Name: טכניקה אינפוזיה Microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: למד טכניקת מיקרוכירורגיה בעכברים להזרקת חומרים ישירות למוח דרך עורק התרדמה הפנימי. שיטה זו מבטיחה טראומה מינימלית, שמירה על שלמות הרשת הנוירונלית וריכוזים גבוהים של החומר במוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו רוצים להודות לד"ר ליי צ'ן (בית הספר לרפואה של אייקן בהר סיני, ניו יורק) שייסד לראשונה את השימוש במודל הזה במעבדה שלנו, ולד"ר גרטשן וולף (המרכז הגרמני לחקר הסרטן, היידלברג, גרמניה) על הפצת הטכניקה במעבדה שלנו. נתמך בחלקו על ידי HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 ו- NSC 2015/17/B/NZ7/02985.

הנהלים מעורבים בפרוטוקול הבא אושרו על ידי האוניברסיטה של ​​טיפול בבעלי חיים מוסדיים מיאמי ועדת שימוש (IACUC). בנוסף, כל ההליכים מתנהלים במתקנים שאושרו על ידי האגודה הערכה וההסמכה של הבינלאומי טיפול בבעלי חיים מעבדה (AAALAC). 1. הכנת עכברים לכירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר עם isoflurane מעורבב עם חמצן, באמצעות מערכת הרדמת מעבדה. השתמש isoflurane בשעה מוגדר בין 4-5% ותזרים חמצן 2 ליטר / דקה על מכונת המסחרי (ראה לוח חומרים). מעבירים את החיה על פני השטח ניתוח, תחת סטראו, ולקיים הרדמה באמצעות חרטומו (להשתמש isoflurane הגדרת 1.5 - תזרים 2.5 וחמצן ב 2 ליטר / דקה). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבטיח שמירה על קצב עכבר הנשימה הוא סביב 1 - 2 נשימה / sec בלי להתנשף. בנוסף, להבטיח כי בעל החיים לא להפגין תגובה לגירוי שפם הדוושה reflex (קמצוץ הבוהן). צג הנשימה שיעור ומאמץ במהלך הניתוח, לפחות כל 5 דקות. עקוב ספציפי מוסדי טיפול בבעלי חי ועדת שימוש והנחיות וטרינרים לניטור הרדמה מכרסמת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ירידה של חומר סיכה עיניים על כל עין באמצעות ספוגית סטרילית על מנת למנוע יובש. מנהל של אנטי דלקתי משכך כאבים כדי להקל נוחות מומלצת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם החיה שוכבת על גבה, לשמור על הרדמה באמצעות חרטומו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אזור הצוואר של החיה על ידי מנגב את האזור שלוש פעמים עם 70% ו chlorhexidine אתנול. לגלח את אזור הניתוח של החיה באמצעות סכין גילוח (כמפורט להלן). </li></ol> 2. דיסקציה של עורק התרדמה המשותף (CCA) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את ההליך המיקרו-כירורגיה כולו תחת סטראו. בעזרת מספריים כירורגיים מלקחיים לבצע חתך קו האמצע רדוד בצוואר, מלמעלה עצם החזה אל מתחת ל tהוא הלסת (כ -3 עד 4 ס&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחי שומן בקפידה נפרד ורקמות חיבור לחשוף את קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כרית (חפץ עגול, כ -0.5 ס&quot;מ קוטר) על החלק האחורי של הצוואר של העכבר כדי להאריך את הצוואר, עוד חשיפת האזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את הרקמות או באמצעות מפשק רקמות או ווים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצד