Name: אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים המעכבים חסינות-תגובתי חסינות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: חקור אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים בלבות מושתלים באמצעות זרימה ציטומטרית ותרבית תאים משותפת. שיטה זו מאפשרת הבנה מעמיקה של מנגנוני העמידה והסבלנות להשתלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מכירים את התרומות הטכניות של Cytometry זרימה, Microsurgery, ו Bio-מאגר / פתולוגיה מרכזי מצוינות מחקר בהר סיני. עבודה זו נתמכה על ידי פעולה CO1 BM1305: פעולה להתמקד ולהאיץ תא Cellerogenic טיפולים (FACTT), הר סיני Recanati / מילר השתלות קרנות ההתפתחות, שר הבריאות של Ciencia e Innovacion SAF2013-48834-R ו SAF2016-80031-R JO

<html> במחקר זה, עכברים שוכנים על פי הנחיות משרד החקלאות של ארצות הברית ואת ההמלצות של שירות בריאות הציבור מדריך לטיפול ושימוש של חיות מעבדה. כל הטכניקות הניסוייות שעסקו בשימוש בבעלי חיים בוצעו בהתאם ל&quot;מוסדות לטיפול בבעלי חיים מוסדיים ולשימוש &quot;(IACUC) - פרוטוקולים מאושרים של בית הספר לרפואה של הר סיני. 1. הכנת מדיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן להשלים RPMI 1640 בינוני עם 10% FBS ו 1% פניצילין סטרפטומיצין (10,000 U / mL) באמצעות 2 מ&quot;מ L- גלוטמין, 1 mM נתרן pyruvate, 0.1 מ&quot;מ חומצות אמינו חיוניות, 5 מ&quot;מ HEPES, ו 0.05 מ&quot;מ -Mercaptoethanol. </li></ol> 2. בידוד allograft ו השעיה תא בודד הערה: טכניקת ההשתלה והאינפסטומוזיס של העורק הריאתי ווריד הקאווה הנחות תוארה לראשונה על ידי קורי ומשתפי הפעולה וניתן לדמיין אותה ב- Liu &amp; KangS = &quot;xref&quot;&gt; 10 , 11 ( איור 1 א ). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר מושתלים עם isoflurane 4-5% בחדר אינדוקציה. להקריב אותו על ידי נקע צוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך חתך הבטן קו האמצע עם מספריים סטנדרטיים ולהסיר את תוכן הבטן כדי למקם את אבי העורקים. הערה: הלב המושתל יהיה בצד ימין של אבי העורקים הבטן המקבל ( איור 1 ב ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את השתל בעדינות באמצעות מלקחיים חדה מלקחיים ומקם אותו מיד לתוך בינוני RPMI קר. הערה: באמצעות מספריים הניתוח להפריד את השתל מן אבי העורקים יכול להזיק השתל ולגרום רקמה להישאר להישאר דבקה לנמען. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל השתלות נאספו, להעביר אותם לתוך מכסה המנוע תרבות סטרילי לעיבוד רקמות. מניחים את השתל בצלחת פטרי לקוביות הרקמה לחתיכות קטנות (1 מ&quot;מ) באמצעות מספריים סטריליים, בוטה, microsurgery. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם שיניים חדותEps, להעביר את החלקים לצינור 50 מ&quot;ל עם 5 מ&quot;ל של קולגן A (0.1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​collagenase ב 1x סטרילי PBS). דגירה זה 1 שעה אמבטיה 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל של המדיום RPMI לנטרל את collagenase ולהעביר את המדגם באמצעות מסננת 100 מיקרומטר בעזרת הבוכנה של מזרק 1 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין המדגם למטה ב XG 400 במשך 5 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה ב 1 מ&quot;ל של חיץ תמוגה ACK. מערבבים היטב דגירה 5 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל של מדיום RPMI לנטרל את המאגר תמוגה לסובב את המדגם למטה ב XG 400 עבור 5 מ &#39;ב 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend תא גלולה μL 200 של המדיום RPMI ולהעביר אותו צינור 5 התחתית התחתונה פוליפרופילן מ&quot;ל. הערה: צינורות פוליפרופילן תמיכה פחות דבקות. כמו כן, שמירה על התאים בטמפרטורה נמוכה, כגון 4 ° C, מפחית הידבקות. </li></ol> 3. בידוד של מאקרופאגים השתל השתלנות באמצעות תא המופעל פלואורסצנטי מייןING <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום מחייב ספציפי לא רצוי על תאים מיאלואידים באמצעות קולטן FC חסימת mAb (עכברוש נגד עכבר CD16 / 32). הוסף 1-2 μL לכל מדגם, 15 דקות לפני מכתים פני השטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (0.6 מיקרוגרם / μL), אנטי עכבר Ly6C APC (2 מיקרוגרם / μL), כתם אנטי-עכבר CD11b, ו אנטי עכבר Ly6G Pe / Cy7 (2 מיקרוגרם / μL). מכסים את צינורות עם רדיד אלומיניום כדי להגן על נוגדנים ניאון מן האור דגירה של צינורות במקרר ב 4 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות. הערה: עבור פיצויים כתם יחיד, להכין צינור בקרה שלילי (ללא כתם) וצינורות עם תאים שכותרתו בנפרד עם כל אחד fluorochromes. כדי לעזור להגדיר את השער, בקרות isotype ניתן להשתמש במיוחד עבור Ly6C (IgG2a) ו Ly6G (IgG2b). