Name: Vitrification MicroSecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל Cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: למדו את שיטת MicroSecure Vitrification לשימור עוברים אנושיים בבלסטוציסטים. טכניקה סגורה ואספטית המבטיחה שיעורי הצלחה גבוהים בהשתלות ובלידות חיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MC Schiewe רוצה להודות למר יער גארנר במרכז הפריון של לאס וגאס עבור המומחיות הסטטיסטית שלו בניתוח והערכת נתוני CDC ו סארט שנתיים. כמו כן, המחברים מבקשים להודות המנהל הרפואי שלהם, ד&quot;ר רוברט אנדרסון, על התמיכה והאמונה המסורים שלצדו ביכולות שלנו הטכניות ומומחיות.

<ol><li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+appraisal+of+cryopreservation+%28slow+cooling+versus+vitrification%29+of+human+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li>
<li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/301673333_The_Historic_Development_and_Incorporation_of_Four_Assisted_Reproductive_Technologies_Shaping_Today's_IVF_Industry">The historic development and incorporation of four assisted reproductive technologies shaping today's IVF industry.</a> J. Fertil. In Vitro Reprod. Med. Genet. 4, 2-9 (2016).</li>
<li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196+degrees+C+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li>
<li>Rall, W. F., Wood, M. J., Kirby, C., Whittingham, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Fertil%22%5BJournal%5D)">Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> J. Reprod. Fertil. 80, 499-504 (1987).</li>
<li>Schiewe, M. C., Rall, W. F., Stuart, L. D., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cryoprotectant%2C+cooling+rate+and+in+situ+straw+dilution+using+conventional+freezing+or+vitrification+for+cryopreserving+sheep+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ straw dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos.</a> Theriogenology. 36, 279-293 (1991).</li>
<li>Lane, M., Schoolcraft, W. B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li>
<li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 21, 3246-3252 (2006).</li>
<li>Kuwayama, M., Vatja, G., Ieda, S., Kato, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+open+and+closed+methods+for+vitrification+of+human+embryos+and+elimination+of+potential+contamination%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and elimination of potential contamination.</a> Reprod. Biomed. Online. 11, 608-614 (2005).</li>
<li>Vanderzwalmen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Births+after+vitrification+at+morula+and+blastocyst+stages%3A+effect+of+artificial+reduction+of+the+blastocoelic+cavity+before+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification.</a> Hum. Reprod. 17, 744-751 (2002).</li>
<li>Schiewe, M. C. Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification. <a target="_blank" href="http://www.intechopen.com/books/cryopreservation-in-eukaryotes/quality-control-factors-influencing-the-successful-and-reliable-implementation-of-oocyte-and-embryo-">Cryopreservation</a>. Marco-Jiménez, F., AkdemirKoç, H. , 1st Ed, InTech. Rijeka, Croatia. (2016).</li>
<li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+safe%2C+simple%2C+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. Online. 17, 360-367 (2008).</li>
<li>Panagiotidis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+vitrification+of+blastocysts+from+an+oocyte-donation+programme%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 470-476 (2013).</li>
<li>Papatheodorou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+oocyte+vitrification+system%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed oocyte vitrification system: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 595-602 (2013).</li>
<li>Schiewe, M. C., Zozula, S., Anderson, R. E., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Validation+of+microSecure+vitrification+(%26%23181%3BS-VTF)+for+the+effective+cryopreservation+of+human+embryos+and+oocytes">Validation of microSecure vitrification (µS-VTF) for the effective cryopreservation of human embryos and oocytes.</a> Cryobiology. 71, 264-272 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. MicroSecure vitrification for oocytes and embryos: optimum simplicity, security and cost and effectiveness combining FDA-approved products. J. Clin. Embryol. 13, 33-51 (2010).</li>
<li>Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+survival+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> Cryobiology. 24, 387-402 (1987).</li>
<li>Seki, S., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+warming+rate+on+the+survival+of+vitrified+mouse+oocytes+and+on+the+recrystallization+of+intracellular+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of warming rate on the survival of vitrified mouse oocytes and on the recrystallization of intracellular ice.</a> Biol. Reprod. 79, 727-737 (2008).</li>
<li>Schiewe, M. C. General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchiewe%2C+MC+%22Manual+of+the+International+Embryo+Transfer+Society%3A+A+Procedural+Guide+and+General+Information+for+the+Use+of+Embryo+Transfer+Technology%2C+Emphasizing+Sanitary+Precautions%22">Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions</a>. Stringfellow, D. A., Givens, D. , 3rd Ed, International Embryo Transfer Society. Champaign, IL. (2008).</li>
<li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Asst.+Reprod.+Genet%22%5BJournal%5D)">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. Genet. , (2016).</li>
<li>Liebermann, L., Conaghan, J. <a target="_blank" href="http://embryologists.com/jce161-artificial-collapse-prior-blastocyst-vitrification/">Artificial collapse prior blastocyst vitrification: improvement of clinical outcomes.</a> J. Clin. Embryol. 16, 107-118 (2014).</li>
<li>Parmegiani, L., Tatone, C., Cognigni, G. E., Bernardi, S., Troilo, E., Arnone, A., Maccarini, A. M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes%3A+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li>
</ol>

MC Schiewe מכהן כחבר מועצת המנהלים המייעצת המדעית חברות Cryo חדשני כדירקטור טכני אל בשירותיו של בנק זרע קליפורניה. הפקה של מאמר וידאו זה שולמה על ידי פוריות Ovation. יש המחברים אין הסכמים פיננסיים מתחרים או ניגודי עניינים לחשוף לגבי vitrification של גמטות ועוברים.

