מיפוי אופטי ברזולוציה גבוהה של צומת סין- פרוזדורי העכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול למיפוי אופטי של פעילות חשמלית מן אטריום ימין בעכבר במיוחד צומת סין-פרוזדורים, ברזולוציה גבוהה במרחב ובזמן.

המטרה הכוללת של פרוטוקול ניסיוני זה היא לבצע מיפוי אופטי של הצומת הסינו-פרוזדורי של העכבר מלב שלם של לנגנדורף או מתכשיר פרוזדורים מבודד. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האלקטרופיזיולוגיה והפתופיזיולוגיה של הצומת הסינוסי על המנגנונים של הפרעות קוצב לב, תסמונת סינוס חולה ומחלות שונות הקשורות להפרעות קצב פרוזדורים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת חקירה של פרמטרים מרובים ברקמות השלמות ברזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה מאוד.

לאחר אישור רמת ההרדמה המתאימה על ידי צביטת הבוהן, השתמש במספריים מעוקלים של מאיו בגודל 5.5 אינץ' ובמלקחיים המוסטטיים של קלי בגודל 5.5 אינץ' כדי לבצע חתך של סנטימטר אחד בקדמת בית החזה. בעזרת מלקחיים מעוקלים של איריס בגודל ארבעה אינץ', תפסו במהירות את רקמת הריאה והשתמשו במספריים של איריס בגודל ארבעה שליש אינץ' כדי לחתוך את הריאה, התימוס והלב יחד, יחד עם קרום הלב. שטפו את הרקמות בתמיסת Tyrode מחומצנת של 37 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן השתמש במספריים מעוקלים של Vannas Tubingen בגודל שלושה אינץ' ובארבעה שליש אינץ' מלקחיים מספר חמש כדי להסיר את הריאה, בלוטת התימוס ורקמת השומן מהלב. לאחר מכן, השתמש בצינורית 21 מד בהתאמה אישית ושני מלקחיים מעוקלים בגודל 4.3 אינץ' מספר חמש B כדי להחדיר את אבי העורקים ובו זמנית לחלחל ולמזג את הלב עם תמיסת טירוד של 37 מעלות צלזיוס המכוונת את התמיסה דרך מסנן ניילון מוטבע של 11 מיקרון לפני הזלוף כדי למנוע סתימת זרימת הדם הכלילית. לאחר מכן חבר מתמר לחץ למנעול Luer בקו הזלוף באמצעות תא עצירה תלת-כיווני כדי לנטר את לחץ אבי העורקים, תוך התאמת מהירות הזלוף כדי לשמור על לחץ אבי העורקים בין 60 ל-80 מילימטרים של כספית לפי הצורך.

למיפוי אופטי של הצומת הסינו-פרוזדורי מלב שחדר לנגנדורף, מקם את האיבר בכיוון אופקי כשהצד האחורי פונה כלפי מעלה בתא אמבטיה של איבר רקמת זכוכית והשתמש בפינים בקוטר 0.1 מילימטר כדי לקבע את קודקוד החדר לתחתית החדר המצופה סיליקון כדי למנוע תנועה הנגרמת על ידי זרם במהלך הניסוי. הכנס צינור סיליקון קטן לחדר השמאלי דרך וריד הריאה, הפרוזדור השמאלי והמסתם המיטרלי והשתמש בתפר משי 40 כדי לקבע את הצינור לרקמת החיבור שמסביב. לאחר מכן, השתמש ב-40 תפרים נוספים של משי כדי לחבל את הווריד הנבוב העליון והתחתון ולהצמיד את קצה הנספח הפרוזדורי הימני לתחתית החדר.

מתחו והצמידו את הקצה השני של התפר לתחתית התא והניחו אלקטרודת קצב בהתאמה אישית על קצה התוספתן הפרוזדורי הימני. לאחר מכן הניחו שתי אלקטרודות חד קוטביות של מחט 12 מילימטר ליד בסיס החדר הימני והשמאלי והניחו את האלקטרודה הקרקעית ליד קודקוד החדר. כדי להכתים את הרקמה, הזריק את הצבע המדולל לפתח זלוף מוטבע של קו הזלוף הכלילי לאספקה על פני תקופה של חמש עד שבע דקות.

לאחר 20 דקות של ייצוב, הוסף 0.5 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס בלביסטטין לתוך הפרפוזה ולאחר מכן הזרקה של 0.1 מיליליטר של בלביסטטין מדולל ב-1 מיליליטר של תמיסת טירוד 37 מעלות צלזיוס לקו הזלוף הכלילי במשך חמש עד שבע דקות נוספות באמצעות יציאת הזרקת נעילת Luer מוטבעת. יש להשתמש בבלביסטטין בזהירות. כדי למנוע משקעים של המעכב, יש להמיס תחילה את הבלביסטטין במדיום שחומם ל-37 מעלות צלולות ולערבב במרץ את התערובת.

כדי למפות אופטית את הדגימה, קבע תחילה זכוכית מכוסה קטנה על פני התמיסה מעל הרקמה כדי להפחית את כל חפצי התנועה מהתמיסה הרוטטת. לאחר מכן באמצעות מוביל אור גמיש ומפוצל עם אור עירור המסופק על ידי זרם קבוע, רעש נמוך, מנורת הלוגן, כוון את קרן האור המסוננת אל הרקמה ודמיין את האות הפלואורסצנטי שהתקבל. לאחר קנולציה של הלב כפי שהודגם זה עתה, נתח את החדרים הרחק מהצד הקדמי ופתח את הפרוזדור הימני דרך המסתם התלת-שפידי לאורך ציר הווריד הנבוב העליון של המסתם התלת-שפתי ואחריו חתך דרך הגפה המדיאלית של ה-crista terminalis.

