Name: השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: למדו שיטת השתלת כרית השומן השחלתית בעכברים לחקר אפיתל נורמלי וממורשע במערכת הרבייה הנשית. טכניקה זו מאפשרת ניתוח התמיינות, התחדשות ופוטנציאל נאופלסטי של אוכלוסיות תאים ספציפיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ברצוננו להודות לד&quot;ר אנדרו ק גודווין, מהמרכז הרפואי של אוניברסיטת קנזס, למתן תאים אנושיים HIO118. מחקרים אלה נתמכו על ידי תרומות של תוכנית תא גזע ניו יורק (NYSTEM; T028095) ו המכונים הלאומיים מכון בריאות / הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם (P50HD076210) כדי AFN, ועל ידי מענקי NYSTEM (C028125, C024174 ו T028095), National Institutes of מכון הסרטן בריאות / לאומי (CA182413) וקרן מחקר סרטן השחלות (327,516) כדי AYN.

<ol><li>Deome, K. B., Faulkin, L. J., Bern, H. A., Blair, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mammary+tumors+from+hyperplastic+alveolar+nodules+transplanted+into+gland-free+mammary+fat+pads+of+female+C3H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice.</a> Cancer Res. 19, 515-520 (1959).</li>
<li>Proia, D. A., Kuperwasser, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+human+mammary+tissues+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of human mammary tissues in a mouse model.</a> Nature protocols. 1, 206-214 (2006).</li>
<li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439, 84-88 (2006).</li>
<li>Stingl, J., Caldas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+heterogeneity+of+breast+carcinomas+and+the+cancer+stem+cell+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular heterogeneity of breast carcinomas and the cancer stem cell hypothesis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 791-799 (2007).</li>
<li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PIK3CA%28H1047R%29+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">PIK3CA(H1047R) induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525, 114-118 (2015).</li>
<li>Nikitin, A. Y., Nafus, M. G., Zhou, Z., Liao, C. -P., Roy-Burman, P. Prostate stem cells and cancer in animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNikitin%2C+AY+%22Stem+Cells+and+Cancer%22">Stem Cells and Cancer</a>. Bagley, R. G., Teicher, B. A. , Humana Press. New York, NY. 199-216 (2009).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160, 324-338 (2015).</li>
<li>Lu, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+stem+cell+populations+in+sweat+glands+and+ducts+reveals+roles+in+homeostasis+and+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of stem cell populations in sweat glands and ducts reveals roles in homeostasis and wound repair.</a> Cell. 150, 136-150 (2012).</li>
<li>Flesken-Nikitin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+surface+epithelium+at+the+junction+area+contains+a+cancer-prone+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ovarian surface epithelium at the junction area contains a cancer-prone stem cell niche.</a> Nature. 495, 241-245 (2013).</li>
<li>Orsulic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ovarian+cancer+by+defined+multiple+genetic+changes+in+a+mouse+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of ovarian cancer by defined multiple genetic changes in a mouse model system.</a> Cancer Cell. 1, 53-62 (2002).</li>
<li>Dawes, J., Liu, B., Mars, W., Michalopoulos, G., Khillan, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+ovarian+transplants+to+rescue+a+transgenic+line+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Multiple ovarian transplants to rescue a transgenic line of mice.</a> Lab Anim (NY). 39, 191-193 (2010).</li>
<li>Cordero, A. B., Kwon, Y., Hua, X., Godwin, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+and+therapeutic+treatments+in+an+orthotopic+mouse+model+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging and therapeutic treatments in an orthotopic mouse model of ovarian cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).</li>
<li>Albihn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+capsular+material+by+equine+trophoblast+transplanted+into+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Production of capsular material by equine trophoblast transplanted into immunodeficient mice.</a> Reproduction. 125, 855-863 (2003).</li>
<li>Muthusamy, N., Vijayakumar, A., Cheng, G., Ghashghaei, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+knock-in+Foxj1%28CreERT2%3A%3AGFP%29+mouse+for+recombination+in+epithelial+cells+with+motile+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A knock-in Foxj1(CreERT2::GFP) mouse for recombination in epithelial cells with motile cilia.</a> Genesis. 52, 350-358 (2014).</li>
<li>Perets, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+the+fallopian+tube+secretory+epithelium+leads+to+high-grade+serous+ovarian+cancer+in+Brca%3BTp53%3BPten+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Transformation of the fallopian tube secretory epithelium leads to high-grade serous ovarian cancer in Brca;Tp53;Pten models.</a> Cancer Cell. 24, 751-765 (2013).</li>
