אינדוקציה של שבץ איסכמי ו איסכמיה reperfusion בעכברים באמצעות הטכניקה ויזואליזציה ספיגות עורקים התיכונים של אזור האוטם

המטרה הכוללת של הליך כירורגי זה היא לגרום באופן רשמי ומהימן לשבץ איסכמי תוך השארת עורק המוח החיצוני שלם. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום חקר שבץ מוחי, כגון השפעת הטיפול על חומרת השבץ. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שלאחר השראת שבץ מוחי, עורק המוח החיצוני נשאר זמין להזרקת טיפול ישירות לחצי הכדור הפגוע.

הנח עכבר מורדם באיזופלורן על משטח הניתוח המוכן והתאם חרוט אף למתן איזופלורן מעורבב בחמצן. ודא שקצב הנשימה הוא סביב נשימה אחת עד שתיים בשנייה מבלי להתנשף. בנוסף, ודא שהחיה אינה מפגינה תגובה לגירוי שפם או לרפלקס הדוושה.

מרחו טיפה של חומר סיכה עיניים על כל עין, בעזרת ספוגית סטרילית כדי למנוע מהם להתייבש במהלך ההליך. לאחר גילוח אזור החתך, יש לחטא היטב את אזור הניתוח באמצעות אתנול 70% ותמיסה על בסיס כלורהקסידין. שמור את החיה על משטח כירורגי חם תחת מיקרוסקופ סטריאו.

לאחר מכן, בעזרת מספריים ומלקחיים כירורגיים, בצע חתך רדוד בקו האמצע בצוואר מעל עצם החזה עד מתחת ללסת. בעזרת מלקחיים, הפרד בזהירות רקמות שומן וחיבור כדי לחשוף את קנה הנשימה. הרקמות צריכות להיפרד בקלות ובאופן טבעי משני הצדדים.

לאחר מכן הניחו כרית או חפץ עגול אחר בקוטר של כ-0.5 סנטימטרים מתחת לחלק האחורי של הצוואר כדי להאריך את הצוואר ולחשוף עוד יותר את האזור לניתוח. פתח את החתך באמצעות מפסק רקמות או ווים. לאחר מכן, בצד שמאל של קנה הנשימה, יש להפריד בזהירות את רקמת החיבור כדי לחשוף את עורק הצוואר המשותף השמאלי מבלי לפגוע בעצבים הסמוכים ובוורידים הראשיים.

לאחר מכן, הכניסו את המלקחיים המעוקלים מתחת ל-CCA כדי לנקב את רקמת החיבור ואז אפשרו להם להיפתח לאט כדי לשחרר את ה-CCA. נתק את ה-CCA מהרקמה הבסיסית וחשוף את הסתעפות ה-y העליונה של עורק המוח הפנימי ועורק המוח החיצוני. לאחר חשיפת ה-CCA, הכנס שלושה מקטעים של תפר ניילון מתחת ל-CCA.

ודא שה-CCA אינו מעוות, מכיוון שהדבר יסבך באופן דרסטי את החדרת התפר. ואז בנקודה הנמוכה ביותר האפשרית, סגור את התפר התחתון באמצעות קשר קבוע. קשרו את התפר העליון ממש מתחת להסתעפות של ה-ICA וה-ECA באמצעות קשר נשלף.

לאחר מכן, קשרו את התפר האמצעי באמצעות קשר נשלף, אך השאירו אותו פתוח לרווחה. לאחר מכן, בעזרת מספריים קפיציים של מיקרו דיסקציה, צור 0.2 מילימטר ב- CCA בין התפרים התחתונים והאמצעיים קרוב יותר לתפר התחתון. בעזרת מלקחיים, הכנס את תפר ה-MCAO לתוך חתך ה-CCA, והנח אותו לכיוון התפר העליון.

לאחר מכן הדק בעדינות את הקשר של התפר האמצעי ב-CCA כך שהוא יגביל את זרימת הדם סביב תפר ה-MCAO, אך יהיה רופף מספיק כדי לאפשר לתפר ה-MCAO לנוע בחופשיות. כעת שחרר בזהירות את התפר העליון, וודא שתפר ה-MCAO לא יחליק החוצה. הכנס את תפר ה-MCAO כמה מילימטרים לתוך ה-ICA ולאחר מכן סגור מחדש את התפר העליון עם קשר כמו קודם.

