Name: שינויו Functionalization של קבוצת guanidine ידי מבשרי תפורות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: למד שיטת סינתזה לפפטידים מפונקציונליים בגואנידין לכימיה פפטידית שרירית ורפואה מותאמת אישית. הפרוטוקול תואם לסינתזת פפטידים על פאזה מוצקה ומאפשר פיתוח תרופות ממוקדות לטיפול בסרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

TGK מודה והמדרשה הבינלאומית למדע והנדסה (IGGSE) של מינכן Technische Universität עבור התמיכה הכספית שלהם. HK מודה המרכז חלבון משולב המדע במינכן (CIPSM) על תמיכתם.

<ol><li>Saczewski, F., Balewski, L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19780701">Biological activities of guanidine compounds.</a> Exp. Opin. Ther. Patents. 19 (10), 1417-1448 (2009).</li>
<li>Saczewski, F., Balewski, L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23617396">Biological activities of guanidine compounds, 2008-2012 update.</a> Exp. Opin. Ther. Patents. 23 (8), 965-995 (2013).</li>
<li>Wirth, T. H., Davidson, N. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja01074a018">Mercury (II) Comlexes of Guanidine and Ammonia, and a general discussion of the Complexing of Mercury (II) by Nitrogen Bases.</a> J. Am. Chem. Soc. 86 (20), 4325-4329 (1964).</li>
<li>Berlinck, R. G., Burtoloso, A. C., Kossuga, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemistry+and+biology+of+organic+guanidine+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Prod.+Rep%22%5BJournal%5D)">The chemistry and biology of organic guanidine derivatives.</a> Nat. Prod. Rep. 25, 919-954 (2008).</li>
<li>Peterlin-Mašič, L., Kikelj, D. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0040402001005075">Arginine mimetics.</a> Tetrahedron. 57 (33), 7073-7105 (2001).</li>
<li>Peterlin-Mašič, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arginine+mimetic+structures+in+biologically+active+antagonists+and+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Arginine mimetic structures in biologically active antagonists and inhibitors.</a> Curr. Med. Chem. 13 (30), 3627-3648 (2006).</li>
<li>Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrins%3A+bidirectional%2C+allosteric+signaling+machines%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Integrins: bidirectional, allosteric signaling machines.</a> Cell. 110 (6), 673-687 (2002).</li>
<li>Liddington, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+aspects+of+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural aspects of integrins.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 819, 111-126 (2014).</li>
<li>Plow, E. F., Haas, T. A., Zhang, L., Loftusi, J., Smith, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10801897">Ligand binding to integrins.</a> J. Biol. Chem. 275 (29), 21785-21788 (2000).</li>
<li>Kapp, T. G., Fottner, M., Maltsev, O. V., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+cause%2C+great+impact+-+modification+of+guanidine+group+in+RGD+controls+subtype+selectivity%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Small cause, great impact - modification of guanidine group in RGD controls subtype selectivity.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 55, 1540-1543 (2016).</li>
<li>Xiong, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+the+extracellular+segment+of+integrin+alpha+Vbeta3%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha Vbeta3.</a> Science. 294, 339-345 (2001).</li>
<li>Xiong, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+the+extracellular+segment+of+integrin+alpha+Vbeta3+in+complex+with+an+Arg-Gly-Asp+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha Vbeta3 in complex with an Arg-Gly-Asp ligand.</a> Science. 296 (5565), 151-155 (2002).</li>
<li>Nagae, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+%CE%B15%CE%B21+integrin+ectodomain%3A+atomic+details+of+the+fibronectin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of α5β1 integrin ectodomain: atomic details of the fibronectin receptor.</a> J. Cell Biol. 197 (1), 131-140 (2012).</li>
<li>Hersel, U., Dahmen, C., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RGD+modified+polymers%3A+biomaterials+for+stimulated+cell+adhesion+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">RGD modified polymers: biomaterials for stimulated cell adhesion and beyond.</a> Biomaterials. 24 (24), 4385-4415 (2003).</li>
<li>Auernheimer, J., Dahmen, C., Hersel, U., Bausch, A., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoswitched+Cell+Adhesion+on+Surfaces+with+RGD+Peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Photoswitched Cell Adhesion on Surfaces with RGD Peptides.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (46), 16107-16110 (2005).</li>
<li>Corradini, D., Eksteen, E., Eksteen, R., Schoenmakers, P., Miller, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCorradini%2C+D+%22Handbook+of+HPLC%22">Handbook of HPLC</a>. , CRC Press. (2011).</li>
<li>de Hoffmann, E., Stroobant, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3ade+Hoffmann%2C+E+%22Mass+Spectrometry%3A+Principles+and+Applications%22">Mass Spectrometry: Principles and Applications</a>. , John Wiley & Sons. (2007).</li>
<li>Frank, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+Control+of+Integrin-Subtype+Selectivity+in+isoDGR+Peptide+Motifs%3A+A+Biological+Switch%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Conformational Control of Integrin-Subtype Selectivity in isoDGR Peptide Motifs: A Biological Switch.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49 (48), 9278-9281 (2010).</li>
<li>Rossiter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+substrate-based+inhibitors+of+mammalian+dimethylarginine+dimethylaminohydrolase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Selective substrate-based inhibitors of mammalian dimethylarginine dimethylaminohydrolase.</a> J. Med. Chem. 48 (14), 4670-4678 (2005).</li>
<li>Weiss, S., Keller, M., Bernhardt, G., Buschauer, A., König, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N%28G%29-Acyl-argininamides+as+NPY+Y%281%29+receptor+antagonists%3A+Influence+of+structurally+diverse+acyl+substituents+on+stability+and+affinity%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">N(G)-Acyl-argininamides as NPY Y(1) receptor antagonists: Influence of structurally diverse acyl substituents on stability and affinity.</a> Bioorg. Med. Chem. 18 (17), 6292-6304 (2010).</li>
<li>Hammerschmidt, F., Kvaternik, H., Schweifer, A., Mereiter, K., Aigner, R. M. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0032-1316789">Improved Synthesis of No-Carrier-Added [*I]MIBG and Its Precursor.</a> Synthesis. 44 (21), 3387-3391 (2012).</li>
</ol>