היום, קיימת ציפייה גבוהה של השגת הישרדות הבלסטוציסט מלאה (&gt; 95%) והשיג הצלחת השתלה דומה לזה של עוברים טריים. קבוצות אחדות הציעו כי שיעורי לידת חי מחזורי חזרת עוברת מזוגגים הם אולי אפילו גבוהים יותר מאשר blastocysts הטרי כאשר העובר cryopreserved שלמים המושתל לתוך רחם בריא, שאינו הורמונלי מגורה. הנתונים שלנו מצביעים בבירור כי vitrification ביעילות ובאמינות שומרת את הכדאיות של העובר הטרי. יתר על כן, הוכחנו כי ספטית שלנו, שיטה סגורה, שנקרא vitrification MicroSecure (מיקרו-שניות-VTF), יכול להשיג תוצאה אופטימלית דומה או גדול יותר סטנדרטים מסחריים (כלומר, מערכות המכשיר פתוח) המשמש בתעשיית IVF. וריאציה קשורה דירות טכניות ואמינות בין אנשים באמצעות שפע של מכשירי vitrification / שיטות. לעומת זאת, זה הביא inconsistencies בין תוכניות החלת vitrification. לכן, אין זה מפתיע כי היכרות מכשיר הוא גורם חשוב לגבי בקיאות מעבדה ותוצאות מוצלחות. זהו זה רעיון של &quot;חתימה טכנית&quot; 11 זה מסביר למה דירות בין התוכניות עשויות להיות בעייתיות. לא רק יש את הפיתוח של יותר מתריסר מכשירים מסחריים מסובך תופעה זו, זה יצר בעיות בקרת איכות. למרבה המזל, סגור מערכות vitrification, כמו מיקרו-שניות-VTF, ראפיד-לי, וכאילו VitriSafe, נמצאים כעת להוכיח להיות יעיל באותה מידה לפתוח מערכות המכשיר 12, 13, 14. MicroSecure VTF היא טכניקת vitrification רומן, מזוהם פתחה בקלות טכנית, אמינות, אבטחת קריו בראש. על ידי שילוב של השימוש בשני-שאושרו בעבר, התקני ה- FDA תואמים, מדוברת במערכת vitrification לא מסחרי wה- i היתרון המובהק של בעל עלות נמוכה הוקמה, בניגוד התקנים מיוחדים. בנוסף, tamperproof הייחודי מערכת תיוג הכפולה בצבע הפנימה, כמו גם יתרונות בקרת איכות רבות אחרים, הפכו מיקרו-שניות-VTF 11 אפשרות העולמית אטרקטיבית. בתור מכשיר VTF שאינו מסחרי, עם זאת, יישום התעשייה הענף שלה מתפתח לאט. רק דרך המשך פרסום של בטיחות, ביטחון, ואת היעילות הקלינית תרוויח מיקרו-שניות-VTF גדל ניצול. בחודש אוגוסט 2014, כאשר הוא מתמודד עם חוסר היכולת לרכוש את קש העובר 0.3 מ&quot;ל המקורי מיוצרים עם תקע הידרופובי הפנימי, הלא הפתילה, הצלחנו לשנות את השיטה מיקרו-שניות-VTF באופן מהימן. בקיצור, קשיות 0.3 מ&quot;ל זרע / העובר החדש עם אטמי כותנה-PVP שלהם הותאמו ביעילות. זו הושגה פשוט על ידי יצירת חותם פנימי לפני תקע הכותנה, ובכך למנוע מגע נוזל הפתילה עםפתוח קצה VTF (כלומר, flexipette המכיל את העובר או ביצים). יתר על כן, אם מוטות מזהים 40 מ&quot;מימ אינן נגישות, נושא הציפה הקשורים מוטה 30 המ&quot;מ הבהיר ניתן counterweighted באמצעות שני מיסבים. צעדים נוספים אלה הפכו את הטכניקה מעט פחות פשוטה, אבל עדיין יעיל מאוד. היום, כלכלה ויעילות הופכות דאגות חשובות יותר ויותר, כמו blastocysts ביופסיה בדרך כלל מזוגגות בנפרד, עד מצב euploidy שלהם הוא אשר על דו&quot;ח גנטיקה. Blastocysts עם מעמד aneuploidy לא-ישים אשר בדרך כלל נמחק, בהסכמת מטופל, תוך מספר שבועות. כך, רוב (&gt; 50%) של התקני VTF מבוטלים לאחר אחסון לטווח קצר, גרימת בעלות שנתית הסלמה כאשר משתמשים במכשירים מסחריים. בסך הכל, מיקרו-שניות-VTF היא הליך מאוד יעיל, אמין, הדיר עבור cryopreservation של blastocysts האדם. Securel עיצוב בקרת איכות מעולהתוויות y ובבטחה המאחסן עובר / ביציות תוך ביטול כישלון התאוששות ואופטימיזציה הישרדות כדאיות מחממים פוסט, אשר מצדיקה את השימוש של המערכה כגישה אוניברסלית vitrification העובר.