<li>Capo-Chichi, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+alterations+of+the+extracellular+environment+of+ovarian+surface+epithelial+cells+in+premalignant+transformation%2C+tumorigenicity%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Dynamic alterations of the extracellular environment of ovarian surface epithelial cells in premalignant transformation, tumorigenicity, and metastasis.</a> Cancer. 95, 1802-1815 (2002).</li>
<li>Roland, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+surface+and+cyst+epithelial+basement+membranes+and+preneoplastic+morphologic+changes+in+prophylactic+oophorectomies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Loss of surface and cyst epithelial basement membranes and preneoplastic morphologic changes in prophylactic oophorectomies.</a> Cancer. 98, 2607-2623 (2003).</li>
<li>Flesken-Nikitin, A., Odai-Afotey, A. A., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+stem+cell+niche+in+the+pathogenesis+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Oncol%22%5BJournal%5D)">Role of the stem cell niche in the pathogenesis of epithelial ovarian cancers.</a> Mol Cell Oncol. 1, 963435(2014).</li>
<li>Ng, A., Barker, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovary+and+fimbrial+stem+cells%3A+biology%2C+niche+and+cancer+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Ovary and fimbrial stem cells: biology, niche and cancer origins.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16, 625-638 (2015).</li>
<li>Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+of+origin+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells of origin in cancer.</a> Nature. 469, 314-322 (2011).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2015%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).</li>
<li>Williams, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+high-resolution+imaging+of+epithelial+ovarian+cancer+by+laparoscopic+nonlinear+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Strategies for high-resolution imaging of epithelial ovarian cancer by laparoscopic nonlinear microscopy.</a> Transl Oncol. 3, 181-194 (2010).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הקמנו assay השתלת כרית שומן השחלות המאפשרת משלוח וזיהוי מדויק של תאים ורקמות האפיתל. הליך השתלת assay כרית שומן השחלות הוא פחות מאתגר מבחינה טכנית מאשר זריקת intrabursal 10-12 ומאפשר אחידים יותר ומיקום מדויק של תאים מושתלים לעומת הזרקת intraperitoneal 9. כמו כן הוא מתאים היטב להשתלה לטווח ארוך של איבר שלם, כגון צינור הרחם. חשוב לציין, כרית שומן השחלות מספק microenvironment מוכר epithelia של מערכת הרבייה הנשית. זה צריך להיות מתאים במיוחד עבור מחקרים של המאפיינים המולקולריים התאיים של שחלות אדם ועכבר ותאים אפיתל תובל במהלך רגנרציה, שינוי ממאיר. בניגוד לאיברים אחרים, כמה מחקרים התמקדו זיהוי ואפיון של תאי גזע האפיטל של r הנקבהeproductive בדרך 18,19. מחקרים כאלה הם בעלי חשיבות מיוחדת בגלל סרטן רבים הם האמינו מקורן בתאי גזע בוגרים 20. עם זאת מקור תאי של סרטן שחלות אפיתל להישאר מאוד במחלוקת 18. סרטן השחלות אפיתל להסביר את רוב מקרי סרטן השחלות והיא נמצאת במקום ה -5 בין כל מקרי המוות הקשורים לסרטן של נשים בארצות הברית 21. לכן פיתוח של assay orthotopic עם מספר יתרונות על פני שיטות ההשתלה קיימת 9-12 אמור להקל מאוד מחקרים בתחום זה. בהתחשב במיקום השטחי של כרית שומן שחלות, מערכות הדמית חיה קטנות שניתן להשתמש בם כדי לעקוב אחר engraftments שכותרתו עם פלורסנט החזק או כתבי bioluminescent. זה גם צריך להיות אפשרי להקים מבחני הדמיה לחיות פולשנית ברזולוציה גבוהה, כגון מיקרוסקופיה שאינו ליניארי 22. כרית שומן השחלות יכול גם להיות כל הזמן בתרבויות איברים, ובכך לאפשרing תרבות תלת מימדי של אפיתלים נורמלי נאופלסטיות בתנאים מקרוב משחזרת הארגון של תאים הבין-תאי. מחקרים עתידיים צריכים להתייחס האפשרויות המבטיחות הללו. יש שלבים קריטיים כמה שיש לקחת בחשבון. מתן כרית חימום ושמירת מכרסמים חמים במהלך הניתוח משפרת את שיעור ההישרדות מאוד. עקרות של מכשירי טיפול כרית השומן מבטיחות כי מערכות engrafted נשמרות סטרילי. מניסיוננו, תוצאות דימום משמעותי בגדילה של השתלות. חשוב לציין, חתך כרית השומן צריך להיעשות דווקא משום קורע כרית השומן או תיקבו אותו דרך גורמי דימום. יש להשתמש מקריש כדי לעצור את הדימום לפי הצורך. אם engraftments אינם מפתחים, ריכוז גבוה יותר של התאים מוזרקים צריך להיחשב. בצמחים המוצלחים הראשונים ניתן להבחין מוקדם ככל שבוע לאחר ההשתלה ורוב engraftments צריך להיות אחד גלויחודש לאחר ההליך. להשתלה, מחטים עם קוטר גדול יותר (23-25 ​​G) יכולות לשמש כדי למנוע מריחה של תאים גדולים (מעל 10 מיקרומטר קוטר). עם זאת, מחטים כאלה עשויות להיות יותר טראומטיות כרית השומן והשימוש בם צריך להיבדק מראש. בניסויים שלנו השתמשנו עכברים תורמים ומקבל ישנים 6 עד 8 בשבוע. עבור שתי המטרות עכברים צעירים או מבוגרים יכולים לשמש. עם זאת, מספר תאים המוזרקים ייתכן שיהיה צורך מותאם. הגודל הקטן יותר של רפידות שומן השחלות תורמות צעיר גם צריך להיחשב. כמו עם כל שיטות, ישנן מספר מגבלות של assay השתלת כרית שומן עכבר שחלות. למרות עכברים חיסוניים מוסמכת syngeneic יכולים לשמש תאים / רקמות עיקריות בעכברים, הטכניקה שלנו דורשת NSG או עכברי SCID להשתלה של חומר אנושי. סביר להניח שאפשר להאניש את כרית השומן כדי לתמוך בצמיחה של תאי אפיתל אנושיים. עם זאת, אנחנו עדיין לא נבחנו גישה זו עדיין. שימוש צעיר Feזכרים עשויים להוביל לעלויות גידול נמוכות; יש עם זאת, עכברות שלא הרו בוגרות (גיל 8 עד 10 שבועות) כרית שומן גדולה יותר, ובכך לאפשר השתלה של דגימות גדולות. לבסוף, אנשי מעבדה צריכים להיות מיושמים על בכירורגיה חי כדי להבטיח את ביצוע בזמן והמוצלח של ההליך.