החוקרים אין לחשוף.

מפלסת הדרך guanidinylation הינה נגזרת פפטיד מחזורית orthogonally deprotected, (ג (OrnD (OT Bu) GF (N Me) V)), אשר מסונתז על ידי פרוטוקול Fmoc רמת סינתזה פפטיד מוצק שלב (SPPS). Ornithin שימש הנגזר מוגן orthogonally, (Fmoc-Orn (DDE) -OH), אשר ניתן deprotected עם הידרזין ב DMF לאחר cyclization של הפיגום פפטיד. מבשר פפטיד מטוהר על ידי המשקעים של המתחם ועל ידי lyophilization לאחר מכן. מבשרי ...

בין קבוצות pharmacophoric בשכיחותו הליגנדים טבעיים היא קבוצת guanidine, אשר מעורבים באינטראקציות מרובות 1, 2. לדוגמא, היא משמשת תורם מממן פי ארבעה פוטנציאל באינטראקציות אג&quot;ח מימן מעורב אינטראקציות אלקטרוסטטיות, כגון גשרי מלח או אינטראקציות π קטיון. בשנת כימיה רפואית, בקבוצה זו נמצאת לעתים קרובות סמים לתרופות 4, למרות שפעמים רבות מאוד כמו mimetics guanidine 5, 6. הסיבה לפיתוח mimetics guanidine היא הסרה של הקבוצה guanidine בכל מקום, בעלי מטען חשמלי חיובי, כמו גם את ההתאמה של lipophilicity של ליגנד. בשנת הליגנדים peptidic, חומצת אמינו הקבוצה המכילה guanidine היחידה היא ארגינין, אשר על כן מופיעה בדרך כלל באזור ביו של הליגנדים peptidic. יחסי ציבור מאודלדוגמה ominent עבור משפחה ליגנד-המכיל ארגינין היא תת-המשפחה של integrins מחייב RGD. באופן כללי, integrins הם מחלקה של קולטנים הידבקות התא, אשר להשתלט הפונקציות החשובות בכל אורגניזמים גבוה. חלק מהפעולות הללו כרוכים הידבקות התא, הגירה, והישרדות התא. לפיכך, הם מעורבים גם באינדיקציות פתולוגיים, כגון סרטן סיסטיק. Integrins הם חלבונים heterodimeric transmembrane המורכבת α- ו β-למקטע היוצרות 24 תת integrin ידוע כיום; 8 מהם מכירים את רצף tripeptide Arg-גלאי-ASP (= RGD) ב הליגנדים שלהם 7. האזור מחייב ממוקם במפגש בין שני תתי סוגים אלה בחלק התאי, קבוצת ראש integrin שנקראה 8. RGD מוכרת על ידי שתי אינטראקציות נפוצות: באזור מתכת-יון-תלות באתר הדבקה (מידאס), הנמצא למקטע בטא ואשר נקשר החומצה קרבוקסילית של הליגנדים (Cha לוואיב של ASP); וקבוצת guanidine של הליגנדים, הנמצאת למקטע אלפא. רוב תת integrin הם מופקרים ולשתף לפחות חלק מטריקס הטבעי שלהם (ECM) הליגנדים 9. לפיכך, לפיתוח הליגנדים integrin מלאכותיים, המוקד העיקרי הוא, מלבד זיקה מחייבת גבוהה, את הסלקטיביות תת. לאחרונה, הצלחנו לחשוף מרכיב מפתח עבור הדור של הליגנדים-סלקטיבית תת: קבוצת guanidine. באמצעות שינויים ברורים, הליגנדים biselective עבור αv- ו α5 המכילים תת integrin ניתן להפוך תרכובות סלקטיבית על ידי שינויים פשוטים על הקבוצה guanidine, אשר לאחר מכן ניתן להפלות את 10 α-יחידות משנה שונות. בכיס αv, קבוצת guanidine אינטראקצית צד-על באמצעות גשר מלח bidentate עם Asp218 11, 12. ג אינטראקציה זולהיות גם ציין α5β1 (כאן, עם Asp227 ב α5), אך בנוסף, קץ-על האינטראקציה של הקבוצה guanidine עם שאריות GLN (Gln221) הוא ציין שיש 13. לפיכך, שינינו את קבוצת guanidine בשני אופנים מנוגדים: במקרה אחד, על ידי חסימת הצד-על אינטראקציה עם מתילציה של δ N של קבוצת guanidine, ובמקרה השני, עם מתילציה של ω N guanidine, חסימת האינטראקציה סוף-על. באופן מפתיע, שינוי קטן זה הוביל לשינוי סלקטיביות מוחלט של הליגנדים. בנוסף אלקילציה, שיטת functionalization חדשה הוצגה בפרסום זה. שיטת functionalization הקלסית לסוג זה של ליגנד pentapeptidic היא דרך נטיית שרשרת הצד של חומצת אמינו לא מעורבת מחייב (למשל, K ב ג (RGDfK)) 14, 15. כאן,אנו מראים כי functionalization הוא גם אפשרי על ידי שינוי guanidine - שהוא חיוני עבור מחייב - עם acyl או מקשר alkylated. המטען החיובי כי הוא חיוני מחייב נשמר, ומודלים מראים כי נקודות השרשרת הארוכות מכייס המחייב, ובכך מתן אפשרות אידיאלית עבור הקובץ המצורף של linkers נוסף תיוג יחידות (למשל, תווית פלורסנט או chelator עבור מולקולרי הַדמָיָה). בעבודה זו, אנו מתרכזים בצעדי ההכנה עבור השינוי של קבוצת guanidine ב הליגנדים המכיל ארגינין. זה כרוך הסינתזה של מיני -methylated ω N, כמו גם guanidines עם יחידות ומקשרות יותר. השינויים השונים מהווים קבוצות acyl ו אלקיל.

