Cell הזרקת הסרטן Intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור

גרורה במוח הפך צורך רפואי דחוף כמו השכיחות שלה גדלה תוך אופציות טיפוליות נותרו פליאטיבי. יצירת מודלים של בעלי חיים הניסיונות של גרורות במוח באמצעות זריקת intracarotid העורקת של תאי סרטן מקל מחקרים מכניסטית של ביולוגית המחלה והערכת משטרי התערבות רומן.

המטרה הכוללת של הזרקה מיקרו-כירורגית זו של תאים סרטניים דרך עורק הצוואר היא לייצר מודלים עקביים של גרורות מוח ניסיוניות בעכברים. כך ששיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הגרורות במוח, כגון האם טיפול חדש עשוי להראות יעילות בטיפול בגרורות במוח. אז היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת לייצר גרורות מוחיות ניסיוניות in vivo עם יכולת שחזור גבוהה ושונות נמוכה.

בדרך כלל אנשים חדשים בטכניקה זו יתקשו בהתחלה מכיוון שנדרשת כמות נכבדה של תרגול כדי לשמור על יד יציבה כדי להזריק תאים סרטניים לעורק הצוואר של עכברים אלה תחת המיקרוסקופ. התחל בהליך זה על ידי זריעת תאי הסרטן במדיית DMEM F12 בתוספת 10% FPS ותרבית אותם במשך יום עד יומיים לפני ההזרקה. ביום הניתוח יש להוציא את התאים מהאינקובטור ולקצור אותם כשהם מגיעים למפגש של 70% עד 80% על ידי שטיפה בחומר נטול סרום.

לאחר מכן, דגרו על התאים עם 0.25% טריפסין למשך דקה עד שתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הסר אותם מהחממה והוסף לתאים 10% FBS המכיל מדיה DMEM F12 כדי להרוות שבבים. צנטריפוגה של התאים בטמפרטורה של 80 פעמים G למשך שלוש דקות.

לאחר מכן, הסר את המדיום ושטוף את התאים ללא סרום פעמיים כדי להסיר שאריות סרום. לאחר מכן, ספרו את התאים בעזרת המוציטומטר והשעו אותם מחדש ב-HBSS. לאחר מכן, שמור את התאים על קרח עד לזמן ההזרקה.

בהליך זה, יש להרדים את העכבר עם קוקטייל קטמין/קסילזין על ידי הזרקה תוך צפקית. אשר הרדמה מלאה על ידי צביטה בכפות הרגליים של בעל החיים ושים לב לחוסר התגובה. לאחר מכן, הסר את שיער הצוואר על ידי גילוח או שימוש בכמות קטנה של מוצר להסרת שיער.

לאחר מכן, הנח את העכבר על צלחת זכוכית ואבטח אותו עם גומיות. נקו את העור על ידי מריחת 70% אלכוהול בפובידון יוד. כעת, בצע חתך בעור באורך של כסנטימטר אחד בעזרת אזמל כירורגי.

לאחר מכן, נתחו את השריר בצורה בוטה בעזרת מלקחיים כירורגיים כדי לחשוף את עורק הצוואר שמתחתיו. הפרד את עורק הצוואר מהעצב התועה הסמוך בעזרת מלקחיים כירורגיים. לאחר מכן, הניחו שני תפרים.

אחד דיסטלי וקרוב לכדור הצמר גפן ויוצרים קשרים רופפים. הדק את הקשר הפרוקסימלי כדי לחסום את זרימת הדם לאתר ההזרקה. לאחר מכן, הרטיבו צמר גפן קטן עם חיץ והניחו אותו מתחת לעורק הצוואר של אתר ההזרקה המיועד.

לאחר מכן, המשך להזרקת תאים סרטניים אם עורק הצוואר על כדור הצמר גפן נראה בלחץ מלא עם דם אדום טרי. בשלב זה, מערבולת ושואבת 100 מיקרוליטר של תאים סרטניים לתוך המזרק. מתחת למיקרוסקופ הניתוח, הכנס לאט את המחט בגודל 31 עם שיפוע כלפי מעלה ללומן של עורק הצוואר, יושב על גבי כדור הצמר גפן.

הזרקו לאט את התאים מהמזרק לעורק הצוואר. ניתן להבחין בהזרקה מוצלחת על ידי שינוי הצבע של כלי הדם והשרירים הסמוכים כאשר תאי הסרטן המבודדים נדחפים למחזור הדם. בסיום ההזרקה, הרם את הקשירה הדיסטלית בעדינות כדי למנוע רגורגיטציה.

לאחר מכן, הדק במהירות את הקשר הדיסטלי כדי להשלים את תהליך ההזרקה. לאחר השלמת ההזרקה, הדק את הקשרים וחתוך את תפר המשי העודף בעזרת מספריים מיקרו. הזיזו לאחור את השריר המופרד כדי לכסות את מקום הפצע וסגרו את העור בשני סיכות.

להתאוששות, העבירו את החיה לכרית חימום. לאחר מכן, יש לתת בופרנורפין באמצעות הזרקה תת עורית כמשכך כאבים לאחר ניתוח. לאחר שהוא חוזר להכרה וחוזר להתנהגות רגילה, החזר את העכבר למקום הדיור שלו.

ספק לבעל החיים מזון ג'ל למשך מספר ימים לאחר הניתוח. תמונות אלה מראות כי תאי סרטן השד MDA MB231 ששונו סומנו עם גן מדווח רופף ex-vivo. החל מ-24 שעות לאחר הזרקת עורק הצוואר, התפתחות גרורות במוח נוטרה באופן לא פולשני על ידי הדמיה חוזרת של מערכת הדמיה in vivo.

כימות נתוני ההדמיה מצביע על ירידה ראשונית בעומס הגידול לאחר הזרקת עורק הצוואר, ואחריה צמיחה אקספוננציאלית של גרורות במוח עד לשפע רב יותר של בעלי חיים. אז מה ששולטים בטכניקה הזו ניתן לעשות תוך פחות מ-10 דקות עבור כל הזרקת עכבר אם היא מבוצעת כראוי. אז בזמן ביצוע הליך זה, הדבר החשוב ביותר שיש לזכור הוא שאתה צריך לוודא, ללמוד ולהבטיח את המיקום של עורק הצוואר על גבי כדור הצמר גפן לפני שתמשיך להזרקת התאים הסרטניים.

בעקבות הליך זה ניתן לבצע שיטות אחרות כגון טיפולים טיפוליים כדי לענות על שאלות אחרות. לדוגמה, האם תרופה חדשה תהיה יעילה בעיכוב גרורות במוח גדלה. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום גרורות המוח לחקור שאלות בסיסיות או תרגומיות במודל ניסוי in vivo בעכברים.

אז אחרי הצפייה בסרטון הזה, אתם אמורים להבין היטב כיצד להזריק את התאים הסרטניים לעורק הצוואר של עכברים כדי לייצר מודל ניסיוני של גרורות במוח