מבחני השתלה, אשר כרוך המבוא של תאים ורקמות למתחמי גוף ספציפיים בעכברים, מייצגים גישה חיונית ללימודים של התחדשות רקמות סרטן. השתלות orthotopic של תאים, כלומר, המיקום שלהם לתוך סביבה מקומית, חשובים במיוחד לאפיון של תאי גזע בוגרים. קיומו של בתאי גזע חלב הוצע לראשונה על ידי ההשתלה של שברי בלוטת חלב אפיתל לתוך רפידות שומן חלב ללא בלוטה של עכברי 1. מבחני engraftment לרפד שומן העכבר האנושי 2 שימשו לשחזר את פיתוח הפוטנציאל ונורמלי ההתחדשות של תאי אפיתל שד ראשוני האדם. יתר על כן, השתלות דילול סדרתי והגבלה של סוגי תאים מובחנים phenotypically לתוך כרית שומן חלב הפינה היו מכריעות על מנת לבחון את יכולת התחדשות העצמית והבחנת multilineage של תאי גזע חלב 3-5. מבחני השתלה ב הקומבינאטיון עם שושלת גנטית איתור ספק עדויות של התא מוצא חלב סרטן 5. השתלות כליה הקפסולה משמשות לבדיקת תכונות של תאי גזע הערמונית המשוערת 6. השתלת orthotopic של עכבר רגיל ו אנטינאופלסטיים organoids לבלב אנושיים גילה גנים ושבילים שינו בהתקדמות סרטן 7. חשיבותה של סביבת היליד גם כבר נתמכה על ידי הפגנת ההתחדשות מגוונת לאחר engraftments של בלוטות זיעה לתוך במקומות שונים, כגון רפידות שומן חלב, רפידות שומן כתף, ו -8 עור בחזרה. חלל הצפק ואת בורסת השחלות בדרך כלל משמשים כמקומות להשתלת orthotopic של תאי אפיתל של דרכי הנשית רביית 9-12. שתי שיטות אלה יש מספר מגבלות. הזרקת Intraperitoneal של תאים מובילות ההשתלות שלהם בתחומים שונים של חלל הצפק, ובכך complicating מעקב גדילה הסלולר. יתר על כן, שינויים במיקרו-סביבה, כגון היקף כלי הדם, עצבוב וייצוג תא החיסון, עשוי להיות משמעותי למדי באזורים שונים של חלל הצפק. בורסת ההשחלות יש נפח מוגבל מאוד, המאפשר הזרקה לא יותר מ -10 μl של נוזל. זה משמעותי מגביל את כמות תאים שיכולים להינתן. יתר על כן, זריקות לתוך בורסת ההשחלות יכולות להיות מאתגרות למדי מבחינה טכנית ואת ההליך דורש כמות משמעותית של זמן. כדי לטפל במגבלות אלה, נקטנו מיתרונות החומרים כרית שומן השחלות. כרית שומן עכבר השחלות יש גודל גדול, צמוד השחלה ואת צינור הרחם, והוא נגיש בקלות על ידי ניתוח. זה כבר דווח כי trophoblast סוסים ניתן להשתיל לתוך כרית שומן עכבר שחלות 13. עם זאת הפרטים של שיטה זו לא תוארו. זה גם לא דווח אם לי זהthod ניתן ליישם תאים בוגרים ורקמות. כאן, אנו מתארים גישה אמינה עבור ההשתלה של עכבר תאים אנושיים של מערכת הרבייה הנשית ולהראות כי שיטה זו תופסת גם לגבי השתלת איבר לטווח ארוכה.