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים פעמיים עם בינוני RPMI וסובב אותם ב XG 400 דקות 5 ב 4 ° C. ספירת התאים באמצעות כחול trypan ו hemocytometeR לדלל אותם 1 מ&quot;ל של מדיום RPMI לכל 1 x 10 6 תאים. לפני מיון, להעביר את דגימות באמצעות 5 מ&quot;ל, 70 מיקרומטר תא מסננת צינור מסווה. הוסף DAPI (1 מיקרוגרם / מ&quot;ל) כסמן כדאיות התא ולהמשיך למיין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כי מקרופאגים הם תאים רגישים ושבירים, להגדיר את התנאים למיין ל 20 psi ולהשתמש גודל מיקרומטר 100 מיקרומטר לבודד מקרופאגים באמצעות מצב טוהר 4-way. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן צינורות איסוף עם 1 מ&quot;ל של מדיום RPMI בצינור 5 פוליפרופילן מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנת סדרן לפתוח ניסוי חדש ובחר ניסוי ריק עם פאנל ריק כדי להגדיר את ההגדרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מגרש נקודה המציג את קדימה (FSC) לעומת ( לעומת ) פיזור בצד (SSC) ואת השער על כל leukocytes, למעט פסולת וגושים עם הפיזור הנמוך ביותר קדימה בצד. משער הורה זה, ליצור מגרש נקודה חדשה המציגה SSC לעומת DAPI ושער על תאים DAPI. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על אוכלוסייה חדשה זו שנשלחה, צור מודעהOt העלילה המציגה CD11b לעומת CD45 ושער על כפול חיובי (CD11b + CD45 + ) מקרופאגים ונויטרופילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכאן, ליצור העלילה נקודה אחרונה הצגת Ly6C לעומת Ly6G ושער אוכלוסיות רצוי: Ly6C היי Ly6G - , Ly6C lo Ly6G - , ו Ly6C int Ly6G + ( איור 2 ). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיון, לבדוק טוהר תאי הכדאיות (&gt; 90%) וסובב את צינורות איסוף ב XG 400 במשך 5 דקות ב 4 ° C. לספור את התאים באמצעות כחול trypan ו hemocytometer ו resuspend אותם בריכוז הרצוי ( למשל, 1 x 10 6 מקרופאגים / מ&quot;ל) במדיום RPMI מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת 50 x 10 3 מקרופאגים לכל היטב צלחת 96-היטב בתחתית עם נפח סופי של 100 μL של המדיום RPMI מלא. השאירו את התאים ללא הפרעות במשך לפחות 24 שעות ב 37 ° C ו 5% CO 2 . </li></ol> 4. IsolatioN של תאים T באמצעות פלואורסצנטי מופעל תא מיון הערה: C57BL / 6-Foxp3tm1Flv / Jn הוא X- ממוקד מקושט זן עכבר אשר שיתוף סימני תאים להביע את Foxbox (P3 תיבת P3) גן עם חלבון פלואורסצנטי אדום מונומריק (mRFP). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים ולהקריב C57BL / 6 ו C57BL / 6-Foxp3tm1Flv / J (H-2b) עכברים כפי שתואר לעיל בשלב 2.1. לבודד את הטחול ואת בלוטות הלימפה (LN: מפשעתי, מותני, axillar, brachial, צוואר הרחם) ומיקומם במהירות בינוני RPMI קר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבודד את LN, במקום את העכבר במצב שכיבה, לעשות חתך העור קו האמצע מלמטה למעלה, בזהירות חיתוך הצפק בעדינות להפיץ את העור בנפרד. לאחר איסוף כל lumar, lumbar, axillary, brachial, צוואר הרחם LN ( איור 1C , בצבע אדום), לחתוך את הצפק לבודד את הטחול בצד השמאלי העליון של המעיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפצל את הטחול LN באמצעות מסנן 100 מיקרומטר להציבעל גבי צינור 50 מ&quot;ל. באמצעות הבוכנה של מזרק 1 מ&quot;ל, לחץ בעדינות על הרקמה. יש לשטוף את המסנן עם המדיום RPMI פעמים רבות ככל הנדרש עד שהוא נקי. הערה: LN וטחול מכל עכבר ניתן להרכיב יחד באותה צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה ב XG 400 דקות 5 ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה ב 2 מ&quot;ל של חיץ תמוגה ACK. מערבבים היטב דגירה 5 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 מ&quot;ל של מדיום RPMI לנטרל את המאגר תמוגה. ספין למטה ב XG 400 דקות 5 ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend תא גלולה μL 200 של המדיום RPMI ולהעביר אותו צינור 5 תחתית פוליסטירן מ&quot;ל התחתונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם עבור עכבר CD4 APC (0.6 מיקרוגרם / μL) ו / או נגד העכבר CD8 PeCy7 (2 מיקרוגרם / μL). מכסים את צינורות עם רדיד אלומיניום כדי להגן על נוגדנים ניאון מן האור, דגירה של צינורות במקרר ב 4 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות. הערה: עבור פיצויים כתם יחיד, להכין צינור בקרה שלילית (ללא כתם) וצינורות עם תאים שכותרתו יחיד עם כל אחד fluorochromes. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים פעמיים עם בינוני RPMI וסובב אותם ב XG 400 דקות 5 ב 4 ° C. ספירת התאים באמצעות כחול trypan ו hemocytometer. הערה: צבע CFSE מסופק כמו אבקת carboxyfluorescein אבקת succinimidyl אסתר בדרך כלל ב 50 מיקרוגרם. הוסף 18 DMSO μL לבקבוקון של CFSE לפתרון מלאי הסופי של 5 מ&quot;מ חנות ב -20 מעלות צלזיוס במשך מספר חודשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור תיוג CFSE, resuspend תאים CD8 מוכתם בריכוז של עד 6 6 תאים לכל מ&quot;ל PBS ב ריכוז עובד הסופי של CFSE 5 מיקרומטר מהפתרון המניות. דגירה אותם באמבטיה ב 20 מעלות צלזיוס במשך 5 דקות כפי שתואר לעיל 6 . הערה: (שלב קריטי) עבור תאים בריכוז נמוך (≤ 10 6 לכל מ&quot;ל), חיוני כי התאים להיות מתויגים בנוכחות של חלבון נוסף למאגר את ההשפעות הרעילות של CFSE. לכן, PBS יכול להכיל 5% FBS. שים לב שאם אנידיום משמש, חומצות אמינו חופשיות עשויות להוריד את יעילות תיוג על ידי מתחרים על CFSE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל את CFSE עם 2 מ&quot;ל של מדיום RPMI. ספין ב XG 400 דקות 5 ב 4 ° C. הוסף 1 מ&quot;ל של מדיום RPMI לכל 1 x 10 6 תאים CD8 T. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני מיון, להעביר את המדגם באמצעות מסננת תא 70 מיקרומטר על מכסה צינור 5 מ&quot;ל. הוסף 50 μL של DAPI 1x (1 מיקרוגרם / מ&quot;ל) כסמן הכדאיות התא ולהמשיך למיין. הערה: 1x פירושו יחס של 1: 1 של המגיב ביחס למרכיב אחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את התנאים למיין ב 20 psi ו 100 מיקרומטר גודל נחיר לבודד פעמיים חיוב CD8 + CFSE + T תאים ( איור 3 א ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן צינורות איסוף עם 1 מ&quot;ל של מדיום RPMI בצינור 5 פוליפרופילן מ&quot;ל ולהמשיך למיין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנת סדרן לפתוח ניסוי חדש ובחר ניסוי ריק עם פאנל ריק כדי להגדיר את ההגדרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור בידוד CD4 + T תא, להגדיר מגרש נקודה כי disמשחק את FSC לעומת SSC ושער על לימפוציטים, למעט פסולת כמו גם תאים גרעיניים גדולים, כגון תאים דנדריטים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משער הורה זה, ליצור מגרש נקודה חדשה המציגה SSC לעומת DAPI ושער על תאים DAPI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על אוכלוסייה זו החדש מגודרת, ליצור העלילה נקודה המציג SSC לעומת CD4 לבודד את כל התאים CD4 + ( איור 3 ב ). לחלופין, anti-CD3 mAb ניתן להשתמש כדי להבטיח בידוד של אוכלוסיות תאים טהור T. הערה: חלק קטן של כל תאי CD4 + T (5-10%) צריך להיות Foxp3 + mRFP + . </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיון, לבדוק טוהר תאי הכדאיות (&gt; 90%) וסובב את צינורות איסוף ב XG 400 במשך 5 דקות ב 4 ° C. ספירת התאים באמצעות כחול trypan ו hemocytometer. Resuspend באמצעות 1 מ&quot;ל של המדיום RPMI מלא לכל 2x10 6 תאים T. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת assay דיכוי על ידי תאים culturing T עם מקרופאגים בעבר מיון. לוחית 10 x 10 4 CD4 + T ו 10 x 10 4 CD8 + CFSE + T תאים באותו היטב נפח סופי של 100 μL של המדיום RPMI מלא. לדגור על 37 מעלות צלזיוס 5% CO2 עבור 96 שעות. הערה: מקרופאגים ותאי T שימשו יחס של 1: 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעורר T חלוקת התא על ידי שטיפת T תא activator CD3 / CD28 חרוזים מגנטיים ב 2 מ&quot;ל של PBS לפני השימוש בהם כדי לנקות את המאגר המכיל אזיד. הוסף 5 μL של עכבר תא תא activator CD3 / CD28 חרוזים לכל טוב. הערה: חרוזים מגנטיים דומים בגודל לתאים מציגים אנטיגן והם מצמידים אנטי CD3 ו anti-CD28 mAb, המציע שיטה פשוטה להפעלה והרחבה של תאי T. </li></ol>