Vitrification הוא טיפולי פוריות השפעה ביותר יחיד הפריה חוץ גופית (IVF) בתעשייה מאז הפיתוח של הזרקת זרע intracytoplasmic. היום, blastocysts הוא cryopreserved ללא אובדן כדאיות עובר הקשורים בעבר עם שיטות קונבנציונליות איטית-הקפאת 1. עם הישרדות העובר שלאחר התחממות אמינה, תעשיית הפוריות הוא והפכה את השימוש המועדף של מחזורי חזרת עוברת cryopreserved, אשר להניב תוצאות הריון דומות או גבוהות יותר עוברים טריים מסורתיים. בשיתוף עם ביופסיה הבלסטוציסט והקרנה גנטית preimplantation (PGS), vitrification הפך לכלי קליני חיוני להשגת תוצאות אופטימליות לידת חי בריאה באמצעות העברה עוברים יחיד euploid 2, 3. Vitrification העובר Murine פותח באמצע 1980 4, </sup&gt; 5 ומותאמת חקלאות בעלי חיים ב -1990 6. בהתבסס על ההנחה כי פתרונות vitrification להקים מדינת glasseous metastable, ללא פגיעת היווצרות קרח קריסטל, היא הוכיחה בצורה יעילה יותר לשמור על שלמות הסלולר השלמה של עוברים. מעניין לציין, כי קבלת המבטיח של vitrification לתוך אמבריולוגיה אדם לא החלה להתממש עד המאה ה -21. פרסומים מוקדמים קידום שימוש vitrification התרחשו במקביל להתפתחותה של התקני מערכת &quot;פתוחים&quot; ייחודיים 7, 8, 9. עם זאת, אימוץ vitrification לתוך פרקטיקה קלינית היה איטי, כפי שהוא בא בזמן שיפורי הקפאת הבלסטוציסט איטי גם התרחשו. הקפאה איטית ממדרגה קונבנציונלית מוצלחת, בנוסף vitrification, העולה בקנה אחד עם שיפורים במערכות תרבות העוברת, כמו גם עם incorporatיון של גישות blastocoele-קורסת, שהגדיל את רמת ההישרדות הכוללת הן של trophectoderm, ולאחר מכן, השתלה 10. בעשור האחרון, טכנולוגיית vitrification החליפה שיטות הקפאה קונבנציונליות במהירות. במידה רבה, זה היה עקב ההתפתחות של מכשירי vitrification מיוחדים. יתכן שחלק מהמכשירים הללו נכה הבטיחות, היעילות הכוללת של vitrification הקליני על ידי החדרת פגמים בעיצוב טבועים מכשירים המשמשים בתעשיית IVF 11. ואכן, את הדקויות של מכשירים שונים להציג וריאציה טכנית משמעותית בין תוכניות, המכונית גם &quot;חתימות טכניות&quot; 12. לפיכך, כתבי עת מדעיים, כמו Journal of ניסויים דמיינו (יופיטר), יכול לשמש משאב יקר ערך עבור הוכחת פרטים טכניים, אשר יסייע להפחית וריאציה התוצאה. בעיה מתמשכת נוספת היא כי הסעיףשתי embryologists ממשיך להיות מידע מוטעה, גם היום, על בסיס הטענות כי &quot;קירור אולטרה-המהיר של עוברים או ביציות בתוך &#39;מערכת vitrification פתוחה&quot; (כלומר, קשר עובר ישיר עם חנקן נוזלי (LN 2)) הוא תנאי הכרחי כדי אופטימיזציה אחוזי הצלחה. &quot; האמונה ברורה, זה לא מדויק, מבוסס על ההצלחה המוכחת של ספטית סגורת מערכות 13, 14, 15. בהתבסס על עקרונות cryobiological של vitrification, את היעילות של vitrification היא יותר גבוה בהתחשב בשעורי התחממות מאשר על קירור שיעורים 16, 17, 18. באופן כללי, ללא תלות בהתקן vitrification בשימוש, שיעור ההתחממות יעלה את קצב הקירור להבטיח בהישרדותם. שיעורי התחממות גבוהים למזער את ההזדמנות עבור כל צמיחת קרח (כלומר, recrystallization של זיהומים בעלי גרעין בפתרונות-קריו) בשלב devitrification של ההתחממות. אמנם, יציבות פתרון vitrification (כלומר, הסוג וריכוז סוכני cryoprotective בשימוש) עשויה להיות השפעה מבלבלת, אבל זה מופנה בפרסום נפרד 11. בהתחשב בעיות קצב הקירור מחמם, vitrification MicroSecure (מיקרו-שניות-VTF) פותחה בשנת 2008 שיטה זולה, לא מסחרי, FDA תואמי אופטימיזציה ההיבטים-בקרת איכות של vitrification. זה היה ייחודי בכך שהוא הציע לחבל הוכחה, הפנים, תיוג כפול בצבע. יתר על כן, על ידי טעינה ואחסון עובר ישירות flexipette סטרילי משמש pipetting (כלומר, ללא pipetting למשטח התקן משני) ועל ידי שימוש בקשיות ionomeric-שרף לחלוטין חותם לרתך באמצעות אוטם אוטומטי, וריאציה טכנית מוגרת ביעילות. בהערכות גompleteness של מכשירי vitrification לשימוש פוטנציאלי, ישנם גורם בקרת איכות כמה שצריך להילקח בחשבון, כולל: 1) תיוג תוויות &quot;בסדר.&quot; &quot;החנות פוטנציאל להיות דבקות בצורה מאובטחת? האם הם tamperproof? האם הם מציעים פוטנציאל זיהוי כפול צבע? האם זה דורש תווית משנית, והוא יכול התווית להסירו בקלות לצורכי רישום ומעקב (כלומר, אימות חולה) שלאחר ההתחממות? 2) בקלות טכנית עוברת &quot;בסדר.&quot; &quot;החנות לטעון בקלות לתוך / על גבי המכשיר במועד וזיהה פשוט ואיתר מחמם פוסט? 3) פשטות פרוצדורלי / נשנה -Does פשטות הצעת vitrification השיטה ואמינות המאפשרת בקלות עבור דירות, אשר ממזערת את השונות בין טכנאים (פנימיים) ותוכניות (חיצוניות)? 4) קיבולת אחסון LN 2 &quot;בסדר.&quot; &quot;החנות המכשירים להיות בקלות ובבטחה טיפל וזיהה? האם שלהם STOזעם פוטנציאל המרחב ביותר? האם מציעים אבטחה ובטיחות המכשיר מפני נזק פיזי או מזהמים אפשריים כמערכת סגורה ספטית? 5) פוטנציאל Recovery / שרידות -זה עיצוב המכשיר נוטה בעיות פוטנציאליות בהתאוששות המובטחת של עוברים, האם הם מהימנים לַהֲפוֹך לִזְכוּכִית ולשמור שלמויות הסלולר להשלים מחמם פוסט? חשש האיכות הספציפית האחרון, קצב ההתאוששות, למעשה מוזער מפתיע בדוחות שפורסמו; זה נעשה על ידי הסתרת התוצאה השלילית בדרך כלל (כלומר, עובר או ביצה אבודות) בשיעורי הישרדות בדרך כלל-טובים. כל מכשיר נוטה להחלמה עקבית (&lt;99%) הוא פגום ברצינות מהווה התחייבות פרוצדורליים. ספטית, נסגרה שיטה מיקרו-שניות-VTF פותחה אסטרטגית לתת דין וחשבון על כל מידה בקרת איכות. עם זאת, לאחר 5 שנים של הצלחה קלינית מעולה ואימות 14, ההליך היה לאo להיות שונה. הקשיות העובר 0.3 מ&quot;ל המקורי (בעל תקע הידרופובי) הוסרו מתעשיית IVF והחליפו עם קש זרע 0.3 מ&quot;ל בעל תקע סטנדרטי כותנה / PVP (כלומר, relabeled כקש זרע / העובר). נייר פרוצדורליים זה מתאר את הצעדים ואסטרטגיות הספציפיים הדרושים כדי ליישם מיקרו-שניות-VTF בבטחה, בפשטות, ביעילות. יתר על כן, אנו מדגישים את השינוי (ים) צריך לתת דין וחשבון מהימן עבור מגבלות היצע, עד הזמן אפשר אריזת קש אידיאלית חלופית מחדש בחזרה למעבדה הקלינית.