שמאל של החיה של קנה הנשימה, בזהירות למרוט לגזרים את רקמת החיבור לחשוף את המרכז לאמנות עכשווית שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים להסיר את כל רקמת החיבור בזהירות לחשוף הסתעפות המרכז לאמנות העכשווית, והתחילה הוא עורקי הראש חיצוניים ופנימיים. </li></ol> 3. הכנה של CCA עבור עירוי ואלכוהול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס שני מגזרי ניילון תפר (כ 1 סנטימטר כל אחת) תחת עורק ראשי חיצוני (ECA), באמצעות מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח פקעת קבעה בנקודה הגבוהה ביותר האפשרית של ECA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית של ECA, מיד מעל הסתעפות המרכז לאמנות עכשווית, מקוםקשר נשלף. קשר זה צריך להיות משוחרר לעומת הקשר העליון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את CCA באמצעות קליפ כלי, בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את עורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת) באמצעות קליפ כלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספריים האביב microdissection באמצעות לבצע חתך קטן ECA (כ -2 מ&quot;מ), בין שני הקשרים. </li></ol> 4. עירוי ואלכוהול באמצעות הרשפ&quot;ת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב מערכת אינפוזיה. צרף 6 אינץ &#39;של צינור נימים (מידות אידיאלית: 2.5 מ&quot;מ x 1.2 מ&quot;מ) כדי מזרק טוברקולין המכיל 250 μl של החומר להיות חדור (תרופות, פתוגנים, שלפוחית ​​תאית, בין יתר) והכנס את קצה הנימים בעדינות לתוך החתך מבוצע בשלב 3.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך להחליק במורד הנימים עד שהוא מגיע נקודת אמצע בין ההסתעפות ואת הקליפ סגירת CCA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכבול את קשר ECA הנמוך. ודא כי הקשר הוא רופף מספיק כדי לאפשר נזילות נימים חזקות מספיק כדי למנוע דולףז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר קליפ מן ICA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להפעיל לחץ על בוכנת מזרק עירוי החומר המאפשר בכ 10 μl לשנייה. </li></ol> 5. נהלי אינפוזיה הודעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום קליפ בחזרה על ICA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר בעדינות את צינור נימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכבול את קשר ECA הנמוך לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר קליפים מתוך הרשפ&quot;ת ובין CCA. </li></ol> סגירת חתך 6. שלאחר ניתוח טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סור ווים מפשקים או רקמות כרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזור תפר נקי באמצעות תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך באמצעות ניילון תפר / מחט מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל אנטי דלקתי משכך כאבים כדי להקל אי נוחות לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים חיה בכלוב מונח על כרית חימום לפחות התאוששות 1 hr וצג. </li></ol>