<table><tbody><tr><td>N,N&prime; -Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine, 98%&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>434167&nbsp; אולדריץ'</td><td></td></tr><tr><td>טריפנילפוספין, 99%</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>T84409&nbsp; SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran, >99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>4745</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran נטול מים, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>5182</td><td></td></tr><tr><td>מתנול נטול מים, 99.8%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>322415&nbsp; SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diisopropyl azodicarboxylate, 98%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>225541&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Dichlormethan, לסינתזה, 99.5%</td> <td>Carl Roth</td><td>8424</td><td></td></tr><tr><td>סיליקה ג'ל לכרומטוגרפיה פלאש</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60738&nbsp; SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>n-Pentane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>8720</td><td></td></tr><tr><td>n-Hexane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>CP47</td><td></td></tr><tr><td>Ethylacetate, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>7338</td><td></td></tr><tr><td>Aminohexanol, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A56353&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><<tr><td>em>S-Methylisothiourea hemisulfate, 98%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>M84445 ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Di-tert-butyl dicarbonate, 99%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>205249&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Dimethylformamid, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>A529</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropylethylamin, 99.5%</td> <td>Carl Roth</td><td>2474</td><td></td></tr><tr><td>אצטי אנהידריד, 99%</td> <td>Carl Roth</td><td>4483</td><td></td></tr><tr><td>שרף כלורטריטיל</td><td>Carbolution</td><td>CC11006</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Gly-OH, 98%</td> <td>Carbolution</td><td></td><td></td>CC05014</tr><tr><td>פיפרידין, 99%</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>104094&nbsp; SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Orn(Dde)-OH</td><td>Iris-Biotech</td><td>FAA1502</td><td></td></tr><tr><td>HATU, 99%</td> <td>Carbolution</td><td>CC01011</td><td></td></tr><tr><td>HOAt, 99%</td> <td>Carbolution</td><td>CC01004</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Val-OH</td><td>Carbolution</td><td></td> CC05028-2-Nitrobenzenesulfonyl <td></td></tr><tr><td>chloride, 97%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>N11507&nbsp; אולדריץ'</td><td></td></tr><tr><td>2,4,6-קולידין, 99%</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>27690&nbsp; SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Mercaptoethanol, 99%&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>M6250&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diazabicycloundecen, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>139009&nbsp; אולדריץ'</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-D-Phe-OH, 98%</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>47378&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-ASP (OtBu)-OH, 98%</td> <td>קרבולוציה</td><td>CC05008</td><td></td></tr><tr><td>Hexafluoroisopropanol</td><td>קרבולוציה</td><td>CC03056</td><td></td></tr><tr><td>דיפנילפוספוריל אזיד, 97%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>178756&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>TFA, 99.9%</td><td>Carl Roth</td><td>P088</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilan, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>אצטוניטריל, HPLC כיתה</td><td>קארל רוט</td><td>HN44</td><td></td></tr></tbody></table>

