Name: Cell הזרקת הסרטן Intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: למד טכניקת הזרקת תאי סרטן תוך עורקית ליצירת מודלי גרורות מוח בעכברים. שיטה זו מאפשרת שחזוריות גבוהה ומגוון נמוך בתוצאות, ומסייעת בבדיקת טיפולים חדשים לגרורות מוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

למחברים אין אישורים.

הצהרת אתיקה: כל במחקרים בבעלי החיים אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש (IACUC) של האוניברסיטה של ​​מרכז טקסס MD Anderson Cancer. 1. כן תאים סרטניים עבור הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרעי התאים הסרטניים אחד או ימים לפני הזריקה. השתמש בחומרי הדפסה DMEM / F12 בתוספת 10% FBS, אלא מדיום המומחיות מותווה בספרות עבור קו תא מסוים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום פעולה כירורגית, תאי קציר כאשר הם מגיעים 70 - 80% מפגש ידי השטיפה ראשונה עם סרום ללא מדיה פעם לפני trypsinization (0.25%) עבור 1 - 2 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. להוסיף לתאים 10% FBS המכילים תקשורת DMEM / F12 כדי להרוות את טריפסין 0.25%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב g 80 × 3 דקות. שטפו תאים ב סרום ללא מדיה פעמיים כדי להסיר בסרום שיורית, לספור את התאים עם hemocytometer מחדש להשעות ב תמיסת מלח מאוזן של האנק (HBSS) ל 1 - 5 × 10 6 תאים / מ&quot;ל, בהתאם לקו הסלולרי. שמור על הקרחעד בזמן ההזרקה. הערה: מד&quot;א- MB-231 תאים סרטן השד תאי מלנומה K1735 שימשו במחקר זה, ושניהם שורות תאים שימשו ב 2 × 10 6 תאים / ריכוז מ&quot;ל. שמור את משך trypsinization קצר ככל האפשר טיפול יתר עלול להשפיע על התוצאות של מבחני גרורות. </li></ol> 2. כן עכברים עבור הזרקת תאים סרטנית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים על ידי הזרקה (IP) הזרקה של קטמין / קוקטייל xylazine (קטמין 100 מ&quot;ג / ק&quot;ג, xylazine 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר הרדמה מלאה על ידי צובט את הרגליים חי ולבחון חוסר התגובה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על צלחת זכוכית (ששימשו ליציקת ג&#39;לים חלבון), ובטוחה עם גומיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת הצורך, להסיר את השיער של הצוואר על ידי גילוח או מריחת כמות קטנה של המוצר הסרת שיער ומוחה את השיער מעל עם מגבת נייר. הערה: אם באמצעות עכברים בעירום, לדלג על שלב זה כמו אין להם שיער גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקו את עור הצוואר על ידי יישוםpovidone יוד ואלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכבר על הבמה של מיקרוסקופ לנתח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושים חתך בעור ~ 1 ס&quot;מ בעזרת איזמל ניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבוטות