Vitrification MicroSecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל Cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש

המטרה הכוללת של שיטת ויטריפיקציה של עוברים MicroSecure היא לספק הליך ויטריפיקציה סגור אספטי בטוח, מאובטח, פשוט אך יעיל לעוברים אנושיים. שיטה זו פותחה כדי למזער את משתני בקרת האיכות בזיגוג של עוברים אנושיים, ובכך להבטיח הצלחה אמינה וניתנת לשחזור. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא שואפת לבטל וריאציות טכניות בין ביולוגים למעבדות.

הטכניקה שלנו כל כך פשוטה לביצוע שאנו מוצאים שהאתגר הגדול ביותר עבור המתאמנים שלנו הוא ללמוד כיצד לבצע פיפטה של עוברים מבלי לאבד אותם. הרעיון מאחורי השיטה שלנו היה לבטל את הצורך במכשירים מיוחדים על ידי התאמת שני פריטים נפוצים שאושרו על ידי ה-FDA. קש אחסון יונומרי עם תווית פנימית, וגמישות סטרילית.

הדגמה חזותית של טכניקה זו מועילה ביותר מכיוון שהיא מדגישה את הטיפים הבסיסיים המבטיחים את יישומה המוצלח. לפני תחילת ההליך, הנח את קש הזרע הסטרילי של 0.3 מ"ל על משטח הטפלון של האלקטרודה של אוטם דחף בסיסי על השולחן, ממש מול התקע, כדי ליצור אטימה פנימית. לחץ על הידית כדי להפעיל את החום, שחרר את הידית כאשר האור האדום כבוי ונשמע צפצוף.

לאחר מכן דחוף את פקק הכותנה קדימה כנגד האיטום הפנימי לפני השלמת ההגדרה. לצורך דילול קריו והעמסת בלסטוציסט של הדגימות, הסר את צלחת תרבית המטופל מהחממה ואשר את כל זיהויי הדגימה עם מקור משני. תחת סטריאומיקרוסקופ, השתמש בגמישות ויטריפיקציה, המכונה קצה ויט, כדי להעביר את הבלסטוציסטים לטיפות אחיזה בודדות בשורה העליונה של צלחת קריו מתאימה.

לאחר מכן, מלאו מראש את הפלקסיפט ב-3 מיקרוליטר של תמיסת V1 והפיצו מחצית מהתוכן לעובר הראשון. שאפו את העובר והעבירו אותו לטיפה הכביסה הראשונה V1. לאחר מכן פיפטה את העובר פעמיים עד שלוש סביב היקף הטיפה, ונקה את תוכן הפיפטה שנותר מחוץ לטיפה על פני הכלי.

לאחר מכן העבירו את הבלסטוציסט לטיפת אחיזה V1 בודדת וטענו מראש את קצה הויטמין בתמיסת V2 הבאה לפני שפיפטינג את העוברים הנוספים עם קצה ויטמין חדש. לאחר שטיפת כל הבלסטוציסטים בטיפות V2 ו-V3 כפי שהודגם זה עתה, נקה את שאריות התמיסה והבועות מקצה הוויטמין מחוץ לטיפה המחזיקה V3, ומלא לחלוטין את הקצה בתמיסת V3 נקייה מסביב לעובר הראשון. הוצא כ-1 מיקרוליטר מהנפח, ושאף את הבלסטוציסט ואת תמיסת ה-V3 הנותרת לחלוטין לתוך קצה הוויט.

כעת, הסר את הקצה מהפיפטה, והשתמש בכרית גזה סטרילית כדי לייבש את שאריות תמיסת ה-V3 מהמשטח החיצוני של קצה הוויט. ייבוש המשטח החיצוני של הקצה הוא קריטי ואינו כרוך בסיכון נוסף לאובדן עובר. לאחר מכן הכנס את קצה הקצה תחילה לקצה הפתוח של הקש האטום מראש והפוך את הקש, קצה התווית כלפי מטה.

שימו לב לקצה בתקע הפנימי. השאירו מרחב אוויר של 1 ס"מ בקצה הפתוח ואז רתכו אותו בבטחה וסגרו אותו. לאחר שכל הקשיות נאטמו, טבלו אותן ישירות לתוך חנקן נוזלי בבקבוק נירוסטה ואחסנו את הקשיות בגביע הפתוח המחובר למקל ההליכה של המטופל.

לפליטה ודילול של תמיסת קריו, הנח את צלחת דילול שש הבארות המתאימה למרכז שלב סטריאומיקרוסקופ וצלחת פטרי בגודל 60 מ"מ המכילה אמבט חימום סוכרוז של 37 מעלות צלזיוס לצד אחד של המיקרוסקופ. לאחר מכן, בודד את הקש לחימום, והחזק את אטם הקש העליון מעל מפלס הנוזל כדי לאשר את זהות הדגימה. השתמש במספריים של מאיו כדי לאבטח את הקשית מתחת לתקע הפנימי, כדי לשמור על קצה הוויטמיה שקוע בחנקן הנוזלי.