שינויו functionalization של קבוצת guanidine ידי מבשרי תפורות

Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

קבוצת guanidine היא אחת קבוצות pharmacophoric החשובות ביותר כימיה רפואית. חומצת האמינו רק נושאת קבוצת guanidine הוא ארגינין. במאמר זה, שיטה קלה השינוי של קבוצת guanidine ב הליגנדים peptidic מסופקת, עם דוגמא של הליגנדים integrin מחייב RGD. זה הודגם לאחרונה כי השינוי המובהק של קבוצת guanidine ב הליגנדים אלה מאפשר אפנון סלקטיבית של תת (למשל, בין תתי הסוגים αv ו α5). יתר על כן, אסטרטגיה ידועה בעבר עבור functionalization דרך קבוצת guanidine הודגמה, ואת הגישה הסינטתית נסקרה במסמך זה. השינויים המתוארים כאן לערב סופני (ω N) קבוצות guanidine alkylated ו acetylated. לסינתזה, מולקולות מבשרות תפורים מסונתזות, אשר לאחר מכן חשופים תגובה עם אמין deprotected orthogonally להעביר את הקדםקבוצת guanidine -modified. לסינתזה של guanidines alkylated, מבשרי מבוסס על N, H -pyrazole-1-carboxamidine -DI-בוק-1 &#39;N משמשים לסנתז תרכובות acylated, מבשר הבחירה להיות נגזרת acylated בהתאמה של N -Boc- S - methylisothiourea, אשר ניתן להשיג ב תגובות אחד ושני צעד.

מבשר פפטיד המחזורי היה מסונתז כמו פפטיד ליניארי, cyclized, ו orthogonally DDE-deprotected. לאחר המשקעים, הטוהר של המתחם נותח עם HPLC-MS (איור 1). כדי לעקוב אחר ההתקדמות של התגובה, ניתוח HPLC בוצע לאחר זמן תגובת 2-h (איור 2). עבור שאריות גדולות על קבוצת guanidine, זמן התגובה של 2 h הוא לעתים קרובות לא מספיק. במקרה ז...

פרוטוקול לסינתזה של guanidines-modified אלקיל מבוסס על השימוש המבשר המתאימים הוצג.