לנתח את השריר עם מלקחי שיניים לחשוף את העורק הראשי מתחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את עורק התרדמה מן העצב התועה סמוך עם מלקחיים כירורגיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים כירורגיים, להפריד קצת צמר גפן מן כדור צמר גפן, ללחלח, ואופנה לתוך כדור צמר גפן קטן. מניחים כדור צמר גפן לחות-חיץ זה מתחת העורק הראשי של האתר המיועד של ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים דיסטלי תפר הפרוקסימלי כדור צמר גפן ולעשות קשרים רופפים. להדק את הקשר הפרוקסימלי לחסום את זרימת הדם לתוך הזריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך הזרקת תאים סרטניים אם עורק התרדמה על כדור צמר גפן מופיע בלחץ מלא בדם אדום טרי. </li></ol> 3. הזרקת תאים סרטניים לתוך העורק הראשי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> וורטקס ולצייר 100 μl of תאים סרטניים לתוך המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת המיקרוסקופ לנתח, והכנס באיטיות 31 המחט G (עם שיפוע כלפי מעלה) לתוך לומן של עורק התרדמה יושב על גבי כדור צמר גפן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק את התאים מן המזרק לתוך העורק הראשי. זריקה מוצלחת ניתן לצפות במיקרוסקופ על ידי שינוי הצבע של כלי דם סמוכים שרירים כאשר תאים סרטניים שנאגרו נדחפים לתוך המחזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הזריקה של כל נפח תושלם, להרים את העורק הראשי דיסטלי בעדינות כדי למנוע regurgitation. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות להדק את הקשר דיסטלי כדי להשלים את תהליך ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלמת הזריקה, להדק את ליגטורה וקוצצים את תפר משי עודף עם מספריים מיקרו תחת מיקרוסקופ לנתח. מעבר אחורה השריר המופרד כדי לכסות את אתר הפצע. סגור את העור עם שתי סיכות. </li></ol> 4. שחזור כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את החיה המופעל על כרית חימוםעבור התאוששות. זה עלול לקחת 30 - 60 דקות על חיות המחמד כדי להכרתו. בינתיים, לנהל עצירות (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג) באמצעות זריקה תת עורית כמו שיכוך כאבים לאחר ניתוח. הערה: שיכוך כאבים צריך להינתן על פי IACUC המקומי פרוטוקול שאושר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר החיות להתעורר ולחדש ההתנהגות הנורמלית שלהם, להחזיר את העכברים למיקום הדיור שלהם. ספק עכברים עם מזון ג&#39;ל שלאחר ניתוח כמה ימים. לשמור על תיק רפואי ולשמור אותו בחדר. </li></ol> 5. לא פולשני in vivo הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור תאים שכותרתו עם בונה כתב בלוציפראז, למדוד יעילות הזרקת תאים סרטניים באמצעות במערכת הדמיה vivo 14. הערה: הדמיה לא מבוצעת ביום הזרקה כדי למנוע לחץ מופרז לבעלי חיים במחקר. </li></ol>