<ol><li>Chen, L., Swartz, K. R., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+microport+technique+for+applications+in+cerebrovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Vessel microport technique for applications in cerebrovascular research.</a> J Neurosci Res. 87 (7), 1718-1727 (2009).</li>
<li>Frisella, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus+improves+cognitive+function+in+a+murine+model+of+mucopolysaccharidosis+type+VII%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Intracranial injection of recombinant adeno-associated virus improves cognitive function in a murine model of mucopolysaccharidosis type VII.</a> Mol Ther. 3 (3), 351-358 (2001).</li>
<li>Wei, L., Erinjeri, J. P., Rovainen, C. M., Woolsey, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+growth+and+angiogenesis+around+cortical+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Collateral growth and angiogenesis around cortical stroke.</a> Stroke. 32 (9), 2179-2184 (2001).</li>
<li>Wu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+methotrexate+to+epidermal+growth+factor+receptor-positive+brain+tumors+by+means+of+cetuximab+%28IMC-C225%29+dendrimer+bioconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of methotrexate to epidermal growth factor receptor-positive brain tumors by means of cetuximab (IMC-C225) dendrimer bioconjugates.</a> Mol Cancer Ther. 5 (1), 52-59 (2006).</li>
<li>Pignataro, G., Studer, F. E., Wilz, A., Simon, R. P., Boison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotection+in+ischemic+mouse+brain+induced+by+stem+cell-derived+brain+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuroprotection in ischemic mouse brain induced by stem cell-derived brain implants.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 919-927 (2007).</li>
<li>Sugiyama, Y., Kusuhara, H., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+and+biochemical+analysis+of+carrier-mediated+efflux+of+drugs+through+the+blood-brain+and+blood-cerebrospinal+fluid+barriers%3A+importance+in+the+drug+delivery+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Kinetic and biochemical analysis of carrier-mediated efflux of drugs through the blood-brain and blood-cerebrospinal fluid barriers: importance in the drug delivery to the brain.</a> J Control Release. 62 (1-2), 179-186 (1999).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+and+gene+delivery+to+the+brain%3A+the+vascular+route%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drug and gene delivery to the brain: the vascular route.</a> Neuron. 36 (4), 555-558 (2002).</li>
<li>Vantyghem, S. A., Postenka, C. O., Chambers, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrous+cycle+influences+organ-specific+metastasis+of+B16F10+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Estrous cycle influences organ-specific metastasis of B16F10 melanoma cells.</a> Cancer Res. 63 (16), 4763-4765 (2003).</li>
<li>Huang, R. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+delivery+targeted+to+the+brain+using+a+transferrin-conjugated+polyethyleneglycol-modified+polyamidoamine+dendrimer%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Efficient gene delivery targeted to the brain using a transferrin-conjugated polyethyleneglycol-modified polyamidoamine dendrimer.</a> FASEB J. 21 (4), 1117-1125 (2007).</li>
<li>Liu, R., Martuza, R. L., Rabkin, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+delivery+of+oncolytic+HSV+vector+G47Delta+to+metastatic+breast+cancer+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Intracarotid delivery of oncolytic HSV vector G47Delta to metastatic breast cancer in the brain.</a> Gene Ther. 12 (8), 647-654 (2005).</li>
<li>Kumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transvascular+delivery+of+small+interfering+RNA+to+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transvascular delivery of small interfering RNA to the central nervous system.</a> Nature. 448 (7149), 39-43 (2007).</li>
<li>Wrobel, J. K., Wolff, G., Xiao, R., Power, R. F., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+Selenium+Supplementation+Modulates+Growth+of+Brain+Metastatic+Tumors+and+Changes+the+Expression+of+Adhesion+Molecules+in+Brain+Microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Dietary Selenium Supplementation Modulates Growth of Brain Metastatic Tumors and Changes the Expression of Adhesion Molecules in Brain Microvessels.</a> Biol Trace Elem Res. , (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

