+impairment+of+CD8%28%2B%29+T+cells+by+regulatory+T+cells+during+persistent+retroviral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Functional impairment of CD8(+) T cells by regulatory T cells during persistent retroviral infection.</a> Immunity. 20 (3), 293-303 (2004).</li>
<li>Robertson, S. J., Messer, R. J., Carmody, A. B., Hasenkrug, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+suppression+of+CD8%2B+T+cell+function+by+Friend+virus-induced+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">In vitro suppression of CD8+ T cell function by Friend virus-induced regulatory T cells.</a> J Immunol. 176 (6), 3342-3349 (2006).</li>
<li>Iwashiro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+by+CD4%2B+regulatory+T+cells+induced+by+chronic+retroviral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression by CD4+ regulatory T cells induced by chronic retroviral infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (16), 9226-9230 (2001).</li>
<li>Suvas, S., Kumaraguru, U., Pack, C. D., Lee, S., Rouse, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2B+T+cells+regulate+virus-specific+primary+and+memory+CD8%2B+T+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+ T cells regulate virus-specific primary and memory CD8+ T cell responses.</a> J Exp Med. 198 (6), 889-901 (2003).</li>
<li>Suvas, S., Azkur, A. K., Kim, B. S., Kumaraguru, U., Rouse, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2B+regulatory+T+cells+control+the+severity+of+viral+immunoinflammatory+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+ regulatory T cells control the severity of viral immunoinflammatory lesions.</a> J Immunol. 172 (7), 4123-4132 (2004).</li>
<li>Veiga-Parga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+regulatory+T+cells+during+viral-induced+inflammatory+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">On the role of regulatory T cells during viral-induced inflammatory lesions.</a> J Immunol. 189 (12), 5924-5933 (2012).</li>
<li>Wherry, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+signature+of+CD8%2B+T+cell+exhaustion+during+chronic+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Molecular signature of CD8+ T cell exhaustion during chronic viral infection.</a> Immunity. 27 (4), 670-684 (2007).</li>
<li>Jin, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperation+of+Tim-3+and+PD-1+in+CD8+T-cell+exhaustion+during+chronic+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cooperation of Tim-3 and PD-1 in CD8 T-cell exhaustion during chronic viral infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14733-14738 (2010).</li>
<li>Punkosdy, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T-cell+expansion+during+chronic+viral+infection+is+dependent+on+endogenous+retroviral+superantigens%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Regulatory T-cell expansion during chronic viral infection is dependent on endogenous retroviral superantigens.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (9), 3677-3682 (2011).</li>
<li>Blackburn, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coregulation+of+CD8%2B+T+cell+exhaustion+by+multiple+inhibitory+receptors+during+chronic+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Coregulation of CD8+ T cell exhaustion by multiple inhibitory receptors during chronic viral infection.</a> Nat Immunol. 10 (1), 29-37 (2009).</li>
<li>Park, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1+upregulated+on+regulatory+T+cells+during+chronic+virus+infection+enhances+the+suppression+of+CD8%2B+T+cell+immune+response+via+the+interaction+with+PD-L1+expressed+on+CD8%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">PD-1 upregulated on regulatory T cells during chronic virus infection enhances the suppression of CD8+ T cell immune response via the interaction with PD-L1 expressed on CD8+ T cells.</a> J Immunol. 194 (12), 5801-5811 (2015).</li>
<li>Virgin, H. W., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+chronic+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Redefining chronic viral infection.</a> Cell. 138 (1), 30-50 (2009).</li>