<ol><li>Jose, M. D., Ikezumi, Y., van Rooijen, N., Atkins, R. C., Chadban, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+act+as+effectors+of+tissue+damage+in+acute+renal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Macrophages act as effectors of tissue damage in acute renal allograft rejection.</a> Transplantation. 76 (7), 1015-1022 (2003).</li>
<li>Oberbarnscheidt, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-self+recognition+by+monocytes+initiates+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Non-self recognition by monocytes initiates allograft rejection.</a> J Clin Invest. 124 (8), 3579-3589 (2014).</li>
<li>Garcia, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytic+suppressive+cells+mediate+cardiovascular+transplantation+tolerance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Monocytic suppressive cells mediate cardiovascular transplantation tolerance in mice.</a> J Clin Invest. 120 (7), 2486-2496 (2010).</li>
<li>Conde, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DC-SIGN%28%2B%29+Macrophages+Control+the+Induction+of+Transplantation+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">DC-SIGN(+) Macrophages Control the Induction of Transplantation Tolerance.</a> Immunity. 42 (6), 1143-1158 (2015).</li>
<li>Ginhoux, F., Schultze, J. L., Murray, P. J., Ochando, J., Biswas, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+multidimensional+concept+of+macrophage+ontogeny%2C+activation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">New insights into the multidimensional concept of macrophage ontogeny, activation and function.</a> Nat Immunol. 17 (1), 34-40 (2016).</li>
<li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+fluorescent+target+arrays+for+assessment+of+T+cell+responses+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of fluorescent target arrays for assessment of T cell responses in vivo.</a> J Vis Exp. (88), e51627(2014).</li>
<li>Tario, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+staining+and+proliferation+modeling+methods+for+cell+division+monitoring+using+cell+tracking+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optimized staining and proliferation modeling methods for cell division monitoring using cell tracking dyes.</a> J Vis Exp. (70), e4287(2012).</li>
<li>Poujol, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+evaluation+of+lymphocyte+transformation+test+based+on+5-ethynyl-2%27deoxyuridine+incorporation+as+a+clinical+alternative+to+tritiated+thymidine+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric evaluation of lymphocyte transformation test based on 5-ethynyl-2'deoxyuridine incorporation as a clinical alternative to tritiated thymidine uptake measurement.</a> J Immunol Methods. 415, 71-79 (2014).</li>
<li>Last'ovicka, J., Budinsky, V., Spisek, R., Bartunkova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+lymphocyte+proliferation%3A+CFSE+kills+dividing+cells+and+modulates+expression+of+activation+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">Assessment of lymphocyte proliferation: CFSE kills dividing cells and modulates expression of activation markers.</a> Cell Immunol. 256 (1-2), 79-85 (2009).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), e238(2007).</li>
<li>Ochando, J., Conde, P., Bronte, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-Derived+Suppressor+Cells+in+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Transplant+Rep%22%5BJournal%5D)">Monocyte-Derived Suppressor Cells in Transplantation.</a> Curr Transplant Rep. 2 (2), 176-183 (2015).</li>
<li>Gallina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumors+induce+a+subset+of+inflammatory+monocytes+with+immunosuppressive+activity+on+CD8%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Tumors induce a subset of inflammatory monocytes with immunosuppressive activity on CD8+ T cells.</a> J Clin Invest. 116 (10), 2777-2790 (2006).</li>
<li>Huang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gr-1%2BCD115%2B+immature+myeloid+suppressor+cells+mediate+the+development+of+tumor-induced+T+regulatory+cells+and+T-cell+anergy+in+tumor-bearing+host%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Gr-1+CD115+ immature myeloid suppressor cells mediate the development of tumor-induced T regulatory cells and T-cell anergy in tumor-bearing host.</a> Cancer Res. 66 (2), 1123-1131 (2006).</li>
<li>Luan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytic+myeloid-derived+suppressor+cells+accumulate+in+renal+transplant+patients+and+mediate+CD4%28%2B%29+Foxp3%28%2B%29+Treg+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Monocytic myeloid-derived suppressor cells accumulate in renal transplant patients and mediate CD4(+) Foxp3(+) Treg expansion.</a> Am J Transplant. 13 (12), 3123-3131 (2013).</li>
<li>Tario, J. D., Muirhead, K. A., Pan, D., Munson, M. E., Wallace, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+immune+cell+proliferation+and+cytotoxic+potential+using+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tracking immune cell proliferation and cytotoxic potential using flow cytometry.</a> Methods Mol Biol. 699, 119-164 (2011).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר את השיטות נהגנו immunocharacterize השתל-חדירה תת תא מיאלואידי במודל Murine ניסיוני של השתלת לב, אשר חל גם על רקמות אחרות מודלים שונים ניסיוני Murine. תאים בלחץ נמוך מיון ב 20 psi היתה השיטה המועדפת לבודד תשואה טובה של תת תאים טהורים. שמירה על טוהר של כל תת משנה מיאלואידי הוא קריטי כדי לקבוע תוצאות מכריעות של יכולת מדכאת בין אוכלוסיות מיאלואידים שונים. עם זאת, שיטות אחרות ניתן להשתמש לבידוד של אוכלוסיות שונות של ליקוציט, כגון ערכות העשרה מסחרי. ללא קשר לאוכלוסיית ה...