המיקרו-כירורגיה העירוי המתואר כאן כבר הוכיח את עצמו מאוד מוצלח ומספק חומרים אקסוגניים של תכונות ביולוגיות שונות לתוך מערכת העצבים המרכזי, מניעת הפצה רצויה בכל הגוף 1, 12. שיבוש של מחסום דם מוח הוא מאפיין פתולוגי של מחלות כמה הקשורות במערכת העצבים המרכזית; ולכן בהערכת היחסים של חומרים אקסוגניים עם המחסום שבין הדם למוח היא בעלת חשיבות ועניין עיקריים. מודל נ...

במודלים vivo של מערכת העצבים המרכזית (CNS) מחלות דורשים משלוח יעיל של חומרים אקסוגניים, כגון תרופות, פתוגנים, או exosomes, לתוך המוח. לכן, שיטת הצגה אידיאלית צריכה לגרום טראומה מינימאלית לבעל החיים, לשמור על שלמותה של הרשת העצבית, ולהשיג ריכוזי חומר גבוהים במוח 1. מספר שיטות כירורגיות של משלוח חומר מקומי תוארו, כולל תוך-נדן, תוך-מוחי, וזריקות תוך חדרים או שתלים 2, 3, 4, 5. גישות אלה, עם זאת, הנחשבים טראומטיות אל מערכת העצבים המרכזי, ולאפשר מתן בהיקפים נמוכים בלבד של החומר של עניין. יתר על כן, הוצע כי חומרים אקסוגניים ניתן להסיר במהירות על ידי הנוזל השדרתי 6 </sעד&gt;, ומגוון חדירה נמוך אל מוח parenchyma נצפה 7 כאשר הטכניקות הנ&quot;ל מועסקות. שיטות משלוח מערכתיות, כגון פה, ריאות, תת עורית, ומסלולים תוך ורידים, נמצאות בשימוש נפוצה יותר במודלים של בעלי חיים, אם כי הם מפגינים אפקטיביים נמוכים באספקת החומרים אל מערכת העצבים המרכזי, בשל הספיגה ידי גופים אחרים 8, 9. לכן, המסלולים האלה של משלוח דורשים מנות גבוהות של חומרים המנוהלים, מעלים את הסיכון של תופעות לוואי רעיל 10, 11. כאן אנו מתארים טכניקה המיקרו-כירורגיה עירוי עכבר, אשר למעשה מספקת חומרים ישירות לתוך המוח דרך עורק התרדמה הפנימי. בנוסף למיקוד המסירה של מערכת העצבים המרכזית, טכניקה זו אינה לעקוף מחסומים פיזיולוגי ולכן הוא רלוונטי מאוד Biologicaתהליכי l המעורבים הקטעים של רפויים או פתוגנים לתוך המוח.

<table><tbody><tr><td>מכשיר הרדמה</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>כלי מדע עדין</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים קצה ישר</td><td>כלי מדע עדין</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים קצה זוויתי</td><td>כלי מדע עדין</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>מספריים אביביים</td><td>כלי מדע עדין</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>תפר ניילון</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>צינורות נימיים (מיקרו-רנתן 0.010 אינץ' x 0.005 אינץ' לכל רגל)&nbsp;</td>תפר סגירה של <td>Braintree Scientific</td><td>MRE01050</td><td></td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td><td>FisherScientific</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקה אינפוזיה microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

מודלים של בעלי חיים של מחלות מערכת העצבים המרכזית (CNS), וכתוצאה מכך, מחלות הפרעה במחסום הדם-מוח, דורשים אספקה של חומרים אקסוגניים למוח. חומרים אקסוגניים אלה עלולים לגרום להשפעה מזיקה או להוות אסטרטגיה טיפולית. שיטות ההעברה הנפוצות ביותר של חומרים אקסוגניים למוח מבוססות על משלוחים מערכתיים, כגון נתיבים תת עוריים או תוך ורידיים. למרות השימוש הנפוץ, לגישות אלו יש מספר מגבלות, כולל יעילות נמוכה של העברה למוח. לעומת זאת, שיטות כירורגיות המעבירות חומרים באופן מקומי למערכת העצבים המרכזית הן ספציפיות יותר ומונעות ספיגת החומרים האקסוגניים על ידי איברים אחרים. קיימות מספר שיטות כירורגיות להעברת מערכת העצבים המרכזית; עם זאת, הם נוטים להיות טראומטיים מאוד. כאן, אנו מתארים טכניקת מיקרו-כירורגיה של עירוי עכברים, המעבירה ביעילות חומרים למוח דרך עורק הצוואר הפנימי, עם טראומה מינימלית וללא הפרעה לתפקוד תקין של מערכת העצבים המרכזית.

הטכניקה המיקרו-כירורגיה עירוי העכבר המתואר כאן הוא מאוד תכליתי ויש בו נעשה שימוש כדי לספק חומרים שונים ישירות לתוך המוח, כולל אספקה של תאים סרטניים במודל נציג של היווצרות גרורות במוח 1, 12. טכניקה זו מתאימה גם להעריך את ההיבטים פתולוגית של פתוגנים שונים במערכת העצבים המרכזית. במודל עכברים ש...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקת עירוי מיקרו-כירורגית של עכבר, המעבירה ביעילות חומרים ישירות למוח דרך עורק הצוואר הפנימי.

טכניקה אינפוזיה Microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous ...