<li>Penaloza-MacMaster, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+regulatory+T+cells+and+PD-1+in+modulating+T+cell+exhaustion+and+viral+control+during+chronic+LCMV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Interplay between regulatory T cells and PD-1 in modulating T cell exhaustion and viral control during chronic LCMV infection.</a> J Exp Med. 211 (9), 1905-1918 (2014).</li>
<li>Chang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin+ligase+Peli1+negatively+regulates+T+cell+activation+and+prevents+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin ligase Peli1 negatively regulates T cell activation and prevents autoimmunity.</a> Nat Immunol. 12 (10), 1002-1009 (2011).</li>
<li>Krishnamoorthy, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+infection+with+respiratory+syncytial+virus+impairs+regulatory+T+cell+function+and+increases+susceptibility+to+allergic+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Early infection with respiratory syncytial virus impairs regulatory T cell function and increases susceptibility to allergic asthma.</a> Nat Med. 18 (10), 1525-1530 (2012).</li>
<li>Yadav, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropilin-1+distinguishes+natural+and+inducible+regulatory+T+cells+among+regulatory+T+cell+subsets+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Neuropilin-1 distinguishes natural and inducible regulatory T cells among regulatory T cell subsets in vivo.</a> J Exp Med. 209 (10), 1713-1722 (2012).</li>
<li>Tai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basis+of+CTLA-4+function+in+regulatory+and+conventional+CD4%28%2B%29+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Basis of CTLA-4 function in regulatory and conventional CD4(+) T cells.</a> Blood. 119 (22), 5155-5163 (2012).</li>
<li>Rushbrook, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+suppress+in+vitro+proliferation+of+virus-specific+CD8%2B+T+cells+during+persistent+hepatitis+C+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8+ T cells during persistent hepatitis C virus infection.</a> J Virol. 79 (12), 7852-7859 (2005).</li>
<li>Sekiya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuclear+orphan+receptor+Nr4a2+induces+Foxp3+and+regulates+differentiation+of+CD4%5BTitle%5D)+AND+%22T+cells.+Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The nuclear orphan receptor Nr4a2 induces Foxp3 and regulates differentiation of CD4.</a> T cells. Nat Commun. 2 (269), (2011).</li>
<li>Merianos, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+alloantibodies+induce+a+postnatal+immune+response+that+limits+engraftment+following+in+utero+hematopoietic+cell+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Maternal alloantibodies induce a postnatal immune response that limits engraftment following in utero hematopoietic cell transplantation in mice.</a> J Clin Invest. 119 (9), 2590-2600 (2009).</li>
<li>Allakhverdi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CD103+identifies+human+regulatory+T-cell+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of CD103 identifies human regulatory T-cell subsets.</a> J Allergy Clin Immunol. 118 (6), 1342-1349 (2006).</li>
<li>Camisaschi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LAG-3+expression+defines+a+subset+of+CD4%28%2B%29CD25%28high%29Foxp3%28%2B%29+regulatory+T+cells+that+are+expanded+at+tumor+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">LAG-3 expression defines a subset of CD4(+)CD25(high)Foxp3(+) regulatory T cells that are expanded at tumor sites.</a> J Immunol. 184 (11), 6545-6551 (2010).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+GARP+selectively+identifies+activated+human+FOXP3%2B+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Expression of GARP selectively identifies activated human FOXP3+ regulatory T cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (32), 13439-13444 (2009).</li>
<li>Myers, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-2-independent+and+TNF-alpha-dependent+expansion+of+Vbeta5%2B+natural+regulatory+T+cells+during+retrovirus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-2-independent and TNF-alpha-dependent expansion of Vbeta5+ natural regulatory T cells during retrovirus infection.</a> J Immunol. 190 (11), 5485-5495 (2013).</li>
</ol>

