Name: מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד S. pneumoniae, H. אינפלואנזה, K. pneumoniae, P. aeruginosa או A. baumannii (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: למד שיטת זיהום תוך-סימפוני לא ניתוחית להקמת דלקת ריאות חזקה במכרסמים immunocompetent. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות טיפולים אנטיבקטריאליים במודל רלוונטי של דלקת ריאות קשה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

JH מבקש להכיר ולהודות מנטור, חבר ומנהל לשעבר ואלרי ברי עבור הראשון מלמד אותנו מודל זה; וגארי Woodnutt, שלימד אותנו את היסודות של השראה מחויבותנו בתחום PK / PD אנטיבקטריאלי. כל המחברים מבקשים להודות דוד פיין לתמיכה והערכתו המדע שלנו. ברצוננו להכיר לשעבר שלנו עמיתים מיקרוביולוגיה vivo שתרמו הגוף של נתונים שנוצרו באמצעות שיטות אלה, במיוחד פיט DeMarsh, רוב שטראוב, רוני פייג &#39;Nerissa סיימון. לבסוף, תודתנו ללכת העמיתים מיקרוביולוגיה במבחנה שלנו על עזר, במיוחד עבור מתן כל המיקרופונים אנו מבקשים (לין McCloskey, ג&#39;וש המערבי ושרון מינ &#39;); ועבור צוות מיקרוביולוגיה קלינית שלנו אשר מספק ייעוץ ותמיכה מומחה (לינדה מילר, ניקול Scangarella-עומאן ודבורה באטלר).