פרוטוקול זה מתאר טכניקות חוץ גופית ללמוד את הפונקציה של מקרופאגים מסתננים רקמות מבודד allografts לב, על פי יכולתם לווסת תגובות תא T. תיאורים נרחבים בספרות, צבעים ניטור פלורסנט תא בשילוב עם cytometry זרימה, הם כלים רבי עוצמה כדי ללמוד את הפונקציה המדכאת של סוגי תאים ספציפיים במבחנה in vivo. פרוטוקול שלנו עוקב אחר השיטה carboxyfluorescein succinimidyl אסתר (CFSE) לניטור התפשטות לימפוציטים במבחנה . כאשר תא CFSE שכותרתו מחלק, צאצאיה רוכש חצי מספר של carboxyfluorescein מתויגות מולקולות 6 . הירידה המקבילה פלואורסצנטי התא על ידי cytometry הזרימה ניתן להשתמש כדי להעריך את חלוקת התא, ניטור היכולת של מקרופאגים מדכאים כדי לווסת את התגובה החיסונית של תאי T. מאז CFSE הוא צבע פלואורסצנטי מבוסס, הוא תואם עם brOad טווח של fluorochromes אחרים, מה שהופך אותו ישים cytometry זרימה רב צבע. הבחירה הנכונה של fluorochromes פנוטיפינג חשוב גם כדי למנוע חפיפה ספקטרלית מוגזמת וחוסר היכולת לזהות תאים חיוביים נוגדנים, במיוחד עם צבעים חלבונים גלויים כגון CFSE 7 . ישנם יתרונות רבים של שימוש בצבעי פלואורסצנט על טכניקות חלופיות למדידת התפשטות תאים, כגון assay שילוב thymidine, אשר משתמשת thymidine radiolabeled (TdR) 8 . Assay זה מנצל thymidine tritiated ( 3 H-TdR), כי הוא משולב לתוך גדילים חדשים של DNA כרומוזומלי במהלך חלוקת התא מיטוטי. דאגה בטיחותית הקשורה assay זה הוא השימוש רדיואיזוטופים, שכן ניטור ביתא scintillation משמש למדידת רדיואקטיביות ב- DNA התאושש מן התאים על מנת לקבוע את מידת חלוקת התא. מתודולוגית, התחת thymidine tritiatedאי הוא לא מספיק גמיש כדי להתאים את האילוצים המעבדה קליניים חשובים כגון מספר נמוך של תאים וניתוח מושהה לאחר מכתים. להיפך, מכתים CFSE הוכח כדי למנוע התפשטות תאים ולהפריע סמנים הפעלה קריטית, כגון CD69, HLA-DR ו CD25 9 . לכן, הבנת היתרונות והמגבלות של כל מתודולוגיה, במיוחד במחקרים רב צבעוניים שבהם צבעים מרובים משמשים כדי לעקוב אחר סוגי תאים שונים, הוא קריטי להשגת תוצאות מדויקות לשחזור.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>10% FBS</td><td>Life Technologies</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>1,000x 2-mercaptoethanol</td><td>Life Technologies</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>100x Pen/Strep</td><td>Life Technologies</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>100x L-גלוטמין</td><td>Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>100x Non חומצות אמינו אזנטיאליות</td><td>Corning</td><td>25025039</td><td></td></tr><tr><td>1 M מאגר HEPES&nbsp;</td><td>Corning</td><td>25060CL</td><td></td></tr><tr><td>100 מ"מ נתרן פירובט</td><td>ThermoScientific</td><td>SH30239.01</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטווידין</td><td>ThermoScientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Collagenese A</td><td>Roche</td><td>70381322</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (ללא סידן& מגנזיום)</td> <td>קורנינג</td><td>21031CV</td><td></td></tr><tr><td>70 ומיקרו; מסננת תאים m</td><td>פישר</td><td>22363548</td><td></td></tr><tr><td>ACK מאגר ליזה</td><td>Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>32670-5mg-F</td><td></td></tr><tr><td>CFSE-FITC</td><td>Invitrogen</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads עכבר מפעיל תא T CD3/CD28</td><td>Life Technologies</td><td>11452D</td><td></td></tr><tr><td>96 באר&nbsp; צלחת U-תחתונה</td><td>קורנינג</td><td>353077</td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>anti-Ly6C-APC</td><td>eBioscience</td><td>175932-80</td><td></td></tr><tr><td>anti-Ly6G-PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>127617</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD11b-Percp/Cy5.5</td><td>eBioscience</td><td>45011282</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD45-APC/Cy7</td><td>eBioscience</td><td>47045182</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD4-APC</td><td>eBioscience</td><td>17004181</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD8-P / Cy7</td><td>eBioscience</td><td>25008181</td><td></td></tr><tr><td>LSRII Flow Cytometer</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva Software</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6-Foxp3tm1Flv/J&nbsp;</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>008374</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Balb/c</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>000651</td><td></td></tr></tbody></table>

אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים המעכבים חסינות-תגובתי חסינות

Functional Characterization of Regulatory Macrophages That Inhibit Graft-reactive Immunity

הצטברות מקרופאג באיברים המושתלים הוכרה מזה זמן רב כתכונה של דחיית אלוגראפט. מונוציטים אימונוגניים לחדור את האלוגראפט מוקדם לאחר ההשתלה, לעלות תגובה תגובתית שתל נגד האיברים המושתלים, וליזום דחייה איברים 2 . נתונים אחרונים מראים כי מקרופאגים מדכאים להקל על השתלות לטווח ארוך מוצלח 3 נדרשים לגירוי של השתלות השתלות 4 . דבר זה מצביע על תפיסה רב-ממדית של אוקטוגני מקרופאג, הפעלה ותפקוד, הדורשת מפת דרכים חדשה לבידוד וניתוח של מקרופאג &#39; 5 . בשל הפלסטיות של מקרופאגים, יש צורך במתודולוגיה לבודד ולאפיין מקרופאגים, בהתאם לסביבה רקמות, ולהגדיר את הפונקציות שלהם על פי תרחישים שונים. הנה, אנחנו descriלהיות פרוטוקול אפיון החיסון של מקרופאגים השתל השתוללות ושיטות נהגנו להעריך פונקציונלית יכולתם לעכב התפשטות CD8 + T ו לקדם CD4 + Foxp3 + הרחבת Treg במבחנה .

התוצאות המייצגות מראות את אסטרטגיית ה gating המתוארת בפרוטוקול לעיל. תוצאות גם להציג את ניתוח של פעילות תאים T- התפשטות לאחר שיתוף תרבות עם השתל חדירה מקרופאגים. קיבולת הדיכוי במבחנה של תת מקרופאגים נותח באיור 4 . התוצאות מראות כי Ly6C lo6G Lee - מקרופאגים המתקבלים מקבלי סובלני הם מדכאים. התוצאות גם מצביעות על כך שתאי ה- Ly6C int6G + מציגים יכולת מדכאת צנועה. רק Ly6C lo6G Le - תאים קידם את ...

מקרופאגים הם תאי פלסטיק של מערכת hematopoietic כי יש תפקיד מכריע בחסינות מגן הומיאוסטזיס. בדו&quot;ח זה, אנו מתארים אופטימיזציה של טכניקות חוץ גופית כדי phenotypically ופונקציונלית לאפיין להשתלשלים מסתננים מקרופאגים תקינה המצטברים באיבר המושתל בתנאים סובלני.

Macrophage accumulation in transplanted organs has long been recognized as a feature of allograft rejection1. Immunogenic monocytes infiltrate the ...