<ol><li>Gavrilovic, I. T., Posner, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+metastases%3A+epidemiology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Brain metastases: epidemiology and pathophysiology.</a> J Neurooncol. 75 (1), 5-14 (2005).</li>
<li>Patchell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+management+of+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Rev%22%5BJournal%5D)">The management of brain metastases.</a> Cancer Treat Rev. 29 (6), 533-540 (2003).</li>
<li>Barnholtz-Sloan, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+proportions+of+brain+metastases+in+patients+diagnosed+%281973+to+2001%29+in+the+Metropolitan+Detroit+Cancer+Surveillance+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Incidence proportions of brain metastases in patients diagnosed (1973 to 2001) in the Metropolitan Detroit Cancer Surveillance System.</a> J Clin Oncol. 22 (14), 2865-2872 (2004).</li>
<li>Schouten, L. J., Rutten, J., Huveneers, H. A., Twijnstra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+brain+metastases+in+a+cohort+of+patients+with+carcinoma+of+the+breast%2C+colon%2C+kidney%2C+and+lung+and+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Incidence of brain metastases in a cohort of patients with carcinoma of the breast, colon, kidney, and lung and melanoma.</a> Cancer. 94 (10), 2698-2705 (2002).</li>
<li>Bendell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+metastases+in+women+who+receive+trastuzumab-based+therapy+for+metastatic+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Central nervous system metastases in women who receive trastuzumab-based therapy for metastatic breast carcinoma.</a> Cancer. 97 (12), 2972-2977 (2003).</li>
<li>Clayton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+cerebral+metastases+in+patients+treated+with+trastuzumab+for+metastatic+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Incidence of cerebral metastases in patients treated with trastuzumab for metastatic breast cancer.</a> Br J Cancer. 91 (4), 639-643 (2004).</li>
<li>Romond, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trastuzumab+plus+adjuvant+chemotherapy+for+operable+HER2-positive+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Trastuzumab plus adjuvant chemotherapy for operable HER2-positive breast cancer.</a> N Engl J Med. 353 (16), 1673-1684 (2005).</li>
<li>Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patient+perspective+on+brain+metastases+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A patient perspective on brain metastases in breast cancer.</a> Clin Cancer Res. 13 (6), 1623-1624 (2007).</li>
<li>Lin, N. U., Bellon, J. R., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+metastases+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">CNS metastases in breast cancer.</a> J Clin Oncol. 22 (17), 3608-3617 (2004).</li>
<li>Zhang, C., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment+determinants+of+brain+metastasis+of+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Microenvironment determinants of brain metastasis of brain metastasis.</a> Cell Biosci. 1 (1), 8(2011).</li>
<li>Fidler, I. J., Nicolson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+selectivity+for+implantation+survival+and+growth+of+B16+melanoma+variant+tumor+lines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Organ selectivity for implantation survival and growth of B16 melanoma variant tumor lines.</a> J Natl Cancer Inst. 57 (5), 1199-1202 (1976).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-induced+PTEN+loss+by+exosomal+microRNA+primes+brain+metastasis+outgrowth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth.</a> Nature. 527 (7576), 100-104 (2015).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SRC+family+kinases+as+novel+therapeutic+targets+to+treat+breast+cancer+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">SRC family kinases as novel therapeutic targets to treat breast cancer brain metastases.</a> Cancer Res. 73 (18), 5764-5774 (2013).</li>
<li>Lim, E., Modi, K. D., Kim, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescent+imaging+of+mammary+tumors+using+IVIS+spectrum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using IVIS spectrum.</a> J Vis Exp. (26), (2009).</li>
<li>Zhang, C., Zhang, F., Tsan, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor-beta2+is+a+molecular+determinant+for+site-specific+melanoma+metastasis+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor-beta2 is a molecular determinant for site-specific melanoma metastasis in the brain.</a> Cancer Res. 69 (3), 828-835 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