המטרה הכוללת של טכניקה כירורגית זו היא להעביר חומרים אקסוגניים למוח העכבר מבלי לחדור לגולגולת. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במדעי המוח בנוגע לפעולה של תרופות, פתוגנים ואקסוזומים במוח. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא גורמת לטראומה מינימלית לבעל החיים, שומרת על שלמות הרשת העצבית ומשיגה ריכוזים גבוהים של החומר במוח.התחל במתן איזופלורן מעורבב עם חמצן כדי להרדים את העכבר בתא אינדוקציה. לאחר השראת הרדמה, העבירו את החיה למשטח הניתוח תחת מיקרוסקופ סטריאו, והניחו את חרוט האף כדי לשמור על מישור הרדמה כירורגי. ודא שקצב הנשימה הוא סביב נשימה אחת עד שתיים בשנייה מבלי להתנשף.בנוסף, ודא שהחיה אינה מגיבה לגירוי שפם או צביטה בבוהן. השתמש במקלון סטרילי כדי למרוח טיפה של חומר סיכה עיניים על כל עין כדי למנוע יובש. לאחר גילוח אתר הניתוח עם סכין גילוח, הכינו את האזור עם 70% אתנול וכלורהקסידין.תוך כדי הסתכלות דרך מיקרוסקופ הסטריאו, השתמש במספריים ובמלקחיים כירורגיים כדי ליצור חתך בקו האמצע בצוואר מעל עצם החזה ועד מתחת ללסת. השתמש במלקחיים כדי להפריד בזהירות רקמת שומן ורקמת חיבור כדי לחשוף את קנה הנשימה. לאחר מכן הניחו חפץ רך ועגול בקוטר של כחמישה סנטימטרים מתחת לחלק האחורי של הצוואר כדי להאריך את הצוואר ולחשוף עוד יותר את האזור.לאחר מכן, הפרד את הרקמה סביב קנה הנשימה באמצעות ווים או מפסק רקמות. בצד שמאל של קנה הנשימה, יש להפריד בזהירות את רקמת החיבור כדי לחשוף את עורק הצוואר המשותף השמאלי, או CCA. בעזרת מלקחיים, הסר בזהירות את כל רקמת החיבור כדי לחשוף את התפצלות ה-CCA בתחילת עורקי הצוואר החיצוניים והפנימיים כאחד.לאחר חשיפת ה-ECA וה-ICA, השתמש במלקחיים כדי להניח קטע של תפר ניילון בגודל סנטימטר אחד מתחת לעורק הצוואר החיצוני. לאחר מכן הניחו קטע שני של סנטימטר אחד. לאחר מכן קשרו קשר קבוע בנקודה הגבוהה ביותר האפשרית של ה-ECA.בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית של ה-ECA, מיד מעל התפצלות ה-CCA, קשרו קשר רופף יותר ונשלף. לאחר מכן השתמש בקליפסים של כלי כדי לסגור את ה-CCA בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית, ולסגור את ה-ICA. סגירה נכונה של עורק הצוואר הפנימי לפני ביצוע חתך קטן בעורק הצוואר החיצוני תמנע דימום.כעת, בעזרת מספריים קפיציים של מיקרו-דיסקציה, בצע חתך של שני מילימטר ב- ECA בין שני הקשרים. חשוב לשמור על חתכים קטנים, שכן חתך גדול יגרום להחדרת החומר. הרכיבו את מערכת העירוי על ידי הצמדת שישה סנטימטרים של צינורות נימיים למזרק טוברקולין המכיל 250 מיקרוליטר של החומר שיש להחדיר.לאחר מכן הכנס בעדינות את קצה הצינור הנימי לתוך החתך ב-ECA. המשך לקדם את הקצה עד שהוא מגיע לאמצע הדרך בין ההסתעפות לקליפס ב-CCA. קשרו את קשר ה-ECA התחתון.ודא שהקשר רופף מספיק כדי לאפשר נזילות נימית, והדוק מספיק כדי למנוע דליפה. לאחר מכן, הסר את הקליפ מה-ICA. הפעל בעדינות לחץ על בוכנת המזרק, ואפשר עירוי חומר במהירות של כ-10 מיקרוליטר לשנייה.לאחר עירוי חומר הבדיקה, הנח את הקליפ בחזרה על ה-ICA. הסר בעדינות את הצינור הנימים. לאחר מכן, קשרו את קשר ה-ECA התחתון לחלוטין.הסר את המהדק מה-ICA ומה-CCA. לאחר מכן הסר את המחזיר או ווי הרקמה והכרית. נקה את האזור המיועד לתפירה במי מלח סטריליים, ולאחר מכן סגור את החתך באמצעות תפרי ניילון.לאחר מתן חומר אנטי דלקתי ומשכך כאבים מאושר כדי להקל על אי הנוחות לאחר הניתוח, הניחו את בעל החיים בכלוב על כרית חימום למשך שעה לפחות, ועקבו אחר ההתאוששות. היסטוגרמה זו מדגימה זיהוי HIV על ידי PCR בזמן אמת שבעה ימים לאחר עירוי הנגיף דרך עורק הצוואר הפנימי השמאלי. כצפוי, רמות הנגיף גבוהות יותר בהמיספרה השמאלית.תמונה אימונופלואורסצנטית זו מציגה קטע מוח של עכבר המתאר תג GFP CD63, סמן אקסוזום, לאחר עירוי שלפוחית חוץ-תאית דרך עורק הצוואר הפנימי. ה-CD63 המבטא שלפוחיות חוץ-תאיות, המוצגות בירוק, קשורות למיקרו-כלי הדם במוח העכבר. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 20 דקות אם היא מבוצעת כראוי.לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום המחלות הנוירודגנרטיביות לחקור אינטראקציות בין תרופות, פתוגנים ואקסוזומים בעכברים.