המטרה הכוללת של הליך זה במבחנה היא לאפיין פנוטיפית ותפקודית אוכלוסיות מקרופאגים שבודדו מלבבות מושתלים במודל השתלה המונית. שיטות אלה יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח בחסינות שאנו מוצאים לגבי איך לשפר את ההצלחה בהישרדות ובעמידות של אלוגרף. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת לחקור כיצד רקמה ספציפית שחדרה לאלוגרף לב מבודדת תת-קבוצה של מיקרופאג'ים מווסתים את תגובת רקמות המארח.לאחר יצירת תרחיף של תא בודד מהאלוגרפט, חסום כל קשירה לא ספציפית על התאים המיאלואידים עם מיקרוליטר אחד עד שניים של קולטן FC החוסם נוגדן חד שבטי למשך 15 דקות. בתום הדגירה, צבעו את התאים בנוגדנים המתאימים על פני התא המיאלואיד הפלואורסצנטי למשך 45 דקות בארבע מעלות צלזיוס מוגנים מפני אור. לאחר מכן שטפו את התאים פעמיים במדיום RPMI על ידי צנטריפוגה.ותלו מחדש את הכדור בכחול טריפן לספירה. לאחר מכן, יש לדלל את התאים לריכוז חד פעמי של 10 עד שישית תאים למיליליטר במדיום טרי. ולסנן את התאים דרך מסננת של 70 מיקרון לתוך צינור תחתון עגול של חמישה מיליליטר.רגע לפני המיון, צבעו את התאים ב-DAPI כסמן כדאיות והגדירו את ציטומטר הזרימה לפרמטרי מיון המקרופאגים המתאימים. הנח צינורות חרוטיים של חמישה מיליליטר המכילים מיליליטר אחד של מדיום RPMI לאיסוף התאים הממוינים וטען את צינור הדגימה על הציטומטר. בתוכנת ציטומטר הזרימה, בחר ניסוי ריק עם פאנל ריק, והגדר עלילת נקודות פיזור קדימה לעומת צד.שער על הלויקוציטים, למעט פסולת התא והגושים עם הפיזור הנמוך ביותר קדימה וצדדית. משער אב זה, צור תרשים נקודות חדש המציג פיזור צדדי לעומת DAPI ושער בתאים השליליים של DAPI. על אוכלוסייה מגודרת חדשה זו, צור תרשים נקודות המציג CD11b לעומת CD45, ושער על CD11b CD45 מקרופאגים חיוביים כפולים ונויטרופילים.לאחר מכן צור תצוגת עלילת נקודות סופית Ly6C לעומת Ly6G כדי לאפשר שער של האוכלוסייה הרצויה ולמיין את התאים. בסוף המיון, אשר את הטוהר והכדאיות של הדגימות. אסוף את התאים הממוינים על ידי צנטריפוגה, והשהה מחדש את הכדור לספירה במדיום RPMI טרי.לדלל את אוכלוסיות המקרופאגים לריכוז המתאים לזריעה חמש פעמים 10 עד המקרופאגים הרביעיים לכל 100 מיקרוליטר של מדיום שלם לבאר, בצלחת תחתונה עגולה של 96 בארות. לאחר מכן הניחו את התאים באינקובטור תרבית תאים למשך 24 שעות לפחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2. כדי לבודד את ה-T, הנח את העכבר הנוקב במצב שכיבה.ראשית בצע חתך בעור בקו האמצע, חתוך בזהירות את הצפק ופזר בעדינות את העור. אוספים את בלוטות הלימפה ההיקפיות והטחול, ומניחים את הרקמות במסנן של 100 מיקרומטר על גבי צינור חרוטי של 50 מיליליטר. בעזרת הבוכנה של מזרק של 1 מיליליטר, לחץ בעדינות על רקמות הלימפה דרך המסנן, ושטוף את המסנן במדיום RPMI טרי עד שהרשת נקייה.אסוף את התרחיף של התא היחיד על ידי צנטריפוגה, ושלח מחדש את הגלולה בשני מיליליטר של מאגר ליזה ACK. לאחר חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס, נטרלו את מאגר הליזיס עם שני מיליליטר של מדיום RPMI טרי, וצנטריפוגה את התאים. השעו מחדש את הגלולה ב-200 מיקרוליטר של מדיום טרי, והעבירו את התאים לצינור תחתון עגול של חמישה מיליליטר לסינון עם הנוגדנים המתאימים להכתמת פני השטח של תאי T.לאחר 45 דקות בארבע מעלות צלזיוס מוגנות מאור, שטפו את התאים פעמיים במדיום RPMI טרי וספרו את התאים על ידי אי הכללת טריפן כחול. לאחר מכן, יש לדלל את התאים המוכתמים ב-CD8 לריכוז של 10 עד 6 תאים למיליליטר ב-CFSE למשך חמש דקות באמבט מים של 20 מעלות צלזיוס. בתום הדגירה יש לנטרל את ה-CFSE עם שני מיליליטר של מדיום RPMI, ולאסוף את התאים באמצעות צנטריפוגה.השעו מחדש את התאים בפעם אחת 10 עד תאי ה-T המוכתמים ב-CD8 השישי למיליליטר של ריכוז בינוני RPMI, וסננו את כל דגימות התאים דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר לצינורות תחתונים עגולים של חמישה מיליליטר. לאחר מכן סמן את התאים ב-DAPI והכן את ציטומטר הזרימה למיון כפי שהודגם זה עתה. לבידוד תאי T חיוביים ל-CD4, הגדר תרשים נקודות פיזור קדימה לעומת צד לשער על הלימפוציטים, למעט הפסולת כמו גם התאים המיאלואידים הגרגיריים הגדולים.משער אב זה, צור תרשים נקודות המציג פיזור צדדי לעומת DAPI, ושער בתאים השליליים של DAPI. באוכלוסייה חדשה זו, צור תרשים נקודה אחד המציג פיזור צד לעומת CD4, ותרשים נקודה אחת המציג CD8 לעומת CFSE. לאחר מכן מיין את אוכלוסיות תאי ה-T המגודרות.בסוף המיון, יש לאשר את טוהר והכדאיות של הדגימות, ולאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה לספירה. לדלל את התאים ל-2 פעמים 10 עד תאי T השישיים למיליליטר של ריכוז RPMI, ו-100 מיקרוליטר של תאי T בתווך RPMI שלם לכל באר של מקרופאגים לתרבית משותפת של 96 שעות ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2. לבסוף, הוסף חמישה מיקרוליטר PBS שטיפה מפעיל תאי T CD3 CD28 חרוזים מגנטיים לכל באר כדי להפעיל ולהרחיב את תאי ה-T.Ly6Clo Ly6G-macraphages המתקבלים ממושתלים נסבלים מפעילים השפעה מדכאת על תאי T חיוביים CD8, עם פעילות דיכוי צנועה שנצפתה גם מתאי Ly6CG חיוביים לביניים Ly6C. עם זאת, רק תאי Ly6Clo Ly6G מקדמים את ההתרחבות במבחנה של TReg חיובי ל-CD4 חיובי ל-Foxp3. יחד, נתונים אלה תומכים במסקנה כי למקרופאגים שליליים חיוביים ל-CD11B חיובי ל-Ly6Clo Ly6G יש רבות מהתכונות המדווחות כקשורות לתאים מדכאים שמקורם במונוציטים, כולל יכולתם לעכב את התפשטות תאי ה-T CD8 ולקדם התרחבות חיובית ל-CD4 חיובית ל-Foxp3.בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לשמור על הטוהר על מנת לבסס נתונים חד משמעיים על יכולת הדיכוי של כל תת-קבוצה של מקרופאגים. בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות אחרות כמו שימוש בשערי העשרה מסחריים לבידוד אוכלוסיות לויקוציטים שונות מעניינות. מיון מקרופאגים הוא החלק הארוך ביותר בהליך זה, אך כאשר שולטים בו, חלק זה של הטכניקה יכול להסתיים תוך שמונה שעות אם מבוצע כראוי.לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום האימונולוגיה לחקור את יכולת הדיכוי של חדירת מקרופאגים במודל סים להשתלת איברים מוצקים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לאפיין אוכלוסיות מקרופאגים שונות מתוך אלוגרף לב עכבר.

functional-characterization-regulatory-macrophages-that-inhibit-graft

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקרופאגים לשחק תפקיד מרכזי הומאוסטזיס והפתולוגיה ברקמות רבות. הפרוטוקול המובא כאן מתאר שיטות ומכלה...

