Name: מערכי ננו-אשכול ליגנד בתוך bilayer שומנים נתמך (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 34 s
Description: למד ליצור מערכי ננו-אשכולות חלבון ב-bilayer שומנים נתמך לחקר הפעלת תאי T והידבקות תאים. שיטה זו תואמת מיקרוסקופיה מתקדמת כמו TIRF ו-RICM וניתנת לשחזור בקלות במעבדות ביופיזיקה סטנדרטיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים לורן Limozin, פייר דילארד אסטריד וואהל להמשך דיונים פוריים על יישומי הסלולר. אנו מודים גם פרדריק Bedu ממתקן cleanroom PLANETE על עזרתו עם תצפיות SEM. עבודה זו מומנה בחלקה על ידי המועצה האירופית למחקר באמצעות מס מענק 307,104 FP / 2007-2013 / ERC.

1. ניקוי זכוכית כיסוי-מגלשות צ&#39;יימברס תצפית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסדר את כיסוי שקופיות זכוכית על מגש רב-שקופית עשוי חומר אינרטי כמו polytetrafluoroethylene (PTFE). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את המגש עם מגלשות ובית נבחרי התצפית בתמיסה פעילה שטח (כל מוצר מומלץ לניקוי cuvettes קוורץ מתאים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש באמבטיה קולית, אולטרה-sonicate בפתרון הפעיל השטח עבור 30 דקות בטמפרטורת חדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 5 פעמים עם מים ultrapure (18.2 MΩ.cm, 0.059 מיקרו-שניות / ס&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אולטרה-sonicate בתמיסה פעילה שטח עבור 30 דקות בטמפרטורת חדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף 10 פעמים עם מי ultrapure. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 1.5 ו 1.6 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות במים בטמפרטורת החדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס) במשך עד שבוע. </li></ol> 2. ייצור של נקודות ה- Nano חלבון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתצהיר של חרוזים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Deposit ההשעיה של חרוזים סיליקה (נ / v 2%, 70 μL) טיפה אחר טיפה על כיסוי-שקופית (24 x 24 מ&quot;מ, עובי 170 מיקרומטר) שנערך נטייה של 15 מעלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנו ההשעיה להפיץ כ 1 דקות תוך הפיכת הזכוכית ידי 90 ° כל 15 s. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לנוזלים להתאדות בתנאי סביבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות בכוס נקייה או קאמרית PTFE בכל תנאי הסביבה של עד 2 ימים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתצהיר של אלומיניום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את השקופיות (מוכן בסעיף 2.1) בתוך תדר רדיו וציוד מקרטע (RF) magnetron 8, על שולחן מסתובב במרחק של כ 105 מ&quot;מ מתוך אלומיניום (99%): סיליקון (1%) יעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משאבה למטה בתא בתצהיר 2.6 x 10 -4 Pa באמצעות משאבה טורבו-מולקולרית. שלב זה חשוב להסרת זיהומי גזים אפשריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצג אווירת ארגון טהורה (5N, 99.999%) עם שטף של 10 SCCM בלחץ של 0.8 Pa (6.6 mTorr). <br/&gt; הערה: שטף הארגון הנכנס נשלט על ידי בקר זרימה המונית ולחץ התהליך מנוטר באמצעות מד לחץ. תזרים גז הארגון הוא רציף נשלט על ידי איזון בין הכניסה שסתומי פתיחת לשקע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעילו את הגנרטור כוח RF. הערה: הנה, מגוון טיפוסי של 400-600 וואט חשמל בתדר רדיו ב 13.56 תדירות MHz שימש. מחולל RF משמש עם רשת התאמת במצב צימוד פלזמה קיבולי. הכוח בא לידי ביטוי מנוטר ממוזער באמצעות הסתגלות הרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי הפלזמה הוא התייצב, גמגום עבור 2 דקות שמירה על התריס הסגור כדי להסיר זיהומים אפשריים מפני השטח של היעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את התריס ולאפשר המקרטעת להימשך 60 דקות להפקיד אלומיניום בשקופית הזכוכית בעובי של 200 ננומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את זרימת הארגון, לסגור את שסתום השער לבודד את משאבת turbomolecular מהאולם בתצהיר לפרוק את החדר עם n הנקיitrogen להשיג את הלחץ בחדר. שחזר את השקופיות מצופה אלומיניום. אחסן עד חודש בקופסא זכוכית או PTFE נקיה הרמטית בתנאי סביבה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיקוע של organosilane <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופית מצופה אלומיניום מוכן בשלב 2.2.6 במים ultrapure בטמפרטורת החדר-sonicate אולטרה עבור 30 s באמבטיה קולי (50 W, 50/60 הרץ, בין 20 לבין 30 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.5 הפיקדון מ&quot;ל של (3-aminopropyl) -triethoxysilane (APTES) בתחתית ייבוש. זהירות: APTES הוא organosilane, אשר מתאדה בקלות והוא רעיל. APTES יש לטפל רק תחת זרם-ברדס ועם כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את שקופיות הזכוכית (שהוכנו 2.3.1) על רשת קרמיקת מקום בתוך הייבוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבור את ייבוש משאבת קרום ולרוץ לעבר כוח מרבי עבור 30 דקות כדי ליצור ואקום נמוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את השסתום של הייבוש לכבות את המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחמם את הייבושכ 50 מעלות צלזיוס למשך 1 שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הייבוש ולאסוף את השקופיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה נוספת ייבוש נקי לאחסון של עד 48 שעות בטמפרטורת החדר (20 עד 30 מעלות צלזיוס). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתצהיר של שכבת החלבון הראשונה - אלבומין בסרום שור שכותרתו עם ביוטין (BSA ביוטין) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח באחד השקפים המוכנים בסעיף 2.3 על תמיכת PTFE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיקדון 1 מ&quot;ל של 25 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​BSA ביוטין המומסים בופר פוספט (PBS). השאירו למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר (20 עד 30 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף 10 פעמים עם PBS. חנות המדגם עד 24 שעות ב 4 ° C הרחק ממקור אור. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת מסכת אלומיניום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה השקופיות בתמיסה של NaOH ב PBS (שהוכן על ידי dropwise תוספת של 1 M NaOH לכ 100 מ&quot;ל PBS להשיג pH≈12) במשך הלילה בטמפרטורת החדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס). זְהִירוּת. NaOH הוא מאכל, יש לטפל באמצעות כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לִשְׁטוֹף10 פעמים במים ultrapure. </li></ol></li></ol> 3. הפקדת bilayer השומנים נתמכים (SLB) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניקוי השוקת לנגמיואיר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המים המתחמים PTFE של השוקת לנגמיואיר באמצעות משאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקי במגבת המתכלים שאינם ארוגים נטולת מוך ספוגה בכלורופורם. זְהִירוּת. כלורופורם הוא רעיל ויש לטפל באזור מאוורר היטב, עם מסכה (או תחת זרם-ברדס) ועם כפפות מתאימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4 פעמים נקיות עם מים פושרים ultrapure (40 עד 50 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6 פעמים נקיות לפחות עם מי ultrapure קרים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתצהיר של שכבת השומנים הראשונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מגשים PTFE במארז PTFE של שוקת לנגמיואיר ואז למלא אותו עם מים ultrapure. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנת השליטה במנגנון לנגמיואיר להגדיר את הלחץ נמדד 0 MN / m. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת כוס gastight / מתכת מזרק להפקיד 30 μL של פתרון השומנים 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​(1, 2-dioleoyl- SN -glycero-3-phosphocholine (dOPC) כלורופורם) על פני המים. כלורופורם מתאדה ואת מולקולות השומנים ספונטניות יוצרות בשכבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנה המלאה לדחוס בשכבת השומנים על ידי סגירת מחסום PTFE עד הלחץ הרצוי (27 MN / m עבור dOPC) הוא הגיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנה המלאה לטבול את שקופית הזכוכית מוכנה בסעיף 2.5.2 לתוך מתחם PTFE באמצעות מהדק ממונע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את השקופית, בתוך מלחציים, בניצב ממשק מים-אוויר. השתמש בתוכנה המלאה להעלות את זה לאט (15 מ&quot;מ / דקה) דרך הממשק, תוך שמירה על לחץ קבוע על 27 MN / m. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום בסביבה יבשה לשימוש מיידי או לאחסון של עד 24 שעות בטמפרטורת חדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתצהיר של שכבת השומנים השנייה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על לחץ משטח בשוקת לנגמיואיר על הערך הרצוי של 27 MN / m. דחיסה באמצעותתוכנת שליטה על המנגנון לנגמיואיר ו / או להוסיף כמות קטנה של שומנים בדם כדי להשיג את הלחץ הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את שקופיות זכוכית נושאת בשכבת השומנים, הכינה בסעיף 3.2.6, אופקי על פני המים. ודא כי כל שקופית צפה מעל מגש PTFE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דחוף את מגלשות הכוס, שקופית אחת בכל פעם, לתוך מגש PTFE המקביל שלה באמצעות פינצטה PTFE או מתכת כזה שהם שקועים בתוך המים. הימנע הטיית השקופיות תוך דחיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש בפינצטה PTFE או המתכת להעביר את מגשים PTFE המכיל את השקופיות לתוך crystallizer מלא מי ultrapure מוודאים כי המגלשות אינן חשופות לאוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש בפינצטה PTFE או מתכת להעביר, תוך כדי עבודה מתחת למים, שקופית זכוכית מצופה bilayer לתוך תא התצפית. הערה: תא התצפית ממוקם מתחת למים בתוך crystallizer. תא התצפית מחוייט מורכב מטבעת PTFE עם אטם גומיתרמילי פלדה ד, אשר ניתן להרכיב מתחת למים כדי להפוך תא מים חזק אשר עשוי המשטח התחתון משקופית זכוכית מצופה בעבר עם bilayer השומנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגרו את תא בעודה ממשיכה לעבוד תחת המים ולהבטיח כי כ 1 מ&quot;ל של מים לכוד בתוך החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את התא התאסף מחוץ למים. ודא שזה מים חזקים ודליפה בחינם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את 1 מ&quot;ל של ההווה מים ultrapure בתא תצפית עם PBS ידי הוספה והסרה 500 μL של פעמים 10 PBS. ודא כי החדר הוא לא נטול נוזלי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צעד חסימת SLB <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הציגו 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​של אלבומין בסרום שור (BSA) בחדר תצפית המכיל את השקופית מוכן בסעיף 3.3.6 דגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את bilayer ידי הסרת והוספת 500 μL של פעמים 10 PBS. את bilayer יכול להישמר 24 שעות ב 4 ° C. </li></ol></li></ol> 4. Functionalization עם הליגנדים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף פלורסנט או לא פלורסנט neutravidin (NAV, גרסה deglycosylated של avidin אינה טעונה ב- pH 7) בשעה 2 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​לתוך תא המכיל את השקופית מוכן בסעיף 3.4.2 עבור 30 דקות בטמפרטורת החדר (בין 20 ו 30 מעלות C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף באמצעות הוספה והסרה 500 μL של פעמים 10 PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף biotinylated אנטי CD3 ב 2 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​לתא המכיל את השקופית מוכן בסעיף 3.4.2. עבור functionalization הכפול של SLB והנקודות, להוסיף FC-ICAM1 התג שלו ב 5 מיקרוגרם / מיליליטר (כאן, את bilayer עשוי dOPC + 1% של חומצת nitrilotriacetic (נ.ת.