שינויו Functionalization של קבוצת guanidine ידי מבשרי תפורות

The guanidine group is one of the most important pharmacophoric groups in medicinal chemistry. The only amino acid carrying a guanidine group is arginine. ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לספק גישה סינתטית נוחה לפפטידים פונקציונליים של גואנידין. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הכימיה של פפטידי שריר כגון פיתוח ליגנדים של אינטגרין או ליגנדים GPCR. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת גישה קלה וסינתטית לגואנידינים מתפקדים, התואמים לחלוטין ל- SPPS.הטכנולוגיה תהיה בעלת ערך במיוחד עבור מולקולות מישוש מכיוון שהקבוצות הפונקציונליות, שעברו שינוי, הן בדרך כלל ביומולקולות מתדרדרות. במקרה שלנו, אנו שואפים למולקולות שניתן להשתמש בהן בהדמיה מולקולרית fpr של תכונות ייחודיות של סרטן בודד ולטיפול הספציפי בהן; נושא חשוב לרפואה מותאמת אישית. כדי להתחיל בהליך הספציפי הזה, הוסף גרם אחד של בוק-פיראזול קרבוקסמידין וגרם אחד של PPh3 לבקבוק עם תחתית עגולה של 50 מיליליטר.לאחר מכן, הוסף 10 מיליליטר THF מיובש לבקבוק עם תחתית עגולה של 50 מיליליטר באווירה אינרטית באמצעות מחיצת גומי. בעזרת מזרק מוסיפים 194 מיקרוליטר מתנול יבש. מערבבים את התמיסה בטמפרטורת החדר.בעזרת מזרק מוסיפים תמיסה מוכנה של דיסופרופיל אזודיקרבוקסילט ב-THF טיפה במשך 15 דקות. לאחר מכן, תנו לתמיסה לערבב במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. בעזרת מאייד סיבובי, הסר את הממס בלחץ מופחת.לאחר מכן, ממיסים את המוצר הגולמי במיליליטר אחד של DCM. לאחר מכן, תן עמוד הבזק עם 100 גרם סיליקה, ב -10% אתיל אצטט בתמיסת פנטן. טען את המוצר הגולמי המומס על העמודה והוסף את הממס בלחץ.אסוף, זהה ושלב את השברים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, בעזרת מאייד סיבובי, מאדים את הממס בלחץ מופחת כדי לקבל את התרכובת הרצויה כשמן צהוב וצמיג. ראשית, הוסף גרם אחד של בוק-פיראזול קרבוקסמידין, גרם אחד של PPH3 ו-0.9 גרם של Dde-6-Aminohexanol לבקבוק עם תחתית עגולה של 50 מיליליטר.לאחר מכן, הוסף 10 מיליליטר THF יבש באווירה אינרטית באמצעות מחיצת גומי. לאחר מכן, ממיסים את חומרי המוצא בטמפרטורת החדר. בעזרת מזרק מוסיפים תמיסה מוכנה של דיסופרופיל אזודיקרבוקסילט ב-THF טיפה במשך 15 דקות.מערבבים את התמיסה במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, השתמש במאייד סיבובי כדי להסיר את הממס בלחץ מופחת. ממיסים את המוצר הגולמי ב-1 מיליליטר של DCM.לאחר מכן, טען עמוד הבזק עם 100 גרם סיליקה בתמיסה של שניים לאחד של פנטן ואתיל אצטט. טען את המוצר הגולמי המומס על העמודה והוסף את הממס בלחץ. אסוף, זהה ושלב את השברים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.בעזרת מאייד סיבובי מאדים את הממס בלחץ מופחת כדי להשיג את המוצר הרצוי. כדי להתחיל, ממיסים 1.4 גרם של S-methylisothiourea ו-2.2 גרם של boc-anhydride בתמיסה דו-פאזית מערבבת במרץ של DCM ונתרן ביקרבונט מימי רווי. תנו לתערובת לערבב במשך 24 שעות בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, שפכו את התערובת למשפך מפריד. הפרד את השכבות וחלץ את השלב המימי שלוש פעמים עם DCM. לאחר מכן, שלב את השלבים האורגניים.