הקש בחוזקה את המספריים על בקבוק הדיואר מספר פעמים כדי לעקור את הקצה מהקיר הצדדי הפנימי של הקש כאמצעי זהירות לבקרת איכות, והרם את הקשית לאוויר הסביבה בכיוון אופקי ליד או מתחת למשטח הסטריאוסקופ. אוחזים בקצה הלא מסומן של הקש, חותכים את הקש בתקע הפנימי. לאחר מכן הרם את הקש מעל צלחת האמבטיה המחממת ושפך את קצה הוויטמין לאמבטיה בזווית של 60 מעלות, עד שהקצה מוחצן לחלוטין.

בסיס הגמיש צריך לנוח מעל קיר צד הכלים. לאחר 5 עד 10 שניות, העבירו את בסיס הפיפטה למכשיר פיפטינג מיקרו-קאפ. התחל טיימר של חמש דקות.

תוך כדי צפייה במיקרוסקופ, השתמש באצבע המורה כדי לכסות את חור הנורה, וסחט בעדינות את הנורה כדי לשחרר את הבלסטוציסט המזוגג מקצה הוויטמיה לתוך שטיפת T1. לאחר אישור שחרור הבלסטוציסט, נקה את שאריות תמיסת ה-V3 והבועות בלחץ חיובי, ופנה את התכולה למרכז באר השלכה שאינה בשימוש. העבירו את קצה הוויטמין על פיפטה סטרבר, והעבירו את העובר לטיפה T1 השנייה מתחת לשמן למשך ארבע הדקות הנותרות.

במהלך הדגירה, מלאו מראש את ה-flexipet בתמיסה הבאה, ולאחר מכן דללו את הבלסטוציסט בטיפות T2, 3 ו-4 במרווחים של שלוש דקות. לבסוף, אזנו את הבלסטוציסטים בטיפת T5 למשך חמש דקות על משטח של 37 מעלות צלזיוס, לפני החזרתם לאינקובטור. מערכת דירוג הבלסטוציסט של גרדנר שונה מחשיבה בלסטוציסטים מלאים כבעלי פחות מ-10% בקע של תאי הטרופקטודרם, בעוד שבלסטוציסטים עם עד 50% בקע מסווגים כמורחבים.

בלסטוציסטים המפגינים בקע גדול מ-50% נחשבים לבקיעה. באמצעות שיטות השימור והחימום המוכחות, רמות גבוהות של לידות חי בכל התחלת מחזור הושגו באופן עקבי עם או בלי בדיקות גנטיות טרום השרשה. למרות שההצלחות הללו גבוהות במידה ניכרת, באמצעות בלסטוציסטים אופלואידים שנבחרו מראש.

ואכן, בהערכת אוכלוסיית חולי פרוגנוזה טובה עבור מחזורים משומרים בהקפאה בלבד, נתוני העברת עוברים קפואים אלה מדגימים שיעורי הצלחה טובים יותר מהממוצע הארצי הן לשיעורי ההשתלה והן לשיעורי לידת חי ביותר מ-30%על ידי העברת בלסטוציסטים מזוגגים אופלואידים בודדים שנבדקו גנטית, כמה משיעורי ההשתלה הגבוהים ביותר ושיעורי לידת חי בארצות הברית, ללא תלות בגיל, הושגו, בהשוואה לסטטיסטיקה הלאומית האחרונה שדווחה על ידי המרכז לבקרת מחלות עבור שתי מרפאות פוריות מכובדות אחרות, והנתונים שפורסמו על ידי האגודה לטכנולוגיות רבייה מסייעות. ויטריפיקציה של MicroSecure היא הליך אספטי חדשני שפותח עבור קלות טכנית, אמינות ואבטחה קריו. מערכת ויטריפיקציה פשוטה ולא מסחרית זו מציעה חלופה יעילה ביותר בעלות נמוכה להתקני ויטריפיקציה.

מאז פיתוחה, שיטת MicroSecure הבטיחה התאוששות של למעלה מ-99.9% עוברים ומעל 95% הישרדות מלאה של בלסטוציסט. זה איפשר את הפיכת הפרקטיקה הקלינית שלנו כמעט לכל מחזורי העברת האמבירו שנשמרו בהקפאה במהלך שלוש השנים האחרונות. שינינו ביעילות את הנוהל שלנו כך שיכלול אטם פנימי מול פקק הכותנה של קשיות זרע יונומריות, כדי עדיין לייצר אטמי ריתוך אמינים ותוצאות יוצאות דופן לאחר ההתחממות.

ישנן מערכות מכשירים רבות ושונות המשמשות כיום בתעשיות טכנולוגיית הרבייה המסייעת, אך אף מכשיר אחר אינו מציע את הפשטות והחזרתיות הטכנית כדי למנוע למעשה שונות של המשתמש ולספק בטיחות אופטימלית, כמו ויטריפיקציה של MicroSecure.