השלבים הקריטיים ביותר להזרקת עורקי תרדמה מוצלחת של תאים סרטניים הם: 1) הרדמה עמוקה של עכבר כהכנת פעולה כירורגית; 2) מיקום קבוע של עורק תרדמה על גבי תמיכת הכותנה; 3) קשירה הדוקה של עורק תרדמה לאחר זריקה מוצלחת. הרדמה עמוקה של ~ 30 דקות בדרך כלל יש צורך עבור ביצועים כירורגית יציבים תחת מיקרוסקופ לנתח. אנו משתמשים קוקטייל קטמין / xylazine מוכן לשימוש מסחרי עבור הרדמה העכבר. כדי למנוע מינון יתר פוטנציאל, קוקטייל קטמי...

גרורות של סרטן במערכת העצבים המרכזית (CNS) היא מחלה הרסנית, והוא יכול לכלול גם את המוח parenchyma או leptomeninges ( &quot;גרורות במוח&quot; מתייחס הן במאמר זה). זהו גידול ממאיר תוך גולגולתי השולט, עולים במספרם גליומות הראשוני על ידי&gt; 10: 1 1, 2. סרטן הריאות, סרטן השד ומלנומה שלוש מחל נאופלסטיות הגדולות העליונות מייצר מקרים גבוהים של המוח גרור 3, 4. בשנים האחרונות, התקדמות מרשימה טיפולים בסרטן רומן כבר האריכה דראמטי הישרדות ואיכות חיים משופרת עבור חולי סרטן רבים. עם זאת, על הישנות, השכיחות של גרורות במוח עולה בקצב מהיר. לדוגמא, trastuzumab הנוגדן אנטי HER2 (הרצפטין) הוכיח יעילות קלינית משמעותית בחולים עם HER2 + סרטן השד; עדיין מגמה מטרידה התפתחהבחולים אלה: עד 1/3 אלה שמחלתם המערכתית extracranial נהנה בתחילה מטיפול trastuzumab מאוחר יותר לפתח מוח גרור 5, 6, 7. למרבה הצער, חולים עם גרורות במוח הם מגיבים כמעט כל טיפולים הקיימים כיום, בדרך כלל חווים הידרדרות טראומטית של איכות החיים, ואת ההישרדות לשנה אחת שלהם לאחר האבחון היא רק ~ 20% 8. הטיפולים הקיימים נגד גרורות במוח (כולל סטרואידים, רדיותרפיה גולגולתי, כריתה כירורגית בחולים נבחרים) הם רק פליאטיבי, אין בהן כדי לרפאה 9. לכן, גרורות במוח מתגלה האתגר הבא המרשים בעידן זה של טיפולים בסרטן הרומן. כדי להתמודד עם האתגר לא מסופק חולות פניו מדי יום במרפאת, אנו זקוקים בדחיפות כדי להבין טוב יותר את המנגנון הבסיסי של גרורות במוח ולהשתמש בידע הזה כדי לפתח טיפולים חדשניים. <pClass = &quot;jove_content&quot;&gt; קולוניזציה מוצלחת של המוח על ידי תאים סרטניים גרורתי דורשת ביצוע סדרה של פונקציות המתווכות על ידי האינטראקציה המורכבת של שחקנים ביולוגיים רבים, כגון המעקף של מחסום דם המוח (BBB) ​​ולברוח מהמוח של פנימי מנגנוני הגנה חיסוניים 10, שאף אחד מהם הוא לחזור בדיוק לשעבר vivo או במערכת במבחנה. לפיכך, ראוי ונאמן במודלים vivo הם קריטיים עבור מחקרים של גרורות במוח. קונבנציונלי ב assay גרורה vivo מציג תאים סרטניים באמצעות הזרקה לוריד זנב, מוביל את רוב התאים שהשתכנו הריאה. נגעי המוח גרורתי לעתים רחוקות מיוצרים דגמים אלה לפני מותו חיה הנגרמת על ידי ניטל גידול בתוך הריאות 11. הזרקה תוך-מוחית ישירה של תאים סרטניים מייצרת תולדת גידול עקבית של מערכת העצבים המרכזי, והוא בשימוש נרחב במחקרים של גליומות עיקרי. עם זאת, sהזרקת uch פוגעת BBB וגורמת פציעה טראומטית באתר הזרקה, הוא נקודות עיקריות של דאגה באשר הרלוונטי הפיזיולוגית של מודל זה. תוואי אחר הקדמה סרטן תאים בשימוש תכוף, הזרקת intracardiac, הוא קל לניהול אין לייצר גרורות ניסיוני אל מערכת העצבים המרכזית. עם זאת, גרורה במקביל לאתרי איבר אחרים מאשר CNS מיוצרים תמיד ועלול לגרום לתמותה חיה 11; לפיכך, הרמה הגבוהה של השתנות של מודל זה עושה את זה מתאים הערכה כמותית של מנגנונים ביולוגיים או סוכנים טיפוליים עם מספר מצומצם של בעלי חיים. כאן אנו מתארים את ההליכים לייצר גרורות במוח ניסיון באמצעות ההזרקה של תאים סרטניים לתוך עורק התרדמה המשותף. השתמשנו בגישה זו כדי לנתח תרומות &#39;גנים בודדים אל מפל גרורתי של גרורות במוח להעריך יעילות של התערבות טיפוליתים 12, 13. יתרונותיו העיקריים של גישה זו הם הרמה הגבוהה של שחזור מידה נמוכה של השתנות; החיסרון העיקרי הוא התחכום והמיומנות הדרושים לביצוע המיקרו-כירורגיה.