<ol><li>Eagle, H., Fleischman, R., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous%27+vs.+%27discontinuous%27+therapy+with+penicillin%3A+the+effect+of+the+interval+between+injections+on+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Continuous' vs. 'discontinuous' therapy with penicillin: the effect of the interval between injections on therapeutic efficacy.</a> N Engl J Med. 248 (12), 481-488 (1953).</li>
<li>Eagle, H., Fleischman, R., Musselman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bactericidal+action+of+penicillin+in+vivo%3A+the+participation+of+the+host%2C+and+the+slow+recovery+of+the+surviving+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">The bactericidal action of penicillin in vivo: the participation of the host, and the slow recovery of the surviving organisms.</a> Ann Intern Med. 33 (3), 544-571 (1950).</li>
<li>Vogelman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+antimicrobial+pharmacokinetic+parameters+with+therapeutic+efficacy+in+an+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Correlation of antimicrobial pharmacokinetic parameters with therapeutic efficacy in an animal model.</a> J Infect Dis. 158 (4), 831-847 (1988).</li>
<li>Craig, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic%2Fpharmacodynamic+parameters%3A+rationale+for+antibacterial+dosing+of+mice+and+men%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters: rationale for antibacterial dosing of mice and men.</a> Clin Infect Dis. 26 (1), 1-12 (1998).</li>
<li>Ambrose, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics-pharmacodynamics+of+antimicrobial+therapy%3A+it%27s+not+just+for+mice+anymore%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics-pharmacodynamics of antimicrobial therapy: it's not just for mice anymore.</a> Clin Infect Dis. 44 (1), 79-86 (2007).</li>
<li>Ambrose, P. G., Bhavnani, S. M., Owens, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pharmacodynamics+of+quinolones%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Clinical pharmacodynamics of quinolones.</a> Infect Dis Clin North Am. 17 (3), 529-543 (2003).</li>
<li>Andes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+and+pharmacodynamic+properties+of+antimicrobials+in+the+therapy+of+respiratory+tract+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Inf+Dis%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic and pharmacodynamic properties of antimicrobials in the therapy of respiratory tract infections.</a> Curr Opin Inf Dis. 14 (2), 165-172 (2001).</li>
<li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of human pneumonia.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (3), L387-L398 (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Antibiotics+in+laboratory+medicine%2C+5th+edition.+Chapter+15%3A+Evaluation+of+antimicrobials+in+experimental+animal+infections%22">Antibiotics in laboratory medicine, 5th edition. Chapter 15: Evaluation of antimicrobials in experimental animal infections</a>. Lorian, V. , Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. (2005).</li>
<li>McConnell, M. J., Actis, L., Pachón, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acinetobacter+baumannii%3A+human+infections%2C+factors+contributing+to+pathogenesis+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models.</a> FEMS Microbiol Rev. 37 (2), 130-155 (2013).</li>
<li>Nuermberger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+pneumococcal+pneumonia+and+their+applicability+to+the+study+of+tissue-directed+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Murine models of pneumococcal pneumonia and their applicability to the study of tissue-directed antimicrobials.</a> Pharmacotherapy. 25 (12 Pt 2), 134S-139S (2005).</li>
<li>Mehrad, B., Standiford, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+animal+models+in+the+study+of+inflammatory+mediators+of+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Use of animal models in the study of inflammatory mediators of pneumonia.</a> ILAR J. 40 (4), 167-174 (1999).</li>
<li>De Simone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+genetic+background+influences+the+response+to+the+opportunistic+Pseudomonas+aeruginosa+infection+altering+cell-mediated+immunity+and+bacterial+replication%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication.</a> PLoS ONE. 9 (9), (2014).</li>
<li>Smith, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+non-surgical+method+of+intrabronchial+instillation+for+the+establishment+of+respiratory+infections+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A simple non-surgical method of intrabronchial instillation for the establishment of respiratory infections in the rat.</a> Lab Anim. 25 (1), 46-49 (1991).</li>
<li>Berry, V., Ferreira-Cornwell, M. C., Singley, C., Woodnutt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+murine+infections+caused+by+H.+influenzae+and+H.+parainfluenzae%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Development of experimental murine infections caused by H. influenzae and H. parainfluenzae.</a> Clin Microbiol Infect. 7 (S1), 322(2001).</li>
<li>Miles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+cyclohexyl-amides+as+potent+antibacterials+targeting+bacterial+type+IIA+topoisomerases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel cyclohexyl-amides as potent antibacterials targeting bacterial type IIA topoisomerases.</a> Bioorg Med Chem Lett. 21 (24), 7483-7488 (2011).</li>
<li>Miles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+tricyclics+%28e.g.+GSK945237%29+as+potent+inhibitors+of+bacterial+type+IIA+topoisomerases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel tricyclics (e.g. GSK945237) as potent inhibitors of bacterial type IIA topoisomerases.</a> Bioorg Med Chem Lett. 26 (10), 2464-2469 (2016).</li>
<li>Hoover, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics%2Fpharmacodynamics+of+peptide+deformylase+inhibitor+GSK1322322+against+Streptococcus+pneumoniae%2C+Haemophilus+influenzae%2C+and+Staphylococcus+aureus+in+rodent+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics/pharmacodynamics of peptide deformylase inhibitor GSK1322322 against Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, and Staphylococcus aureus in rodent models of infection.</a> Antimicrob Agents Chemother. 60 (1), 180-189 (2016).</li>
<li>Berry, V., Hoover, J., Singley, C., Woodnutt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+bacteriological+efficacy+of+pharmacokinetically+enhanced+amoxicillin-clavulanate+against+Streptococcus+pneumoniae+with+elevated+amoxicillin+MICs+and+Haemophilus+influenzae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Comparative bacteriological efficacy of pharmacokinetically enhanced amoxicillin-clavulanate against Streptococcus pneumoniae with elevated amoxicillin MICs and Haemophilus influenzae.</a> Antimicrob Agents Chemother. 49 (3), 908-915 (2005).</li>
<li>Czock, D., Markert, C., Hartman, B., Keller, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+antimicrobial+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Metab+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of antimicrobial drugs.</a> Expert Opin Drug Metab Toxicol. 5 (5), 475-487 (2009).</li>
<li>Drusano, G. L., Fregeau, C., Liu, W., Brown, D. L., Louie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+burden+on+granulocyte+clearance+of+bacteria+in+a+mouse+thigh+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Impact of burden on granulocyte clearance of bacteria in a mouse thigh infection model.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54 (10), 4368-4372 (2010).</li>
<li>Miles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+hydroxyl+tricyclics+%28e.g.+GSK966587%29+as+potent+inhibitors+of+bacterial+type+IIA+topoisomerases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel hydroxyl tricyclics (e.g. GSK966587) as potent inhibitors of bacterial type IIA topoisomerases.</a> Bioorg Med Chem Lett. 23 (19), 5437-5441 (2013).</li>
<li>Hunt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleuromutilin+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs+Future%22%5BJournal%5D)">Pleuromutilin antibiotics.</a> Drugs Future. 25 (11), 1163-1168 (2000).</li>
<li>Jin, Q., et al. Novel LpxC inhibitors with broad-spectrum gram-negative activity. Proceedings of the 44th National Organic Chemistry Symposium.. College Park, MD, , Abstract T-31 (2015).</li>
<li>Singley, C., Page, R., Hoover, J., Elefante, P., DeMarsh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+a+LRS+inhibitor+GSK2251052+against+Enterobacteriaceae+isolates+using+a+computer-controlled+infusion+system+to+recreate+human+PK+profiles+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Efficacy of a LRS inhibitor GSK2251052 against Enterobacteriaceae isolates using a computer-controlled infusion system to recreate human PK profiles in rats.</a> Clin Microbiol Infect. 17 (S4), S429-S430 (2011).</li>
<li>Berry, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+in+vivo+activity+of+gemifloxacin+in+a+rat+model+of+respiratory+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Comparative in vivo activity of gemifloxacin in a rat model of respiratory tract infection.</a> J Antimicrob Chemother. 45 (S1), 79-85 (2000).</li>
<li>Tsuji, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S-649266%2C+a+Novel+Siderophore+Cephalosporin%3A+Efficacy+against+Klebsiella+pneumoniae+producing+NDM-1+or+KPC+in+rat+lung+infection+model+with+recreated+humanized+exposure+profile+of+2+gram+dose+with+1+hour+and+3+hours+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">S-649266, a Novel Siderophore Cephalosporin: Efficacy against Klebsiella pneumoniae producing NDM-1 or KPC in rat lung infection model with recreated humanized exposure profile of 2 gram dose with 1 hour and 3 hours infusion.</a> Open Forum Infect Dis. 1 (S1), S106-S107 (2014).</li>
<li>Tsuji, M., et al. Use of Iron Depleted Mueller Hinton Broth (IDMHB) for microdilution testing of S-649266, a novel siderophore cephalosporin. 26th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Amsterdam, Netherlands, , Abstract P0808 (2016).</li>
<li>Singley, C., Hoover, J., DeMarsh, P. J., Elefante, P., Zalacain, M. Efficacy of PDF Inhibitor GSK1322322 Against Abscess Infections Caused by MRSA Using a Computer-Controlled Infusion System to Recreate Human PK Profiles in Rats. Proceedings of the 60th Annual Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Boston, MA, , Abstract F1-2114 (2010).</li>
<li>Hoover, J., Mininger, C., Rittenhouse, S. GSK2251052, a novel LeuRS inhibitor, is effective against multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa in a mouse pneumonia model. Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. San Francisco, CA, , Abstract B-1308 (2012).</li>
<li>Hoover, J., Mininger, C., Novick, S., Rittenhouse, S. Efficacy of GSK2140944 against Streptococcus pneumoniae in a non-neutropenic mouse lung infection model. Proceedings of the 53rd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Denver, CO, , Abstract A-014 (2013).</li>
<li>Hoover, J. L., et al. Selection of a lung infection model to predict efficacy in community-acquired pneumonia (CAP) caused by S. pneumoniae (SP). Proceedings of the 47th Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Chicago, Illinois, , Abstract A-17 (2007).</li>
<li>Drusano, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saturability+of+granulocyte+kill+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+murine+model+of+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Saturability of granulocyte kill of Pseudomonas aeruginosa in a murine model of pneumonia.</a> Antimicrob Agents Chemother. 55 (6), 2693-2695 (2011).</li>
<li>Peric, M., Browne, F. A., Jacobs, M. R., Applebaum, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+nine+oral+agents+against+gram-positive+and+gram-negative+bacteria+encountered+in+community-acquired+infections%3A+use+of+pharmacokinetic%2Fpharmacodynamic+breakpoints+in+the+comparative+assessment+of+beta-lactam+and+macrolide+antimicrobial+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Ther%22%5BJournal%5D)">Activity of nine oral agents against gram-positive and gram-negative bacteria encountered in community-acquired infections: use of pharmacokinetic/pharmacodynamic breakpoints in the comparative assessment of beta-lactam and macrolide antimicrobial agents.</a> Clin Ther. 25 (1), 169-177 (2003).</li>
<li>Calbo, E., Garau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+to+antimicrobial+therapy+of+community-acquired+respiratory+tract+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Application of pharmacokinetics and pharmacodynamics to antimicrobial therapy of community-acquired respiratory tract infections.</a> Respiration. 72 (6), 561-571 (2005).</li>
<li>Bulik, C. C., et al. Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2140944 against Staphylococcus aureus and Streptococcus pneumoniae in a murine-thigh infection model. Proceedings of the 54th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Washington, DC, , Abstract A-680 (2014).</li>
<li>Bulik, C. C., et al. Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2251052 against gram-negative bacilli in a murine-thigh infection model. Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. San Francisco, CA, , Abstract A-1270 (2012).</li>
<li>Andes, D. R., et al. Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2251052 against gram-negative bacilli using data from a neutropenic murine-pneumonia infection model. Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. San Francisco, CA, , Abstract A-1271 (2012).</li>
</ol>

המחברים כל משולמים לעובדי GlaxoSmithKline תרופות עצמו מניות בחברה.