<table><tbody><tr><td>מקל אלומיניום</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>מיסבים כדוריים, 3/32 אינץ'VXB.com</td><td></td> <td>KIT15977</td><td>נירוסטה</td></tr><tr><td>CBS זרע/קש עובר, 0.3 מ"ל</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td> צבע <td>סטרילי בודד</td></tr>, <tr><td>מוטות זיהוי, 30 מ"מ</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td><td></td></tr><tr><td>צינורות תרבית משוקללים, 15 מ"ל</td><td>פלקון</td><td>352099</td><td>חרוטי</td></tr><tr><td>צינורות תרבית, 10 מ"ל</td><td>Falcon</td><td>352057</td> שרוולי <td>Cryosleeves</td></tr><tr><td></td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>מסנן, 250 מ"ל</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0.22 &mu; </td></tr><tr><td>m צלוחות, תרבית רקמות 50 מ"ל</td><td>פלקון</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>פלקסיפטות, 300 &mu; מ ID</td><td>קוק מד.</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>מלקחיים סטריליים, 20/חבילה</td></tr><tr><td>,</td><td>מלקחיים גדולים Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>, מפצל - אוטם</td> חום <td>עדין Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>גביע</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>, SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V או 220 V עם מתאם</td></tr><tr><td>מדיה חוצצת Hepes&nbsp;</td><td>לייף גלובל או</td><td>LGGH-100; 100&nbsp; מ"ל, או</td><td>מאוחסן ב 2 - 8 &ordm; C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 מ"ל</td> עם תוויות <td>AA לא חיוניות</td></tr><tr><td>, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td></td></tr><tr><td>מיכל חנקן נוזלי בצבעים שונים, 40&nbsp; L</td><td>MVE או טיילור וורטון</td><td></td><td>אחסון נוזלים שונים&nbsp;</td></tr><tr><td>LN<תת>2; בקבוק דיואר, 0.5&nbsp; L</td><td>המפטון מחקר</td><td>HR4-695</td><td>נירוסטה</td></tr><tr><td>6 בארות כלי קסטר</td><td>ביוגניקה</td><td>015/020</td><td>כלי פלסטיק לפי מארז</td></tr><tr><td>נורת פיפטה, מיקרו כובע</td><td>דראמונד</td><td>פישר #13681451</td><td>חור בקודקוד הנורה</td></tr><tr><td>כלי פטרי, 35 מ"מ</td><td>פלקון</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פטרי, 58 מ"מ</td><td>צלחות פטרי 150288</td><td></td><td></td>Nunc</tr>, <tr><td>100 מ"מ</td><td>פלקון</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לפיפטה, ART ארוך</td><td>פישר מדע.</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 &mu; L</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond או Falcon</td> מכשיר <td>צנרת נטענת</td><td>שונים</td></tr><tr><td>, חשפנית</td><td>קופר כירורגית</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות, סרולוגיות 1&nbsp; מ"ל</td><td>פלקון</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות, סרולוגי 2&nbsp; מ"ל</td><td>בז</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות, סרולוגי 5&nbsp; מ"ל</td><td>פלקון</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות, סרולוגי 10&nbsp; mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>מספריים, כירורגי Mayo</td><td>Miltex</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Nikon, Olympus, Leica</td><td></td> רפידות גזה סטריליות שונות<td></td></tr><tr><td>, 4 אינץ' x 4 אינץ'</td> <td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>סרום סינתטי</td><td>Life Global, או</td><td>LGPS-20; 20 מ"ל, או</td><td>מאוחסן ב 2 - 8 &ordm; C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 מ"ל</td><td>לרכוש אנדוטוקסין נמוך לוט</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Chemical Co.</td><td>#S9378</td><td>Aliquot ל-50&nbsp; צלוחיות מ"ל, שנה; 
17.1 גרם/בקבוק + בינוני עד 50 מ"ל; 
עושה תמיסה של 1 M; 
סנן עם 0.22 ומיקרו; m יחידה</td></tr><tr><td>טיימר</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>פתרון הפשרה</td><td>חדשני Cryo Enterprises</td><td>BL-TS (&le; 1.0 מ' סוכרוז)</td><td>T1, T2, T3, T4; מטורף ב-2 - 8 &ordm; C עבור &le; חודש לאחר פתיחת</td></tr><tr><td>פתרון הוויטריפיקציה*,**</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&ge; 7.9 M [גליצרול/EG])</td><td>V1, V2, V3; מאוחסן ב-2 - 8 &ordm; C עבור &le; חודש לאחר הפתיחה</td></tr><tr><td colspan="4">* תוספים שאינם מחלחלים עשויים לכלול: סוכרוז, פיקול וסודיום היאלורונאט&nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">** תכשירים מסחריים אחרים הם בדרך כלל אתילן גליקול (EG)/דימתיל סולפוקסיד (DMSO; 30% v/v; 4.8 M), אך יכולים להיות EG/פרופילן גליקול (32% v/v; 5.2 M). תמיסות מעורבות משמשות בדרך כלל להפחתת חששות רעילות קריו של תמיסה טוחנת גבוהה. פתרונות מסחריים כוללים בדרך כלל פתרון ES ו-VS. ניסוח של תכשיר מסחרי הוא בדרך כלל רכוש קנייני.</td></tr></tbody></table>

