Name: שימוש רב-פלואור מרת חומצות In vivo דימות תהודה מגנטית כדי למדוד חומצות מרה התחבורה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: למד שיטה חדשנית לאבחון ספיגה לקויה של חומצות מרה באמצעות דימות תהודה מגנטית רב-פלואורי בעכברים חיים. גלה כיצד שימוש בפלואורין לא רדיואקטיבי מאפשר מדידה מדויקת ללא קרינה מייננת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות בארה&quot;ב, המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול כליות (מספרים מענק R21 DK093406 ו T32 DK067872 כדי JP.R.) וכן בפרס ההצטיינות VA (מספר מענק 1BX002129 כדי JP.R.).

הפרוטוקול הבא עומד בהנחיות אושרה על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש (IACUC) באוניברסיטת מרילנד הספר לרפואה (IACUC פרוטוקול # 0,415,011, אישרה 18 ביוני, 2015). 1. עכברים Gavaging עם 19 F-תווית מרה חומצות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים Gavage עם 150 מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף 19 חומצות מרה F שכותרתו. ממלאים מזרק 1 מ&quot;ל על הנפח עם 19 פתרון מרה F שכותרתו חומצה המניות [ליזין-אצטיל חומצה trifluoro cholic (CA-ליס-TFA; ב 1: 1 פוליאתילן גליקול 400: בופר פוספט של Dulbecco) או cholylsarcosine- trifluoro-N-methyl-acetamide (CA-sar-TFMA; ב -60% פוליאתילן גליקול 400 ו -40% בופר פוספט של Dulbecco] ולצרף מחט gavage קיבה מעוקל 20-מד 1.5 אינץ שקצהו הנורה ודא המחט gavage. זה מספיק זמן כדי להגיע לרמה של סחוס xyphoid של העכבר כאשר מוכנסים בוושט עד הרכזת של המחט </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוקף gחרק החיה ידי העור הרפוי בחלק האחורי של הצוואר בין האגודל ואצבע מורה ולהשתמש האצבעות הנותרות כדי לתפוס את העור על גב וזנב נמוכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את העכבר זקוף ולהעביר את המחט gavage לאורך הצד והגג של הפה אל הוושט ומטה לתוך הבטן. אם ההתנגדות הוא נתקל ב הלוע, למקם את המחט עד שהחיה &#39;בולעת&#39; זה - לא לדחוף כנגד התנגדות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הרדמה נדרשת gavage, הצב את העכבר בתוך צנצנת פעמון המכיל 5 מ&quot;ל isoflurane וקרוב. כאשר סמן העכבר נופל על צידו, לחכות 7 שניות, להסיר את העכבר ולבצע gavage. כדי להגן על אנשים מפני אדי הרדמה, השתמש צנצנת הפעמון רק במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו החיה להתאושש isoflurane בעוד כמה דקות. הערה: מכיוון isoflurane עובר מטבוליזם על ידי הכבד, אות פלואור שמקורם התרופה בשלמותה או מטבוליטים שלו מופרש למערכת המרה וכיס המרה יכול לבלבל fluorine איתותים מ- 19 חומצות מרות F שכותרתו 15. חלופה אחת היא להשתמש קטמין בתוספת xylazine (ראה סעיף 3.1 עבור מינונים). </li></ol> קציר 2. כיס המרה, הכבד ואת הדם מדידות של חומצות מרה באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית / ספקטרומטריית מסה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשיג מילוי כיס מרה מקסימלית, עכברים מהירים במשך שעה לפחות 6 לפני קצירת האיברים. הכן קטמין ו xylazine ב פוספט שנאגרו מלוחים (100 קטמין μl, 62.5 xylazine μl, 840 μl PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק סטרילי 1 מ&quot;ל, להזריק hr עכבר תת עורי 1 לפני הקציר איבר עם משקל גוף 15 μl / g של פתרון קטמין / xylazine (קטמין 150 מ&quot;ג ו -18 מ&quot;ג xylazine לכל ק&quot;ג משקל גוף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> hr אחת שלאחר מתן קטמין / xylazine לאשר הרדמה נאותה על ידי צביטת בוהן ומקום פרקדן העכבר הרדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספרי אינץ 5 או 6 לעשות חתך בעור בטן קו אמצע מן החיק אל xyphoid וסיבימספרי ne (4 אינץ &#39;) לחתוך את והצפק ולחשוף אברי בטן - לא לנקב את הסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחוז תהליך xyphoid עם מהדק 5 אינץ ולהרים בחזרה לרוחב החזה כדי לחשוף את חלל הבטן העליונה. שימוש במלקחיים ו מכשיר קהה לנתח ולהעביר את הכבד הצידה, חושף את כיס המרה. הערה: אין לקרוע את הכבד או לגעת כיס המרה כמו לשעבר יגרום דימום חמור, וזה רשאי לעורר התכווצות כיס המרה וריקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מהדק 4 אינץ &#39;על פני צינור המרה המשותף (איור 3, מקווקו חיצים). חותכי רצועת הצמדת המוט המעולה של כיס המרה אל הסרעפת בעדינות להזיז את כיס המרה לצד ימין של הבטן. </li></ol><img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54597/54597fig3.jpg" /> איור 3: אנטומיים Proton MRI צפיות של עכבר כיס מרה. הלוח השמאלי מציג את mous החשוףכיס המרה דואר משמאל קו האמצע לאחר חתך בבטן. המהדק תופס את תהליך xyphoid. כיס מרת הצום מלא המרה היא מצוין על ידי החץ הגדול ואת צינור מרה משותפת הדק ידי החצים המקווקוים. [הבלעה: נכרת כיס המרה שלם עם צינור המרה המשותף הידק. השליט מסומן במילימטרים (מ&quot;מ).] הפנל הימני מראה פרוטון ברזולוציה גבוהה תמונת MRI צפיפות משוקללת של כיס מרת murine צום (חץ). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig3large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <ol start="7" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני מוציא את כיס המרה לבצע לנקב לב, קציר דם, ולגרום לדימום מחודש החיה לאמת המתת חסד. הערה: קציר כיס המרה הראשונה עלולים לקרוע את הכבד גורם התמוטטות לב וכלי דם ואי ספיקה להשיג דגימת דם נאותה (≥ 200 μl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הצד התחתון של הסרעפת שמאללזהות את שטח פעימות הלב. בנקודת הפעימה מקסימלי לב לנקב את הסרעפת והלב עם מחט 23-מד מצורף מזרק 1 מ&quot;ל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט למשוך את המזרק בזמן aspirating. כאשר הדם מתחיל למלא את המזרק, לעצור נסיגה ולתחזק יניקה לאסוף 0.2 - 0.6 מ&quot;ל דם. בעדינות לסובב את המחט או חוזר בה מעט עשוי להקים מחדש זרימה אם היא תפסיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הדם אל צינור צנטריפוגות heparinized 1.5 מ&quot;ל XG ב 2000 במשך 15 דקות. משקע הפלזמה עם ארבעה חלקים אצטוניטריל ו צנטריפוגות ב XG 12,000 במשך 10 דקות. לנתח את supernatant על ידי / כרומטוגרפיה נוזלית ספקטרוסקופיית מסות (LC / MS / MS) 11-1312-1412-1412-1412-14. במידת הצורך, לאחסן הפלזמה ב -80 מעלות צלסיוס לפני ניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות דיסקציה קהה, לשחרר את כיס המרה מהכבד. Transect צינור המרה המשותף מתחת מהדק, להסיר ולשקול את כיס המרה, ולמקם אותו בתוך microcen 1.5 מ&quot;לצינור trifuge. קציר את הכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize כ 100 מ&quot;ג של הכבד ואת כיס המרה כולו על הקרח homogenizer רקמות זכוכית בגודל 21. חלץ עם 75% אצטוניטריל ומים 25% (800 μl עבור הכבד, 300 μl עבור כיס המרה) ו צנטריפוגות ב XG 12,000 במשך 10 דקות. לדלל תמציות לפי הצורך ולכמת התוכן של חומצות מרה באמצעות LC / MS / MS 11-13. </li></ol> 3. פרוטון חיים בעודו חי (1 H) ו פלואור (19 F) דימות תהודה מגנטית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשיג מילוי כיס המרה מקסימלית, עכברים לצום לפחות 6 שעות לפני הדמיה. באמצעות קטמין ו xylazine, להרדים עכברים כדי למנוע תנועה בתוך סורק MRI. הכן פתרון המניות של קטמין בתוספת xylazine ב בופר פוספט (130 קטמין μl, 42.5 μl xylazine, 827 μl PBS). hr אחת לפני MRI, להשתמש במזרק סטרילי 1 מ&quot;ל להזריק תת עורי עכבר עם 5 משקל גוף μl / g של פתרון זה (קטמין 65 מ&quot;ג ו 4.25 מ&quot;ג xylazine לכל ק&quot;ג משקל גוף). כדי למנוע יובש בהרדמה להחיל משחת וטרינרים על העיניים של החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אינדוקציה עם קטמין / xylazine כנ&quot;ל, קליפ אזור 1.5 ס&quot;מ 2 בצד שמאל החצי התחתון של העכבר הבטן באמצעות 40 # או להבי גוזז חשמלי עדין. לאחר הסרת פרווה, מכין את השטח עם 8 - 12% בדילול פתרון לקרצף כירורגית יוד ולשטוף עם אלכוהול 70% - לחזור שני צעדים. הכנס 24-מד ידי תת עורית מחט / קטטר 0.75 אינץ &#39;מנהרה לתוך חלל הבטן. ודא את הקטטר אינו נמצא cecum או איבר בטן אחר על ידי המשיכה של הבוכנה - לא אמור להיות שום דם או חומר צואתי ב הקטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט ולהשאיר את הקטטר intraperitoneal. מניח את העכבר על רפידה תרמית שבשליטת טמפרטורה בתא חי סורק MRI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מזרק סטרילי 1-מ&quot;ל המכיל קטמין ו xylazine ב בופר פוספט (1,000 קטמין μl, 300 xylazine μl, 6,700 μl PBS) ולמלא את האורך הרצוי של צינור סטרילי 72 אינץ &#39;. חבר את הקטטר intraperitoneal אל צינורות סטרילית prefilled ולהרחיב אותו הרחק סורק ה- MRI. כדי לשמור על הרדמה להזריק 50 μl של פתרון זה כל 20 דקות אם הסימנים החיוניים של העכבר הם יציבים. הערה: לפני ההדמיה, לוודא שאין מתכות הן ליד סורק ה- MRI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש סליל MRI נפח ליניארי כפול מכוון 19 F / 1 H כדי לשדר ולקלוט אותות תדר רדיו ב 300.283 MHz עבור 1 H ו- 282.524 MHz עבור 19 גרעינים F. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע כיול מערכת 11, 13 ולוקליזציה חיה עם שלוש פרוסה (צירי, באמצע sagittal, ואת העטרה) תמונות הסקאוט באמצעות רצף ירה מהר זווית נמוכה (FLASH). כדי להתחיל בניסוי, לחץ על הכפתור &#39;תנועת האור&#39; בחלון בקרת הסריקה על קונסולת התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוכשת multislice 1 תמונות H MR באמצעות רכישה מהירה עם הרפיה לשפרment (RARE) רצף בתצוגת הצלב של המדגם או הגוף של החיה עם msec 2,200 זמן החזרה, זמן הד 8.9 msec, גורם RARE 8, שדה הראיה 4 x 4 ס&quot;מ 2, פורסים גודל 1.0 מ&quot;מ, מטריקס עובי 266 x 266, ב-מטוס ברזולוציה 150 x 150 מיקרומטר 2, ומספר הממוצע 6. כדי להתחיל בניסוי, לחץ על כפתור &#39;תנועת האור&#39; בחלון בקרת הסריקה על קונסולת התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוכשת 19 תמונות F תוך שימוש ברצף FLASH באותו אזור של MRI H 1 עם זמן החזרה 220 ms, זווית flip = 30 °, זמן הד 3.078 ms, מטריצה בגודל 32 x 32, ב-מטוס ברזולוציה 1.25 x 1.25 מ&quot;מ 2, פורסים 4.0 מ&quot;מ עובי, ומספר ממוצע 768. כדי להתחיל בניסוי, לחץ על &quot;GOP &#39;(G o- O n- P ipeline) שבחלון כלי בקרה ספקטרומטר על קונסולת תוכנה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר MRI, להרדים את העכבר עם injecti intraperitonealעל של 15 μl / g קטמין משקל גוף / פתרון xylazine (150 מ&quot;ג קטמין / 18 מ&quot;ג xylazine לכל משקל ק&quot;ג גוף) ואחריו לנקב לב עבור exsanguination. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשחזר עכבר מההרדמה, להסיר את הקטטר intraperitoneal אבל לא להשאיר את החיה ללא השגחה עד שהוא חוזר להכרה מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד 19 F שכותרתו ריכוזים של חומצות מרות 11-13 מ קציר איבר, לשמור על הרדמה עם קטמין בתוספת xylazine כמתואר לעיל. </li></ol>