להצלחה אופטימלית בשעתוק מודל זיהום זה, ההצעות הנוספות הבאות צריכות להיחשב. ארסיות של בידודים חדשים יכולה להיות מוגברת על ידי passaging 2 - 3 פעמים ב vivo לפני הניצול במחקר. מניות קפוא חיידקים צריכות תמיד להיות מוכנות מהמקור עיקרי in vivo מקור -derived עם קטעים מעטים ככל האפשר מן המקור, ו refreezing או שימוש חוזר של מניות מופשרות הוא מיואש. שימוש מבודדים קליני האחרון התאושש מחול עם דלקת ריאות, ו / או הכנת תרבויות בצמיחה בשלב יומן יכול גם לעזור לשפר את הקמת הזיהום. דילול פי חמישה לתוך אגר (למשל 2 השעיה מלוחה מיליליטר הוסיפה 8 אגרו מיליליטר) יכול לשמש במקום עשרה לקפל להגדיל את הבידוד חיידקי, ואת נפח הבידוד יכול להיות מותאם על פי הגודל של החיה (למשל 200 μL / בעלי חיים בדרך כלל מחוסן לתוך 250 חולדות גרם). לפני הוספת השעית החיידקים המלוחה לתוךאגר (כלומר שלב 2.3), צפיפות החיידקים ניתן לחזות או מוערך על ידי בדיקה ויזואלית, סטנדרטים מקפרלנד או מדידות צפיפות אופטיות. זה עוזר להכיר את מאפייני צמיחה במבחנה לכל לבודד לפני ביצוע בניסויי vivo. עקביות בצמיחה וטיפול מאפשרת הערכה המדויקת ביותר של צפיפות חיידקים לכל לבודד נתון. שיטות מיקרוביולוגית תקן שונות מאלה שתוארו, כגון תקשורת אלטרנטיבית ורקמות homogenizers, עשויות לשמש מתאים להכנת inocula ואת ספירת חיידקי רקמות נגועות. מומלץ מאוד להכין או להמיס את אגר יום לפני הניסוי ולאחסן אותו לילה באמבט מים נפרד להגדיר עד 50 מעלות צלזיוס. זה יפשט את התהליך ולעזור להישמר מפני אגר להיות חם מדי בזמן הזיהום. טמפרטורה של 41 - 42 מעלות צלזיוס משיגה איזון טוב בין maintaiנינג אגר במצב נוזלי מבלי להיות חם מדי להישרדות חיידקים לטווח קצר. כחלופה ניתן אגר מזין, אגר אצילי שימש בהצלחה בניסויים מסוימים. צינור אחד הבידוד אגר הוא בדרך כלל מספיק עבור ניסוי כולו (והוא מומלץ), אבל צינורות מרובים יכולים להיות מוכנים להדביק מספר רב של בעלי חיים (למשל יותר מ -60) או כאשר התהליך הדבקה לוקח יותר 30 - 45 דק &#39;אם צינורות בידוד דרושים מספר, מוסיף את השעית חיידקים המלוחה על צינור אחד של אגר כפי שהוא נדרש. הפעולה זו מפחיתה את הסיכון כי הישרדות חיידקים ו / או כושר תושפע בחשיפה ממושכת טמפרטורה גבוהה לפני החיסון. יצוין כי צינורות בידוד מרובים באמצעות עשויים גם לדרוש הליכים אקראיים בעלי חיים נוספים. במידת האפשר, להדביק את כל החיות מאותו הכנה הבידוד. מומלץ להתאים את גודל ניסויים לרמה הנוכחית של מיומנות עם technique. מדען מיומן יכול לצנרר לחסן חיה בתוך פחות מ -30 שניות לחסן עד 5 - 6 חיות לכל אצווה (כלומר עם מזרק אחד מלא של בידוד אגר). לאלו לימוד הטכניקה, המהירות חשובה כמו אגרתי תתחיל לחזק; עם זאת, מיקום מדויק של הבידוד חשוב יותר. להתחיל עם 1 או 2 חיות לכל תצווה, ולהגדיל את הטכניקה הופכת יותר מוכרת. החיות להמשיך לנשום במהלך אינטובציה; וכך, חלון הזמן עבור חיסון תלוי כמה מהר את החיה מתאוששת מן isoflurane, אשר צריך להיות כ 2 - 3 דקות. בעלי חיים המעוררים בתהליך ניתנים מחדש מורדמים ניסו בשנית, אבל זה לא מומלץ לעשות זאת שוב ושוב. חיסון מוצלח על הניסיון הראשון צפוי כמעט 100% של בעלי חיים פעם מושגת מיומנת. הערה שזה קל יותר ללמוד את הטכניקה באמצעות החולדות ראשונות; עכברים הם יותר עדין קטן מדיls נוטה יותר סתימה עם אגר הקרושה אם לא מניפולציות במהירות. מזרקים טרום התחממות, צינורות מלוחים כמו גם שמירה על מכשיר אינטובציה על משטח חם (לא חם), כגון כרית חימום על הגדרה נמוכה, יכול לעזור למנוע התמצקות של אגר. כאשר לומדים את הטכניקה, זה גם מועיל לתרגל מיקום נכון של הבידוד באמצעות צבע כהה (כגון מתילן כחול מרוכז) במקום השעית החיידקים אגרו. בצע את ההליך כמתואר, אבל להרדימו מיד לאחר חיסון של צבע (שאינו מאפשר את החיה להתאושש בין הרדמה המתת חסד). לנתח כדי לקבוע היכן לצבוע הושם, ולהתאים טכניקה בהתאם. המדד העיקרי במודל זה הוא CFU מריאות נגועות. הישרדות היא לא אינדיקטור טוב של נטל בקטריאלי אינו נקודת הסיום מומלץ. עבור מחקרי יעילות, ה- N הציע הוא 5 - 6 חיות לכל קבוצה כמו זה predicteד כדי לאתר ≥1 יומן 10 הבדלים CFU בין קבוצות עם כוח% 90 לפחות. ניתן בעקבות בעלי חיים יכולים להידבק בקבוצות כך חבריהם לכלוב להישאר ביחד, או תהליך אקראי אמיתי. שימו לב שאם קבוצות מוקצות על ידי כלוב, הקבוצות צריכות להיות נגועות ב רצף אקראי עם פקדי צמיחת סוף המחקר הנגועים אחרון (כדי לאשר הישרדות חיידקים / כושר לא היה מושפע משך הזמן החשוף טמפרטורה גבוהה באמבט מים). אין שיטות צנזורת נתונים צריכות להיות הכרחיות, ואף אחד המומלצים למעט סילוק המיידי של כל חיה כי כבר ברור mis-מחוסן בתחילת המחקר (לפני תחילת כל טיפול). בעלי חיים מומתים לפני תום המחקר צריכים להיות שנדגמו ותוצאות נכללות בנתונים להגדיר אלא סיבה טובה הדרה זוהתה באופן פרוספקטיבי (כלומר אירוע שאינו קשור זיהום או טיפול). שריד התרופה עלולה AFFect כמה דוגמאות והוא מהווה שיקול חשוב בכל דגמי זיהום in vivo. אם תרכובת ניתנת לעתים קרובות, בסמוך למועד של המתת חסד או יש זמן מחצית חיים ארוך, זה יכול להיות נוכח homogenate רקמות בריכוז גבוה מספיק כדי להמשיך להרוג חיידקים vivo לשעבר במהלך תהליך ספירה בקטריאלי (דילול ציפוי של הדגימות או על הצלחות אגרו במהלך דגירת הלילה). כדי למנוע זאת, פחם פעיל ו / או תוסף אשר מפרק את המולקולה הפעילה מבלי לפגוע תאי חיידקיים ניתן להוסיף המדגם לפני המגון. שיטות אחרות כוללות centrifuging הדגימות כדי להסיר את רוב המתחם הפעיל (שאמור להישאר supernatant) והעסיקו דילול שונה ציפוי מזימות כדי לדלל את המתחם הפעיל מספיק לריכוז שאינו מעכב. כפי שמעידה דוגמאות שניתן לראות בתרשים 2, מודל זה בהצלחה induces דלקות ריאות במכרסמים עם מגוון רחב של אורגניזמים כולל אלה שאינם גדלים גם במודלים אחרים (אינפלואנזה H. למשל). זיהומים אלה הם עקביים לשחזור, להקטין את הסבירות כי ניסויים יהיו צורך לחזור בשל כשל מודל ו / או ביצועים ירודים עם לבודד נתון. למרות החיות הן עם מערכת חיסון תקינות, הם אינם מסוגלים לפתור את הזיהום במהירות, אם בכלל. זה מאפשר גמישות רבה יותר אורך המחקר, כפי מבודד רבים לשמור על זיהום קיימא דרך לפחות 96 שעות ללא צורך בזריקות חוזרות ונשנות לשמור נויטרופניה. היתרון הפוטנציאלי של הלימוד יעיל אנטיבקטריאלי בחיות immunocompetent כבר ציין בעבר 20, 21, ויש ראיות לכך, עבור תרכובות מסוימות (למשל oxazolidinones), נתוני מכרסמים שאינם נויטרופני יכולים יותר לחזות במדויק במטרות חשיפה אנושיות בהשוואה לאלו נויטרופני שניתנה 5. השירות רב תכליתי של tהוא מודל מודגם איורים 3 ו -4 ובלוחות 1 ו 2. מחקרים אלה הם חלק מאוסף גדול של נתונים שהתפרסמו פורסם שנוצרה עם המודל הזה כדי לתמוך במאמצים אופטימיזציה להוביל 16, 17, 22-24, להשוואה והאישור של מינון אדם מוצע משטר 19, 25-29 ו לאפיון PK / PD 18, 30-32 .While המודל הזה הוא בתחילה מורכב יותר לנהל בהשוואה לשיטת משאיפת אף, ישנם יתרונות רבים כפי שתואר לעיל. בעזרת תרגול שימוש שיגרתי, הטכניקות צריכות להיות פשוטות לביצוע. ראוי לציין בחלק מהמחקרים כי הנטל חיידקי בתחילת המחקר היה נמוך מזה ממוקד בדרך כלל במודלים זיהום ריאה אחרות. הדבר נובע במידה רבה על הדילול הנדרש לתוך אגרתי ואת נפח האתגר הקטן, במיוחד אצל עכברים. עם זאת, ראוי גם לצייןהתפתחות חיידקים כי נתפסה בכל המקרים גם כאשר הנטל הראשוני היה נמוך יחסית. את עומס חיידקי בסיס היעד הוא 6 עד 6.5 יומן 10 ריאות CFU / (6.8 עד 7.3 יומן 10 CFU / g של רקמה בעכברי סמך משקל ריאות ממוצעות) אשר תואמת את הצפיפויות מוערכות בבני אדם עם דלקת ריאות חמורות 33. נטל בסיסי גבוה יותר ניתן להשיג על ידי התמקדות יותר את הבידוד חיידקי או על ידי וכתוצאה מכך התעכבה תחילת הממשל המתחם כדי לאפשר התפתחות חיידקים נוספים; עם זאת, להגדיל את העומס אתגר יותר מדי יכול להוביל למחלות קשות וחריף באופן חריג (כלומר מוות בתוך פחות מ -24 שעות) כי הוא עקשן לכל הטיפולים אנטיבקטריאלי קשר הרגישות. למרות הבידוד מושם בתחילה מועדף לתוך הריאה השמאלית של החיה, הזיהום מתפשט בדרך כלל ברחבי בשתי הריאות. מחלת ריאות מתקדמת, הפצת החיידקים לאיברים אחרים, ותחלואה סופית היא לעתים קרובות observאד עם ס pneumoniae, ק pneumoniae ו פ aeruginosa. מעניין, זיהומים עם אינפלואנזה ח ו baumannii א הם בדרך כלל יותר מאופקים, ורק לעתים רחוקות לגרום למוות בבית inocula החיידקים שנקבע. תוצאות יעילות המתקבלות במודל זה יש בקורלציה גם עם פרופילים רגישים במבחנה כמו גם מטרות PD PK / מוגדרות. צמצום הוצאה לנפש ניטלת חיידקים הם נצפו באופן שיגרתי עבור מבודד הנחשב רגיש הסוכן נבדק, בעוד אלה תערוכה העמידה הנחשב ללא שינוי או התפתחות חיידקים מעל הבסיס 16, 17, 19, 24-29. בניסויים שנערכו בחיות מעבדה הערכת שני quinolones וכן macrolide באמצעות מודל זה 32 הראו כי היעד PK / PD הנדרשים 1-log 10 הפחתת ס pneumoniae בהשוואה לנקודת ההתחלה בקורלציה עם יעד שנקבע עכברים נויטרופני, וחשוב יותר, עם מטרות קליניות pneum חיידקי נרכש בקהילה6 onia, 7, 34, 35. Gepotidacin, אנטיביוטיקה המנגנון החדשני, נוסתה נגד מספר ס pneumoniae ונזקק יעד דומה PK / PD הפחתה 1-log 10 במודל דלקת ריאות זה 31 כפי שדרשה הפחתה 1-log 10 במודל הירך נויטרופני 36 כאשר חדירת ריאות נלקחה בחשבון (נתונים על קובץ). באופן דומה, PK / המטרות PD שנקבעו עכברי GSK2251052 נגד פ aeruginosa תאמו עבור קיפאון, 1- ו -2-log 10 הפחתות CFU בין מודל ריאה זה 30 ואת מודל זיהום נויטרופני ירך כאשר חדירת ריאות נחשבות 37, 38 . מתאם עם מודל דלקת ריאות נויטרופני באמצעות חיסון אף היה עני; עם זאת, GSK2251052 לא לייצר יותר מאשר תגובה סטטית שלימוד 38. זה ניתן לייחס בידוד החיידקים הגבוה, אשר היה 8 יומן 10 CFU / עכבר לעומת 6 יומן <sub&gt; 10 CFU / עכבר אינטובציה נויטרופני הירך 37 ו intratracheal 30 דגמים. אוסף של נתונים כגון זה הוא קריטי עבור בהשוואות, שכן היא מאפשרת השוואה ישירה עם מודלים קיימים קורלציה עם נתונים קליניים על מנת להעריך את יכולת הניבוי של התרגום. עוד שימוש נרחב של מודל דלקת ריאות אינטובציה intratracheal יספק נתונים נוספים על אלו סוגים של ניתוחים. ישנן מספר מגבלות של מודל דלקת ריאות עם מערכת חיסון תקינה זו. ראשית, הוא לא מתאים היטב כדי להעריך הופעתה של התנגדות ספונטנית בגלל בידוד החיידקים הגבוה הנדרש בדרך כלל לתוצאות מחקרים כאלה חמורים מדי זיהום. בעקבות ניסיונות להשיג ניטל חיידקים של יומן 7 או 8 10 CFU בתחילת המחקר, תחלואה מהירה נצפתה (כלומר בעלי חיים הופכים הגוססת בתוך פחות מ -24 שעות) למרות שטיפה היסודית של inocula כדי לסלק רעלים קיימים (נתונים על קובץ). זהייתכן שתוכל להתגבר על בעיה זו באמצעות מכרסמים גדולים. חולדות, במיוחד חולדות כבדות (&gt; 250 גרם), מופיעות לסבול יותר inocula הגבוה לעומת עכברים עשויים להיות מתאים עבור סוגים אלה של מחקרים. מגבלה שנייה היא כי השימוש של אגר כמו משפר-זיהום עלול למנוע שימוש במודל להערכה של מארחת מסוימת: אינטראקציות הפתוגן. הוא האמין כי אגר מספק נקודה מוגנת מוקדים עד הזיהום הוא לקבוע באופן מלא בתוך הריאה. אפשר לספק את הבידוד מלוח ולא אגרתי כדי לעזור להתגבר על בעיה זו; עם זאת, יש לציין כי זו תייצר זיהום רק עם בידודים כמה. שלישית, קיימת עקומת למידה תלולה נדרש להיות בקיאים הטכניקה. ההליך יכול להיות עדין, במיוחד אצל עכברים. יקל בטעות למקום צינורית המתכת לתוך הוושט, ו בכוח מופרז יכול להוביל ניקוב או הוושט או קנה הנשימה. מיקום זהיר של הבידוד הוא גםנדרשים או או לא חיות לשחזר או לא להיות נגועות כראוי. עם זאת, עם סבלנות והתמדה, אפשר להיות מאוד מיומן לבצע את הטכניקה במהירות, בצורה חלקה ומדויק. על ידי ביטול הדרישה עבור נויטרופניה, הגדלת האיתנות שחזור, מאפשר לחוקרים ללמוד יותר פתוגנים ומבודד, שיפור הגמישות של תכנון הניסוי ומתן זיהום מאתגר לאפיין פרמקודינמיקה עבור דלקת ריאות, מודל דלקת ריאות עם מערכת חיסון תקינה זה מוסיף ערך משמעותי לגילוי האנטיביוטיקה קהילה. שימוש מוגבר של מודל זה על ידי חוקרים נוספים יעזור לספק את בהשוואות דרושים לכך שהוא יוכל להשיג הסכמה רחבה יותר ולהמשיך לספק מידע תומך פרשנות ראויה.