vitrification microsecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

Vitrification עובר קליני התפתח עם התפתחות מכשירי vitrification ייחודיים במאה ה -21 ועם התפיסה המוטעית כי קירור אולטרה-מהיר מערכת &quot;פתוחה&quot; (כלומר, מגע ישיר LN 2) היה הכרח כדי לייעל הצלחת vitrification. הדוגמא סביב חשיבות שיעורי קירור הובילה נהלי שימוש לא בטוחים נתונים לשינויים טכניים ליצירת התקני vitrification כי התעלמו גורמי בקרת איכות חשובות (למשל, קל שימוש, דירות, אמינות, אבטחת תיוג, ובטיחות אחסון). הבנת הליקויים-בקרת איכות של מכשירים אחרים אפשר את התפתחותה של שיטה בטוחה ומאובטחת, הדיר, ואמין מיקרו-שניות-VTF שמטרתה למזער וריאציה התוך והבין-טכנאי. לא פחות חשוב, זה בשילוב הזמין של שני מכשירים FDA תואמים קיימים: 1) קשית עובר שרף 0.3 מיליליטר ionomeric עם הפנים, כפול בצבע, לחבל-pתיוג גג עם פוטנציאל חותמים לרתך דיר; ו -2) קצר, נפוץ בשימוש, 300 מיקרומטר מזהה flexipettes סטרילי כדי לטעון את העובר ישירות (ים) כדי ליצור מכשיר vitrification העולמי יעיל. כמו-ספטית אחרים, סגור מערכות vitrification (למשל, vitrification אבטחה גבוהה (HSV), ראפיד-i, ו VitriSafe) להשתמש ביעילות ברפואה הרבייה, vitrification microSecure (מיקרו-שניות-VTF) הוכיחה שהיא יכולה להשיג הישרדות והריון שלאחר התחממות גבוהה תוצאות עם לידיעתה לפשטות, וריאציה טכנית מופחתת. למרות קש העובר 0.3-מ&quot;ל המכיל תוסף הידרופובי הפנימי הוחלף מסחרית עם קשית זרע סטנדרטי בעל כותנה-פוליוויניל pyrrolidone (PVP) תקעים, שמרה על הרכב שרף ionomeric להבטחת איטום לרתך. עם זאת, אטמי כותנה יכול הפתיל את תכולת נוזל העובר של flexipettes לנוגע בהם. שיטה שונה מיקרו-שניות-VTF הותאמה לכלול לרתך פנימיות נוספותלאטום לפני תקע בצד טעינת המכשיר. השלב הטכני הוסיף לנוהל מיקרו-שניות-VTF לא השפיע יישום מוצלח שלה, כמו בהישרדותם (&gt; 95%) ושיעורי ההריון ממשיכים היום.

1,341 blastocysts מזוגגת היו מחוממים בין השנים 2012 עד יוני 2014, ו 1,341 עוברים התאושש (100%) בעוד 1,316 שרדו (98.1%). blastocysts ביופסיה חווה במהלך הישרדות 99.5%. עם העברת יחיד, גנטי נבדק בעיקר, euploid, עובר מזוגג, הצלחנו להשיג חלק משיעורי ההשתלה הגבוה ביותר ושיעורי לידת חי בארצות הברית, ללא קשר לגיל (איור 3) 20, על פי סטטיסטיקה לאומית האחרונה דווחה על ידי המרכז לבקרת מחלות וחברת טכנולוגיות רביית Assisted (לוחות 1 ו -2). הערכת אוכלוסייה חולה פרוגנוזה טובה (פחות מ 35 שנים) לאופני cryopreserved לבד (טבלת 1), במעבדה שלנו ביצועים טובים יותר מהממוצע הארצי הוא שיעורי ההשרשה (כלומר, את היעילות של עובר להקים הריון) ובסופו של דבר לחיות שיעורי ילודה על ידי למעלה מ -30%. בנוסף, אימות / אימות ראשו של קשיות האחסון השונות שלנו באמצע -2014 באמצעות 70 blastocysts מחקר הסכים, מחדש מזוגגים aneuploid הביאה התאוששות של 100% ו -100% הישרדות. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg"> איור 1. הגדרת MicroSecure VTF. מנת VTF (א) מורכבת עם 3 שורות נפרדות של פתרונות vitrification, אשר מנצלות 3 טיפות לשטוף לפני השמה בטיפות החזקה ברורות, ממוספרות. בנוסף, טפטפות פרט עם טיפי VTF מקוצרים (כלומר, 300 מיקרומטר מזהה flexipettes) מובטחות ומאורגנות מתל צינור קלקר (B), אשר ניתן לסובב לשימוש מסודר. שימו לב הרכבת pipetting micropipette נורה פנויה נציג נחה על מדף הקלקר. arget = "_ blank"&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg"> איור 2. השתנה הבלסטוציסט דירוג המערכת. המערכת לדירוג הבלסטוציסט גרדנר שלנו שונה מהווה פריצת המושרה של תאי TE כדי להקל ביופסיה הבלסטוציסט. שינוי רואה הבקיעה המוקדמת של blastocysts המלא (A: כיתה 3 = פחות מ בקיע 10%) ו blastocysts המורחב (B: כיתה 4 = עד 50% בקיעים), בעוד הבלסטוציסט בקיע (C) יש יותר מ -50% בקיעים 16. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 54871fig3.jpg "/&gt; איור 3. תוצאות הריון השוואתיות. במהלך מרווח 1.5 שנתי מצטבר, נתונים ההריון הושוו להעריך את ההשפעות של העברת blastocysts euploid מזוגגת חימם (n = 172 מחזורים / 144 העברות) לעומת מחזורי שאינו PGS (n = 160 מחזורים / 153 העברות) מעורבים בעיקר טרי מעביר 18. לצורך הניסוי שלנו, נתונים אלה עולה בבירור כי blastocysts ביופסיה מזוגגת ידי הליך מיקרו-שניות-VTF לשמור על כדאיות שלהם. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מקור מידע </td><td> מחזורים # </td><td> Mean # של עוברי העבירה </td><td> מחירי השרשה (%) </td><td> מחירי לידת חי (%) </td></tr><tr><td> מעבדת NB * </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00% </td><td> 74.50% </td></tr><tr><td> לאומי ממוצע </td><td> 20,423 </td><td> 1.7 </td><td> 39.60% </td><td> 44.10% </td></tr><tr><td colspan="5"> * נתונים היו בממוצע מבוסס על ביצועי 2014 פוריות אורנג 'קאונטי, מרכז פוריות דרום קליפורניה והמרכז דרום קליפורניה עבור מרפאות לרפואת פוריות באמצעות המעבדה לפוריות Ovation הנוכחי (Lab NB) אשר ייסד את ההליך vitrification microSecure בשנת 2008. </td></tr></tbody></table> לוח 1. 2014 CDC Assisted Reproductive לסטטיסטיקה. נתוני הריון העובר העברה קפוא של נשים מתחת לגיל 35 שנים משלוש דיווח מרפאות רופא בעזרת מעבדת NB שלנו בהשוואה לממוצע הלאומי של ארה"ב 2013 של מעל 450 מרפאות דיווח. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> הממוצע הארצי סארט </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> מרפאת - מדינה </td><td> נשים </td><td> נשים </td><td> נשים </td><td> נשים </td></tr><tr><td></td><td> &lt;35 yrs </td><td> 35-37 yrs </td><td> 38-40 yrs </td><td> 41-42 yrs </td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63.1% </td><td> 58.3% </td><td> 40.6% </td><td> 32.3% </td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64.7% </td><td> 61.5% </td><td> 40.4% </td><td> 32.2% </td></tr><tr><td> RMA-NJ * </td><td> 63.2% </td><td> 59.7% </td><td> 34.6% </td><td> 18.7% </td></tr><tr><td> לאומי ממוצע </td><td> 48.6% </td><td> 38.3% </td><td> 24.3% </td><td> 12.3% </td></tr><tr><td colspan="5"> SCCRM-דרום קליפורניה המרכז לרפואת פוריות; CCRM-קולורדו המרכז לרפואת פוריות; ו RMA-ReprodAssociates לרפואה uctive </td></tr><tr><td colspan="5"> * מרפאות מובילות אלה יש את כל בעיקר מיושמים מחזורי חזרת עוברת מזוגגים, בשיתוף עם בדיקות גנטיות preimplantation, לפועל שלהם רמת הטיפול המטופל כדי לייעל הצלחת לידה חייה לכל עובר המושתל. </td></tr></tbody></table> טבלת 2. 2014 שיעורי לידה חי מצטברים, כפי שדווח על ידי אגודת טכנולוגיות רביית Assisted (סארט), עבור 'מרפאת SCCRM בעזרת מעבדת פוריות Ovation שלנו בניופורט ביץ', קליפורניה, בניגוד מספר תוכניות מכובדות אחרות, כמו גם עם סארט ממוצע ארצי.