ל-S.-J.H. יש פטנט והיא מקבלת תמלוגים על פטנטים הקשורים למסלול PD-1. לכותבים האחרים אין ניגודי אינטרסים כספיים.

אמנם רק מספר קטן של תאי רג T קיים בעכברים ובבני אדם, חשוב להבין את תפקידם כפי שהם ממלאים תפקיד מכריע בויסות התגובה החיסונית ושמירת סובלנות חיסונית. מספר הפונקציות מדכאות של T רג עליות תאים במהלך זיהום בנגיף כרוני 15-20 וכן התקדמות סרטן 13,14. זהו ככל הנראה עקב גירוי אנטיגן המשיך. כדי להעריך את T reg תאים לתפקד תחת התמדת אנטיגן ופיתוח מחלה, הפעילות המדכאת שלהם צריכה להימדד. <p class="jove_content" style=";text-align:right;d...

T רגולטוריים (T reg) תאים להביע forkhead תיבת P3 (Foxp3) כגורם שעתוק להתפתחותם ותפקוד 1. בנוסף, תאים רג T לבטא מולקולות שונות אחרות כגון CD25 2, הלימפוציטים-הפעלת הגן 3 (LAG-3) 3, TNF-induced בסטרואידים קולטן 4, ו T ציטוטוקסיים לימפוציט הקשורים חלבון 4 (CTLA-4) 5 על פני השטח או באזור התאי שלהם. במהלך זיהום כרוני עם סוגים שונים של פתוגנים כמו וירוסים 6,7, חיידקים 8,9, וטפילי 10-12, או במהלך התפתחות סרטן 13,14, תאי רג T נעשים שונים לתאים מופעלים, מוצגים פונקציה מדכאת משופרת מיקוד מפעיל CD4 + ו- CD8 + T תאים. מספר העיתונים הציע כי תאי T reg מורחבים והופעלו לתרום respons תא CD8 + T לקוידואר במהלך רטרו-וירוס חבר (ע&quot;ע) זיהום 15-17. FV-induced תאי רג T לעכב IFN-γ או ביטוי granzyme B תגובתיות ציטוטוקסיות של תאי CD8 + T 15-17. יתר על כן, במודל זיהום בנגיף הרפס סימפלקס, נמסר דלדול של תאי reg CD4 + CD25 + T הביא להרחבת תאים + T CD8 ספציפי וירוס ניזק לרקמות קשה על ידי חדירה של תאי immunopathogenic CD4 + T 18-20. עכברים נגועים באופן כרוני עם זן שיבוט 13 של וירוס choriomeningitis לימפוציטית (LCMV CL13) 21-24 היה בשימוש נרחב כדי לאפיין את הפנוטיפ ותפקוד של תאי T המפעיל (EFF T) ותאי T reg במהלך זיהום בנגיף כרוני. במהלך זיהום LCMV מתמשך, תאי T eff-ספציפי וירוס בהדרגה לאבד פונקצית המפעיל שלהם ולהיות T מותש (exh T) תאים. מצד שני, Tתאים reg לחזק את יכולתם לדכא T בתגובה תאים ספציפיים וירוס 25. הירידה ביכולת התפקוד של תאי T EFF יכולה להיות מוסברת על ידי מספר גורמים כגון גברת ביטוי של קולטנים מעכבים על תאי EFF T, פונקציה שינתה של תאי מציגי אנטיגן, ייצור של ציטוקינים immunoregulatory, ותדירות מוגברת או פונקציה משופרת של רג T תאים 26. בין הגורמים המעורבים דיכוי של תאי T, מתוכנת בתא הנידונים למוות חלבון-1 (PD-1) תאי T exh -expressing ותאי רג T כבר נחשב בעיני רבים מסימני ההיכר של התמדה אנטיגן וסביבה מדכאים. לאחרונה, דווח כי מצור של המסלול PD-1 ו אבלציה של תאי רג T להוביל תפקוד תא T משופר וירידת עומס נגיפי במהלך הזיהום הכרוני LCMV 27. יתר על כן, תאי רג T מופעלים במהלך זיהום כרוני של עכברים עם LCMV 23,25 </sעד&gt; והתפקוד המדכא שלהם מתחזק 25. PD-1 מבוטא בכמות גבוהה בתאי רג T וכן תאי exh T, ורמת PD-1 הביע ידי תאי T reg בקורלציה עם עוצמת הפונקציה המדכאת שלהם לעכב T תא התפשטות 25. כאן אנו מתארים שיטה כדי להשוות את המאפיינים של תאי T reg מופעלים מבודדים עכברים נגועים עם LCMV CL13 ותאי reg מנוחת T מבודד מעכברים נאיביים. יתר על כן, נסביר שורה של תהליכים להפריד תאי רג T מופעלים ולבחון vivo לשעבר הפנוטיפ שלהם, כמו גם למדוד את הפעילות המדכאת שלהם במבחנה.