הערכת היעילות של לתרופות פוטנציאליות במודלים של בעלי חיים של זיהום הוא מרכיב קריטי של תהליך גילוי תרופות אנטיבקטריאלי. בשנת vivo מחקרי יעילות לספק נתונים חשובים לקבלת החלטות על פני האורך של מאמצי גילוי, מן הבהרת יחסים-פעילות מבנה (SAR) ואופטימיזציה סדרה כימית להוביל דרך קביעה-pharmacodynamic pharmacokinetic (PK / PD) מאפיינים של תרכובות ותמיכת בחירה במינון פיתוח ואישור רגולטורים קליניים. דגמים רבים זיהום חיה מתוארים בספרות למטרות אלה. אחד המודלים הנפוצים ביותר בשימוש נרחב הוא זיהום ירך עכבר נויטרופני, אשר היה חלוץ ידי 1 נשר, 2 והרחיבו לאחר מכן פוגלמן וקרייג 3, 4. מודל זה כבר לא יסולא בפז לתמיכת קביעת נקודות עצירה רגישה חיידקים למתן מטרות PK / PD להנחות מינון אדם. ישנם בחינה רבהPles שבהם היכולת החזויה של מודל זה הוכחה 4-7. עם זאת, אחד החסרונות של מודל זיהום הירך הוא חוסר הרלוונטיות ישירה למחל ריאה. כיום ישנו דגש רב יותר על התאמת האתר של זיהום במודלים של בעלי חיים לאתר של זיהום בבני אדם; וכך, ללמוד תרכובות לטיפול בדלקת ריאות, הוא אידיאלי כדי לנצל מודל דלקת ריאות בחיות. כמה שיטות גרימת זיהומים בריאות בחיות מעבדה תוארו ושימשו מחקרי יעילות אנטיבקטריאלי כולל שאיפה אפי, השאיפה דרך המסלול הלוע התחתון, חשיפה אירוסול, וכירורגי intratracheal חיסון 8. במקרים רבים, בעלי החיים (במיוחד עכברים) צריכים קודם כל להיות שניתנו נויטרופני על מנת להשיג זיהום ריאות חזק. למרות קשה זו מדינת מדוכאי חיסון, מספר חיידקים פתוגנים זנים אשר מייצרים זיהומי קיימא במכרסמים הואמוגבל. לדוגמה, זה יכול להיות קשה לקבוע אינפלואנזה המופילוס בהצלחה או baumannii Acinetobacter במודלים דלקת ריאות 9, 10, ופתוגנים אפילו יותר ארסית, כגון Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa ו Klebsiella pneumoniae, יכול להוות אתגר 11-13. בשנת 1991, סמית &#39;תארה מודל דלקת ריאות אצל חולדות יַנוּקָא immunocompetent שבו הזיהום הוקם על ידי הקניית חיידקים ישירות לריאות באמצעות שיטת אינטובציה intratracheal ניתוחית פשוט 14. ברי et al. מאוחר יותר שינה את שיטת הדבקת עכברים 15. שימוש בידוד אגר מבוסס, טכניקת חיסון זה גורמת למחל ריאה חזקות בשני חולדות ועכברים עם מערכת החיסון התקינות עם ס pneumoniae, H. אינפלואנזה, ק pneumoniae, פ aeruginosa ו baumannii א. זה מקובל מגוון רחב של בידודים, כולל אלה מחסה שונה להתנגדהגורם אהה ואלה אשר אינם מייצרים זיהום קיימא דרך נתיבי חיסון אחרים. זה גם מאפשר יעילות שתיקבע בחיות immunocompetent, מצב שבו הוא רלוונטי יותר מאשר דגם העכבר המסורתי נויטרופני עבור אוכלוסיות חולים שאינם מדוכאי חיסון קשה. העקביות והאמינות של המודל הזה על פני פתוגנים רבים ומבודדים עושות את זה היטב מתאים מחקרי יעילות אנטיבקטריאלי.