דלדול המשאבים ואת הכינון מחדש של מקרופאגים בעכברים

אנו מתארים כאן פרוטוקול פשוט לבידוד מקרופאגים צפקיים של עכברים. לאחר הליך זה מיצוי RNA לביצוע ניתוח ביטוי גנים על גירוי קולטנים דמויי טול.

בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכברים. מטרת הפרוטוקול היא לספק מודל שבאמצעותו ניתן לחקור תהליכים פתולוגיים ואסטרטגיות טיפוליות הרלוונטיות לתגובות אלואימוניות בעורקים ולשינויים העורקיים הנובעים מכך התורמים לכישלון השתלת איברים.

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לניתוח הפנוטיפ של תאי T רגולטוריים (Treg) שבודדו מעכברים נגועים בנגיף כוריומנינגטיס לימפוציטי נאיבי וכרוני. בנוסף, אנו מספקים תהליך להערכת הפעילות המדכאת של תאי ה-Treg.

פנוטיפי אנליזה פונקציונלית של תאים תקינה T הופעל מבודדת מן עכברים הנגועים בנגיף לימפוציטית כרונית Choriomeningitis

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לגרום סובלנות ב השתלת ולאחר להעריך חוץ גופית בתוך ויוו הקיבולת המדכא של תאים נפרדים קבוצות משנה של המטופל, את מצב המערכת החיסונית של המטופל כלפי התורם או אנטיגנים אקסוגני.

במבחנה In Vivo למזהמים סביבתיים T, B והתאים מיאלואידית פעילות מדכא ומענים ההורמונאלית מן המקבלים

נוגדן מבוססי תרופות מהפכה לטיפול במחלות דלקתיות. בנוסף יש השפעה ישירה על מטרות מוגדרות, נוגדנים ניתן להפעיל מקרופאגים להיות אנטי דלקתיות. פרוטוקול זה מתאר איך אנטי דלקתיות מקרופאג ההפעלה יכולה להיות המוערך במבחנה, באמצעות העכבר מח עצם, מאקרופאגים ויוו, באמצעות מקרופאגים הצפק.

הערכה של נוגדן מבוססי תרופות השפעות על מח העצם מאתר והפעלה מקרופאג הצפק

נגזר מונוציט DC (MoDC) יכול לחוש כמויות זעירות של מולקולות הקשורות סכנה, ולכן טענתי בקלות. אנו מספקים פרוטוקול מפורט בידודו של MoDC של דם וגידולים שלהם הפעלה עם מכלולים חיסוניים תוך הדגשת מפתח הזהירות הנחשבות על-מנת למנוע הפעלה מוקדמת שלהם.

בידוד פרוטוקול של העכבר נגזר מונוציט תאים דנדריטים והפעלה שלהם עוקבות במבחנה עם מכלולים חיסוניים הגידול

הפרוטוקול מדגים את השימוש היסטופתולוגיות אימונוהיסטוכימיה לפרופיל מקרופאג בטא קולטן של חומצה פולית ועל מערכת היחסים שלה עם המערכת החיסונית בתא סכום לחדור ביופסיות מהעורק arteritis תא ענק.

מחקר Immunohistopathologic פרופיל חומצה פולית קולטן בטא מקרופאג של כלי הדם Microenvironment המערכת החיסונית ב Arteritis תא ענק

מוצג כאן פרוטוקול לכמת ולייצר תמונות דינמיות של תאי גזע מזנכימליים (MSC) רגולציה מתווכת של מקרופאגים (MΦ) פאגוציטוזיס של חלקיקי שמרים לא אוסונים (זימוסן) המצומדים למולקולה פלואורסצנטית רגישה ל- pH.

ויסות תאי גזע מזנכימליים של מקרופאג' פאגוציטוזיס; כמות והדמיה

מונוציטים ומקרופאגים הם תאים חיסוניים פלסטיים מאוד וניתנים לתכנות מחדש החיוניים לבריאות ולמחלות. הם חשים ומגיבים למגוון רחב של גירויים על ידי אימוץ תוכניות בידול ופנוטיפים ספציפיים. תקננו מודל מבחנה לחקר קיטוב ותכנות מחדש של מקרופאגים, ומספק כלי רב ערך למחקר.

מודל תכנות מחדש של מקרופאגים שמקורם במונוציטים אנושיים לבדיקות חוץ גופיות

חקור אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים בלבות מושתלים באמצעות זרימה ציטומטרית ותרבית תאים משותפת. שיטה זו מאפשרת הבנה מעמיקה של מנגנוני העמידה והסבלנות להשתלה.

אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים המעכבים חסינות-תגובתי חסינות

גלה סרטונים נוספים