<ol><li>Thomas, C., Pellicciari, R., Pruzanski, M., Auwerx, J., Schoonjans, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+bile-acid+signalling+for+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting bile-acid signalling for metabolic diseases.</a> Nat Rev Drug Discov. 7, 678-693 (2008).</li>
<li>Vallim, T. Q., Edwards, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acids+have+the+gall+to+function+as+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Bile acids have the gall to function as hormones.</a> Cell Metab. 10, 162-164 (2009).</li>
<li>Dawson, P. A., Karpen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+Review+Series%3A+Intestinal+Lipid+Metabolism%3A+New+Developments+and+Current+Insights+Intestinal+transport+and+metabolism+of+bile+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Thematic Review Series: Intestinal Lipid Metabolism: New Developments and Current Insights Intestinal transport and metabolism of bile acids.</a> Journal of Lipid Research. 56, 1085-1099 (2015).</li>
<li>Dawson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+deletion+of+the+ileal+bile+acid+transporter+eliminates+enterohepatic+cycling+of+bile+acids+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Targeted deletion of the ileal bile acid transporter eliminates enterohepatic cycling of bile acids in mice.</a> J Biol Chem. 278, 33920-33927 (2003).</li>
<li>Pattni, S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+understanding+of+bile+acid+malabsorption%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the understanding of bile acid malabsorption.</a> Br Med Bull. 92, 79-93 (2009).</li>
<li>Walters, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mechanism+for+bile+acid+diarrhea%3A+defective+feedback+inhibition+of+bile+acid+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A new mechanism for bile acid diarrhea: defective feedback inhibition of bile acid biosynthesis.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1189-1194 (2009).</li>
<li>Hofmann, A. F., Mangelsdorf, D. J., Kliewer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+diarrhea+due+to+excessive+bile+acid+synthesis+and+not+defective+ileal+transport%3A+a+new+syndrome+of+defective+fibroblast+growth+factor+19+release%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Chronic diarrhea due to excessive bile acid synthesis and not defective ileal transport: a new syndrome of defective fibroblast growth factor 19 release.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1151-1154 (2009).</li>
<li>Flynn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deoxycholic+acid+promotes+the+growth+of+colonic+aberrant+crypt+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Deoxycholic acid promotes the growth of colonic aberrant crypt foci.</a> Mol Carcinog. 46, 60-70 (2007).</li>
<li>Glinghammar, B., Rafter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carcinogenesis+in+the+colon%3A+interaction+between+luminal+factors+and+genetic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">Carcinogenesis in the colon: interaction between luminal factors and genetic factors.</a> Eur J Cancer Prev. 8, S87-S94 (1999).</li>
<li>Bernstein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carcinogenicity+of+deoxycholate%2C+a+secondary+bile+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Carcinogenicity of deoxycholate, a secondary bile acid.</a> Arch Toxicol. 85, 863-871 (2011).</li>
<li>Zheng, X., Ekins, S., Raufman, J. P., Polli, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+models+for+drug+inhibition+of+the+human+apical+sodium-dependent+bile+acid+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Computational models for drug inhibition of the human apical sodium-dependent bile acid transporter.</a> Mol Pharm. 6, 1591-1603 (2009).</li>
<li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+characterization+of+a+novel+fluorinated+magnetic+resonance+imaging+agent+for+functional+analysis+of+bile+Acid+transporter+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Design and characterization of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile Acid transporter activity.</a> Pharm Res. 30, 1240-1251 (2013).</li>
<li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+evaluation+of+a+novel+trifluorinated+imaging+agent+for+assessment+of+bile+acid+transport+using+fluorine+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Design and evaluation of a novel trifluorinated imaging agent for assessment of bile acid transport using fluorine magnetic resonance imaging.</a> J Pharm Sci. 103, 3782-3792 (2014).</li>
<li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+performance+of+a+novel+fluorinated+magnetic+resonance+imaging+agent+for+functional+analysis+of+bile+acid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">In vivo performance of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile acid transport.</a> Mol Pharm. 11, 1575-1582 (2014).</li>
<li>Raufman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Magnetic+Resonance+Imaging+to+Detect+Biliary+Excretion+of+19F-Labeled+Drug+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Metab+Dispos%22%5BJournal%5D)">In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Detect Biliary Excretion of 19F-Labeled Drug in Mice.</a> Drug Metab Dispos. 39, 736-739 (2011).</li>
<li>Ridlon, J. M., Kang, D. J., Hylemon, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+salt+biotransformations+by+human+intestinal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Bile salt biotransformations by human intestinal bacteria.</a> J Lipid Res. 47, 241-259 (2006).</li>
<li>Frisch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-methyl-11C%5Dcholylsarcosine%2C+a+novel+bile+acid+tracer+for+PET%2FCT+of+hepatic+excretory+function%3A+radiosynthesis+and+proof-of-concept+studies+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">N-methyl-11C]cholylsarcosine, a novel bile acid tracer for PET/CT of hepatic excretory function: radiosynthesis and proof-of-concept studies in pigs.</a> J Nucl Med. 53, 772-778 (2012).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