<table><tbody><tr><td>TSA II טריפטיקז סויה אגר עם 5% דם כבשים</td><td>בקטון דיקינסון וחברה</td><td>4321261</td><td></td></tr><tr><td>שוקולד II אגר</td><td>בקטון דיקינסון וחברה</td><td>4321267</td><td></td></tr><tr><td>BBL מוח עירוי לב מרק שונה</td><td>בקטון דיקינסון ושות'</td><td>299070</td><td></td></tr><tr><td>BBL Trypticase מרק סויה עם 20% גליצרול</td><td>בקטון דיקינסון והחברה</td><td>297808</td><td>אמצעי אחסון עבור מלאי קפוא</td></tr><tr><td>לולאת חיסון</td><td>Nunc</td><td>251586</td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי, USP</td><td>Baxter Healthcare Corporation</td><td>NDC 0338-0048-04</td><td></td></tr><tr><td>Difco Nutrient Agar</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>213000</td><td></td></tr><tr><td>30 מ"ל צינור צנטריפוגה עצמאי עם מכסה</td><td>EverGreen Scientific</td><td>222-3530-G80</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור חרוטי פוליפרופילן 30 x 115 מ"מ</td><td>פלקון, מותג קורנינג</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>14 מ"ל פוליפרופילן צינור תחתון עגול 17 x 100 מ"מ</td><td>פלקון, כלי</td><td>מדריך 352059</td><td></td>של מותג קורנינג</tr><tr><td></td><td>אינטק שירותים בע"מ</td><td>GT01</td><td>צינורית מתכת בהתאמה אישית לחולדות</td></tr><tr><td>צינורות פורטקס 90 '</td><td>SAI</td><td>POR-080-100</td><td>צינורית פלסטיק לחולדות</td></tr><tr><td>1 מ"ל TB קצה החלקה מזרק</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>מחט PrecisionGlide 25 גרם x 5/8</td><td>בקטון דיקינסון ושות'</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>מחט להאכלת בעלי חיים - ישר 20 x 3 אינץ' 2-1/4</td><td>פופר ובניו, בע"מ</td><td>7903</td><td>המשמש ליצירת צינורית מתכת לעכברים</td></tr><tr><td>צינורות פוליאתילן אינטרמדיים</td><td>קליי אדמס המותג - בקטון דיקינסון ושות'</td><td>427401</td><td>צינורית פלסטיק לעכבר&nbsp;</td></tr><tr><td>75 TN 5.0 ומיקרו; מזרק L 26s/2 אינץ'/2</td><td>המילטון</td><td>87930</td><td>HPLC מזרק הזרקת זכוכית</td></tr><tr><td>צינור פיירקס, תרבית 25x150 עם תוחם גומי</td><td>קורנינג</td><td>9825-25</td><td>לחיטוי/אחסון צינורית מתכת</td></tr><tr><td>70% אלכוהול איזופרופיל</td><td>Vi-Jon (ברבור)</td> <td>NDC 0869-0810-43</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן, USP</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-10</td><td></td></tr><tr><td>בטן&nbsp;</td><td>Seward</td><td>Stomacher80</td><td></td></tr><tr><td>Stomacher 80 שקיות קלאסיות</td><td>צלחת</td> בדיקה <td>Seward BA6040</td><td></td></tr>, <tr><td>96 באר, תחתית עגולה</td><td>Costar, Corning Inc</td><td>3795</td><td>אופציונלי, לדילול סדרתי</td></tr><tr><td>צלחות Blood Omni Plates עמידות</td><td></td><td>#A127</td><td>אופציונליות, צלחות דם מלבניות</td></tr></tbody></table>