mouse-microsurgery-infusion-technique-for-targeted-substance-delivery

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כפי חקירה המוח הופך מתוחכם יותר, חקירה של מבנים מוחיים המעגלים דורש שיפור רמות של דיוק רזולוציה גבוהה יותר. פיתחנו שיטה להכנת ואת ההשתלה של מערכת עירוי כרונית בתוך המוח ניצול microcannula בורוסיליקט בקוטר טיפ של 50 מיקרון.

הבינוי השרשה של מערכת Microinfusion לאספקה ​​מתמשכת של סוכני Neuroactive.

מקור: Zamboni, M., et al., אינדוקציה של שינוי תאי לפטומנינגיאלי באמצעות הזרקה תוך-ציסטרנלית. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את ההליך של העברת תרופה משרה לבור המים של עכבר מורדם. ההזרקה גורמת באופן סלקטיבי לביטוי סמן פלואורסצנטי בתאי פני המוח הנגישים באמצעות נוזל מוחי שדרתי, שאושר על ידי הדמיה פלואורסצנטית.

מתן תרופות ממוקד במודל עכבר באמצעות הזרקת Cisterna Magna

מקור: Lim, M., et al. מידול גרורות במוח על ידי הזרקת עורק הצוואר הפנימי של תאים סרטניים. J. Vis. Exp. (2022)בסרטון זה, עכבר מורדם עובר הליך כירורגי שבו מוזרקים תאים סרטניים לעורק הצוואר המשותף (CCA) כדי להקל על העברה ממוקדת למוח. ההליך כולל תפירה מדויקת ומניפולציה של עורקי הצוואר כדי לכוון את התאים המוזרקים לעבר עורק הצוואר הפנימי (ICA), ולקדם היווצרות גידול במוח לאורך זמן.