הסינתזה של CA-ליס-TFA ו- CA-sar-TFMA ועל ניתוח במבחנה של התחבורה שלהם באמצעות transfected ביציבות תאי כליה כלבית מדין-דארבי להביע ASBT ותאי כליה עובריים אנושיים המבטא את נתרן / taurocholate שיתוף הובלת פוליפפטיד (NTCP) מפורטים במקום אחר 13,14. כאן, הדגש הוא על מתן פומי של MFBA ידי gavage לחיות חיות, ואחריו הקציר של כיס המרה, הכבד, ודם לניתוח תוכן MFBA, ו, בעיקר, הדמיה MFBA בכיס המרה באמצעות MRI ביצורים חיים. צעדים קריטיים כוללים הימנעות הרדמה מבוססי פלואור אשר ...

יחד עם התפקיד הקלאסי שלהם כמו חומרי ניקוי המאפשרים ספיגת השומן מהבטן, חומצות מרה צמחו כמו מולקולות חזקות איתות המשפיעים באיברים רבים נוספים על אלה הקשורים 1,2 זרימת enterohepatic שלהם. בנוסף לשליטה מטבוליזם שלהם, חומצות מרה לווסת כמה היבטים של הפיזיולוגיה של מערכת העיכול (למשל, תנועתיות המעיים ייצור ההורמונים האינקרטינים, פיזיולוגיה המעי הגס, ואת הנטייה לפתח סרטן) ויש להם תופעות מערכתיות על הטון וסקולרית, גלוקוזה מטבוליזם השומנים, וניצול אנרגיה. בעוד חלק מהתופעות הללו מתווכות במעיים, אחרים נובעים משינויים לאחר ארוחה רמות חומצות מרה מערכתית, כאמור בחולים שמנים או לאחר ניתוח עוקפים קיבה. כדי להבהיר את הפעולות מטבולית המורכבות של חומצות מרת הטכנולוגיה חדשה נדרשת המאפשרות ניטור סימולטני של רמות חומצת מרה בתאים אנטומיים שונים, במערכת העיכול ו metaרקמות bolic (כבד, לבלב, שרירי שלד שומן). קבלת מידע של זמן ומרחב כזה דורש טכנולוגיה חדשנית - in vivo הדמיה באמצעות קליעים נותבים חומצות מרה הרומן כפי שמתואר כאן הוא כזה גישה חדשנית. חומצות מרה הרכב והפצה בתאים אנטומיים מוסדרים על ידי גורמים לווסת סינתזה בכבד שלהם ספיגת ileal, כולל דיאטה, ניתוח, טיפול אנטיביוטי ושינויים צמחיית המעיים. רגולטור מפתח של ספיגת חומצות מרות במעי עבור הזרימה שלהם enterohepatic 3 (איור 1) הוא נתרן תלוי Apical ileal החומצות המרה Transporter (ASBT; SLC10A2). למרות ספיגה פסיבית מתרחשת ברחבי המעיים, ASBT מתווכת ספיגה של 95% של חומצות מרות במעי כך בדרך כלל יש שפיכה מוגבלת של חומצות מרות לתוך הצואה. Asbt מחסר (Slc10a2 - / -) עכברים גדלו חומצות מרה בצואה וכן ACI מרה פחתהד ברכה 4. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54597/54597fig1.jpg" /> איור 1: מחזור Enterohepatic של מרת חומצות. איור של מחזור Enterohepatic לפיה מרת חומצות מסונתזות בכבד, מופרש לתוך עץ המרה המאוחסן בתוך הכיס המר, יצא אל מעי הדק הפרוקסימלי עם ארוחות, פעיל נלקח דרך ASBT ב דיסטלי המעי. בעוד כמויות קטנות של חומצות מרות נספגות באופן פסיבי לאורך הבטן, כ 95% של חומצות מרות במעי מועברים באופן פעיל על ידי ASBT וכתוצאה מכך מינימאלי פסד (כ 5%) בצואה אשר הוא מתוגמלת על ידי כמות דומה של סינתזה של חומצת מרה חדשה הכבד, ובכך שמירה על ברכת חומצות מרות יציבה. החיצים מימין לזהות גורמים שעשויים להשפיע יליד פלואור שכותרתו יציבות חומצות מרה, כולל חומצת קיבה, לבלב ואנזימים רירית המעי, והכי importantly, אנזימי hydrolytic שפורסמו על ידי מיני קלוסטרידיאל כי ליישב את מעי דק הדיסטלי ומעי גס. (השתנה עם רשות 16) <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> ספיגה של חומצות מרות יכולה להיות מסווגת לשלושה סוגים, שלכל אחד מהם מגבירים חומצות מרות dihydroxy צואה, ובכך לגרום שלשולים לסירוגין או כרוניים. הקלד 1 תוצאות הפתולוגיה ileal ברוטו (למשל, כריתה, מחלת קרוהן) 5. הקלד 3 תוצאות כריתת כיס מרה, vagotomy, מחלת צליאק, יתר חיידקי, ואת אי ספיקת לבלב. לעומת זאת, אנשים עם &quot;ראשוניים&quot; (סוג 2) ספיגה של חומצות מרה להוות אתגר אבחנתי מעולה משום שאין להם תנאים מקדימים כאלה אין ראיות של פתולוגיה של מעי. לפיכך, הספיגה של חומצת מרה העיקרית היא אבחנה בכינויו שלשול-p<html> תסמונת מעי רגיז redominant (IBS-D), אולי הסיבה הנפוצה ביותר לביקורים הקשורות גסטרואנטרולוגיה מחוץ חולה. ההערכה היא כי כשליש מהחולים עם IBS-D יש ספיגה של חומצת מרה העיקרי; בארצות הברית, זה עשוי לייצג כמה מיליוני אנשים 5. תובנות לאחרונה עולה כי BAM העיקרי נובע עיכוב משוב לקוי של סינתזה של חומצת מרה בכבד על ידי 19-גורם גדילה פיברובלסטים מעיים (FGF19), לא מן הביטוי מופחת או פונקציה של ASBT. בשנת ספיגת חומצות מרה עיקרית, רמות נמוכות בדם של FGF19 מצליחות לכבות סינתזה של חומצת מרה בכבד - גידול וכתוצאה מכך חומצות מרות במעי מרווית מובילי חומצות מרות, כולל ASBT, ואת שפיכת augmented של חומצות מרות לתוך הצואה גורמת שלשול 6 (איור 2). עכברים חסרי Fgf15 (FGF19 בעכברים) יש מורחב ברכה של חומצות המרות מוגברים חומצות מרות בצואה 7. = &quot;Jove_content&quot;&gt; <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54597/54597fig2.jpg" /> איור 2: מנגנוני מעיים של חומצות מרה ספיגה. בדרך כלל, כפי שמוצג פאנל, כ 95% של חומצות מרה במעי נספגים בתחבורה פעיל מעי דיסטלי באמצעות ASBT. כאשר ביטוי או פעילות ASBT הוא פחת (לוח ב &#39;), תוצאות ספיגות חומצות מרות במעי פגומה שפיכה של חומצות מרות לתוך המעי הגס. עם איתות FGF19 לקויה (C פנל), חוסר עיכוב משוב של תוצאות הסינתזה של חומצת מרה בכבד בריכוזים מוגברים של חומצות מרות במעי מציפי יכולת הובלת ASBT עם שפיכה של חומצות מרות לתוך המעי הגס. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a> לטווח ארוך, העלאה כרונית ACI המרה בצואהds עשוי לקדם neoplasia המעי הגס. neoplasia קולון נובע דיספלזיה רירית מתקדמת הקשורים מוטציות גנטיות סומטיים, אך גורמים סביבתיים המגבירים חומצות מרות בצואה עשוי להאיץ ולהגדיל את התהליך הזה. במכרסמים, הגדילה חומצות מרה בצואה או כתוצאה הממשל אקסוגניים או חסר Asbt לקדם דיספלזיה המעי הגס היווצרות גידולים 8-10. יש לציין, ממצאים פרווקטיביים עולים כי תרופות נפוצות בשימוש אושרה על ידי מנהל המזון ותרופות האמריקאי (FDA) potently לעכב תחבורה של חומצות מרות על ידי ASBT במבחנת 11. אם תרופות אלה להפחית תחבורת חומצות מרה קטנה מעי in vivo ולהגביר את רמות חומצת מרה בצואה, את ההשפעה הפוטנציאלית על פתולוגיה מעי גס תהיה בדבר. אפילו עלייה קטנה פתולוגיה המעי הגס לייחס לשימוש של תרופה כזו עשויה להיות השפעה בריאותית משמעותית. ערכת כלים אשר יכול להעריך את הסבירות של אלה ממצאים במבחנת ob אפידמיולוגייםservations ידרבן מחקר נוסף, כולל מחקרי בטיחות שלאחר השיווק. למרות הצורך, מבחנים מעשיים לזהות אנשים עם ספיגה של חומצות המרות חסרים. מדידה ישירה של חומצות מרות בצואה נדחתה לפני שנים מסורבלות, לא מעשי, ולא אמין 5. גישות חלופיות כוללות מדידת שמירה של נגזרת חומצה כולית רדיואקטיבי שכותרתו סלניום (75 SeHCAT) ורמות פלזמה של 7α-הידרוקסי-4-cholesten-3-אחד (C4), או משפט טיפולי קלסרים חומצות מרות. 75 בדיקות SeHCAT יש זמינות מוגבלת באירופה והוא לא ה- FDA או זמין לשימוש בארה&quot;ב יתר על כן, אפילו חשיפה לקרינה צנועה (0.26 mSv / 75 מבחן SeHCAT) מבדיקות אבחון מעלה חששות, ואת יתר חיידקי מחלה כבדה מתקדמת עלולים לבלבל 75 תוצאות SeHCAT. בדיקות C4 הוא פוטנציאל אטרקטיבי מאז פלזמה רק נדרש, אבל יש לו val חיובי חזוי נמוךue ובדיקה אינו זמין באופן נרחב. מדידת רמות בסרום של FGF19 יש מגבלות דומות. לעתים קרובות רופאים לפנות למשפט טיפולי של sequestrants חומצות מרות, אך גישה זו אינה יכולה לספק אבחנה סופית של ספיגה של חומצות המרות 5. מסיבות אלה, גישת MRI רומן הייתה יזומה כדי למדוד תחבורה של חומצות מרות והפצת in vivo באמצעות חומצות מרה רבות-פלואור חדשנית (MFBA-MRI). MFBA המכיל שלושה אטומי פלואור (19 ו), איזוטופ יציב של שפע 100% טבעי, מועברים באופן דומה לחומצות מרה יליד 12, והוא יכול לשמש כדי לחזות התחבורה של חומצות מרה עם שילוב של פרוטון (1 H) פלואור ( 19 F) MRI, שיטה רגישה, בטוחה ללא קרינה מייננת חשיפה 13,14.