<table><tbody><tr><td>תמיסת קטמין הידרוכלוריד/קסילזין הידרוכלוריד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K113</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ שגרתי Leica M50</td><td>Leica</td><td>M50</td><td>המיקרוסקופ הוא מודולרי וניתן להגדרה גבוהה כדי להתאים לדרישות חלל מסוימות.</td></tr><tr><td>סקיפל חד פעמי כירורגי</td><td>Integra Miltex</td><td>4-410</td><td>לביצוע חתכים בעור</td></tr><tr><td>מלקחיים לרקמות - 1 x 2 שיניים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td>לניתוח בוטה של ריריות</td></tr><tr><td>Dumont #5 - מלקחיים בגימור מראה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-23</td><td>להפרדה והכנה של עורק הצוואר להזרקה</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים</td><td>Fine Science Tools</td><td>15025-10</td><td>לחיתוך תפרים</td></tr><tr><td>ערכת קליפ EZ</td><td>Stoelting</td><td>59020</td><td>לקלור פצע</td></tr><tr><td>מזרק אינסולין BD</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>328438</td><td>להזרקת תאים</td></tr><tr><td>ספקטרום IVIS In Vivo מערכת הדמיה</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr></tbody></table>

cell הזרקת הסרטן intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

גרורות, התפשטות וצמיחה של תאים ממאירים באתרים משניים בתוך הגוף של המטופל, מהווה&gt; 90% לתמותה מסרטן. לאחרונה, התקדמות מרשימה טיפולים חדשניים כבר האריכה דראמטי הישרדות ואיכות חיים משופרת עבור חולי סרטן רבים. למרבה הצער, שכיחות ישנת גרורתית המוח היא מהירה עולה, וכל הטיפולים הקיימים כיום הם פליאטיבי בלבד. לפיכך, במודלים של בעלי חיים ניסיוניים טובים יש צורך דחוף כדי להקל מעמיק מחקרים של ביולוגית המחלה ועל מנת להעריך את משטר טיפולי חדשני להערכה פרה-קלינית. עם זאת, סטנדרט assay גרור vivo באמצעות הזרקת זנב וריד של תאים סרטניים מייצר בעיקר גרור ריאות; חיות בדרך כלל נכנעים ניטלים גידול ריאות לפני כל תולדה משמעותית של גרורות במוח. הזרקת intracardiac של תאים סרטניים מייצרת גרורות לאתרי איברים מרובים כולל המוח; עם זאת, variability של הגידול מיוצר עם המודל הזה הוא גדול, ריסון השירות שלה בהערכת יעילות טיפולית. כדי ליצור מודלים של בעלי חיים אמינים ועקביים ללימוד גרור במוח, כאן אנו מתארים תהליך הייצור גרור במוח ניסיוני עכבר הבית (musculus Mus) באמצעות זריקת intracarotid של תאים סרטניים. גישה זו מאפשרת אחד כדי לייצר מספר רב של עכברי מוח גרורי נושאות עם מאפייני צמיחה ותמותה דומים, ובכך להקל על מאמצי מחקר לחקור מנגנונים ביולוגיים בסיסיים ועל מנת להעריך את הסוכנים טיפוליים חדשניים.

ישנן שתי נקודות שבן איכות ההזרקה ניתן להעריך. ההזדמנות הראשונה היא על ידי ההתבוננות של המפעיל של שינוי צבעי כלי דם במהלך הזרקה. דליפת זריקות גרועות ניתן להבחין בקלות תחת מיקרוסקופ לנתח. המיקום יציב ובטוח של הגוף העכבר (איור 1 א) ו העורק הראשי שלה (איור 1B) על כדור צמר גפן התומכים הם גורמים קריטיים להזרקה חלקה ומוצלחת לעורק התרדמה. הנקודה השנייה כדי להעריך את איכות הזריקה היא לאחר ניתוח הדמיה לא פולשנית. לעניין זה, ...

גרורה במוח הפך צורך רפואי דחוף כמו השכיחות שלה גדלה תוך אופציות טיפוליות נותרו פליאטיבי. יצירת מודלים של בעלי חיים הניסיונות של גרורות במוח באמצעות זריקת intracarotid העורקת של תאי סרטן מקל מחקרים מכניסטית של ביולוגית המחלה והערכת משטרי התערבות רומן.