<table><tbody><tr><td>מחט 25 מד</td><td>BD Becton Dickinson</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>28 מחט מד (מזרק היפודרמי עם מחט מחוברת)</td> <td>קנדל</td><td>30339</td><td>מספר חלק:</td></tr><tr><td>גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי 8881500014-2</td> מטריצת קרום הבסיס <td>Sigma-Aldrich</td><td>F9786</td><td></td></tr><tr><td>(Geltrex)</td><td>Invitrogen</td><td>A1413202</td><td></td></tr><tr><td>&-actin-Dsעכברים אדומים</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>6051</td><td>B6. עכברי Cg-Tg(CAG-DsRed*MST)1Nagy/J</td></tr><tr><td>&beta;-actin-EGFP</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>3291</td><td>C57BL/6-Tg(CAG-eGFP)1Osb/J</td></tr><tr><td>&beta;-מרקפטואתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>M7522</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בקר</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>VWR</td><td>EM-CX1058-1</td><td></td></tr><tr>תא גזע<td>קולגנאז/היאלורונידאז</td><td> טכנולוגיות</td><td>7912</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקונים קריוגניים</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>377267</td><td></td></tr><tr><td>dispase II</td><td>Worthington</td><td>NPRO2</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F12 (HAM's)</td><td>Corning</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI (Deoxyribonuclease I)</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7900</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הטמעה לדגימות רקמות קפואות (O. C. T.)</td><td>סאקורה פינטק&nbsp;</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמיס</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4127</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 200 הוכחה</td><td>Koptec</td><td>V1001</td><td>להכנת 70%&nbsp;</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>סיגמא</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>קצה מסנן 0.1-10/20 ומיקרו; l XL&nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1120-3810</td><td></td></tr><tr><td>FOXJ1 נוגדן</td><td>eBioscience</td><td>E10109-1632</td><td>בשימוש בריכוז 1:1,000 (ללא מסכה)</td></tr> <tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>סיגמא</td><td>H0135</td><td></td></tr><tr><td>קטופרופן</td><td>Zoetis</td><td>4396H</td><td></td></tr><tr><td>סרט מעבדה (Parafilm M)</td> <td>American National Can</td><td>PM-999</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Corning</td><td>25-005-Cl</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין-טרנספרין-נתרן סלניט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I884</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן, 250 מ"ל</td><td>סנטה קרוז בריאות בעלי חיים</td><td>sc-363629Rx</td><td></td></tr><tr><td>צלחת חיבור נמוכה 24 בארות</td><td>Costar</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>MEM חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>קורנינג</td><td>25-025-Cl</td><td></td></tr><tr><td>תבניות היסטולוגיה של מתכת</td><td>מדעי מיקרוסקופיה</td> אלקטרונית<td>מיקרוסקופ 62527-22</td><td></td></tr>, מיקרוסקופ <tr><td>ניקון</td><td>Eclipse TS 100</td><td></td><td>הפוך</td></tr><tr><td>, עכברי ניקון</td><td></td><td>SMZ800</td><td></td></tr><tr><td>Nod/SCID/gamma (NSG)</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>05557</td><td>NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ</td></tr><tr><td>paraformaldehyde 16% תמיסה</td><td>אלקטרונים מדעי מיקרוסקופיה</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>פרפין (Paraplast, X-TRA)</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>23-021-401</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן PAX8</td><td>Proteintech</td><td>10336-1-AP</td><td>בשימוש בריכוז 1:1,000 (ללא חשיפת מיסוך)</td></tr> <tr><td>PBS (מי מלח עם חוצץ פוספט)</td><td>קורנינג</td><td>&nbsp; 21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין סטרפטומיצין</td><td>קורנינג</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>עכברי כשל חיסוני משולב חמור (SCID/NCr), רקע BALB/C)</td><td>NCI-Frederick Animal Production Program</td><td>01S11</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פירובט</td><td>קורנינג</td><td>25-000-Cl</td><td></td></tr><tr><td>ג'ל לעיבוד דגימות (HISTOGEL)</td><td>ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>HG-4000-012</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA, 25%</td> <td>קורנינג</td><td>25-053-Cl</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

בדיקות השתלה אורתוטופיות בעכברים הן יקרות ערך למחקרים על התחדשות תאים וטרנספורמציה ניאופלסטית. גישות נפוצות להשתלה אורתוטופית של פני השחלה ואפיתל החצוצרות כוללות מתן תוך-צפקי ותוך בורסלי של תאים. המגבלות המתאימות של שיטות אלה כוללות מיקום מוגדר בצורה גרועה של תאים מוזרקים ונפח שטח מוגבל. יתר על כן, הם אינם מתאימים לשימור מבני ארוך טווח של איברים מושתלים. כדי להתמודד עם אתגרים אלה, פיתחנו גישה חלופית, המבוססת על החדרת תאים ושברי רקמות לכרית השומן של העכבר. כרית השומן השחלתי של העכבר ממוקמת בסביבה הקרובה של השחלה וצינור הרחם (המכונה ביצית, חצוצרה), ומספקת מיקרו-סביבה מוכרת לתאים ולרקמות של איברים אלה. בגישתנו תאי עכבר ואדם בעלי תווית פלואורסצנטית, ושברים של צינור הרחם מושתלים באמצעות ניתוח חתך גבי טראומטי מינימלי. תאים מושתלים ותוצאיהם ממוקמים בקלות בכרית השומן השחלתי במשך למעלה מ-40 יום. השתלה ארוכת טווח של כל צינור הרחם מאפשרת שימור נכון של כל מרכיבי הרקמה העיקריים, ואינה גורמת לתופעות לוואי שליליות, כגון פיברוזיס ודלקת. הגישה שלנו צריכה להיות ישימה באופן ייחודי למענה על שאלות ביולוגיות חשובות כגון התמיינות, פוטנציאל התחדשות וניאופלסטי של אוכלוסיות תאים ספציפיות. יתר על כן, הוא צריך להתאים למחקרים של גורמים מיקרו-סביבתיים בהתפתחות תקינה וסרטן.