<table><tbody><tr><td>דואל גודל-21 כל מטחנת רקמות זכוכית</td><td>Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ</td><td>885351-0022</td><td></td></tr><tr><td>Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T נשא אופקי MR סורק</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH, גרמניה</td><td></td><td>השתמש בתוכנת Paravision גרסה 5.1 נלווית (ראה שלב 3.5)</td></tr><tr><td>Bruker 40 מ"מ 19F/1H סליל נפח מכוון כפול</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH, גרמניה</td><td></td><td>השתמש בתוכנת Paravision נלווית גרסה 5.1 (ראה שלב 3.5)</td></tr><tr><td>מערכת Waters Acquity UPLC עם גלאי מרובע</td><td>תאגיד Waters Corporation, Milford, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Waters Acquity UPLC אתילן מגשר היברידי C8 1.7 &mu; m 2.1 x 50 מ"מ עמוד</td><td>תאגיד ווטרס, מילפורד, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gavage Needle</td><td>Braintree Scientific, INC.</td><td>N-010</td><td>20 G-1.5 אינץ' מעוקל 2.25 מ"מ כדור</td></tr><tr><td>2 נירוסטה המוסטטים&nbsp;</td><td>VWR</td><td>10755-018</td><td>4 ו-5 אינץ', ישר</td></tr><tr><td>קטמין</td><td>MWI אספקה וטרינרית</td><td>501090</td><td>קטמין זטאמין 100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>Akorn, Inc.</td><td></td><td>20 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>קטטר תוך-צפקי</td><td>Abbott</td><td>AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42</td><td>24-G x 0.75 אינץ'</td></tr></tbody></table>