מידול גרורות של גידולי מוח באמצעות הזרקת תאים סרטניים בעורק הצוואר הפנימי

מקור: Leda, A. R., et al. טכניקת עירוי מיקרו-כירורגיה של עכבר להעברת חומרים ממוקדים למערכת העצבים המרכזית דרך עורק הצוואר הפנימי. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים הליך מיקרו-כירורגי שנועד להקל על עירוי ממוקד של חומר בדיקה למוח דרך עורק הצוואר הפנימי (ICA). ההליך כולל תפירה מדויקת ומניפולציה של כלי הדם כדי להגביל זמנית את זרימת הדם, מה שמבטיח אספקה מבוקרת. צינור נימי מוחדר לעורק הצוואר החיצוני (ECA) ומתקדם לכיוון ההתפצלות. עם העירוי, החומר עוקף את זרימת הדם המערכתית, חוצה את מחסום הדם-מוח ומשיג...

העברת חומרים ממוקדים למוח העכבר באמצעות עירוי לעורק הצוואר הפנימי

שיבוש מחסום דם מוח מסייע למשלוח של תרופות מסוימות למוח. מניטול נמסר תאים מתכווצים סביב כלי דם התוך arterially כדי פיזי לשבש את המכשול.

מודל עכברים של שיבוש מחסום דם מוח כדי לאפשר ממוקד Therapeutics Neurovascular

גרורה במוח הפך צורך רפואי דחוף כמו השכיחות שלה גדלה תוך אופציות טיפוליות נותרו פליאטיבי. יצירת מודלים של בעלי חיים הניסיונות של גרורות במוח באמצעות זריקת intracarotid העורקת של תאי סרטן מקל מחקרים מכניסטית של ביולוגית המחלה והערכת משטרי התערבות רומן.

Cell הזרקת הסרטן Intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור

שיטה לאספקת תאי גזע עצביים, הניתנים להזרקת פתרונות או השעיות, דרך עורק הראש המשותף (עכבר) או העורק הראשי החיצוני (עכברוש) לאחר דיווח על שבץ. תאים מוזרק מופצים בהרחבה ברחבי המוח באתר וניתן לאתרם עד 30 d לאחר המסירה.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

גרורות במוח הן גורם לתחלואה קשה ולתמותה בחולי סרטן. רוב המודלים של עכברי גרורות במוח מסובכים על ידי גרורות מערכתיות מבלבלות ניתוח של תמותה ותוצאות התערבות טיפולית. מוצג כאן פרוטוקול להזרקת קרוטיד פנימית של תאים סרטניים המייצר גידולים תוך גולגולתיים עקביים עם גידולים סיסטמיים מינימליים.

מידול גרורות במוח על ידי הזרקת עורק הצוואר הפנימי של תאים סרטניים

תיקון עורק התרדמה במודל עכברי לאחר הזרקה מחזיר את זרימת הדם לעורק מבלי להשפיע לרעה על פיזור החומר המוזרק. תיקון אתר ההזרקה מאפשר זריקות עוקבות דרך אותו עורק ומונע איסכמיה מוחית בזני עכברים חסרי מעגל שלם של וויליס.

הקלה על הזרקות חוזרות תוך קרוטיד במודלים של עכברים על ידי טכניקת תיקון אתר הזרקה חדשנית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להערכת תפקוד תאי החיסון לאחר שבץ איסכמי באמצעות ניתוח זרימה ציטומטרי במודל מיני שבץ. שיטה זו מאפשרת בחינה מפורטת של אינטראקציות נוירואימוניות וניתן להתאים אותה לחקר מחלות ניווניות אחרות, מה שמשפר את ההבנה שלנו לגבי תגובות חיסוניות בפתולוגיה של שבץ מוחי.

בידוד והערכה ציטומטרית של זרימה של אינטראקציות נוירואימוניות במודל עכברי מיני שבץ

למד טכניקת מיקרוכירורגיה בעכברים להזרקת חומרים ישירות למוח דרך עורק התרדמה הפנימי. שיטה זו מבטיחה טראומה מינימלית, שמירה על שלמות הרשת הנוירונלית וריכוזים גבוהים של החומר במוח.

טכניקה אינפוזיה Microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי

גלה סרטונים נוספים