ניתן תאים ורקמות ניסיוני המושתלים במדויק לתוך כרית שומן השחלות תחת מיקרוסקופ לנתיחה (איור 1). הדוגמאות כוללות תאים אפיתל תובל העכבר העיקרי נגזר עכברים בכל מקום בגוף להביע EGFP (איור 2 א) או DsRed (תרשים 2B) ותאי אפיתל משטח השחלות הנציח אדם HIO118 16,17 תאים שכותרתו עם lentiviruses mCherry ו EGFP (איור 2C - F). הגישה היא גם ישימה להשתלה ארוכת טווח של איברים, כגון צינור רחם עכבר (איור 3). לדברי מכתים immunohistochemical, הוא הריסים (FOXJ1 חיובי 14) פרשה (PAX8 חיובי 15) תאים נשמרים האפיתל תובל של רקמות מושתלות (איור 3D ו- E). <imgalt = &quot;איור 1&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54,444 / 54444fig1.jpg&quot; /&gt; איור 1:. שומן שחלות Pad השתלה (A) חשוף בתחום השתלה (חץ). (ב) חתך נעשה על ידי מחט G 28 (חץ). (C) מטריקס קרום UT / מרתף engraftment תערובת ידי קצה פיפטה (חץ). (ד) UT engrafted (חץ, אדום בוהק, UT של עכברים β-אקטין DsRed). FP, כרית שומן; OV, שחלה; UT, צינור הרחם. סרגל קנה מידה = 2 מ&quot;מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54444/54444fig2.jpg" /> איור 2:. זיהוי של תאי אפיתל תובל המושתלים עכבר ראשיים אדם הונצח תאי האפיתל Surface שחלות (A, B) מתוך<html> גידולים של תאי אפיתל תובל עכבר עיקרי (חיצים) של עכברים β-תקטין EGFP (A, ירוקים) β-יקטין DsRed (B, אדום) 8 ימים לאחר ההשתלה לעכבר syngeneic. (C, D) Engraftments של תאי HIO118 המעורבים (חיצים) שכותרתו עם או lenti-EGFP (ירוק) או lenti-mCherry (אדום) 10 ימים לאחר ההשתלה לעכברי NSG. (D) אזור מוגדל מ (C, חץ). (E, F) שתל שפותח 43 ימים לאחר ההשתלה של תאים באותו כמו C, D כדי העכבר SCID (חיצים). לספירה, F, קרינה; E, שדה בהיר, FP, כרית שומן; OV, שחלה; UT, צינור הרחם. (A, B, DF) בר סולם = 500 מיקרומטר; (C) סרגל קנה מידה = 1,600 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> המודעה / 54,444 / 54444fig3.jpg &quot;/&gt; איור 3: אפיון השתלת רחם Tube. (א) צינור רחם שלם (חץ) של β-תקטין DsRed עכבר 6 ימים לאחר ההשתלה לתוך כרית שומן שחלות (חץ, אדום בהיר). (ב) בסעיף קפוא פלורסנט של כרית השומן עם השתלה שמוצגת (א). אדום, DsRed; כחול, 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) counterstaining גרעיני. (C) הרחם צינור השתל (חץ) 40 ימים לאחר ההשתלה לעכבר הנמען NSG (חץ). סעיף פרפין. הערת שימור נכון של כל רכיבי צינור רחם העקרוניים, וחוסר סיסטיק הקשורים השתלה ודלקת. Hematoxylin והכתים eosin. (D, E) איתור של הסמנים האפיתל תובל מותאם-box גן 8 (PAX8) ותיבת forkhead J1 (FOXJ1; צבע גרעיני חום, ראשי חץ) בתאים של השתל (חיצים) שמוצגים ( <sטרונג&gt; C). מערכת אימונו. Counterstaining עם ירוק מתיל. FP, כרית שומן; OV, שחלה; UT, צינור הרחם. (א) בר סולם = 1,000 מיקרומטר; (ב) בר סולם = 200 מיקרומטר; (CE) סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig3large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> רְכִיב </td><td> בינוני 1x DMEM F12 (של Ham) </td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> 2 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> נתרן pruvate </td><td> 1 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> אפידרמיס גורם גדילה </td><td> 10 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> גורם-2 צמיחה פיברובלסטים בסיסית </td><td> 10 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> הידרוקורטיזון </td><td> 500 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> אִינסוּלִין </td><td> 5 מיקרוגרם מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> transferrin </td><td> 5 מיקרוגרם מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> סלניט נתרן </td><td> 5 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> אלבומין שור </td><td> 0.10% </td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> 100 יחידות מ&quot;ל -1 / 100 מיקרוגרם מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> הנשר בינוני Essential Minimum (ממ) חומצות אמינו לא חיוניות </td><td> 0.1 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> בטא mercaptoethanol </td><td> 10 -4 M </td></tr></tbody></table> טבלה 1:. עכבר תובל Epithelim צמיחה בינוני (M-TE-GM) רכיבים המפורטים בעמודה השמאלית המומסים 1x DMEM F12 (של Ham) בינוני בריכוזים המצוין, בעמודה הימנית. הרכב הבינוני הסופי הוא בסרום חינם.