MicroSecure Vitrification פותחה כמערכת התקני ויטריפיקציה סגורה אספטית לא מסחרית התואמת לשיטות הייצור והטיפול ברקמות של ה-FDA. עקב הוצאת קשיות עובר סתומות הידרופוביות מהתעשייה, הליך הזיגוג שונה כך שיכלול אטם פנימי לפני פקק הכותנה הפנימי הסטנדרטי.

Vitrification MicroSecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל Cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

המטרה הכוללת של שיטת ויטריפיקציה של עוברים MicroSecure היא לספק הליך ויטריפיקציה סגור אספטי בטוח, מאובטח, פשוט אך יעיל לעוברים אנושיים. שיטה זו פותחה כדי למזער את משתני בקרת האיכות בזיגוג של עוברים אנושיים, ובכך להבטיח הצלחה אמינה וניתנת לשחזור. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא שואפת לבטל וריאציות טכניות בין ביולוגים למעבדות.הטכניקה שלנו כל כך פשוטה לביצוע שאנו מוצאים שהאתגר הגדול ביותר עבור המתאמנים שלנו הוא ללמוד כיצד לבצע פיפטה של עוברים מבלי לאבד אותם. הרעיון מאחורי השיטה שלנו היה לבטל את הצורך במכשירים מיוחדים על ידי התאמת שני פריטים נפוצים שאושרו על ידי ה-FDA. קש אחסון יונומרי עם תווית פנימית, וגמישות סטרילית.הדגמה חזותית של טכניקה זו מועילה ביותר מכיוון שהיא מדגישה את הטיפים הבסיסיים המבטיחים את יישומה המוצלח. לפני תחילת ההליך, הנח את קש הזרע הסטרילי של 0.3 מ"ל על משטח הטפלון של האלקטרודה של אוטם דחף בסיסי על השולחן, ממש מול התקע, כדי ליצור אטימה פנימית. לחץ על הידית כדי להפעיל את החום, שחרר את הידית כאשר האור האדום כבוי ונשמע צפצוף.לאחר מכן דחוף את פקק הכותנה קדימה כנגד האיטום הפנימי לפני השלמת ההגדרה. לצורך דילול קריו והעמסת בלסטוציסט של הדגימות, הסר את צלחת תרבית המטופל מהחממה ואשר את כל זיהויי הדגימה עם מקור משני. תחת סטריאומיקרוסקופ, השתמש בגמישות ויטריפיקציה, המכונה קצה ויט, כדי להעביר את הבלסטוציסטים לטיפות אחיזה בודדות בשורה העליונה של צלחת קריו מתאימה.לאחר מכן, מלאו מראש את הפלקסיפט ב-3 מיקרוליטר של תמיסת V1 והפיצו מחצית מהתוכן לעובר הראשון. שאפו את העובר והעבירו אותו לטיפה הכביסה הראשונה V1. לאחר מכן פיפטה את העובר פעמיים עד שלוש סביב היקף הטיפה, ונקה את תוכן הפיפטה שנותר מחוץ לטיפה על פני הכלי.לאחר מכן העבירו את הבלסטוציסט לטיפת אחיזה V1 בודדת וטענו מראש את קצה הויטמין בתמיסת V2 הבאה לפני שפיפטינג את העוברים הנוספים עם קצה ויטמין חדש. לאחר שטיפת כל הבלסטוציסטים בטיפות V2 ו-V3 כפי שהודגם זה עתה, נקה את שאריות התמיסה והבועות מקצה הוויטמין מחוץ לטיפה המחזיקה V3, ומלא לחלוטין את הקצה בתמיסת V3 נקייה מסביב לעובר הראשון. הוצא כ-1 מיקרוליטר מהנפח, ושאף את הבלסטוציסט ואת תמיסת ה-V3 הנותרת לחלוטין לתוך קצה הוויט.כעת, הסר את הקצה מהפיפטה, והשתמש בכרית גזה סטרילית כדי לייבש את שאריות תמיסת ה-V3 מהמשטח החיצוני של קצה הוויט. ייבוש המשטח החיצוני של הקצה הוא קריטי ואינו כרוך בסיכון נוסף לאובדן עובר. לאחר מכן הכנס את קצה הקצה תחילה לקצה הפתוח של הקש האטום מראש והפוך את הקש, קצה התווית כלפי מטה.שימו לב לקצה בתקע הפנימי. השאירו מרחב אוויר של 1 ס"מ בקצה הפתוח ואז רתכו אותו בבטחה וסגרו אותו. לאחר שכל הקשיות נאטמו, טבלו אותן ישירות לתוך חנקן נוזלי בבקבוק נירוסטה ואחסנו את הקשיות בגביע הפתוח המחובר למקל ההליכה של המטופל.לפליטה ודילול של תמיסת קריו, הנח את צלחת דילול שש הבארות המתאימה למרכז שלב סטריאומיקרוסקופ וצלחת פטרי בגודל 60 מ"מ המכילה אמבט חימום סוכרוז של 37 מעלות צלזיוס לצד אחד של המיקרוסקופ. לאחר מכן, בודד את הקש לחימום, והחזק את אטם הקש העליון מעל מפלס הנוזל כדי לאשר את זהות הדגימה. השתמש במספריים של מאיו כדי לאבטח את הקשית מתחת לתקע הפנימי, כדי לשמור על קצה הוויטמיה שקוע בחנקן הנוזלי.