דיסקציה של בולה השמיעה של עכברים אחרי לידה: בידוד של עצמות באוזן התיכונה ניתוח היסטולוגית

המטרה הכוללת של הליך הדיסקציה היא לבודד את הבולה השמיעתית והקפסולה, ולאחר מכן את עצמות השמיעה הבודדות מעכברים לאחר לידה לניתוחים היסטולוגיים שלמים שונים. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה של הפצע, כגון מנגנונים של מורפוגנזה לקויה, התעצמות אנדוכונדרלית או חילוף חומרים מינרלי לקוי. שיטה זו מבוססת על ידע מעמיק בפרטים אנטומיים.

בדרך כלל, אנשים חדשים בעכבר כמערכת ביולוגית עשויים להיאבק, מכיוון שהידע שלהם על האוזן התיכונה האנושית עשוי שלא להיות ישים למקבילו של העכבר. מי שתדגים את ההליך תהיה איאקו סאקאמוטו, טכנאית במעבדה שלי. התחל בהנחת הבולה השמיעתית והקפסולה עם עצם הגולגולת שמסביב לתוך צלחת דגימה המכילה pH 7.4 מלוח חוצץ פוספט בטמפרטורת החדר.

תחת מיקרוסקופ ניתוח דו-עיני, זהה את עצמות הגולגולת המקיפות את קפסולת השמיעה כפי שמוצג כאן. השתמש בסט אחד של מלקחיים כדי לאחוז בגולגולת שמסביב, ובסט שני כדי למשוך את הבסיס והעצם העורפית. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי למשוך בעדינות את העצמות הבין-קודקודיות והקודקודיות הרחק מהקפסולה ולהסיר כשהן משוחררות לחלוטין.

לאחר מכן, משוך את הקשקש הרחק מהבולה והקפסולה והקניט בעדינות את העצם והרקמות הרכות. לאחר מכן, אחזו באוזן החיצונית והפכו את הדגימה כדי לחשוף את הצד המדיאלי. לאחר מכן, סובב את הדגימה ב-180 מעלות, אחוז בקפסולה ומשוך את הרקמות הרכות שנותרו.

הפסגה הגבית נראית כעת. בזווית זו נראים בבירור עצבי הפנים והוסטיבולו-שבלול בתעלת השמע הפנימית, הפוסה התת-קשתית והתעלה החצי עגולה הקדמית. כאשר הפסגה הגבית מוטה בזווית לכיוון החלק התחתון של צלחת הדיסקציה, הבולה השמיעתית נראית בבירור.

אם התכשיר מוטה מעט, אז ה-malleus נראה בתוך הבולה. התחל בשימוש במלקחיים כדי לשבור את תעלת השמע החיצונית מעל ה-malleus ולרוחב ה-sulcus tympanicus. צור עובדה שנייה לפני הראשונה.

לאחר מכן הסר את חתיכת תעלת השמע החיצונית כך שקרום התוף יהיה גלוי. לאחר מכן, הסר חלק מקרום התוף ועצם התוף ליד ה-processus brevis הן בדופן הגחון והן בדופן האחורית. כעת יש לחשוף את שריר ה-malleus, incus, stapes ו-tensor tympani.

הרם את המלאוס וחתך את שריר הטנזור טימפאני עם הקצה המשופע של מחט 27. שימו לב שהמנובריום המליאלי נצמד היטב לקרום התוף, כפי שניתן לראות אצל יונקים אחרים. עקור את ה-malleus מהאינקוס במפרק העצמות על ידי שבירת התהליך הקדמי של ה-malleus בגוניאל.

בודד את ה-malleus מהבולה השמיעתית באמצעות מלקחיים. הסר את החלק העיקרי של הבולה השמיעתית כדי לחשוף את האינקוס והסטפס. לאחר מכן השתמש בקצה המשופע של מחט בגודל 27 כדי לחתוך את הרצועה האחורית של האינקוס בפסגה הקצרה.

בודד את האינקוס באמצעות מלקחיים. חתוך את העורק הסטפדיה ליד הסטפס עם הקצה המשופע של מחט בגודל 27. סובב את הדגימה כך שהחלון העגול ימוקם בתחתית.

לאחר מכן הכנס מחט תפירה לנקב האובטורטור של הסטפס והרם את הסטפס. לאחר הסרת הסטפס, פתח החלון הסגלגל אמור להיות גלוי בבירור. השתמש במחט 27 כדי לדחוף את הסטפס ממחט התפירה.

כדי להתחיל בהטמעת רקמות, השתמש תחילה במספריים כדי לחתוך את התהליך הסטיליפורמי בקצה הקדמי של הבולה. ה-malleus והפסגה הגבית נראים דרך החלק החתוך. טבלו את הבולה והקפסולה ב-1-2% פרפורמלדהיד ב-PBS.

אם אוויר נלכד בבולה, הסר אותו באמצעות מחט ומזרק. השאירו את הבולה והקפסולה בקיבוע בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה על מסובב צינור. למחרת, שטפו את הבולה והקפסולה במהירות ב-PBS.

לאחר מכן טבלו מיד בתרכובת הטמעת קריו נוזלית בארבע מעלות צלזיוס. מקובל שנוצרות בועות אוויר בתרכובת ההטמעה הקריו בגובה האוזן התיכונה והחיצונית. הסר את בועת האוויר מהאוזן התיכונה באמצעות שאיבה על ידי מחט.

השתמש באותה טכניקה עבור בועת האוויר באוזן החיצונית. לאחר הסרת כל בועות האוויר, כוון את הרקמה בהתאם לסוג החלקים שיש לקבל. לאחר מכן ניתן להטמיע את הרקמה בבלוקים קפואים לפני החיתוך.

תמונה זו מציגה את H ו-E מכתימים קטע פרפין אורכי של מאלאוס נטול אבנית, המסומן באות M, ואת הבולה השמיעתית והקפסולה מעכבר P14. קרום התוף מסומן באות TM. תמונה זו מציגה תיוג עצם סידן של קטע אורך של מאלאוס קפוא ללא אבדן, המסומן על ידי האות M, ואת הבולה השמיעתית של עכבר P21. אותות ירוקים של סידן חושפים היווצרות עצם חדשה במלאוס, בולה וכמוסה.

לאחר שליטה בטכניקה, ניתן לבודד את הבולה השמיעתית ואת הקפסולה תוך עשר דקות אם ההליך מבוצע כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב את האוריינטציות האנטומיות של עצמות השמיעה והבולה בעכבר, שתוארה בטקסט הראשי.