אנו מתארים assay השתלת כרית תחביב השחלות מתאים מחקרים של אפיתלים נורמלי טרנספורמציה של מערכת הרבייה הנשית. כרית שומן העכבר מאפשרת השתלה של שברי רקמות גדולים, נגיש בקלות לניתוח והדמיה, ומספקת את הסביבה הטבעית הטובה ביותר עבור רקמות ממוצא Müllerian.

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

המטרה הכוללת של בדיקת השתלה זו לרקמת השומן השחלאית היא להקל על מחקרים של אפיתל תקין ומסרטן של דרכי הרבייה הנשיות בסביבה טבעית אופטימלית. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום, כגון פוטנציאל דיפרנציאציה, התחדשות ופוטנציאל נאופלסטי של אוכלוסיות תאים ספציפיות בדרכי הרבייה הנשיות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שרקמת השומן השחלאית של העכבר מאפשרת השתלה של תאים ומקטעי רקמה גדולים.הגישה עבור ניתוח והדמיה היא קלה. החלל הפריטוני (peritoneal cavity) והבורסה השחלאית (ovarian bursa) משמשים לעיתים קרובות כאתרים להשתלה אורתוטופית של תאי אפיתל ממערכת הרבייה הנשית. לשיטות אלו מספר מגבלות.לאחר ביצוע הרדמה והמתה של עכברי beta-actin EGFP או beta-actin DS red בהתאם לפרוטוקול הכתוב, הניחו עכבר בודד על בד סופג, כאשר הצד הגחוני פונה כלפי מעלה. פתחו את העור על ידי ביצוע חתך לאורך קו האמצע הלטרלי, ובאמצעות קצות האצבעות, משכו את העור שמעל ומתחת לחתך לכיוון הראש והזנב של העכבר. בעזרת פינצטה קהה, החזיקו את הפריטונאום והשתמשו במספריים עדינים כדי לפתוח את חלל הגוף.לאחר מכן, דחפו בעדינות הצידה את קשרי המעיים ואתרו את איברי הרבייה. באמצעות פינצטה עדינה, הרימו קרן רחם אחת וגזרו 0.5 סנטימטרים מעל הנקודה שבה נפרדות קרני הרחם. לאחר מכן, תוך כדי החזקת קרן הרחם, הפרידו את הרקמה החיבורית המחוברת לקרן הרחם, לצינור הרחם, לשחלה ולכרית השומן השחלית.הניחו את דרכי הרבייה המנותחות בתוך צלחת עם six milliliters של PBS סטרילי והמשיכו לטיפול בדרכי הרבייה השניות לפני תרבית של תאי אפיתל של חצוצרה, או TE, בהתאם לפרוטוקול הכתוב. לאחר ניתוח חצוצרות בודדות מקרני הרחם של עכבר virgin beta-actin DS red בני שש עד שמונה שבועות ב-PBS בהתאם לפרוטוקול הכתוב, תחת מיקרוסקופ ניתוח, העבירו חצוצרות בודדות לתוך טיפה של 200 microliter של PBS. בעזרת פינצטה ומחטים בכיול 28-gauge, פתחו בעדינות את החצוצרות על ידי הסרת ה-mesosalpinx, חלק מהרצועה הרחבה (broad ligament) התומכת במקטעי החצוצרה.הניחו צינורות רחם בודדים, פרוסים חלקית, בטיפה של 200 microliter של PBS קר מאוד, עד ששומן השחלה של המקבלת נחשף ומוכן לקבלת השתל. העבירו את בעל החיים לקלייה בביטחון ביולוגי כדי לבצע את השתלת שומן השחלה. לאחר הרדמת עכבר סינגנאי בהתאם לפרוטוקול הכתוב, השתמשו במכונת תספורת מספר 40 כדי לגלח שטח הגדול פי שניים מאזור הניתוח.השתמשו ב-povidone-iodine, ולאחריו ב-70% ethanol, לביצוע שלושה שלבי חיטוי כירורגי. לאחר מכן, העבירו את בעל החיים אל מתחת למיקרוסקופ דיסקציה. לאחר מכן, באמצעות סקלפל, בצעו חתך במיקום הדרסומדיאלי ישירות מעל כרית השומן השחלאית וחשפו את דרכי הרבייה.לאחר מכן, כסו את האזור בסדין סטרילי. לאחר מכן, בעזרת פינצטה עדינה וקהה, משכו בזהירות את כרית השומן השחלאית דרך החתך לכיוון קו האמצע, תוך מזעור הנזק לעצבים ולכלי דם ראשיים. כדי למנוע עיכוב בצמיחה של השתלים, יש לבצע את החתך בכרית השומן בצורה מדויקת ככל האפשר, כיוון שקריעה או ניקור של כרית השומן לכל אורכה גורמים לדימום.יש להשתמש בחומרי קרישה להפסקת דימומים במידת הצורך. השתמשו במחט אלכסונית בכיול 28 (28-gauge) כדי לבצע חתך בעומק של 2 עד 4 מילימטרים ברפידת השומן השחלתית, 3 עד 4 מילימטרים מעל השחלה, תוך וידוי שהמחט חודרת רק למחציתה בקירוב של רפידת השומן. עבור השתלות תאים, מלאו מזרק עם מחט בכיול 30 (30-gauge) ב-10 עד 20 µL מתערובת המטריקס של קרומי הבסיס של התאים והזריקו אותה אל תוך החתך ברפידת השומן.