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד<i&gt; s. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; h. אינפלואנזה</i&gt;,<i&gt; k. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; p. aeruginosa</em&gt; או<em&gt; a. baumannii</em

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

יעילות של טיפולים אנטי-בקטריאלי מועמד חייבת להיות מופגנת במודלים של בעלי חיים של זיהום כחלק מתהליך הגילוי ופיתוח, רצוי במודלים אשר לחקות את האינדיקציה הקלינית המיועדת. שיטת התרמת דלקות ריאות חזקות אצל חולדות ועכברים עם מערכת חיסון תקינים מתוארת אשר מאפשרת ההערכה של טיפולים במודל של דלקת ריאות חמורות הנגרם על ידי S. pneumoniae, H. אינפלואנזה, פ aeruginosa, ק pneumoniae או baumannii א. בעלי חיים מורדמים, וכן בידוד אגר מבוססת מופקד עמוק לתוך הריאות באמצעות אינטובציה intratracheal הניתוחית. הזיהום הנובע עולה בקנה אחד, לשחזור, ויציב לפחות 48 שעות ועד 96 שעות עבור רוב הבידודים. מחקרים עם antibacterials משווקים הוכיחו קורלציה טובה בין יעילות in vivo ו רגישות במבחנה, הלימה בין מטרות pharmacokinetic / pharmacodynamic נקבעהבמודל זה ויעדים קבלו קליני נצפה. אמנם יש השקעה ראשונית זמן כאשר לומדים את הטכניקה, זה יכול להתבצע במהירות וביעילות פעם מיומנת מושג. יתרונות של המודל כוללים חיסול של דרישת נויטרופני, חוסן מוגבר שחזור, יכולת ללמוד יותר פתוגנים ומבודדים, גמישות משופרת בעיצוב מחקר והקמת זיהום מאתגר מארח עם מערכת חיסון תקין.

מתוארת שיטה לקביעת זיהומי ריאות במכרסמים בעלי יכולת חיסונית. עם מיומנות, ניתן לבצע שיטה זו במהירות ובקלות כדי לגרום לזיהום יציב עם מבודדים רבים של S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae ו-A. baumannii.

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. אינפלואנזה</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; או<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