<table><tbody><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse CD4</td><td>RM4-5</td><td>BD Biosciences</td><td>553047</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td></tr><tr><td>U-Bottom Tissue Culture Plates</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>353077</td></tr><tr><td>מאגר</td><td></td> קיבוע <td>BD Biosciences</td><td>554655</td></tr><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse CD25</td><td>7D4</td><td>BD Biosciences</td><td>553072</td></tr><tr><td>מסננת תאים, 70 מ"מ</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td></tr><tr><td>מסננת תאים, 40 מ"מ</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td></tr><tr><td>סגול מבריק 421 נגד עכבר CD279 (PD-1)</td><td>29F.1A12</td><td>BioLegend</td><td>135217</td></tr><tr><td>סגול מבריק 605 נגד עכבר CD4</td><td>RM4-5</td><td>Biolegend</td><td>100547</td></tr><tr><td>APC נגד עכבר/עכברוש Foxp3&nbsp;</td><td>FJK-16s</td><td>eBioscience</td><td>17-5773</td></tr><tr><td>Foxp3/סט מאגר</td><td></td> צביעה של גורם שעתוק <td>eBioscience</td><td>00-5223</td></tr><tr><td>PerCP-Cyanine5.5 Anti-Mouse CD8a</td><td>53-6.7</td><td>eBiosicence</td><td>45-0081</td></tr><tr><td>עכבר IFN-gamma פלטינה ELISA</td><td></td><td>eBiosicence</td><td>BMS606</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td></td><td>GE מדעי החיים</td><td>SH30027</td></tr><tr><td>PBS (1x)</td><td></td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30256</td></tr><tr><td>חוצץ</td><td></td> ליזינג <td>ACK Gibco</td><td>A10492-01</td></tr><tr><td>L-גלוטמין, תמיסה של 200 מ"מ</td><td>Gibco&nbsp;</td><td></td><td>25030</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין, 10,000 יח'/מ"ל</td><td></td><td>גיבקו&nbsp;</td><td>ברקוד 10378-016</td></tr><tr><td>ערכת כתמי תאים מתים LIVE/DEAD הניתנת לתיקון קרוב ל-IR טכנולוגיות</td><td></td><td>חיים</td><td>L-34975</td></tr><tr><td>CD8a+ ערכת בידוד תאי T, עכבר</td><td></td><td>Miltenyibiotec</td><td>130-104-075</td></tr><tr><td>CD4+ CD25+ ערכת בידוד תאי T רגולטורית, עכבר</td><td></td><td>Miltenyibiotec</td><td>130-091-041</td></tr><tr><td>עמודות הפרדה MACS, עמודות</td><td></td> <td>LDMiltenyibiotec</td><td>130-042-901</td></tr><tr><td>עמודות הפרדה MACS, עמודות</td><td></td> LS <td>Miltenyibiotec</td><td>130-042-401</td></tr><tr><td>EDTA, 0.5 M (pH 8.0)</td><td></td><td>Promega</td><td>V4231</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td></td><td>Sigma Life Science</td><td>M7522</td></tr><tr><td>סרום</td><td></td> בקר <td>עוברי תרמו פישר Scientific</td><td>SH30919.03</td></tr><tr><td>ערכת</td> <td>ריבוי תאים סגולים של CellTrace</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>C34557</td></tr><tr><td>BD Canto II זרימה ציטומטר</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo</td><td></td><td>TreeStar</td><td></td></tr><tr><td>המטוציטומר</td><td></td><td>מרינפלד מעולה</td><td></td></tr></tbody></table>