לאחר מכן, הנח את תפר ה-MCAO לאזור החסימה, תחילה על ידי ניתובו לתוך ה-ICA מעבר ל-ECA, ולאחר מכן על ידי הבטחה שהתפר נשאר ב-ICA, תוך עקיפת עורק הפטריגופלטין. ההחדרה מוצלחת אם יש מעט זרימת דם חוזרת מהחתך CCA ואם סימן תשעה המילימטר הכסוף ממוקם בין חתך ה-CCA לבין ההסתעפות של ה-ICA וה-ECA. לאחר חסימה מוצלחת, קושרים היטב את התפר האמצעי והעליון ואז מכניסים את התפרים לאזור החתך.

לאחר הסרת המחזיר או ווי הטישו והכרית, נקו את אזור התפר באמצעות מי מלח סטריליים על צמר גפן. ואז סוגרים את העור בתפר ניילון. הנח את העכבר בכלוב נקי הממוקם על כרית מחוממת כדי למנוע היפותרמיה ולאפשר גישה אד ליביטום למים ולמזון מרוכך.

עקוב אחר החיה לאיתור סימני שבץ מוחי למשך חמש עד 10 דקות לפחות. בהתאם לפרוטוקול הרפרפוזיה של איסכמיה, השאר את תפר ה-MCAO במקומו בין 30 דקות ל-120 דקות או יותר. לאחר הרדמת החיה כמו קודם והסרת התפרים הסוגרים את הפצע, השתמש במלקחיים ובמפרידי רקמות כדי לפתוח מחדש את החתך ולחשוף את ה-CCA.

לאחר מכן הסר בזהירות את התפר העליון ומשוך בעדינות את תפר ה-MCAO עד שהחלק המצופה סיליקון ממוקם בקשר האמצעי. בצע מחדש את תפר הקשר העליון כדי למנוע זרימת דם מעבר לתפר MCAO. לאחר מכן שחרר בזהירות את הקשר האמצעי ומשוך את תפר ה-MCAO מעבר לקשר העליון, והשאר אותו בתוך ה-CCA.

סגור היטב את הקשר העליון כדי לחסום את זרימת הדם בעורקים. לאחר מכן, משוך לחלוטין את תפר ה-MCAO וסגור היטב את הקשר האמצעי. סגור את הפצע והעניק טיפול לאחר הניתוח כמו קודם.

סכימה זו מציגה את אזור החסימה הנובע מההליך המודגם בסרטון זה בכחול. אזור הניתוח ממוקם בתחתית הדמות, מסומן על ידי הצורה הסגלגלה, ומיקום התפרים מסומן בקווים שחורים. התמונות הבאות מראות את עמידת TTC של מקטעי המוח.

תמונה זו מייצגת צביעה אופיינית לאחר הכנסת דמה. התמונה מייצגת את הנזק לרקמות שנגרם על ידי MCAO של 60 דקות, ואחריו 90 דקות של רפרפוזיה. נזק גדול יותר לרקמות נראה לאחר 24 שעות של עירוי מחדש, לאחר MCAO של 60 דקות.

צביעה אימונו-פלואורסצנטית עבור הסמן העצבי MAP2 מאפשרת אובדן עצבי מ-60 דקות של חסימה, ולאחר מכן 23 שעות של רפרפוזיה, כדי לראות בבירור בתמונה מימין. אסטרוגליוזיס נראית לאחר צביעה אימונו-פלואורסצנטית עם GFAP. בתמונה מימין, האסטרוגליה מרוכזת באזור הסמוך לנזק לרקמות במוח הרפרפוזיה של איסכמיה, ואילו טפיחה מפוזרת של צביעה נראית בביקורת שניתנה לבושה.

בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לעקוב אחר רווחת בעלי החיים וזמן החסימה. לאחר הליך זה, ניתן לבצע טכניקות אחרות כגון ניתוח התנהגות מוזרה ואימונופלואורסצנציה כדי לענות על שאלות נוספות על פגיעה ברקמות והתאוששות.