הקש בחוזקה את המספריים על בקבוק הדיואר מספר פעמים כדי לעקור את הקצה מהקיר הצדדי הפנימי של הקש כאמצעי זהירות לבקרת איכות, והרם את הקשית לאוויר הסביבה בכיוון אופקי ליד או מתחת למשטח הסטריאוסקופ. אוחזים בקצה הלא מסומן של הקש, חותכים את הקש בתקע הפנימי. לאחר מכן הרם את הקש מעל צלחת האמבטיה המחממת ושפך את קצה הוויטמין לאמבטיה בזווית של 60 מעלות, עד שהקצה מוחצן לחלוטין.בסיס הגמיש צריך לנוח מעל קיר צד הכלים. לאחר 5 עד 10 שניות, העבירו את בסיס הפיפטה למכשיר פיפטינג מיקרו-קאפ. התחל טיימר של חמש דקות.תוך כדי צפייה במיקרוסקופ, השתמש באצבע המורה כדי לכסות את חור הנורה, וסחט בעדינות את הנורה כדי לשחרר את הבלסטוציסט המזוגג מקצה הוויטמיה לתוך שטיפת T1. לאחר אישור שחרור הבלסטוציסט, נקה את שאריות תמיסת ה-V3 והבועות בלחץ חיובי, ופנה את התכולה למרכז באר השלכה שאינה בשימוש. העבירו את קצה הוויטמין על פיפטה סטרבר, והעבירו את העובר לטיפה T1 השנייה מתחת לשמן למשך ארבע הדקות הנותרות.במהלך הדגירה, מלאו מראש את ה-flexipet בתמיסה הבאה, ולאחר מכן דללו את הבלסטוציסט בטיפות T2, 3 ו-4 במרווחים של שלוש דקות. לבסוף, אזנו את הבלסטוציסטים בטיפת T5 למשך חמש דקות על משטח של 37 מעלות צלזיוס, לפני החזרתם לאינקובטור. מערכת דירוג הבלסטוציסט של גרדנר שונה מחשיבה בלסטוציסטים מלאים כבעלי פחות מ-10% בקע של תאי הטרופקטודרם, בעוד שבלסטוציסטים עם עד 50% בקע מסווגים כמורחבים.בלסטוציסטים המפגינים בקע גדול מ-50% נחשבים לבקיעה. באמצעות שיטות השימור והחימום המוכחות, רמות גבוהות של לידות חי בכל התחלת מחזור הושגו באופן עקבי עם או בלי בדיקות גנטיות טרום השרשה. למרות שההצלחות הללו גבוהות במידה ניכרת, באמצעות בלסטוציסטים אופלואידים שנבחרו מראש.ואכן, בהערכת אוכלוסיית חולי פרוגנוזה טובה עבור מחזורים משומרים בהקפאה בלבד, נתוני העברת עוברים קפואים אלה מדגימים שיעורי הצלחה טובים יותר מהממוצע הארצי הן לשיעורי ההשתלה והן לשיעורי לידת חי ביותר מ-30%על ידי העברת בלסטוציסטים מזוגגים אופלואידים בודדים שנבדקו גנטית, כמה משיעורי ההשתלה הגבוהים ביותר ושיעורי לידת חי בארצות הברית, ללא תלות בגיל, הושגו, בהשוואה לסטטיסטיקה הלאומית האחרונה שדווחה על ידי המרכז לבקרת מחלות עבור שתי מרפאות פוריות מכובדות אחרות, והנתונים שפורסמו על ידי האגודה לטכנולוגיות רבייה מסייעות. ויטריפיקציה של MicroSecure היא הליך אספטי חדשני שפותח עבור קלות טכנית, אמינות ואבטחה קריו. מערכת ויטריפיקציה פשוטה ולא מסחרית זו מציעה חלופה יעילה ביותר בעלות נמוכה להתקני ויטריפיקציה.מאז פיתוחה, שיטת MicroSecure הבטיחה התאוששות של למעלה מ-99.9% עוברים ומעל 95% הישרדות מלאה של בלסטוציסט. זה איפשר את הפיכת הפרקטיקה הקלינית שלנו כמעט לכל מחזורי העברת האמבירו שנשמרו בהקפאה במהלך שלוש השנים האחרונות. שינינו ביעילות את הנוהל שלנו כך שיכלול אטם פנימי מול פקק הכותנה של קשיות זרע יונומריות, כדי עדיין לייצר אטמי ריתוך אמינים ותוצאות יוצאות דופן לאחר ההתחממות.ישנן מערכות מכשירים רבות ושונות המשמשות כיום בתעשיות טכנולוגיית הרבייה המסייעת, אך אף מכשיר אחר אינו מציע את הפשטות והחזרתיות הטכנית כדי למנוע למעשה שונות של המשתמש ולספק בטיחות אופטימלית, כמו ויטריפיקציה של MicroSecure.

modified-microsecure-vitrification-safe-simple-highly-effective

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אתילן גליקול מבוססי שיטה vitrification עבור עוברי עכבר מתואר. זהו יתרון לשיטות אחרות בפשטותו ורעילות נמוכה עובריים, ולכן יכול להיות ישים באופן נרחב זנים רבים של עכברים, כולל עכברים טבועה ו גנים שונה.