ע) ליפידים). השאירו למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר (בין 20 ו 30 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף באמצעות הוספה והסרה 500 μL של PBS 10 פעמים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את PBS עם המדיום הסלולרי (PBS + 0.1% BSA) על ידי הוספה והסרה 500 μL של המדיום הסלולרי 10 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו 200 μL של המדיום הסלולרי של chamber עם שקופיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החדר עבור 10 דקות ב 37 ° C לפני הוספת תאים. </li></ol> 5. הפקדת Cell (ראה התייחסות 7 לפרטים נוספים) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להפקיד 400 μL של ההשעיה תא לתא. דגירת התאים למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את התא עם 2% של paraformaldehyde (PFA) עבור 15 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. החלף את PFA עם PBS על ידי הסרת חוזרות והוספה של 500 μL של PBS. </li></ol> תצפית 6. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Proteo-lipidic-דפוס ננו ובזרימה SLB <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מיקרוסקופ פלואורסצנטי לתמונת דפוס החלבון במצב EPI-קרינה באמצעות גל תאורה מתאים (639 ננומטר) וקוביות מסננות (למשל כאן, EX TBP 483 + 564 + 642; BS TFT 506 + 582 + 659; EM TBP 526 + 601 688). הערה: עוצמת האות ניתן לכמת לאמוד את כמות החלבון בתוך ומחוץ הנקודה. השתמש גל תאורה מתאים (330 ננומטר) ו- Fקוביית ilter לתמונה bilayer (BP 365/12, 395 FT, LP 397), אשר מופיע בהיר עם חורים כהים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש הלבנת תמונה רציפה (CPB) טכניקה 13, 15 כדי למדוד את הדיפוזיה של ליפידים נותב ב bilayer. תצפית זו רצויה עשתה רק לאחר הפקדת SLB. הערה: על מנת לכמת את הדיפוזיה, שני פרמטרים נמדדים במהלך תהליך CPB: בפעם ההלבנה הספציפית של הצבע (המתוח) ואת אורך הריקבון של הפרופיל פלורסנט של ההילה נוצרה מסביב לאזור המולבן (tauD). הראשון מתקבל על ידי התוויית ההתפתחות בזמן של עוצמת הקרינה במרכז השדה המואר במהלך תהליך CPB. השני מתקבל על ידי התוויית הפרופיל בעצמה בקצה האזור המואר (בממוצע לכל 12 קווים 5 תמונות לאחר יציב הוא הגיע). העקומות מצויד להשיג מתוח tauD. הדיפוזיה ניתנת על ידי taא.ד. 2 / מתוח (D = <img alt="משוואה" src="/files/ftp_upload/55060/55060eq1.jpg" /> ). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAlberts%2C+B+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22">Molecular Biology of the Cell</a>. , 4th edition, Garland Science. New York. (2002).</li>
<li>Varma, R., Campi, G., Yokosuka, T., Saito, T., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+Cell+Receptor-Proximal+Signals+Are+Sustained+in+Peripheral+Microclusters+and+Terminated+in+the+Central+Supramolecular+Activation+Cluster%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">T Cell Receptor-Proximal Signals Are Sustained in Peripheral Microclusters and Terminated in the Central Supramolecular Activation Cluster.</a> Immunity. 25 (1), 117-127 (2006).</li>
<li>Kaizuka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+for+segregating+T+cell+receptor+and+adhesion+molecules+during+immunological+synapse+formation+in+Jurkat+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Mechanisms for segregating T cell receptor and adhesion molecules during immunological synapse formation in Jurkat T cells.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104 (51), 20296-20301 (2007).</li>
<li>Dustin, M. L., Groves, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+signaling+clusters+in+the+immune+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Receptor signaling clusters in the immune synapse.</a> Annu Rev Biophys. 41, 543-556 (2012).</li>
<li>Huppa, J. B., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell-antigen+recognition+and+the+immunological+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">T-cell-antigen recognition and the immunological synapse.</a> Nat Rev Immunol. 3 (12), 973-983 (2003).</li>
<li>Grakoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Immunological+Synapse%3A+A+Molecular+Machine+Controlling+T+Cell+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The Immunological Synapse: A Molecular Machine Controlling T Cell Activation.</a> Science. 285, 221-228 (1999).</li>
<li>Dillard, P., Varma, R., Sengupta, K., Limozin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligand-mediated+friction+determines+morphodynamics+of+spreading+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Ligand-mediated friction determines morphodynamics of spreading T cells.</a> Biophys J. 107 (11), 2629-2638 (2014).</li>
<li>Lu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+viral+antigen+processing+generates+peptide-specific+MHC+class+I+cell-surface+clusters%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endogenous viral antigen processing generates peptide-specific MHC class I cell-surface clusters.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (38), 15407-15412 (2012).</li>
<li>Pi, F., Dillard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-Tunable+Organic+Nanodot+Arrays%3A+A+Versatile+Platform+for+Manipulating+and+Imaging+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Size-Tunable Organic Nanodot Arrays: A Versatile Platform for Manipulating and Imaging Cells.</a> Nano Lett. 15 (8), 5178-5184 (2015).</li>
<li>Deeg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+activation+is+determined+by+the+number+of+presented+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">T cell activation is determined by the number of presented antigens.</a> Nano Lett. 13 (11), 5619-5626 (2013).</li>
<li>Delcassian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+ligand+spacing+influences+receptor+triggering+in+T+cells+and+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Nanoscale ligand spacing influences receptor triggering in T cells and NK cells.</a> Nano Lett. 13 (11), 5608-5614 (2013).</li>
