כימיה רטובה פפטיד קיבוע על polytetrafluoroethylene עבור Cell-הדבקה משופרת

דבקות תאים היא המפתח לגישות רבות במחקר ביו-חומרים והנדסת רקמות. טכניקה שלב אחר שלב מוצגת באמצעות כימיה רטובה לשינוי פני השטח של הפולימר החשוב PTFE עם פפטידים.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לספק טיפול משטח מבוסס כימיה רטובה לפולימר הפחמן הפרחוני פוליטטרפלואורואתילן, או PTFE. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הביו-חומרים כמו כיצד לשפר את התאימות הביולוגית של פולימרים רפואיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שנדרש רק מינימום ציוד, וכי השיטה ישימה באופן כללי יותר בהשוואה לשיטות אחרות.

הכנת תמיסת הנתרן נפתלניד זקוקה לתנאים קשים בהחלט. חותכים 0.25 גרם מתכת נתרן לחתיכות קטנות כדי לשפר את הפירוק. הוסף את מתכת הנתרן לתמיסה של 1.4 גרם נפתלין ב-20 מיליליטר טטרהידרופוראן בבקבוק זכוכית 100 מיליליטר עם מכסה בורג, המצויד במוט ערבוב מגנטי מצופה PTFE.

מחממים את התמיסה בצניעות כדי לשפר עוד יותר את הפירוק. לתמיסה הסופית צבע כהה ומעט ירקרק, וניתן לאחסן אותה בתנאים יבשים למהדרין. נקב דיסקי PTFE בקוטר 12 מילימטר מחומר נייר כסף בעובי 0.5 מילימטר.

סמן צד אחד, ונקי הוא איזו-פרופנול. דגרו דגימות PTFE בנפרד בתמיסת ההפעלה למשך דקה עד שתיים, באמצעות מלקחיים. שינוי הצבע מלבן לחום כהה מעיד על טיפול מוצלח.

לאחר מכן יש לשטוף פעמיים עם THF, ולאחר מכן עם איזו-פרופנול. לחמצן את הדגימות המטופלות במי חמצן 30%, המכילים 20% חומצה טריכלורואצדית למשך שלוש שעות. שוטפים במים ומייבשים.

למשטח יש כעת מראה חום קל. טפל בדיסקים המחומצנים עם 50% HMDI ב-THF יבש למשך שעתיים. לאחר מכן, שטפו עם THF והשאירו לייבוש.

לבסוף, הידרוליזה של הדגימות נושאות האיזו-ציאנט במים למשך שעתיים-שלוש, וייבש. הנח כל דיסק מתוקן כשהצד המסומן כלפי מעלה לתוך הבארות הבודדות של צלחת 24 בארות. הוסף 1.5 מיליליטר מתמיסת האפוקסיד, והבטיח כיסוי מלא של הדגימות.

לאחר הדגירה של שעתיים, יש לשטוף פעמיים במים, ופעם אחת עם מאגר קרבונט. לתחתית בארות בודדות של צלחת טרייה של 24 בארות, הוסף 50 מיקרוליטר של 0.5 מיליגרם למיליליטר פפטיד, ומאגר קרבונט של 50 מילי-מולרי, pH תשע, המכיל 0.1% נתרן אזיד. הנח בזהירות את הדיסקים המתפקדים באפוקסי הפוך על טיפות תמיסת הפפטיד.

ודא שהמרווח בין קרקעית הבאר לדיסק ה-PTFE רטוב לחלוטין עקב פעולה נימית. דגרו את הצלחת למשך שלוש שעות לפחות, או למשך הלילה בתא רטוב עם אווירה לחה, המושגת על ידי הנחת נייר טישו רטוב בתחתית החדר. לאחר הדגירה יש לשטוף שלוש פעמים במים, ולעקר במי איזו-פרופנול 50% למשך 30 דקות לפחות.

לפני זריעת התאים, כמתואר בפרוטוקול הטקסט, שטפו את הדגימות במי מלח סטריליים עם פוספט. התוצאות של שלבי התגובה הכימית המכריעים נוטרו על ידי ספקטרוסקופיה אינפרא אדום. ההפעלה הראשונית עם נתרן נפתלאמיד יוצרת קשרים כפולים, ובמידה מינורית, פונקציות הידרוקסיל.

האות המציין קשרים כפולים של פחמן נעלם עם החמצון, ומניב משטח הנושא כמעט אך ורק קבוצות הידרוקסיל. שינויי הצבע עקב הפעלה וחמצון תואמים את הכימיה הצפויה. מערכות מליטה כפולות מצומדות צפויות להיות חומות, ואובדן מערכות ההדבקה הכפולות מביא להבהרה.

בנוסף, נבדקה התוצאה האפשרית של הפעלה וחמצון על פני השטח באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק. כמעט ולא נצפתה השפעה מזיקה של הטיפול. קיבוע של פפטיד דבק תאי האנדותל, ארגינין, גלוטמין, חומצה אספרטית ולין, על פני הפולימר, תומך בצמיחת תאי אנדותל.

בעוד שכמעט ולא מתרחשת הידבקות והתפשטות תאים על חומר לא מטופל, השינוי תומך מאוד בקולוניזציה לאורך תקופה של שבועיים. לדוגמה ליישום קליני, השינוי בוצע באופן זהה על חומר מקורי משתל זמין מסחרית העשוי מ-PTFE מורחב עם תוצאות דומות במשך תקופה של שבוע אחד. לאחר שליטה, טכניקה זו אורכת כ -12 שעות.

יש לזכור כי הליך זה הוא ספציפי ל-PTFE. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להפעיל PTFE על פני השטח, וכיצד לשתק פפטידים בשלבים הבאים. בעקבות הליך זה, ניתן לשתק מולקולות אחרות, כגון פוליסכרידים או גורמי חבל הטבור בצורה דומה.

זכור שעבודה עם כימיקלים רעילים וקורוזיביים מאוד מסוכנת, וכי יש לנקוט באמצעי זהירות סטנדרטיים.