Cryopreservation של עוברי עכברים ידי Vitrification אתילן גליקול מבוסס

בסרטון זה, אנו מדגימים שיטת ויטריפיקציה קריוגרפית מהירה במיוחד לשימור דגימות ביולוגיות. השיטה כוללת שימוש בשילוב של cryoprotectants כדי להגן על הרקמה הביולוגית מפני נזקי קיפאון על ידי מניעת היווצרות גבישי קרח תוך תאיים.

שימור בהקפאה מבוסס ויטריפיקציה: טכניקת קירור מהירה במיוחד לשימור דגימות ביולוגיות בטמפרטורות נמוכות מאוד לאחסון לטווח ארוך

בסרטון זה, אנו מתארים את הליך הוויטריפיקציה של עוברי ארנבים שנקטפו בשלב ההתפתחות הרצוי באמצעות אתילן גליקול ודימתיל סולפוקסיד כהגנה קריוגנית וקש קריוגני כמערכת הנשא. לעוברים המזוגגים יש שיעור הישרדות גבוה וניתן לאחסן אותם לתקופה ממושכת עד לשימוש.

ויטריפיקציה של עוברי ארנב באמצעות קש קריוגני: טכניקת קירור מהירה במיוחד לשימור עוברי ארנבים לאחסון לטווח ארוך

טכניקות הרבייה בסיוע (אמנויות) הן בהערכה רציפה כדי לשפר את התוצאות ולהפחית את הסיכונים הקשורים. כתב יד זה מתאר הליך מינימלית פולשני העברת העובר עם פרוטוקול הקריוגנית יעיל המאפשר שימוש בארנבים כמודל בעלי חיים אידיאלי של רבייה אנושית.

העברת העובר פולשני המינימלי העובר ויטריפיקציה בשלב העובר אופטימלית במודל ארנב

כאן אנו מציגים פרוטוקול זמן לשגות morphometric לעקוב האינטנסיביות של הבלסטוציסט התכווצות והתרחבות re במהלך התערבויות previtrification ושחזור פוסט-התחממות כדור הארץ. היישום של הפרוטוקול אפשרי במבחנה מעבדות הפריה מצויד מיקרוסקופים בצילום מואץ והוא מומלץ בפיתוח של שיטת ויטריפיקציה הבלסטוציסט אופטימלית.

פרוטוקול Morphometric להערכה אובייקטיבית של הבלסטוציסט התנהגות במהלך ויטריפיקציה והשלבים התחממות כדור הארץ

ביופסיה blastocyst ו ויטריפיקציה נדרשים ביעילות לבצע בדיקה גנטית מראש השרשה. גישה הדורשת את הפתיחה הרציפה של הסונה והחזרת התאים ה7-8 של תאי העור ביום 5-7 שלאחר ההפריה מגבילה גם את מספר המניפולציות הנדרשות ואת חשיפת העובר לתנאי הסביבה האופטימליים.

ביופסיה של האדם בלסטוציסטה וויטריפיקציה

כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור אמצעי האחסון המינימלי של ויטריפיקציה של חתולים בלתי בוגרים עם מדיה מתוצרת מעבדה על תמיכות מסחריות. הוא מכסה כל צעד מ oocyte בידוד מ vivo גונדות לשעבר כדי ויטריפיקציה והתחממות.

כמות מינימלית של ויטריפיקציה של חתולים לא בוגרים

שימור קריופרציה של Oocyte מוכר על ידי מספר חברות מדעיות בינלאומיות כסטנדרט הזהב לשימור פוריות אצל נשים לאחר הפוסט-פוסט-פוריות. אסטרטגיות קליניות ומעבדות מתאימות מבטיחות יעילות מרבית, יעילות ובטיחות של טיפולי שימור פוריות.

שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

הפרוטוקול נועד לספק שיטה סטנדרטית לרטט של ביציות כבשים בוגרות וצעירות. הוא כולל את כל השלבים מהכנת אמצעי ההבשלה במבחנה לתרבות שלאחר ההתחממות. אוציטים עוברים רטט בשלב MII באמצעות Cryotop כדי להבטיח את עוצמת הקול החיונית המינימלית.

ויטריפיקציה של אין ויטרו התבגר אוציטס שנאספו מן השחלות למבוגרים טרום-פוברטל בכבשים

מוצג פרוטוקול לוויטריפיקציה של רקמת השחלה, כשיטת שימור הקפאה חלופית להקפאה איטית הנפוצה.

ויטריפיקציה של רקמת קליפת המוח השחלתית להשגת מצב זגוגי של צבירה

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול מרית מונטווידאו לזיגוג עוברים לפני השרשה של עכברים וכבשים, המורכב ממרית תוצרת בית ושימוש בתמיסות תוצרת בית. העוברים מתאזנים במהירות בשתי תמיסות קריופרוטקטנטיות בריכוז הולך וגובר, נטענות על המרית, טובלות בחנקן נוזלי, ולבסוף נאטמות בקשית של 0.5 מ"ל.

מרית מכשיר מונטווידאו לזיגוג של עוברי יונקים

למדו את שיטת MicroSecure Vitrification לשימור עוברים אנושיים בבלסטוציסטים. טכניקה סגורה ואספטית המבטיחה שיעורי הצלחה גבוהים בהשתלות ובלידות חיות.

Vitrification MicroSecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל Cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש

גלה סרטונים נוספים