שימוש רב-פלואור מרת חומצות<em&gt; in vivo</em&gt; דימות תהודה מגנטית כדי למדוד חומצות מרה התחבורה

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

יחד עם התפקיד המסורתי שלהם כמו חומרי ניקוי המאפשרים ספיגות שומן, המתעורר ספרות עולה כי חומצות מרות הן מולקולות איתות חזקות כי להשפיע על איברים מרובים; הם לווסת תנועתיות המעיים וייצור הורמונים, לשנות את הטון של כלי הדם, חילוף החומרים של הגלוקוז, מטבוליזם של שומנים, ניצול אנרגיה. שינויים חומצות מרה בצואה עשוי לשנות את Microbiome הבטן ולקדם פתולוגיה המעי הגס כולל שלשול cholerrheic וסרטן המעי הגס. רגולטורים מרכזיים של רכב חומצות מרות בצואה הם Transporter החומצות המרים נתרן תלוי Apical המעי הדק (ASBT) וצמיחת פיברובלסטים גורמים-19 (FGF19). ביטוי מופחת ותפקוד של ASBT פוחתים חומצות מרות במעי-תופסות. יתר על כן, נתונים חוץ גופית מראים כי כמה תרופות ה- FDA לעכב פונקציה ASBT. שחרור FGF19 חסר מגביר כבד מר סינתזת חומצה ולשחרר לתוך המעיים לרמות מציפי ASBT. כך או תפקוד לקוי ASBT או חסר FGF19 מגביר fחומצות מרות ecal ועלולות לגרום שלשול כרוני ולקדם neoplasia מעי הגס. למרבה הצער, כלים למדוד ספיגה של חומצות מרה הפעולות של תרופות בתחבורה חומצות מרה in vivo מוגבלים. כדי להבין את הפעולות המורכבות של חומצות מרות, טכניקות נדרשות המאפשרות ניטור סימולטני של חומצות מרות במעי ורקמות מטבולית. זה הוביל אותנו להרות שיטה חדשנית למדידת התחבורה של חומצות מרה בבעלי חיים באמצעות שילוב של פרוטון (1 H) פלואור (19 F) דימות תהודה מגנטית (MRI). קליעים נותבים חדשניים פלואור (19 F) מבוססים MRI החי נוצרו ונבדק, הוא במבחנת in vivo. יתרונות של גישה זו כוללים היעדר חשיפה לקרינה מייננת ופוטנציאל translational עבור מחקר ושימוש קליני.

השימוש MFBA עבור in vivo MRI כדי &quot;לראות&quot; תחבורה חומצות מרה בזמן אמת יש פוטנציאל גדול עבור שני מחקר ושימוש קליני. יתר על כן, השיטות שתוארו כאן כריתה של כיס המרה וניתוח ביוכימיים של התוכן שלה באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית ו ספקטרומטריית מסה לספק אמצעי המאשר תוצאות ההדמיה. עם זאת, את תוקפו של שיטות אלה דורש מינון מדויק, העיתוי של מבחני, ולוקליזציה של כיס המרה הדמיה או הסרה כירורגית. לעניין האחרון זה, זה מאוד חשוב כי אברי הבטן של העכבר ...

כלים לאבחן ספיגה של חומצות מרה למדוד תחבורה חומצות מרה in vivo מוגבלים. גישה חדשנית בבעלי חיים מתוארת אשר מנצלת פרוטון משולב (1 H) בתוספת פלואור (19 F) תהודה מגנטית; יש שיטה חדשנית זו פוטנציאל translational למסך ספיגה של חומצות מרה בפרקטיקה הקלינית.

שימוש רב-פלואור מרת חומצות<em&gt; In vivo</em&gt; דימות תהודה מגנטית כדי למדוד חומצות מרה התחבורה

