ביצוע כרומטוגרפיה של שכבה דקה 1D

1. לוחות TLC

1. סופחים נפוצים ל-TLC הם סיליקה ג'ל, אלומינה ותאית. לוחות TLC זמינים מסחרית עם מגוון מאפיינים. בחר צלחת TLC וחתוך אותה לגודל מתאים (כ-5 ס"מ על 5 ס"מ מספיקים לרוב היישומים). עבור לוחות TLC עם גב זכוכית, קלעו את הזכוכית באמצעות סרגל וחותך זכוכית, ואז שברו בזהירות לאורך הקו.

2. תצפית

1. ממיסים את הדגימה בממס מתאים ליצירת תמיסה של כ-1%. במידת האפשר, הממס צריך להיות לא קוטבי. ניתן להשתמש בשברי כרומטוגרפיה של עמודות ובתמיסות מדוללות אחרות ללא דילול אם המומס קיים בריכוז שבין 0.2% ל -2.0%.
2. סמן את קו הבסיס בעיפרון כ -1.0 ס"מ מתחתית הצלחת. מקם את הכתמים לפחות 1.0 ס"מ מקצה הצלחת וסמן אותם כראוי.
3. ניתן למרוח כתמים באמצעות נימי זכוכית. כדי לזהות את צלחת ה-TLC, טבלו את הנימים בתמיסה כדי לשאוב כמות קטנה של נוזלים. גע בעדינות בקצה למיקום הרצוי על צלחת TLC והסר אותו מיד.
4. לחלופין, יש למרוח כתמים עם מזרק מיקרוליטר על ידי אספקת תמיסה של כ-1 מיקרוליטר לכל יישום.
5. ניתן ליישם כתמים ברצף בכל מקום, תוך הקפדה לא להפריע לפני השטח של הסופח עם הספוטר הניחו לממס להתייבש בין היישומים.

3. בחירת ממס מתפתח

1. עדיף להשתמש בממס הכי פחות קוטבי האפשרי להפרדה טובה. ממיסים נפוצים עבור TLC כוללים הקסאן, אתיל אצטט, דיכלורומתאן ומתנול (טבלה 1).
2. דרך נוחה למצוא שלב נייד מתאים היא לזהות את לוחית ה-TLC עם דגימה. מרחו מספיק ממס ישירות על המקום ליצירת מעגל ממס בקוטר 1-2 ס"מ. סמן את היקף המעגל. עם ההדמיה ממס מתאים יראה טבעות מופרדות היטב, כאשר הטבעת החיצונית ביותר כ-50% מהמרחק מהמרכז לחזית הממס.
3. ייתכן שיהיה צורך להתאים את הקוטביות של השלב הנייד על ידי בחירת שני ממיסים הניתנים לערבוב ובדיקתם בפרופורציות משתנות. דוגמאות לתערובות נפוצות הן הקסנים עם אתיל אצטט ודיכלורומתאן עם מתנול.

4. פיתוח

1. הנח את צלחת ה-TLC המנומרת בתא מתפתח המכיל את הממס המתפתח המתאים. קו הממס צריך להיות מתחת לקו הבסיס המסומן על לוחית ה-TLC.
2. החדר המתפתח יכול להיות צנצנת עם מכסה, או כוס מכוסה בנייר אלומיניום או סרט פלסטיק. השתמש במיכל הקטן ביותר הזמין שיכיל את צלחת TLC.
3. אל תאפשר לממס להגיע לקצה העליון של הצלחת. כאשר חזית הממס (הגבול שבו מסתיים החלק הרטוב של הסופג) נמצאת 5-10 מ"מ מהחלק העליון של הצלחת, הסר את לוחית ה-TLC מהתא המתפתח וסמן את חזית הממס בעיפרון לפני שהממס מתייבש.

5. ויזואליזציה

1. ניתן לדמיין כתמים צבעוניים באופן מיידי ולסמן בעיפרון. לעתים קרובות, כתמים אינם נראים ולכן יש לדמיין אותם בשיטה אחרת.
2. לעתים קרובות, סופח TLC מכיל מחוון פלורסנט. ניתן לדמיין כתמים באמצעות מנורת אולטרה סגול ידנית (UV). תרכובות המרוות את הקרינה יופיעו ככתמים כהים כאשר הלוח מוקרן באור UV גל קצר (254 ננומטר). תרכובות פלואורסצנטיות ייצרו כתמים בהירים כאשר הן מוקרנות באור UV באורך גל מתאים. סמן את מרכז כל נקודה בעיפרון.
3. ניתן לדמיין כתמים גם על ידי מריחת מגיב או כתם הדמיה על לוחית ה-TLC. ניתן ליישם את המגיב ההדמיה על ידי טבילת הצלחת לתוך המגיב, או על ידי ניגוב הצלחת בכדור צמר גפן רווי במגיב לא קורוזיבי.
4. תמיסה של 20% של חומצה פוספומוליבדית באתנול שימושית להדמיה של רוב התרכובות האורגניות. הכתמים מופיעים בעת חימום הצלחת בעזרת אקדח חום או בתנור.
5. ריאגנטים אחרים עשויים לשמש להדמיה של סוגים ספציפיים של תרכובות. לדוגמה, מגיב נינהידרין משמש להדמיית חומצות אמינו, ו-2,4-דיניטרופנילהידרזין לאלדהידים וקטונים.

6. ניתוח

1. גורם הפיגור (R_f) הוא היחס בין המרחק שתרכובת עוברת במעלה לוח TLC למרחק שהממס עובר. ניתן לקבוע זאת על ידי מדידת המרחק מקו הבסיס למרכז הנקודה וחלוקת הערך במרחק מקו הבסיס לחזית הממס.
   
2. R_f של תרכובת אופיינית לתכונות הפיזיקליות שלה ותלויה בגורמים כמו טמפרטורה, גודל מדגם, עובי ופעילות הסופח, טמפרטורה וגודל המדגם.
3. כדי לאשר כי לא ידוע זהה לתרכובת ידועה, יש לזהות תקן על אותה לוחית TLC. לחומרים זהים יהיה אותו מאפיין R_f.