<li>Matic, J., Deeg, J., Scheffold, A., Goldstein, I., Spatz, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+tuning+and+efficient+T+cell+activation+with+stimulatory+aCD3+nanoarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Fine tuning and efficient T cell activation with stimulatory aCD3 nanoarrays.</a> Nano Lett. 13 (11), 5090-5097 (2013).</li>
<li>Dillard, P., Pi, F., Lellouch, A. C., Limozin, L., Sengupta, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nano-clustering+of+ligands+on+surrogate+antigen+presenting+cells+modulates+T+cell+membrane+adhesion+and+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Nano-clustering of ligands on surrogate antigen presenting cells modulates T cell membrane adhesion and organization.</a> Integr Biol. 8 (3), 287-301 (2016).</li>
<li>Pi, F., Dillard, P., Limozin, L., Charrier, A., Sengupta, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanometric+protein-patch+arrays+on+glass+and+polydimethylsiloxane+for+cell+adhesion+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+lett%22%5BJournal%5D)">Nanometric protein-patch arrays on glass and polydimethylsiloxane for cell adhesion studies.</a> Nano lett. 13 (7), 3372-3378 (2013).</li>
<li>Fenz, S. F., Merkel, R., Sengupta, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+and+intermembrane+distance%3A+case+study+of+avidin+and+E-cadherin+mediated+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Diffusion and intermembrane distance: case study of avidin and E-cadherin mediated adhesion.</a> Langmuir. 25 (2), 1074-1085 (2009).</li>
<li>Sengupta, K., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/la026146o">Mimicking tissue surfaces by supported membrane coupled ultra-thin layer of hyaluronic acid.</a> Langmuir. 19 (5), 1775-1781 (2003).</li>
<li>Taylor, Z. R., Keay, J. C., Sanchez, E. S., Johnson, M. B., Schmidtke, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independently+controlling+protein+dot+size+and+spacing+in+particle+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Independently controlling protein dot size and spacing in particle lithography.</a> Langmuir. 28 (25), 9656-9663 (2012).</li>
<li>Massou, S., et al. <a target="_blank" href="http://adsabs.harvard.edu/abs/2009ApSS..256..395M">Large scale ordered topographical and chemical nano-features from anodic alumina templates.</a> Appl. Surf Sci. 256 (2), 395-398 (2009).</li>
<li>Selhuber-Unkel, C., Lopez-Garcia, M., Kessler, H., Spatz, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperativity+in+adhesion+cluster+formation+during+initial+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Cooperativity in adhesion cluster formation during initial cell adhesion.</a> Biophys J. 95 (11), 5424-5431 (2008).</li>
<li>Arnold, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cell+polarization+and+migration+by+a+gradient+of+nanoscale+variations+in+adhesive+ligand+spacing%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Induction of cell polarization and migration by a gradient of nanoscale variations in adhesive ligand spacing.</a> Nano Lett. 8 (7), 2063-2069 (2008).</li>
<li>Cavalcanti-Adam, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+spreading+and+focal+adhesion+dynamics+are+regulated+by+spacing+of+integrin+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Cell spreading and focal adhesion dynamics are regulated by spacing of integrin ligands.</a> Biophys J. 92 (8), 2964-2974 (2007).</li>
<li>Schvartzman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanolithographic+Control+of+the+Spatial+Organization+of+Cellular+Adhesion+Receptors+at+the+Single-Molecule+Level%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Nanolithographic Control of the Spatial Organization of Cellular Adhesion Receptors at the Single-Molecule Level.</a> Nano Lett. 11 (3), 1306-1312 (2011).</li>
<li>Mossman, K., Groves, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterned+supported+membranes+as+tools+for+quantitative+studies+of+the+immunological+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.Soc.Rev%22%5BJournal%5D)">Micropatterned supported membranes as tools for quantitative studies of the immunological synapse.</a> Chem.Soc.Rev. 36 (1), 46-54 (2007).</li>
<li>Furlan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphatase+CD45+both+positively+and+negatively+regulates+T+cell+receptor+phosphorylation+in+reconstituted+membrane+protein+clusters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Phosphatase CD45 both positively and negatively regulates T cell receptor phosphorylation in reconstituted membrane protein clusters.</a> J Biol Chem. 289 (41), 28514-28525 (2014).</li>
<li>Hsu, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligand+mobility+modulates+immunological+synapse+formation+and+T+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Ligand mobility modulates immunological synapse formation and T cell activation.</a> PloS One. 7 (2), e32398(2012).</li>
<li>Yu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+integrin+binding+to+Arg-Gly-Asp+peptide+activates+actin+polymerization+and+contractile+movement+that+stimulates+outward+translocation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Early integrin binding to Arg-Gly-Asp peptide activates actin polymerization and contractile movement that stimulates outward translocation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (51), 20585-20590 (2011).</li>
</ol>