יבש את השלבים האורגניים המשולבים עם נתרן גופרתי. לאחר הסרת הממס באמצעות מאייד סיבובי, ממיסים את המוצר הגולמי ב -2 מיליליטר הקסאן. טען עמוד הבזק עם 100 גרם סיליקה בתמיסה של ארבעה לאחד של הקסאן ואתיל אצטט.לאחר מכן, טען את המוצר הגולמי המומס על העמוד והוסף את הממס בלחץ. לאחר איסוף וזיהוי השברים, שלב את השברים הרצויים. בעזרת מאייד סיבובי מאדים את הממס בלחץ מופחת לקבלת 1.1 גרם Boc-S-methylisothiourea.ממיסים 250 מיליגרם של Boc-S-methylisothiourea שנאסף ב-10 מיליליטר DMF מיובש בבקבוק עם תחתית עגולה של 50 מיליליטר באטמוספירה אינרטית בטמפרטורת החדר. השתמש במזרק כדי להוסיף 440 מיקרוליטר של DIPEA. בעזרת מזרק מוסיפים 245 מיקרוליטר אנהידריד אצטי תוך כדי ערבוב.תנו לתערובת לערבב במשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, השתמש במזרק כדי להוסיף שני מיליליטר מתנול וערבב במשך 15 דקות. לאחר הסרת הממס בלחץ מופחת, באמצעות מאייד סיבובי, ממיסים את המוצר הגולמי במיליליטר אחד של DCM.טען עמוד פלאש עם 60 גרם סיליקה בתמיסה של שלושה לאחד של הקסאן ואתיל אצטט. לאחר מכן, טען את המוצר הגולמי המומס והוסף את הממס בלחץ. אסוף, זהה ושלב את השברים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.בעזרת מאייד סיבובי מאדים את הממס בלחץ מופחת לקבלת 210 מיליגרם מהמוצר הרצוי כמוצק לבן. כדי להתחיל, ממיסים כמות קטנה של הפפטיד המחזורי המוגן אורתוגונלית בנפח קטן של DMF. הוסף שתי שוות ערך ל- DIPEA.ושני מקבילים של מבשר הגואנידינילציה. לאחר מכן, תנו לתמיסה לערבב במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר השלמת התגובה, הסר את הממס.להמיס מחדש את הפפטיד המחזורי הגואנידיניל באצטיל ניטריל ולבצע טיהור HPLC חצי מכין כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, בבקבוק זכוכית קטן, הוסיפו למוצר המטוהר תמיסה מוכנה של חומצה טריפלואורואצטית, מים וטריאיזופרופילסילן. מערבבים את התערובת הזו במשך שעה בטמפרטורת החדר, ואז מתבוננים בהגנה המלאה באמצעות ESIMS.הוסף 10 מיליליטר אתר קר כקרח לצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר. בעזרת פיפטה של פסטר, הוסף את הפפטיד המוגן טיפה לאתר. צנטריפוגה את המתלה ב 5, 000 פעמים גרם למשך חמש דקות.לאחר מכן, שטפו את הגלולה באתר קר כקרח. בצנטריפוגה ב 5, 000 פעמים גרם למשך חמש דקות. חזור על הכביסה והצנטריפוגה הזו פעם נוספת.לאחר מכן, ממיסים את המוצר ב-2 מיליליטר מים בדרגת HBLC ומטהרים את המוצר באמצעות HPLC חצי מכין כמתואר בפרוטוקול הטקסט. במחקר זה מוצגת שיטה קלה לשינוי קבוצת הגואנידין בגליגינים פפטידיים. התקדמות התגובות מנוטרת באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה.עבור שאריות גדולות יותר בקבוצת הגונידין, שעתיים לרוב אינן מספיקות כדי שהתגובה תגיע להשלמתה. לפיכך, התגובה נמשכת והתרכובות מטוהרות על ידי HPLC חצי מכין. לאחר מכן מדוללת כמות קטנה עם DMSO כדי לקבל תמיסת גזע להערכה ביולוגית בבדיקת קשירת פאזה מוצקה al-ee-so-like.כל התרכובות שנותחו מראות זיקה גבוהה יחסית של תת-הסוג האינטגרנטי אלפא v בטא שלוש, וסלקטיביות גבוהה כנגד תת-הסוג האינטגרנטי אלפא חמש בטא אחת. הרעיון לשיטה זו עלה לנו לראשונה כאשר חיפשנו שיטה סטנדרטית לגואנידינילציה במהלך SPPS. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להכין מבשרי גואנידינילציה בהתאמה אישית, על מנת לשנות או לתפקד את קבוצת הגואנידין של פפטיד היעד שלך.