פנוטיפי אנליזה פונקציונלית של תאים תקינה t הופעל מבודדת מן עכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית choriomeningitis

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

T רגולטוריים (T reg) תאים, המבטאים Foxp3 כגורם שעתוק, הם תת קבוצות של תאים מסוג CD4 + T. תאי רג T לשחק תפקידים מכריעים בסובלנות חיסונית ותחזוקה הומאוסטזיס על ידי ויסות התגובה החיסונית. התפקיד העיקרי של תאי T reg היא לדכא התפשטות של מפעיל T (EFF T) התאים ואת הייצור של ציטוקינים כגון IFN-γ, TNF-α, IL-2. הוכח כי היכולת של תאי רג T לעכב את תפקודם של תאי EFF T מוגברת במהלך זיהום הפתוגן מתמשך התפתחות הסרטן. כדי להבהיר את תפקודם של תאי רג T בתנאי מנוחה או מודלק, מגוון של מבחני דיכוי במבחנה באמצעות תאי reg עכבר או אדם T כבר המציא. המטרה העיקרית של המחקר היא לפתח שיטה כדי להשוות את ההבדלים הפנוטיפ ותפקוד מדכא בין מנוחת רג T מופעלתאים. כדי לבודד תאי רג T מופעלים, עכברים נדבקו בנגיף choriomeningitis לימפוציטית (LCMV) השיבוט 13 (CL13), זן כרוני של LCMV. תאי רג T המבודדים מן הטחול של LCMV עכברי CL13 נגועים הציגו הוא הפנוטיפ מופעל ופעילות מדכאת משופרת בהשוואת נח תאי רג T מבודדים מעכברים נאיביים. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקול הבסיסי לניתוח פנוטיפ vivo לשעבר להבחין בין תאי רג T מופעלים מתוך נח תאי רג T. יתר על כן, אנו מתארים פרוטוקול למדידת הפעילות המדכאת של תאי רג T יופעלו באופן מלא.

יצרנו עכברים עם זיהום בנגיף מתמשך על ידי הזרקת אותם עם 2 x 10 6 pfu של LCMV CL13 לווריד. כדי לחקור את השינויים פנוטיפי בתאי T reg ותאי מרת T במהלך זיהום בנגיף כרוני, הלימפוציטים טחול שהתקבלו בעכברים נאיביים נגועים הוכתמו נוגדנים שונים ונותחו על ידי cytometry זרימה. בגיל 16 pi ד, PD-1 היה upregulated בשני Foxp3 - מרת CD4 + T (איור 1 א, פנל עליון) ואת Foxp3 -</sup...

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לניתוח הפנוטיפ של תאי T רגולטוריים (Treg) שבודדו מעכברים נגועים בנגיף כוריומנינגטיס לימפוציטי נאיבי וכרוני. בנוסף, אנו מספקים תהליך להערכת הפעילות המדכאת של תאי ה-Treg.

פנוטיפי אנליזה פונקציונלית של תאים תקינה T הופעל מבודדת מן עכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית Choriomeningitis