החוקרים אין לחשוף.

השלבים הקריטיים בתוך הפרוטוקול שתואר לעיל קשורים להיווצרות של נקודות ה- Nano חלבון או האחורי-ומילוי השטח סביב הנקודות ידי bilayer שומנים נתמך. השלב הקריטי הראשון ביחס ונקודות ננו חלבון הוא הכנת החרוז-המסכה. הניקוי של הכיסוי שקופית הוא קריטי. השקופיות צורכות לנקות או בתמיסת ניקוי כי מומלצת לניקוי cuvettes קוורץ, או עם פלזמת חמצן. טכניקות ניקוי אחרים כמו טבילה באתנול או טיפול-פרופנול ISO אינם מעבדים את הזכוכית מספיק הידרופילי ולכן אינם תומכים היווצרות monolayer חרוז גדול כיסוי. במקב...

<html> הידבקות התא מתבצעת באמצעות מולקולות הדבקה תא מתמחה (מצלמות), חלבונים המצויים על גבי קרום התא המסוגלים מחייב עמיתו שלהם על מטריצה ​​חוץ-תאית או על תא אחר. על תאים דבקים, המולקולות הדבקות ביותר כולל integrin ו cadherin בכל המקום, נמצאות בצורת אשכולות 1. האינטראקציה של לימפוציטים מסוג T (תאי T) עם תאי מציגי אנטיגן (נגמ&quot;שים) מספקת המחשה בולטת עוד יותר לחשיבות של אשכולות קולטן נוצרו על הממשק בין שני התאים - לעתים קרובות נקרא סינפסה אימונולוגית. לאחר יצירת הקשר הראשוני עם קולטנים בתא APC, T (TCRs) על פני השטח של האשכולות בקנה מידת T תא טופס מיקרון המשמשים איתות פלטפורמות 2, 3, 4, והם בסופו של דבר מרוכז כדי ליצור אשכול מולקולרי מרכזי גדול (cSMAC )נַעֲרָה = &quot;Xref&quot;&gt; 5, 6, 7. לאחרונה, ניתן היה לראות כי בצד APC, הליגנדים של TCR גם מקובצים 8. בהקשר של אינטראקצית T תא-APC, פריסת מערכות היברידיות, שבו APC היא חיקתה ידי משטח מלאכותי פונקציונלי עם חלבונים רלוונטיים, יש מאוד קדם את ההבנה שלנו של הממשק הסינפטי 2, 3, 4, 5, 6, 7 . בהקשר זה, היא רלוונטית מאוד לעצב משטחים כוזבים APC כי ללכוד אחד או יותר בהיבטים של תא המטרה. לדוגמה, אם הליגנדים הם מורכבים על bilayers השומנים נתמך, הם יכולים לפזר את המטוס של bilayer, לחקות את המצב על פני השטח APC ובאותו זמן לאפשר היווצרות של6 cSMAC, 7. בדומה לכך, באשכולות על APC כבר חיקו ידי יצירת אי של הליגנדים בים של פולימרים 9, 10, 11, 12, 13, 14. עם זאת, יש שתי תכונות אלה עד כה לא שולבו. כאן אנו מתארים שיטה חדשנית ליצירת נקודות ה- Nano של אנטי CD3 (נוגדן שפוגע במתחם TCR) מוקף bilayer השומנים עם שומנים לשדר. את bilayer מופקד באמצעות לנגמיואיר-Blodgett / לנגמיואיר-שייפר טכניקה 7, 15, 16 ו אם רוצים, אפשר פונקציונליות עם חלבון מסוים - למשל, ליגנד של integrin תא T (שנקרא ICAM1). בנוסף, cou נקודות חלבון אנטי CD3ld להיות מוחלף באחר נוגדן או CAM. בעוד בחרנו את החלבונים לשימוש עתידי כפלטפורמה למחקרים דבקים של תאי T, את האסטרטגיה המפורטת כאן ניתן להתאים לכל חלבון ואפילו DNA.