modification-functionalization-guanidine-group-tailor-made

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

סינתזה יעילה מוצק בשלב פפטיד של trimer BIS-peptide פונקציונליות ניצול "בטיחות לתפוס" הליך מחשוף שרף HMBA מתואר.

סינתזה שלב מוצק של פפטיד Bis פונקציונליות שימוש &quot;בטיחות תפוס&quot; מתודולוגיה

חלקיקים adenovirus מתוכננים להכיל אנלוגי טבעי חומצת אמינו azidohomoalanine או סוכר...

שינוי Chemoselective של משטחים ויראלי באמצעות כימיה לחץ Bioorthogonal

בסרטון זה ידגים שיטה מהירה, יעילה לmethacrylate פולי (אתילן גליקול), המאפשר polymerizations שרשרת וסינתזת הידרוג'ל. זה ידגים כיצד להציג את פונקציות methacrylamide דומות לפפטידים, שיטות אנליטיות נפוצות פרטים כדי להעריך את יעילות functionalization, לספק הצעות לפתרון בעיות ושינויים מתקדמים, ולהדגים טכניקות אפיון הידרוג'ל טיפוסיות.

Functionalization בסיוע מיקרוגל של פולי (אתילן גליקול) ופפטידים על השרף לשימוש בPolymerizations שרשרת וגיבוש Hydrogel

הפרוטוקול המתואר במסמך זה נועד להסביר ולקצר מספר רב של מכשולים בדרכו של המסלול המורכב המוביל לtriphosphates נוקלאוזידים שונה. כתוצאה מכך, פרוטוקול זה מאפשר גם לסינתזה של אבני הבניין הופעל אלה וזמינותם ליישומים מעשיים.