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להעריך את התפקוד המדכא in vitro של תאי T רגולטוריים, שבודדו מעכברים עם זיהום ויראלי כרוני. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות בנוגע לפנוטיפ ולתפקוד המדכא in vitro של תאי T רגולטוריים מופעלים במהלך זיהום ויראלי כרוני. טכניקה זו יכולה להעריך את ההשפעה הישירה של תאי T רגולטוריים על הפרט עם תגובה חיובית לתאי T in vitro.זהו יתרון משמעותי של טכניקה זו. התחל בהעברה של 5×10⁵ לימפוציטים ספלניים כוללים ב-50 µL של FACS buffer לכל באר בלוח 96 באערים חדש בעל תחתית מסוג U, ולאחר מכן הוסף 150 µL של FACS buffer. סבב את הלוח בצנטריפוגה והסר את העלייה.לאחר מכן, ערבבו את משקעי התאים ושטפו את התאים פעמיים נוספות ב-200 microliters של facs buffer לכל באר. לאחר השטיפה השנייה, השביו את המשקעים ב-50 microliters של תערובת נוגדנים (antibody cocktail) לכל באר, למשך 20 דקות בחושך ובטמפרטורה של ארבע מעלות Celsius. לאחר מכן, שטפו את התאים פעמיים ב-facs buffer, ושפכו את העלייה.בשלב הבא, קבע את התאים למשך 20 דקות בחושך בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס עם 100 µL של בופר קיבוע, ולאחר מכן בצע שתי שטיפות עם בופר שטיפה להחדירה (permeabilization wash buffer). לאחר השטיפה השנייה, השעה מחדש את התאים ב-50 µL של נוגדן anti-FOXP3. כדי להכין את החרוזיים המצופים ב-anti CD3 CD28, העבר את הנפח המתאים של חרוזיים מגנטיים למבחנה של 15 mL, והוסף נפח שווה של PPS.ערבבו בעדינות את התמיסה באמצעות פיפטינג, וסבבו את החרוזיים המגנטיים בצנטריפוגה. בסיום השטיפה, השליכו את הנוזל העליון (supernatant), ודללו את החרוזיים ב-50 µL של מצע גידול מלא לכל באר. לאחר מכן, זרעו 50 µL של 1×10⁵ תאי T רגולטוריים CD4+ CD25+ לכל באר בלוחית 96 בארות בעלת תחתית בצורת U, ולאחר מכן 50 µL של 1×10⁵ תאי T מגיבים CD8+ לכל באר.לאחר שכל התאים הועברו ללוח, הוסיפו 50 µL של חרוזי anti CD3 CD28 מדוללים לכל באר, והוסיפו עד 50 µL של מצע כדי להביא את הנפח הכולל של כל באר ל-200 µL. לאחר מכן, כסו את הלוח בנייר אלומיניום והניחו אותו ב-37 °C באינקובטור פחמן דו-חמצני למשך 72 שעות. כדי לנתח את ייצור תאי הציטוקינים של תאי T חיוביים ל-CD8, לאחר שלושה ימי תרבית, העבירו את העל-נוזלים (supernatants) ללוח 96 באערים אחר ונתחו אותם באמצעות ELISA, בהתאם להוראות היצרן.