<table><tbody><tr><td>כיסויי זכוכית</td><td>מסייעים, קרל הכט KG&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תא תצפית</td> תרכיז פעילי שטח אלקליין <td>תוצרת</td><td></td><td></td>בית</tr><tr><td>(Hellmanex)</td><td>Hella Analytics</td><td>9-307-011-4-507</td><td></td></tr><tr><td>אולטרה-סוניקטור</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Desiccator</td><td>Labbox</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Crystallizer&nbsp;</td><td>שוט</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נויטראוודין</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>84607</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>מים MQ&nbsp;</td><td>ELGA, Veolia צרפת</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חרוזי סיליקה</td><td>Corpuscular Inc</td><td>147114-10</td><td></td></tr><tr><td>APTES</td><td>Sigma-aldrich</td><td>A3648</td><td></td></tr><tr><td>BSA-ביוטין</td><td>Sigma-aldrich</td><td>A8549</td><td></td></tr><tr><td>DOPC</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>850375C</td><td></td></tr><tr><td>Dansyl-PE</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>810330C</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>650471</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אטום לגז&nbsp;</td><td>דומיניק דשר , צרפת</td><td>74453</td><td></td></tr><tr><td>איזון סרטים</td><td>NIMA</td><td>מיקרוסקופ בינוני</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Zeiss, גרמניה</td> מערכת <td></td><td>TIRF-III</td></tr><tr><td>יעד אלומיניום&nbsp;</td><td>Kurt J. Lesker Compagny, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מגנטרון בתדר רדיו מקרטע Syst&egrave; אני&nbsp;</td><td>כלי SMC 600 שונה על ידי ALCATEL , צרפת</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מערכי ננו-אשכול ליגנד בתוך bilayer שומנים נתמך

Ligand Nano-cluster Arrays in a Supported Lipid Bilayer

כיום ישן עניין רב ביצירת מערכי הורה איי חלבון דבק בים של משטח פסיבציה ללימודי תא ביולוגיים. בשנים האחרונות, זה הפך להיות ברור יותר ויותר כי תאי חיים מגיבים, לא רק לאופי ביוכימיים של המולקולות שהוצגו בפניהם, אלא גם דרך מולקולות אלה מוצגות. יצירת מיקרו-דפוסי חלבון ולכן עכשיו תקן במעבדות הביולוגיה רבים; דפוסים-ננו הם גם יותר נגישים. עם זאת, בהקשר של אינטראקציות תא-תא, יש צורך הדפוס לא רק חלבונים אלא גם bilayers שומנים. דפוסים proteo-lipidic כפול כזה עד כה לא היה נגיש. אנו מציעים טכניקה קלילה ליצור נקודות ה- Nano חלבון נתמכות על זכוכית ולהציע שיטה לבצע מילוי חוזר של החלל הבין-הנקודה עם bilayer שומנים נתמך (SLB). מ-הלבנת תמונה של נותב ניאון שומנים כלולים SLB, אנו מדגימים כי bilayer מציג ניכר-PLנזילות Ane. Functionalizing נקודות החלבון עם קבוצות פלורסנט מאפשרת לנו לדמות אותם וכדי להראות שהם מסודרים סריג משושה רגיל. גודל הנקודה הטיפוסי הוא כ 800 ננומטר לבין המרווח הפגין כאן הוא 2 מיקרון. מצעים אלו צפויים לשמש פלטפורמות שימושיות כמו הידבקות תא, גירה ולימודים-חישת mechano.