עבור השתלת חסון הרחם (uterine tube), השתמשו בפינצטה עדינה כדי לאסוף את חסון הרחם והניחו אותו ב-10 עד 20 µL של basement membrane matrix שנשמר על קרח. לאחר מכן, באמצעות טיפ מסנן מדורג XL של 0.1 עד 10 עד 20 µL, אספו את הרקמה ואת תרחיף ה-basement membrane matrix ושחררו אותם לתוך החתך בבב שומן (fat pad). המתינו חמש דקות עד שה-basement membrane matrix יתמצק, והחזירו את דרכי הרבייה אל תוך הצפק (peritoneum).בעזרת שתי תפרים של חוט ניתוח, סגרו את השרירים והשתמשו בסססנני פצע קטנים או בתפרים כירורגיים לסגירת העור. לאחר ההשתלה, אפשרו לבעל החיים להתאושש בהתאם לפרוטוקול הכתוב. כדי לאסוף ולשמר את השתלים, הכינו תמיסת 4%paraformaldehyde, או PFA, על ידי ערבוב של 26 milliliters של מים מזוקקים פעמיים עם ארבעה milliliters של 10X PBS ו-10 milliliters של תמיסת 16%PFA.לאחר הפסקציה של כרית השומן השחלאית המושתלת, השחלה, התקינה והרחם כבלוק אחד, יש להניח מיד את הרקמה בשני מיליליטר של 4%PFA ולקבע בטמפרטורת החדר למשך שעתיים. מאותו בעל חיים, קבע ועבד באופן דומה את כרית השומן השחלאית הנגדית שאינה מושתלת כביקורת. לאחר הקיבוע, שטוף את הרקמות עם PBS שלוש פעמים למשך חמש דקות בכל פעם, והדגר ב-PBS בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.בצעו דימות של דגימה שלמה (whole-mount imaging) והיסטולוגיה בהתאם לפרוטוקול הכתוב. בניסוי זה, תובעת רחם מעכבר beta-actin DS red הועברה והושתלה לרפידת השומן השחלית, כפי שניתן לראות בתמונת פלואורסצנציה זו. מוצגים כאן צמיחות של תאי אפיתל שפופרתיים ראשוניים של עכבר מעכברי beta-actin EGFP ועכברי beta-actin DS red שמונה ימים לאחר השתלה בעכבר סינגנאי.תמונה זו מציגה השתחות של תאי HI0118 מעורבים המסומנים ב-Lenti-eGFP או ב-Lenti-mCherry, 10 ימים לאחר השתלה בעכבר NSG. בלוחות אלו, החיצים מצביעים על השתחה בת 43 יום מהשתלה של תאי HI0118 מעורבים בעכבר SCID. בתמונה פלורסצנטית זו, מוצג תיתול רחם שלם מעכבר beta-actin DS red, שישה ימים לאחר השתלה לרפידה השומנית של השחלה.בפאנל זה, נתח קפוא מרפידת השומן הפלואורסצנטית נצבע בצביעה נגדית של DAPI. השתלה זו של חסם צינור הרחם 40 ימים לאחר ההשתלה בעכבר מקבל מסוג NSG מראה שימור מלא של רכיבי צינור הרחם והיעדר פיברוזיס ודלקת. לבסוף, נתחים נצבעו לסמני אפיתל של צינור הרחם Pax8 ו-FOXJ1 ונצבעו בצביעה נגדית של methyl green כדי להדגים את השימור של תאים ריסוסיים ותאי הפרשה, בהתאמה.לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו ב-20 עד 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב להכין מראש את הפלטות הכירורגיות, את הריאגנטים ואת המכשירים. בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות אחרות, כגון דימוי תוך-חי (intravital imaging) והזרקות של תרופות נגד סרטן, כדי לענות על שאלות נוספות כגון היווצרות סרטן והשפעות של טיפול אנטי-סרטני.טכניקה זו סוללת את הדרך עבור חוקרים בתחומי הביולוגיה הרפרודוקטיבית וסרטן השחלה לחקור תפקודים נורמליים של תאי גזע והתפתחות סרטן ברקמות של דרכי הרבייה הנשיות. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו מבודדים תאים ורקמה מחסנרת הרחם ולאחר מכן תומעים אותם בתוך כרית השומן. זכרו כי עבודה עם בעלי חיים בתנאים סטריליים במהלך ניתוח הישרדות היא קריטית להשגת תוצאה מוצלחת.אספקת פד חימום לשמירה על חום גוף של מכרסמים משפרת במידה ניכרת את שיעור ההישרדות.

transplantation-into-the-mouse-ovarian-fat-pad

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

בסרטון זה אנו משתמשים במודל עכברה נשית המתת חסד הנושאת סרטן שחלות. לאחר מכן אנו מתארים פרוטוקול לזיהוי וחילוץ מחסני שומן או רקמות שומן הקשורים לחמשת איברי הצפק העיקריים כדי לחקור התיישבות תאי סרטן גרורתיים.