המטרה הכוללת של הליך זיהום תוך סימפונות לא ניתוחי זה היא לבסס דלקת ריאות חיידקית חזקה במכרסמים בעלי יכולת חיסונית. שיטה זו מוסיפה ערך לגילוי ופיתוח של אנטיבקטריאליים בכך שהיא מאפשרת להעריך את יעילותם של טיפולים פוטנציאליים במודל בעל יכולת חיסונית של דלקת ריאות חמורה. היתרון העיקרי של טכניקה זו, הוא שהיא מבססת זיהום ריאות חזק וניתן לשחזור עם מבודדים רבים, כולל אלה שבדרך כלל דורשים מבעלי החיים להיות נויטרופניים או מבודדים שאינם מייצרים זיהום בר-קיימא בשיטות אחרות.בדרך כלל, אנשים חדשים בהליך זה יתקשו. אינטובציה נכונה היא הליך עיוור הדורש לימוד התחושה הנכונה לאינטובציה של קנה הנשימה במקום הוושט. אינטובציה נכונה שונה עבור כל מדען.ייתכן שהזווית המדויקת של הצינורית לא תהיה זהה עבור כולם. תחושת רכסי קנה הנשימה היא המפתח. תדגים את הטכניקה הזו סינדי מינינגר, מדענית מהמעבדה שלנו.כדי להתחיל, הכינו תרחיפי חיידקים מלוחים מתרביות מרק לילה, כפי שמצוין בפרוטוקול הטקסט, או מצלחות אגר, כפי שמודגם כאן. קצרו גידול בן לילה מצלחות אגר באמצעות לולאה סטרילית כדי לגרד מושבות מפני השטח. העבירו את החומר שנקטף לחמישה מיליליטר של מי מלח סטריליים עד לקבלת תרחיף מעונן ואטום, ומערבלו בעדינות את התרבית עד לקבלת תערובת אחידה.לאחר מכן יש לדלל באופן סדרתי ולצלוח אליקוט מכל דילול בהתאם לפרוטוקול הטקסט. לאחר הכנת האגר והרכבת הכלים הדרושים לתהליך ההדבקה, על פי פרוטוקול הטקסט, מכניסים תשעה מיליליטר אגר לצינור סטרילי ואז מכניסים את הצינור לאמבט המים עד שהאגר מתייצב לכ-42 מעלות צלזיוס. הוסף מיליליטר אחד של תרחיף חיידקי המלח שהוכן בעבר לצינור האגר.לאחר מכן, הפוך את הצינור מספר פעמים כדי לערבב ולהחזיר אותו למים. הניחו מחצלת נקייה וחד פעמית על משטח העבודה קרוב לאמבט המים. כדי להכין את משטח העבודה ומכשיר האינטובציה, יש לעקר תחילה את צינורית המתכת וצינורות הפוליאתילן בהתאם לפרוטוקול הטקסט ולאחר מכן להעביר אותו בצינור אחסון הזכוכית שלו למשטח העבודה.לאחר מכן, הסר את המכסה מצינור האחסון והחלק את קצה הידית של הצינורית לקצה הפתוח של הצינור. בעזרת מלקחיים סטריליים, הסר אורך אחד של צינור פוליאתילן מהכוס והכנס אותו דרך החלק הפנימי של צינורית המתכת הסטרילית, וודא שהיא נעה בחופשיות. הניחו סימן מנחה במיקום קבוע מראש בעזרת עט בלתי ניתן למחיקה.לאחר מכן, התקן מחט חד פעמית סטרילית בגודל 25 על הקצה החופשי של צינור הפוליאתילן על ידי החלקת המחט מספר מילימטרים לתוך הצינור. לאחר מכן, השתמש במי מלח סטריליים כדי למלא מזרק חד פעמי טרי של מיליליטר. חבר את המזרק למחט המותקנת על צינור הפוליאתילן ושטוף את כל נפח המלח דרך הצינור.השליכו את המזרק המשומש למיכל החדים. לאחר מכן, מלאו מזרק חד פעמי סטרילי חדש של מיליליטר אחד בחיסון על בסיס אגר מאמבט המים. חבר מחדש את המחט והצינור בגודל 25 ושטוף אגר דרך הצינור על ידי לחיצה על הבוכנה רק עד שהצינור מתמלא לחלוטין באגר.לאחר הרדמת החולדה על פי פרוטוקול הטקסט, הניחו את החיה במצב שכיבה על המחצלת החד פעמית כשהראש פונה ימינה והזנב פונה שמאלה. לאחר מכן, הכנס את הקצה החופשי של צינורית המתכת לפה של החיה. סובב את הצינורית כך שהקצה החופשי יהיה בזווית כלפי מעלה וקדם אותה בעדינות לקנה הנשימה, תוך עקיפת מבני הגרון בתנועת פיתול קלה.אשר את ההחדרה לקנה הנשימה, בניגוד לוושט, על ידי החלקה עדינה של הצינורית מעט קדימה ואחורה מספר פעמים תוך שימוש באצבע המורה השמאלית כדי למשש את טבעות קנה הנשימה. כדי להבטיח אינטובציה לקנה הנשימה, ולא לוושט, הזיזו מעט את הצינורית קדימה ואחורה והרגישו את הרכסים. אם הצינורית מחליקה בצורה חלקה במורד הגרון ולא ניתן להרגיש את הרכסים, הסר את המכשיר ונסה שוב.כאשר הצינורית מגיעה לפיצול שבו קנה הנשימה מתפצל לסמפונות השמאלית והימנית, בצע תנועת פיתול קלה לכיוון הצד השמאלי של החיה כדי להבטיח שהצינורית מוכנסת לסמפונות השמאליים. טעות נפוצה היא אי הכנסת החיסון עמוק מספיק לתוך הריאה, מה שעלול לחסום את דרכי הנשימה ולעכב את הנשימה. כאשר הופכים את הצינורית לזווית הנכונה, היא צריכה להחליק בקלות לתוך הסימפונות השמאליים ולהתקדם בצורה חלקה לעומק המתאים.קדם את צינורית המתכת עד שהקצה נמצא באמצע הדרך לשלושה רבעים במורד הריאה השמאלית, באמצעות סימן ההנחיה שהוצב קודם לכן כדי לאשר שהעומק המתאים הושג. כשצינורית המתכת במקומה, קדם את צינורות הפוליאתילן כמה מילימטרים באמצעות סימן ההנחיה שהוצב קודם לכן על הצינור כדי להבטיח שהוא מתקדם רק מספיק כדי לצאת מקצה צינורית המתכת ולא לנקב את הריאה. כאשר שתי הצינוריות במקומן, השתמש במזרק המצורף כדי להחדיר 100 מיקרוליטר של תרחיף אגר עמוק לתוך האונה הגדולה של הריאה השמאלית.משוך כמה מילימטרים מהצינור והסר בעדינות את מכשיר האינטובציה השלם. החזירו אותו לצינור האחסון מזכוכית והעבירו את החיה לכלוב טרי כדי להתאושש. הכן את משטח העבודה והצינורית כפי שהודגם זה עתה עבור חולדות, באמצעות הציוד בגודל המתאים לעכברים.השתמש במזרק חד פעמי סטרילי של 1 מיליליטר ובמחט סטרילית בגודל 25 כדי למלא את מזרק המיקרו-הזרקה מזכוכית במי מלח סטריליים. לאחר מכן, שטפו את מי המלח דרך המכשיר שהורכב מחדש. לאחר מכן, השתמש במזרק חד פעמי סטרילי חדש של מיליליטר אחד ובמחט סטרילית בגודל 25 כדי למלא את מזרק המיקרו-הזרקה בחיסון אגר.לאחר מכן, הרכיבו מחדש את המכשיר ושטפו אגר דרך הצינור רק עד שהצינור מתמלא לחלוטין באגר. לאחר הרדמת העכבר על פי פרוטוקול הטקסט, מקם את החיה באותו כיוון שהודגם עבור החולדה, והשתמש בלחץ קבוע אך עדין כדי להחדיר את קנה הנשימה באופן דומה לזה של החולדה. הימנע משימוש בכוח מכיוון שהטכניקה עדינה יותר בעכברים.ודא שהצינורית מוחדרת לקנה הנשימה על ידי מישוש טבעות קנה הנשימה. סובב מעט וקדם את הצינורית לתוך הסימפונות השמאליים, והכניס עמוק לריאה באמצעות סימני הנחיה שהוצבו בעבר. עם צינורית המתכת במקומה, קדם את צינורות הפוליאתילן כמה מילימטרים והחדיר 20 מיקרוליטר של מתלה אגר.מוצגת כאן דוגמה מייצגת של מושבות הגדלות על צלחת אגר לאחר דילול סדרתי וציפוי משולש של דגימת ריאה הומוגנית. כפי שמודגם בגרף זה עם S.pneumoniae, עלייה בעומס החיידקים של מספר CFU על בסיס 10 מעל בקרות הבסיס נצפית בדרך כלל בריאות נגועות עבור רוב החיידקים המבודדים, אפילו 96 שעות לאחר ההדבקה, והשונות בין בעלי חיים נמוכה. בניסוי זה, שתי תרכובות הוערכו כנגד מבודדים רגישים לקווינולון או עמידים לקווינולון של S.pneumoniae כדי להמחיש שניתן להשתמש במודל זיהום ריאות זה במהלך אופטימיזציה של סדרה כימית מובילה כדי לתמוך בקשרי פעילות מבנה.כל סמל מייצג CFU שנקבע מריאותיה של חולדה אחת. מוצגים כאן מודלים של E max שנוצרו באמצעות נתוני יעילות בטווח מינון בעכברים בעלי יכולת חיסונית הנגועים בריאה עם מבודדים של S.pneumoniae או H.influenzae כדי לקבוע יעדים פרמקוקינטיים ופרמקודינמיים למעכב פוליפפטיד דפורמילאז חדש. עיגולים מייצגים את עומס החיידקים הממוצע מארבעה עד חמישה עכברים לקבוצה שטופלה במינונים שונים של תרכובת.העיגולים הפתוחים מייצגים שטח פנוי מתחת לעקומה ועיגולים מלאים מייצגים את השטח מתחת לעקומת זמן הריכוז מעל הריכוז המעכב המינימלי. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך כ-30 שניות לכל חיה, עם עד חמישה או שישה בעלי חיים מחוסנים לכל מזרק של חיסון אגר. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע את שיטת הזיהום התוך-סימפונות הלא ניתוחית הזו ולהיות מסוגל להשתמש בה לביסוס זיהומי ריאות עם מבודדי חיידקים רבים ושונים.אינסטרומטנל אנרגטי