תמונות הקרינה נותחו על מנת למדוד את המרווח וגודל הנקודות. מרווח אופייני נמצא 1900 ± 80 ננומטר ו-גודל נקודה טיפוסי היה 600 ± 100 ננומטר (1G איור). המרווח נקבע על ידי גודל של חרוזים המשמשים את המסכה. The-גודל הנקודה מוגדר על ידי גודל החרוז כמו גם תנאים בתצהיר. SLB מופקד באופן ייחודי סביב הנקודות חלבון ולא עליהם (איור 2), עם השלמה מושלמת בין חורים הנראים ערוץ הדמיה SLB והנקודות ראיתי בערוץ הדמיה NAV. ניתוח של נתוני הל...

אנו מציגים פרוטוקול functionalize זכוכית עם טלאי חלבון ננומטריים המוקפים bilayer שומנים נוזל. מצעים אלו עולים בקנה אחד עם מיקרוסקופיה אופטית מתקדמת וצפויים להוות פלטפורמה ללימודי הדבקה ו נדידת תאים.

Currently there is considerable interest in creating ordered arrays of adhesive protein islands in a sea of passivated surface for cell biological ...

המטרה הכללית של טכניקה זו היא לייצר מערך של ננו-צבירי חלבונים בשכבת ליפידים כפולה נתמכת, אשר תואמת לטכניקות רגישות של מיקרוסקופיית פנים עבור יישומים בביולוגיה של התא. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום הביופיזיקה של התא, ובמיוחד, כיצד ננו-צבירה של ליגנדים משפיעה על הפעלת תאי T ועל היצמדותם. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא ניתנת לשחזור בקלות במעבדה ביופיזית סטנדרטית והיא תואמת לטכניקות מתקדמות של מיקרוסקופיה רגישה לפני השטח, כגון TIRF ו-RICM.אף ששיטה זו תוכננה לספק תובנות בתחום האימונולוגיה, ניתן ליישמה על סוגי תאים אחרים עם יישומים פוטנציאליים בביולוגיה של התא, אונקולוגיה והנדסת רקמות. כדי להתחיל בהליך זה, נקו את כיסויים הזכוכית ותאי התצפית כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב. לאחר מכן, טפטפו 70 µL של תרחיף חרסיקי סיליקה בריכוז 2% על גבי כיסוי זכוכית המוטה בזווית של 15 מעלות.הפכו את הזכוכית ב-90 מעלות כל 15 שניות למשך דקה אחת בזמן שהתרחופים מתייבשים. קריטי ליצור שכבה אחת צפופה של חרוזים ולהימנע מהיווצרות של שכבות מרובות וצבירי שמן. זו הסיבה שעל הריכוז והנפח של תמיסת החרוזים, כמו גם ההידרופיליות של השקופית, לעבור אופטימיזציה.לאחר שהנוזל התאדה, הנח את השקופית בתוך מכשיר למשקיע מגנטרון בתדר רדיו (radio frequency magnatron sputtering device) על שולחן מסתובב הממוקם במרחק של 10

ligand-nano-cluster-arrays-in-a-supported-lipid-bilayer

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

סרטון זה מתאר את הטכניקה של חקר הרכבת חלבון ספטין על מיקרוספרות מצופות בדו-שכבות ליפידים. טכניקה זו מסייעת בהבנת המכלולים תלויי העקמומיות של חלבון על משטחים מעוקלים.

בדיקה דו-שכבתית ליפידית נתמכת כדורית: טכניקה לצפייה במכלול ספטין על מיקרוספרות

bilayers שומנים נתמך וחלקיקי קרום טבעיים הם מערכות נוחים שיכול להתקרב למאפיינים של קרום תא ולהיות משולבות במגוון רחב של אסטרטגיות אנליטיות. כאן אנו מדגימים שיטה להכנת microarrays המורכב של SiO 2 חרוזים נתמכים שומנים מצופים bilayer, שלפוחית ​​פוספוליפידים או חלקיקי קרום טבעיים.

היווצרות של microarrays Biomembrane עם שיטת הרכבה מבוססת מגב

אנו מדווחים על יישום חכם של ננו-צינורות פחמן לייצוב קינטי של חלקיקי שומנים המכילים ננו-מבנים בהרכבה עצמית בליבותיהם. הכנת חלקיקי שומנים דורשת ריכוזים נמוכים למדי של ננו-צינורות פחמן המאפשרים את השימוש בהם ביישומים ביו-רפואיים כגון מתן תרופות.