כדי לנתח את השגשוג של תאי T חיוביים ל-CD8, שטפו את פלטת התאים עם בופר facs שלוש פעמים. לאחר מכן, השעיו את המשקעים ב-50 microliters של תערובת נוגדנים מתאימה נגד תאי T חיוביים ל-CD8 ששגשגו למשך 20 דקות בחשכה בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס. בסיום הדגירה, שטפו את התאים פעמיים בבופר facs וקבעו אותם למשך 20 דקות בחשכה בארבע מעלות צלזיוס עם 100 microliters של בופר קיבוע.לבסוף, שטפו את התאים פעמיים נוספות בבופר FACS והשביהו מחדש את המשקעים ב-200 מיקרוליטר של בופר FACS. לאחר מכן, מדדו באמצעות ציטומטריה של זרימה את אחוז התרבויות של תאי T חיוביים ל-CD8 שסומנו בכפל עם phylate di. בלימפוציטים ספליניים שהתקבלו מעכברים נאיביים ומעכברים מזוהמים, PD-1 מועלה באופן ספציפי הן בתאים קונבנציונליים חיוביים ל-CD4 ושליליים ל-FOXP3 והן בתאים חיוביים ל-CD8 ושליליים ל-FOXP3 של עכברים שהודבקו ב-LCMV clone 13.השכיחות של תאי T רגולטוריים חיוביים ל-CD4 וחיוביים ל-FOXP3 גבוהה פי שניים בעכברים שהודבקו ב-LCMV clone 13 מאשר בעכברים נאיביים, כאשר רוב התאים החיוביים ל-CD4 וחיוביים ל-FOXP3 מראים גם פנוטיפ מופעל של PD-1 high. ניתן להפריד תאי T מגיבים חיוביים ל-CD8 בהצלחה ללא זיהום משמעותי של תאי מערכת חיסון אחרים. לאחר בידוד תאי T רגולטוריים, ניתן להשיג אוכלוסייה דומיננטית של תאי T חיוביים ל-CD4 וחיוביים ל-CD25 ברמת טוהר של למעלה מ-80%.עירור של תאי T רגולטוריים ותאי T מגיבים מבודדים באמצעות חרוצים מצופים ב-anti CD3 CD28 גורם לעכבה של תאי T מגיבים חיוביים ל-CD8 באופן התלוי במינון. ואכן, כאשר תאי T מגיבים חיוביים ל-CD8 מגודלים בתרבית משותפת עם תאי T רגולטוריים כרוניים ביחס של אחד לאחד, השגשוג של תאי T מגיבים חיוביים ל-CD8 נעיכב באופן משמעותי. גם ייצור של Interferon gamma על ידי תאים מגיבים חיוביים ל-CD8 נעיכב באופן משמעותי כאשר תאי T מגיבים חיוביים ל-CD8 מגודלים בתרבית משותפת עם תאי T רגולטוריים מופעלים מעכברים מזבובים עם זיהום כרוני, בהשוואה לתרבית משותפת עם תאי T רגולטוריים במצב מנוחה מעכברים נאיביים.מצאנו כי ניתן להשלים טכניקה זו ב-80 שעות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להשתמש בתאי T רגולטוריים שבודדו טריים מיד לאחר בידודם. פיתוח זה סלל את הדרך לחוקרים בתחום הרפואה לחקור את התפקוד של תאי T רגולטוריים במחלה דלקתית כרונית.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכישו הבנה טובה לגבי אופן ביצוע פרוצדורה של דיכוי תאי T רגולטוריים in vitro, תוך שימוש במערכת של תרבית משותפת (co-culture) של תאי T רגולטוריים ותאי T מגיבים.