קצירת מחסני שומן פריטוניאלי: טכניקה לחקר התיישבות סרטן השחלות של רקמות שומן פריטוניאלי במודלים של עכברים

בסרטון זה אנו מדגימים בדיקה להשתלת תאי ניסוי ושברי רקמות בכרית השומן השחלתית של העכבר. שיטה זו יכולה לשמש לניטור התחדשות תאים וטרנספורמציה של הגידול באמצעות טכניקות לא פולשניות.

בדיקת השתלת כרית שומן בשחלות: טכניקת In Vivo להחדרת תאים לכרית שומן בשחלות במודלים עכבריים

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול ליצירת מודל ניסויי מורין לחקר התפתחות הגידול וגרורות בצפק. מודל סרטן השחלות הזה נוצר על ידי חיסון אורתוטופי של תאי סרטן שחלות אפיתל אנושי לתוך השחלות של עכברה נקבה.

חיסון אורתוטופי של תאי סרטן השחלות לשחלות מורין: הליך להקמת מודל עכבר סרטן השחלות לחקר הפצת תאים בצפק

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי לקצירת שחלה שלמה ממודל עכבר.

קציר שחלות שלם מעכבר: הליך כירורגי לבידוד שחלה מלאה ממודל מורין

אנו מתארים פרוטוקול המיישם גישות in vivo ו-ex vivo לחקר קולוניזציה של סרטן השחלות ברקמות השומן הצפקיות, במיוחד האומנטום. יתר על כן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות וניתוח מבני תאים חיסוניים באומנטום המכונים כתמים חלביים, המקדמים גרורות של שומן צפק.

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

המתוארים כאן הם orthotopic השתלת השחלות פרוטוקולים עבור שינוי השחלות השפעה על הפיזיולוגיה של העכבר הנמען. הליך כירורגי זה משמש כדי לחשוף עכברים הנשי לסוגים שונים של השחלות השפעה והוא עשוי לכלול heterochronic השתלות והשתלות השחלות שעברו טיפולים שונים ex-vivo .

נהלים השתלת השחלות Orthotopic לחקור את ההשפעה ואת בריאות-תוחלת החיים של השחלות הזדקנות ביולוגית בעכברים הנשי

עבור חלק מהחולים, האפשרות היחידה לשימור פוריות היא הקפאה קריוגנית רקמת השחלה. למרבה הצער, שאיחרו revascularization מערערת הכדאיות הזקיקים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול שיתוף להשתיל רקמה אנושית השחלות עם תאי אנדותל עבור זלוף ניצול כאסטרטגיה מבוססת תא שילוב מואצת עם משלוח ישיר paracrine של מולקולות ביו...

שיתוף השתלת רקמת השחלה האנושי עם תאי אנדותל מהונדסים: שילוב אסטרטגיה מבוסס תא מואצת זלוף עם מסירה ישירה Paracrine

מאמר זה מתאר שיטת השתלת להשתיל השתל בפטמות האפיתל התאים לתוך משטח שומן לבן של בעלי חיים הנמען. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לבחון את השפעות המארחים ו/או התורמים בהתפתחות האפיתל של הפטמות ומבטלת את הצורך בניקוי מראש, ובכך מרחיב את התועלת שבטכניקה זו.

חולדה השתלת תא האפיתל לתוך משטח שומן לבן הגלימה

כאן אנו מציגים פרוטוקול השתלת רקמת שומן לבן וחום המציע אסטרטגיה מבטיחה להיפוך תת-פוריות, השמנת יתר והיפרגליקמיה, תוך שיפור תפקוד הכליות בעכברי BTBR סוכרתיים והשמנת יתר.

שתלי שומן לבנים וחומים: גישה לתיקון ליקויים רבייתיים, מטבוליים וכלייתיים בעכברים שמנים שחורים ושזופים (BTBR)

כאן אנו מציגים פרוטוקול שלב אחר שלב לקביעת מודלים תוך-פריטוניאליים ותוך-בורסליים לחקר התקדמות סרטן השחלה, מטסאציס ותגובה טיפולית. בנוסף, אנו מתארים כיצד להשתמש בהדמיה לא פולשנית מבוססת לוסיפראז במודלים אלו כדי לעקוב אחר התקדמות הגידול בעכבר.

מודלים קלינית רלוונטיים להשתלה של גידולים לחקר סרטן שחלות גרורתי ותגובה טיפולית בעכברים

למדו שיטת השתלת כרית השומן השחלתית בעכברים לחקר אפיתל נורמלי וממורשע במערכת הרבייה הנשית. טכניקה זו מאפשרת ניתוח התמיינות, התחדשות ופוטנציאל נאופלסטי של אוכלוסיות תאים ספציפיות.

השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן

גלה סרטונים נוספים