כדי לפתוח את הדופן החופשית של הפרוזדורים הקדמיים, בצע חתך מקו האמצע של חתך הגפה המדיאלי לקצה הפינה התחתונה הימנית של התוספתן הפרוזדורי הימני והצמד את הקיר החופשי הפרוזדורי השטוח לתחתית תא מצופה סיליקון. כדי לפתוח את התוספתן הפרוזדורי השמאלי, חתוך את המסתם המיטרלי לאורך הפינה העליונה של המסתם המיטרלי של התוספתן הפרוזדורי השמאלי. לאחר מכן הצמד את האטריום השמאלי הפתוח כפי שנעשה בעבר עבור האטריום הימני.

ואז הסר חלקית את רקמת החדר. שמרו על שפת רקמת חדר להצמדת התכשיר למניעת נזק לעלייה והצמידו את הרקמה לתחתית תא מצופה סילגארד. כעת הרם את התכשיר הסופי בכ-0.5 מילימטרים מתחתית החדר המצופה סיליקון כדי לאפשר איחוי על הן מהמשטח האפיקרדיאלי והן מהמשטח האנדוקרדיאלי והיתוך את הדגימה בתמיסת טירוד של 37 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן הנח אלקטרודת כלוריד כסף בהתאמה אישית על קצה התוספתן הפרוזדורי הימני המנותח. הנח אלקטרוקרדיוגרמה אחת של מחט 12 מילימטר חד קוטבית ליד כל אחד מהנספחים הפרוזדוריים הימניים והשמאליים, והנח את האלקטרודה הקרקעית ליד צומת חדר הפרוזדורים. כדי להכתים את רקמת הלב, השתמש בפיפטה של 1 מילימטר כדי לשחרר לאט צבע רגיש למתח מדולל בתמיסת טירוד של 37 מעלות צלזיוס ישירות על הרקמה.

לאחר מכן יש לשתק את הדגימה עם מריחה ישירה של בלביסטטין מדולל על הרקמה ואחריה מתן של 0.5 מיליליטר נוסף של בלביסטטין באמצעות הפרפוזה ולמפות אופטית את הדגימה כפי שהודגם זה עתה. שלבי צביעת הרקמות ועיכוב הבלביסטטין הם קריטיים הדורשים יישום מדויק והליך צביעה מדויק כך שהפרמטרים הפיזיולוגיים של הפרוזדורים כולל קצב הלב, הקצאת קוצב הלב המוביל והולכת הפרוזדורים לא יושפעו. כאן מוצגת מפת מתאר טיפוסית להפעלת פרוזדורים ימניים ששוחזרה לקצב סינוס ספונטני עבור לב עכבר עם פרוזדורף עם שתי מפות מתאר פרוזדוריות ימניות תואמות שנרכשו בקצבי דגימה של 1 ו-0.5 אלפיות השנייה.

נקודת ההפעלה המוקדמת ממוקמת באזור הבין-קבלי ליד הווריד הנבוב העליון שבו מוגדר הצומת הסינו-פרוזדורי מבחינה אנטומית. בניסוי זה, לאחר קצב תוספתן פרוזדורי ימני במשך דקה אחת לפחות ב-10 עד 12 הרץ, הגירוי החשמלי הופסק וזמן ההתאוששות של הצומת הסינוס-פרוזדורי חושב כמרווח הזמן בין פוטנציאל הפעולה האחרון שנלכד לבין פוטנציאל הפעולה הספונטני הראשון. הפעלת הכנת הפרוזדורים המבודדת במהלך קצב סינוס ספונטני מאפשרת לזהות את האזור המדויק של מיקום קוצב הלב המוביל.

אם הליכי הניתוח והעמסת הצבע מתבצעים כראוי, אין להבחין בשינויים משמעותיים במאפיינים הפיזיולוגיים של האטריום. למרות שצביעה עורקית עשויה לדרוש כמות גדולה יותר של צבע, נראה כי האות הפלואורסצנטי ברקמת אזור הצומת הסינו-אטריאלי יציב יותר בשיטת טעינה זו עם זמן דעיכה בעוצמת האות לאחר צביעה כלילית כמעט פי שניים מזה לאחר צביעה על פני השטח. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 30, 40 דקות אם היא מבוצעת כראוי.

בזמן ניסיון הליך זה, הקפד לאתר אנטומיה של פרוזדורים לפני ביצוע חתך כדי למנוע פגיעה ברקמת הפרוזדורים ובצומת הסינוס. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע אמצעים אחרים כמו הקלטות אלקטרודות מיטרליות מזכוכית קונבנציונליות כדי לענות על שאלות נוספות לגבי מאפייני פוטנציאל טרנסממברני קומוטטיבי. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הפיזיולוגיה של האינטלקט לחקור הפרעות קצב פרוזדוריות כולל תפקוד לקוי של בלוטות סינו-אטריאליות בלב.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע מיפוי אופטי ברזולוציה גבוהה של הכנת צומת סינוס עכבר.