phenotypic-functional-analysis-activated-regulatory-t-cells-isolated

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

פרוטוקול מהיר, פשוט וחסכוני עבור הדור של התורם הנגזרות multivirus ספציפי ההרג (rCTL) עבור עירוי כדי allogeneic hematopoietic בתאי גזע להשתלה (HSCT) מקבלי בסיכון לפתח זיהומים CMV, עו"ד או EBV. תהליך הייצור GMP תואמי וצריך להבטיח את יישום רחב יותר של חיסוני T-cell מעבר במרכזים מיוחדים.

דור Multivirus ספציפיים תאים T כדי למנוע / לטפל זיהומים נגיפיים לאחר השתלת allogeneic תא גזע hematopoietic

העברת גני adenoviral לתוך CD4 נאיבי תאי T מהונדס עם ביטוי של הקולטן אדנווירוס Coxsackie מאפשרת ניתוח המולקולרי של התמיינות תאי T...

התמרה adenoviral של CD4 תמימים תאי T ללמוד בידול Treg

פיתחנו assay במבחנה כדי לחקור את התפקיד של מסלולי immunoregulatory בויסות הפרשת ציטוקינים על ידי תאי T מסוג CD4 HIV-ספציפיים.

במבחנה Assay כדי להעריך את ההשפעה של immunoregulatory מסלולים על פונקצית Effector הנייד HIV-ספציפית T מסוג CD4

מקרופאגים הם תאי פלסטיק של מערכת hematopoietic כי יש תפקיד מכריע בחסינות מגן הומיאוסטזיס. בדו"ח זה, אנו מתארים אופטימיזציה של טכניקות חוץ גופית כדי phenotypically ופונקציונלית לאפיין להשתלשלים מסתננים מקרופאגים תקינה המצטברים באיבר המושתל בתנאים סובלני.

אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים המעכבים חסינות-תגובתי חסינות

לימפוציטים הם השחקנים העיקריים בתגובות חיסוניות נרכשות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול טיהור לימפוציטים כדי לקבוע את הפונקציות הפיזיולוגיות של המולקולות הרצויות בהפעלת לימפוציטים במבחנה וב-vivo. הליכי הניסוי המתוארים מתאימים להשוואת יכולות תפקודיות בין לימפוציטים בקרה ללימפוציטים מהונדסים גנטית.

בידוד ההפעלה של Murine לימפוציטים

מערכות ניסיוניות רבות כבר נוצלו כדי להבין את המנגנונים המסדירים פיתוח תאי T ולתפקד תגובה חיסונית. הנה גישה גנטית באמצעות תמרת retroviral מתוארת, אשר היא כלכלי, זמן יעיל, והכי חשוב, מאוד אינפורמטיבי בזיהוי מסלולים רגולטוריים.

Retroviral תמרה של Helper T תאים כגישה גנטית לחקר מנגנוני בקרת הבידול והתפקוד שלהם

מאמר זה מתאר פרוטוקולים של הערכת תגובת Tfh ו- GC B במודל העכבר של זיהום וירוס שפעת.

הערכה של תאי עוזר T זקיקים ותגובת מרכז חיידקים במהלך שפעת זיהום וירוס בעכברים

מאמר זה מציג שני פרוטוקולים אופטימליים לבחינת תאי חיסון חיים ופריפריאליים במערכת העצבים המרכזית, כולל המוח, חוט השדרה וקרומי המוח. כל אחד מהפרוטוקולים הללו מסייע לוודא את תפקודם והרכבם של התאים המאכלסים תאים אלה בתנאים יציבים ודלקתיים.

בידוד רקמות מערכת העצבים המרכזית וקרומי המוח הקשורים לניתוח במורד הזרם של תאי מערכת החיסון

המחקר הנוכחי מציג פרוטוקולים להערכת המחויבות לגורל מוקדם של תאיT FH ספציפיים לווירוס ומניפולציה של ביטוי גנים בתאים אלה.

גישה להבחנה מוקדמת של תאי T CD4+ עוזר זקיקים ספציפי לווירוס בעכברים נגועים ב- LCMV חריף

המחקר מדגים את תפקידו של העור בוויסות התגובות החיסוניות בעכברים באמצעות חיסון אפיעורי (EC). חיסון EC עם אנטיגן חלבון יכול לדכא תגובות חיסוניות ברגישות יתר למגע או להפוך דיכוי המושרה על ידי העור בשילוב עם דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן. חיסון EC מראה הבטחה כגישה יעילה ונטולת מחטים לאימונותרפיה.

מודל עכברי של אימונומודולציה המושרה אפיעורית

פרוטוקול זה מספק אסטרטגיית קו-קולטורציה במבחנה לחקר השפעות תאי T רגולטוריים על התרבות והבדייל של תאי T אפקטוריים.

In-Vitro ניתוח פונקציונלי של תאי T רגולטוריים: התמקדות בהתרבות ובהתמיינות

למדו להעריך את הפעילות המדכאת של תאי T רגולטוריים מבודדים מעכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית. שיטה זו מאפשרת ניתוח פנוטיפי ופונקציונלי של תאי T reg בתרבית in vitro.

פנוטיפי אנליזה פונקציונלית של תאים תקינה T הופעל מבודדת מן עכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית Choriomeningitis

גלה סרטונים נוספים