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לסמן חומצות מרה באמצעות פלואור שאינו רדיואקטיבי המצוי בטבע, לצורך מדידת ריכוזן בכיס המרה באמצעות MRI, כדי לבחון את הובלת חומצות המרה בבעלי חיים חיים. לגישה זו פוטנציאל לזיהוי אנשים הסובלים משלשולים כרוניים שנדרשים לטיפול בשל ספיגה לקויה של חומצות מרה. היתרונות המרכזיים של גישה זו הם שאינה דורשת חשיפה לקרינה מייננת ושיש לה פוטנציאל תרגומי רב הן למחקר קליני והן לפרקטיקה רפואית.הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר הבנו כי בארצות הברית אין בדיקות קליניות מעשיות לזיהוי ליקויים בהובלת חומצות מרה במעי. התחילו במילוי מזרק של 1 mL בנפח המתאים של תמיסת סטוק של חומצה מרה המסומנת בפלואור, וחברו מחט להזנה קיבית (gastric gavage) מעוקל עם קצה בולבי, במידה 20-gauge ובאורך 1.5-inch. לאחר מכן, השתמשו באגודל ובאצבע כדי לתפוס בחוזקה את העכבר בעור הרפוי בגב הצוואר, ובשאר האצבעות כדי לתפוס את העור בגב התחתון ובזנב.תוך החזקת החיה במצב זקוף, העבירו את מחט הזריקה (gavage) לאורך דופן ותקרת הפה אל תוך הוושט ומשם אל הקיבה. בנקודת הסיום הניסויית המתאימה, בצעו חתך עורי בקו המרכז של הבטן מהפיובס ועד לסרטית החרב, ולאחריו חתך תואם דרך ריפוד הפריטונאום כדי לחשוף את איברי הבטן מבלי לנקב את הסרעוף. לאחר מכן, השתמשו בתפסן בן חמישה אינצ'ים כדי להרים את תהליך הסרטית (xiphoid process), ובכך לחשוף את חלל הבטן העליון.בעזרת פינצטה וכלי קהה, נתחו והזיזו את הכבד הצידה כדי לחשוף את כיס המרה. לאחר מכן, מקמו תפס של ארבעה אינץ' על תעלת המרה המשותפת וחתכו את הרצועה המחברת את הקוטב העליון של כיס המרה לסרעפת, כדי לאפשר את הזזת כיס המרה לצד ימין של הבטן. יש להקפיד לתפוס את תעלת המרה המשותפת בהקדם האפשרי לאחר הלפרוטומיה, כדי למנוע קרעים בכבד או התרוקנות לא מכוונת של כיס המרה.לאחר ריקון הדם, העבירו את הדם שנאסף לשפרוּר עם הפרין בנפח 1.5 מיליליטר לצורך סבוב בצנטריפוגה. השקיעו את הפלזמה באמצעות ארבעה חלקים של acetonitrile וסובבו את דגימת הדם שוב בצנטריפוגה. לאחר מכן, נתחו את הנוזל העליון באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית וספקטרוסקופיה של מסות.כדי לשחרר את כיס המרה, בצעו נתיחה קהה (blunt dissection) של הרקמה הסובבת, ולאחריה חיתוך של צינור המרה המשותף מתחת לתסמיך. שקלו את כיס המרה שהוצא, לאחר מכן הניחו את הרקמה במבחנה למיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5-milliliter והוציאו את הכבד. כדי למצות את הרקמות, הוסיפו 75%acetonitrile ו-25%water והומוגניזרו כ-100 milligrams של הכבד ואת כל כיס המרה בהומוגניזרי רקמה מזכוכית בגודל 21 באופן נפרד על קרח.העבירו את הדגימות לפ-Eppendorf tube בנפח 1.5 מיליליטר וסובבו בצנטריפוגה. לאחר מכן, דללו את התמציות כנדרש וכממו את תכולת חומצות המרה באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית ומספקטרומטריה של מסות. בנקודת הסיום הניסויית המתאימה, נקו את החלק הפנימי של הירך השמאלית של העכבר המורדם והחדירו קטטר מחט במידה 24-gauge ובאורך 0.75-inch באופן תת-עורי דרך הירך אל תוך החלל הבטני.הוציאו את המחט, והשאירו את הקטטר האינטרה-פריטוניאלי במקומו. העבירו את העכבר למיטת בעלי החיים של סורק ה-MRI וחברו רפידה תרמית בבקרה טמפרטורלית. חברו את הקטטר לקטע צינור סטרילי באורך 72 אינץ', וחברו את הצינור למזרק סטרילי בנפח 1 מיליליטר לשמירה על ההרדמה לאורך הפרוצדורה.לאחר וידוא כי אין מתכות בקרבת הסורק, השתמשו בסליל MRI נפחי ליניארי עם כוונון כפול לפרוטונים ופלואור להשגרה ולקליטה של אותות תדר הרדיו. לאחר מכן, השתמשו ברצף fast low angle shot כדי להשיג תמונות של קרקפת בשלושה חתכים לצורך כיול המערכת ואימות מיקומו של בעל החיים. כדי להתחיל את הניסוי, לחצו על כפתור הרמזור כדי לרכוש תמונות תהודה מגנטית של פרוטונים בריבוי חתכים באמצעות רצף rapid acquisition with relaxation and enhancement במבט חציוני של הדגימה.לבסוף, לחצו על כפתור ה-GOP בחלון כלי הבקרה של הספקטרומטר כדי לרכוש תמונות פלואור באמצעות רצף צילום שני מהיר בזווית נמוכה באותו אזור. בשיטה זו, ניתן למדוד ריכוז סלקטיבי מאוד של חומצה מרובת-פלואור של מרה, או MFBA, בכיס המרה, אשר גבוה בסדר גודל של אלף מונים מהרמות שנצפו בכבד או בפלזמה, דבר שאינו עולה בקנה אחד עם הרמות הפיזיולוגיות של חומצות מרה. כפי שצפוי מהקינטיקה הפיזיולוגית של מחזור אנטרוהפטי של חומצות מרה, ריכוזי השיא של MFBA בכיס המרה נצפים ארבע עד שבע שעות לאחר מתן מינון פומי.אכן, שעתיים וחצי עד ארבע שעות לאחר מתן MFBA בבלשת פה (oral gavage), נצפים אותות פלואור הנובעים ממה שנראה כתעלת המרה המשותפת ואות חזק יותר הנובע מכיס המרה. לאחר שבע עד שמונה וחצי שעות, האות מתעלת המרה המשותפת אינו מזוהה יותר, ואות הפלואור מכיס המרה עולה לעוצמה זהה לאות הנובע מפנטום MFBA הסמוך. בעכברים החסרים טרנספורטר חומצות מרה תלוי נתרן אפקלי (apical sodium-dependent bile acid transporter-deficient), המראים ספיגה מעיתית מופחתת של חומצות מרה, חלה הפחתה של פי 22 בקירוב בריכוז ה-MFBA בהשוואה לבעלי חיים מסוג פרא (wild-type) המשמשים כביקורת.ואכן, בעוד שזוהה אות פלואור חזק בכיסי המרה של עכברים מסוג פרא (wild-type), לא נמצא אות פלואור מקביל בבעליים עם חסר בנשא חומצות מרה תלוי נתרן אפקלי (apical sodium-dependent bile acid transporter-deficient), דבר המאשר הן ש-MFBA מטופלים באופן דומה לחומצות מרה פיזיולוגיות והן ש-MRI של MFBA יכול לשמש לזיהוי פגיעה בספיגת חומצות מרה במעי. לאחר רכישת המיומנות וביצוע נכון, ניתן להשלים את הלפרוטומיה, דגימת הדם ואת החתכים בכיס המרה ובכבד בתוך 20 דקות. רכישת האות במהלך ה-MRI תימשך בין שעה וחצי לשעתיים.לאחר פיתוחה ומסחורו, לטכניקה זו יש פוטנציאל לסלול את הדרך לחקר תפקידו של הובלת חומצות מרה במעיים בפיזיולוגיה ובמחלות, הן בבעלי חיים קטנים והן בבני אדם. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן מתן חומצות מרה המסומנות בחומר זר לבעלי חיים קטנים, ומדידת ספיגתן בכבד ובכיס המרה באמצעות MRI או באמצעות חיתוך של האיברים.

using-multi-fluorinated-bile-acids-vivo-magnetic-resonance-imaging-to

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים פרוטוקול כללי לin vivo מעקב תא באמצעות MRI במודל של עכברים עם תאי שכותרתו לשעבר vivo. פרוטוקול טיפוסי לתיוג תא, עיבוד רכישת תמונה וכימות כלול.

