פלואורסצנטיות של קרני רנטגן (XRF)

1. הכנת חלונות הסיליקון ניטריד

1. השתמש פינצטה הפוכה כדי להרים חלון (חלונות ניטריד סיליקון יתנפץ אם ירד).
2. הנח חלון על מגלשת זכוכית, צד שטוח למעלה.
3. דבק חתיכות קטנות של סרט ויסקי לצדי החלון, ולהשתמש אלה כדי לדבוק את החלונות לתחתית צלחת התרבות.
4. לחטא את החלונות בצלחות תרבות עם קרינת UV. זה יכול להתבצע עם הגדרת crosslink אוטומטי על ארון UV-crosslinking, ואחריו הקרנת UV נוספת תחת מנורת UV במכסה המנוע זרימה למינאר במשך כ 1 שעות.

2. ציפוי התאים על חלונות הסיליקון ניטריד המעוקרים

1. החזק את המנה עם זה מוטה על זווית 45°.
2. הוסף מדיה על ידי צנרת לכיוון הצד של המנה לאט להקל על זווית ההטיה כדי לצפות את החלון עם מדיה.
3. מוסיפים תאים לצלחת התרבות, באותו אופן, ודגרה.
4. התבונן בתאים מדי פעם באמצעות מיקרוסקופ אור כדי לקבוע מתי הם מוכנים לשימוש.

3. קיבעון וייבוש של תאים

1. במכסה המנוע של זרימה למינארית, הסר את המדיה על ידי שאיפה עדינה תוך הטיית המנה כמתואר לעיל.
2. מוסיפים PBS, צינורות לכיוון הצד של המנה תוך החזקת אותו בזווית. יש להקל באיטיות על זווית ההטיה כדי לצפות את החלון ב-PBS.
3. הסר PBS עם שאיפה עדינה.
4. צנרת לכיוון הצד של המנה, והחזקתה בזווית, להוסיף 4% PFA / PBS, pH 7 כדי לכסות את התאים. שמור בתמיסה זו למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.
5. הסר את תערובת PFA / PBS, ולהיפטר כחומר מסוכן.
6. הוסף PBS, pipetting כמתואר לעיל.
7. חזור על שלבים 3.5 ו-3.6 פעמיים.
8. הסר את PBS על ידי שאיפה עדינה.
9. הוסף צינורות 20 מ"מ, 200 mM סוכרוז, pH 7.
10. הסר את צינורות / סוכרוז על ידי שאיפה עדינה.
11. חזור על שלבים 2.8 ו- 2.9 פעמיים.
12. כתם במהירות את הקצוות ואת הכניסה האחורית של החלון עם Kimwipe, ולאחר מכן להגדיר את החלון על משטח נקי, כגון מחצלת רשת גומי, להתייבש.

4. הדמיית פלואורסצנטיות של תאים

1. לאחר הדגימה יבשה, לאמת את נוכחותם של תאים על החלונות באמצעות מיקרוסקופ אור.
2. השתמש בלק כדי לאבטח את החלונות למחזיק אלומיניום המסופק על ידי קו הקורה.
3. הכנס את מחזיק האלומיניום להרכבה קינמטית, ולאחר מכן מקם אותו בעמדה בנקודת המוקד של האופטיקה במיקרוסקופ קרני הרנטגן, ובזווית של כ -45° לקרן הרנטגן של האירוע, מותקן על שלבי הננו-מיקום לדוגמה.
4. צא מאזור מכשיר המיקרוסקופ של קרני הרנטגן (בדרך כלל כלוב עשוי קירות עופרת), ופתח את התריס. נהל את השלבים הנותרים מרחוק.
5. באמצעות לוחית אזור, או מראות קירקפטריק-באאז, למקד את קרן הרנטגן המונוכרומטית (בדרך כלל 10 keV באנרגיה) עד לגודל ספוט תת מיקרון.
6. באמצעות שלבי דגימת הננו-מיקום, והצגת המיקום של קרן הרנטגן במדגם באמצעות מצלמת נצנצים מכוילת מראש במורד הזרם, לקבוע את הרוחב והגובה המתאימים של סריקת הרסטר כדי ללכוד נתונים של המדגם.
7. עם גלאי נדידת סיליקון באורך גל ב 90° לקרן האירוע, וכ -3 מ"מ או פחות מהדגימה, לאסוף ספקטרום בדיקה עם זמן התעכבות של 1-2 שניות.
8. הצגת ספקטרום הבדיקה, בחר זמן התעכבות מתאים לסריקה, כדי לספק אות לרעש מספיק עבור האלמנטים המעניינים.
9. בחר רזולוציה מתאימה לסריקה, כזו שאינה קטנה משמעותית מגודל הספוט של הקרן במדגם, ואינה גדולה יותר מתכונות העניין במדגם.
10. תכנת את הסריקה לתוך תוכנת הסריקה ואסוף את התמונה.