הכנה קלילה של פנימית עצמית התאספו חלקיקים ליפידים מיוצב על ידי פחמן

אנו מדגימים מערכת היווצרות bilayer שומנים שאפשר לשמור, יבילה. קרום bilayer השומנים יכול להיווצר בתוך שעה 1 עם למעלה מ -80% אחוזי הצלחה כאשר מבשר קרום קפוא מובא טמפרטורת הסביבה. מערכת זו תפחית תהליכי מייגע ומומחיות הקשורים תעלות יונים.

גיבוש ליפידים אוטומטי bilayer ממברנה באמצעות סרט polydimethylsiloxane רזה

חלבונים רבים מבצעים את תפקידם כאשר הם מחוברים למשטחי הממברנה. ניתן לדמות בעקיפין את הקישור של חלבונים חיצוניים על ממברנות ננו-דיסק על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה. אנו מראים כי הערימה האופיינית (רולו) של ננו-דיסקים הנגרמת על ידי הכתם השלילי נתרן פוספוטונגסטט נמנעת על ידי קשירה של חלבון חיצוני.

השיטה לחזות ולנתח חלבוני אינטראקצית ממברנה ידי הילוכים מיקרוסקופים אלקטרונים

פרוטוקול זה מתאר תהליך לייצור רשתות ננו-צינוריות ליפידים באמצעות תנועתיות קינזין גולשת בשילוב עם שלפוחיות ליפידים חד-שכבתיות ענקיות.

ייצור רשתות ננו-צינוריות ליפידים מרובות רכיבים באמצעות בדיקת תנועתיות Kinesin Gliding

אנו מדווחים על פרוטוקול לייצור קרום שומנים היברידי בממשק המים/אוויר על ידי סימום ביטל השימנים עם נחושת (II) 2,9,16,23-טטרה-אטרה-butyl-29H,31H-phthalocyanine (CuPc) מולקולות. קרום שומנים היברידית וכתוצאה מכך יש מבנה כריך שומנים/CuPc/שומנים. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם גם על היווצרות של ננו-חומרים פונקציונליים אחרים.

הרכבה עצמית של קרום שומנים היברידי מסוממים עם מולקולות אורגניות הידרופוביות בממשק מים/אוויר

פרוטוקול זה מתאר היווצרות של תאים מחקים שלפוחיות חד-שומנים ורב-שומנים, דו-שכבתי שומנים נתמכים, ושכבות שומנים מושעות. מודלים במבחנה אלה ניתן להתאים לשלב מגוון רחב של סוגי שומנים וניתן להשתמש בהם כדי לחקור מולקולות שונות ואינטראקציות macromolecule.

הרכבה של חיקוי תאים מודלים נתמכים ומושעים של בולי עץ לחקר אינטראקציות מולקולריות

שומנים חד-שכבתיים שימשו כבסיס ליצירת גבישי חלבון דו-ממדיים (דו-ממדיים) למחקרים מבניים במשך עשרות שנים. הם יציבים בממשק מי האוויר ויכולים לשמש כחומר תומך דק להדמיית אלקטרונים. כאן אנו מציגים את הצעדים המוכחים על הכנת monolayers השומנים למחקרים ביולוגיים.

הכנה לדוגמה באמצעות שיטת חד שכבתית שומנים למחקרים קריסטלוגרפיים אלקטרונים

כאן פותחה מערכת דו-שכבתית של שומנים הנתמכת על ידי ננו-ברים כדי לספק קרום סינתטי עם עקמומיות מוגדרת המאפשרת אפיון של חלבונים בעלי יכולת חישת עקמומיות במבחנה.

מערכת דו-שכבתית של שומנים נתמכת ננו-בר לחקר חלבונים קולטי עקמומיות ממברנה במבחנה

כאן, מתואר פרוטוקול ליצירת תבניות חלבון מווסתות אור והפיכות עם דיוק מרחבי-זמני גבוה בקרומי שומנים מלאכותיים. השיטה מורכבת מפוטואקטיבציה מקומית של החלבון iLID (דימר משופר המושרה באור) המשותק על קרומי המודל אשר, תחת אור כחול, נקשר לחלבון השותף שלו ננו (SspB מסוג פראי).

תבניות דינמיות של חלבונים המושרים על ידי אור בממברנות המודל

למד ליצור מערכי ננו-אשכולות חלבון ב-bilayer שומנים נתמך לחקר הפעלת תאי T והידבקות תאים. שיטה זו תואמת מיקרוסקופיה מתקדמת כמו TIRF ו-RICM וניתנת לשחזור בקלות במעבדות ביופיזיקה סטנדרטיות.

מערכי ננו-אשכול ליגנד בתוך bilayer שומנים נתמך

גלה סרטונים נוספים