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

כאן אנו מתארים טכניקה לקנולציה של צינור הלימפה המזנטרי בחולדות המאפשרת כימות של הובלת שומנים ותרופות דרך מערכת הלימפה לאחר מתן המעי. ניתן להתאים את הטכניקה להערכת ריכוזי לימפה מזנטרית ו/או הובלה של נוזלים, תאי חיסון, פפטידים, חלבונים ומולקולות ליפופיליות.

לימפה Duct cannulated עכברוש דגם mesenteric: בקשה להערכה של המעיים הלימפה תרופות תחבורה

אנו מספקים פרוטוקול מפורט לחקר דינמיקת חומצות המרה בתאים חיים באמצעות חיישן BAS FRET מקודד גנטית. חיישן חומצת מרה זה מייצג כלי ייחודי לחקר (ויסות של) הובלת חומצת מרה והפעלת FXR במגוון רחב של סוגי תאים.

ניטור בזמן אמת של תאיים חומצות מרה Dynamics שימוש חומצות מרה חיישן מבוסס סריג גנטי מקודד

הגששים במטרה לייצג כלי חדשני עבור ניתוח המנגנונים המולקולריים, כגון חלבון ביטוי בסוגים שונים של המחלה (למשל, דלקת, זיהום, ו- tumorigenesis). במחקר זה, אנו מתארים הערכה כמותית טומוגרפי תלת מימדי של הסתננות מקרופאג מעיים במודל מאתר של קוליטיס באמצעות טומוגרפיה בתיווך פלורסצנטיות F4/80-ספציפיות.

בתיווך פלורסצנטיות טומוגרפיה זיהוי, כימות הקשורות מקרופאג דלקת מעיים מאתר

הגישה של חומרים מזינים, microbiota מטבוליטים ותרופות אל מחזור הדם נשלטת על ידי למכשול בטן-דם (GBB). אנו מתארים שיטה ישירה למדידת ה GBB חדירות ויוו, אשר, בניגוד נפוץ שיטות עקיפות, כמעט אינה מושפעת פונקציות כבד וכליות.

שיטת In Vivo להערכת את מחסום הדם-הבטן ואת חילוף החומרים בכבד של מוצרים Microbiota

פרוטוקול זה יש את המטרה של ניטור שינויים vivo myelin (demyelination ו remyelination) על ידי טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים (PET) הדמיה במודל של בעלי חיים של טרשת נפוצה.

הדמיית טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים למדידת Vivo של תוכן מיאלין במודל עכברוש Lysolecithin של טרשת נפוצה

באמצעות מודל עכבר של מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD) הנגרמת על ידי דיאטה, אנו מתארים את השימוש בטכניקות הדמיה מיקרו-ממוחשבות חדשניות in vivo כשיטה לא פולשנית להערכת שלבי ההתקדמות של NAFLD, תוך התמקדות בעיקר ברשת כלי הדם בכבד בשל מעורבותה המשמעותית בחוסר ויסות כבד הקשור ל- NAFLD.

רומן in vivo טכניקות הדמיה טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת להערכת ההתקדמות של מחלת כבד שומני לא אלכוהולי

במאמר זה אנו מתארים שיטת הומוגניזציה מהירה בסיוע הפרדה מגנטית לייצור בקנה מידה גדול של ננו-שלפוחיות שמקורן באנדוזומים כסוג חדש של חיקוי אקסוזום (EMs) החולקים את אותו מקור ביולוגי ומבנה, מורפולוגיה והרכב חלבונים דומים של שלפוחיות חוץ-תאיות מקומיות (EV).

שיטת הומוגניזציה במהירות גבוהה בסיוע הפרדה מגנטית לייצור בקנה מידה גדול של שלפוחיות שמקורן באנדוזום

פרוטוקול זה משתמש במיטה רב-תאית להדמיית תהודה מגנטית מקבילה (MRI) של עד ארבעה בעלי חיים לזיהוי גידולי אדנוקרצינומה בלבלב במודלים מהונדסים גנטית. פרוטוקול MRI רב-בעלי חיים זה מהיר וחסכוני לזיהוי ומדידת גידולים, ומקל על בחירת בעלי חיים למחקרים פרה-קליניים ומעקב לאורך זמן אחר צמיחת הגידול.

הדמיית תהודה מגנטית רב-בעלי חיים למדידות גידולים במודלים של עכברים סרטן לבלב

שיטה מדויקת ומעשית כדי למדוד פרמטרים כמו זן ברקמת שריר הלב הוא בעל ערך קליני רב, שכן הוכח, כי הלחץ הוא סמן רגיש יותר מוקדם עבור תפקוד כויץ מאשר שימוש תכוף פרמטר EF.

תהודה מגנטית נגזר מסננים הערכה שריר הלב באמצעות מעקב אחר תכונות

למד שיטה חדשנית לאבחון ספיגה לקויה של חומצות מרה באמצעות דימות תהודה מגנטית רב-פלואורי בעכברים חיים. גלה כיצד שימוש בפלואורין לא רדיואקטיבי מאפשר מדידה מדויקת ללא קרינה מייננת.

שימוש רב-פלואור מרת חומצות

גלה סרטונים נוספים