a-robust-pneumonia-model-immunocompetent-rodents-to-evaluate

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקור: לנהרד, א. ואחרים. מודל עכבר למעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן בעקבות זיהום נגיפי משחזר מחלה שהוחמרה על ידי הגיל. J. Vis. Exp. (2022)הסרטון הזה מדגים מודל זיהום משותף לעכברים, שבו נגיף השפעת מפעיל את המעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן. הוא מפרט את השלבים המעורבים בהתיישבות חיידקית, זיהום ויראלי והתקדמות מחלה.

מודל עכבר לחקר המעבר הפתוגני של Streptococcus pneumoniae בעקבות זיהום נלווה ויראלי

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום הריאות במודל מכרסם חיסוני באמצעות אינטובציה והתקנת תרחיפים חיידקיים באונות הריאה. מודל זה מאפשר מחקרי יעילות אנטיבקטריאליים בבעלי חיים בעלי יכולת חיסון.

החדרה תוך סימפונית של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס במודלים של מכרסמים חיסוניים

Streptococcus pneumoniae הוא פתוגן המוביל גורם לדלקת ריאות שנרכשה בקהילה קשה ואחראית ליותר מ -2 מיליון מקרי מוות ברחבי העולם. ההשפעה של גורמי חיידקים מעורבים בכושר או ארסיות יכולה להיות במעקב בזמן אמת במודל דלקת ריאות או בקטרמיה עכבר אקוטי באמצעות חיידקי bioluminescent.

בעקבות בזמן אמת השפעת גורמי דלקת ריאות ארסיים בעכבר דלקת ריאות דגם אקוטי באמצעות חיידקי Bioluminescent

פיתחנו מודל פגיעה ריאתית של עכבר על ידי הזרקה תוך-קנה של חיידקים Pseudomonas aeruginosa. מודל זה מחקה פגיעה ריאתית במהלך דלקת ריאות והוא רלוונטי מבחינה קלינית.

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

מספר שיטות תוארו בספרות למידול דלקת ריאות חיידקית בעכברים. בזאת, אנו מתארים לא פולשנית, לא יקר, שיטה מהירה גרימת דלקת ריאות באמצעות שאיפה (כלומר, שאיפה) של בידוד חיידקי pipetted לתוך הלוע התחתון. שיטות Downstream להערכה של התגובה החיסונית המולדת ריאתי הם גם מפורטות.

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

דלקת ריאות זיהומית היא בין הזיהומים הנפוצים ביותר של האדם. מודל המתאים ויוו חיוני להבנת הפתוגנזה של המחלה, בדיקת יעילותם של הריפוי. עם מודל דלקת ריאות השאיפה הלוע התחתון מאתר זה, ניתן לבחון הפתוגנזה של טיפולים חדשים נגד זיהומים קטלניים אלה.

השאיפה הלוע התחתון מאתר מודל של הנשמה-הקשורים ו רכשה החולים בדלקת ריאות חיידקית

כאן, אנו מציגים שיטות כדי לשפר את מחקרי דלקת ריאות משנית על ידי מתן תוואי לא פולשני של חוסר החלטיות לתוך דרכי הנשימה התחתונה ואחריו שחזור הפתוגן וניתוח תעתיק. הליכים אלה ניתנים לעיקור וניתן לבצעו ללא ציוד מיוחד כגון צינורית, חוטי מדריך או כבלי סיבים אופטיים.

משלוח הפתוגן מדויק מערכת השחזור של מודלים Murine של דלקת ריאות משנית בקטריאלי

כתב יד זה מתאר את ביסוס מודל זיהומי של דלקת ריאות בעכברים ואת אפיון פתרון הפגיעה בהתאמה יחד עם שיטות לגידול חיידקים והחדרה תוך טרכיאלית. מתוארת גם גישה חדשנית המשתמשת בציטומטריית זרימה בממד גבוה להערכת הנוף החיסוני.

מודל ניסיוני להערכת רזולוציה של דלקת ריאות

מאמר זה מתאר מודל עכברי חדשני למעבר של פנאומוקוק ממתיישב אסימפטומטי לפתוגן הגורם למחלה במהלך זיהום ויראלי. מודל זה יכול להיות מותאם בקלות לחקר אינטראקציות מיקרוביאליות ומארח-פתוגן במהלך השלבים השונים של התקדמות המחלה ועל פני מארחים שונים.

מודל עכברי למעבר של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס מקולונייזר לפתוגן עם זיהום משותף ויראלי מחזיר מחלה המחמירה בגיל

עכברים בדרך כלל עמידים לזיהומים על ידי Mycobacterium abscessus, מה שמסבך את הגילוי והפיתוח של אנטיביוטיקה נחוצה מאוד נגד זיהומים ריאתיים. כאן, אנו מתארים שיטה להכנת חיסון וזיהום תוך-קנה שהוכח כגורם לזיהום מתמשך בעכברים בעלי יכולת חיסונית.

הכנת מורסה מיקובקטריום משובצת חרוז אגר לחיסון עכברים בעלי יכולת חיסונית תוך קנה הנשימה

למד שיטת זיהום תוך-סימפוני לא ניתוחית להקמת דלקת ריאות חזקה במכרסמים immunocompetent. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות טיפולים אנטיבקטריאליים במודל רלוונטי של דלקת ריאות קשה.

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד S. pneumoniae, H. אינפלואנזה, K. pneumoniae, P. aeruginosa או A. baumannii (וידאו) | JoVE Journal

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד

גלה סרטונים נוספים