נוקלאוזידים triphosphates - מ - סינתזה ביוכימיה באפיון

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגואנידינילציה ישירה בשלב מוקדם המאפשר סינתזה כוללת מהירה של מולקולות אורגניות קטנות המכילות אמינוגואנידין. חומר ביניים סינתטי מתקדם המשמש בסינתזה של מעכב גורם קרישת דם XIa הוכן באמצעות פרוטוקול זה.

ישיר, בשלבים מוקדמים Guanidinylation פרוטוקול לסינתזה של מוצרים טבעיים Aminoguanidine המכיל קומפלקס

מוצג פרוטוקול להכנה קלה של נגזרות קינאזולין 4 מוחלפות מ-2-אמינובנזופנון, תיאוריאה ודימתיל סולפוקסיד.

הכנה קלילה של נגזרי Quinazoline 4-הוחלפו

אנו מציגים פרוטוקול לסינתזה של הידרוג'לים מתפקדים RGD כמכשירים להעברת תאים ותרופות. ההליך כולל תוספת ציקלו-אזיד אלקין-אזיד מזורזת נחושת (CuAAC) בין חומצה פוליאקרילית ששונה באלקין (PAA) ונגזרת RGD-אזיד. ההידרוג'לים נוצרים באמצעות עיבוי בסיוע מיקרוגל ונחקרים תכונותיהם הפיזיקוכימיות.

הסינתזה של RGD פונקציונלית הידרוג ככלי יישומים טיפוליים

נציג בצרות לסינתזה של N-(2-alkoxyvinyl) sulfonamides, הבאים ההמרה ל נגזרות phthalan ו פנתילאמין מוצגים בפירוט.

הכנת N-(2-alkoxyvinyl) sulfonamides N- tosyl-1,2,3-triazoles, הבאים ההמרה ל שהוחלפו Phthalans ו- Phenethylamines

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים מאת regioselective O- גליקוזילציה של ribonucleosides באמצעות הגנה זמנית של שלהם 2', 3'-diol moieties ניצול של אסתר boronic מחזורית. שיטה זו חל על מספר נוקלאוזידים לא מוגן כמו אדנוזין, guanosine, cytidine, uridine, 5-methyluridine 5-fluorouridine לתת נוקלאוזידים דו-סוכר המתאימים.

Regioselective O- גליקוזילציה של נוקלאוזידים via זמני 2', 3'-Diol הגנה על ידי אסתר Boronic לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים

הליכים ניסיוניים מייצגים לתוספת של אמין נוקלאופילים לטריקרבוניל (טרופון) ולאחר הדרומטוזיס של התסביכים המתקבלים מוצגים בפרוטרוט.

הכנת 6-האמילוציהועד 2, 4-דיין-1-הנגזרים באמצעות טריקרבוניל (טרופון) ברזל

פרוטוקול זה מתאר שיטה לייצור והערכת הפעילות האנטי-מיקרוביאלית והציטוטוקסיות של הפפטיד הקטיוני Mel4 ושל הפפטיד המדמה RK758. על ידי שילוב סינתזה כימית, ביטוי רקומביננטי ובדיקות פונקציונליות סטנדרטיות, הוא מספק תהליך עבודה יעיל לייצור ובדיקה של פפטידים וחיקוי מולקולות קטנות.

ייצור ובדיקות של פפטידים אנטימיקרוביאליים והחיקויים שלהם

למד שיטת סינתזה לפפטידים מפונקציונליים בגואנידין לכימיה פפטידית שרירית ורפואה מותאמת אישית. הפרוטוקול תואם לסינתזת פפטידים על פאזה מוצקה ומאפשר פיתוח תרופות ממוקדות לטיפול בסרטן.

שינויו Functionalization של קבוצת guanidine ידי מבשרי תפורות

גלה סרטונים נוספים