Cell הזרקת הסרטן Intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

המטרה הכללית של הזרקה מיקרו-כירורגית זו של תאי סרטן דרך העורק התרדי היא ליצור מודלים עקביים של גרורות מוחיות ניסיוניות in vivo בעכברים. לפיכך, שיטה זו יכולה לסייע במענה לשאלות מפתח בתחום הגרורות המוחיות, כגון האם טיפול תרפויטי חדש עשוי להפגין יעילות בטיפול בגרורות מוחיות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת יצירת גרורות מוחיות ניסיוניות in vivo עם הדירות גבוהה ושונות נמוכה.בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בטכניקה זו יתקשו בתחילה, מכיוון שנדרש תרגול רב כדי לשמור על יד יציבה להזרקת תאי סרטן לעורק התריס (carotid artery) של עכברים אלו תחת מיקרוסקופ. יש להתחיל את ההליך על ידי זריעה של תאי הסרטן במצע DMEM F12 המועשר ב-10% FPS וגידולם למשך יום עד יומיים לפני ההזרקה. ביום הניתוח, יש להוציא את התאים מהאינקובטור ולקצור אותם כאשר הם מגיעים ל-70% עד 80% confluence, על ידי שטיפה במצע נטול סרום.לאחר מכן, דגרו את התאים עם 0.25%trypsin למשך דקה עד שתי דקות ב-37 °C. לאחר מכן, הוציאו אותם מהאינקובטור והוסיפו לתאים מצע DMEM F12 המכיל 10%FBS כדי לעצור את פעילות ה-trypsin. סבבו את התאים בצנטריפוגה ב-80 ×g למשך שלוש דקות.לאחר מכן, הסר את המצע ושטוף את התאים פעמיים במצע נטול סרום כדי להסיר סרום ששאר. לאחר מכן, ספור את התאים באמצעות המוציטומטר (hemocytometer) ותלה אותם מחדש ב-HBSS. לאחר מכן, שמור את הת

intracarotid-cancer-cell-injection-to-produce-mouse-models-brain

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מדגים השתלה של תאי גידול במוח העכבר על ידי ביצוע הזרקה תוך גולגולתית.

מודל אורתוטופי תוך גולגולתי: הליך להשתלת תאים סרטניים במוח עכבר

סרטון זה מדגים את הקמתו של מודל עכבר גרורות במוח על ידי הזרקה תוך קרוטידית של תאים סרטניים המסומנים באופן פלואורסצנטי. מודל העכבר יכול לשמש לחקר ההשפעות של טיפולים חדשניים ואת המנגנונים הפיזיולוגיים העומדים בבסיסם.

מודל עכבר גרורות במוח: שיטה ליצירת גרורות במוח מודל עכבר על ידי הזרקת תא סרטני תוך קרוטיד

מקור: Lim, M., et al. מידול גרורות במוח על ידי הזרקת עורק הצוואר הפנימי של תאים סרטניים. J. Vis. Exp. (2022)בסרטון זה, עכבר מורדם עובר הליך כירורגי שבו מוזרקים תאים סרטניים לעורק הצוואר המשותף (CCA) כדי להקל על העברה ממוקדת למוח. ההליך כולל תפירה מדויקת ומניפולציה של עורקי הצוואר כדי לכוון את התאים המוזרקים לעבר עורק הצוואר הפנימי (ICA), ולקדם היווצרות גידול במוח לאורך זמן.

מידול גרורות של גידולי מוח באמצעות הזרקת תאים סרטניים בעורק הצוואר הפנימי

מודל שד סרטן מוח גרורות עכבר הוא הקים עם הזרקת intracardiac אולטרסאונד מונחה הדמיה של תאי MDA-MB231/Br-GFP. התפתחות של גרורות תוך גולגולתי multifocal כבר במעקב אורכים באמצעות רזולוציה גבוהה 9.4 T-MRI.

הזרקת intracardiac מונחה ההדמיה אולטראסאונד לפתח מודל עכבר של שד גרורות סרטן מוח ואחריו האורכי MRI

מידול גרורות מוח תוך גולגולתי מסובך על ידי חוסר יכולת לפקח על גודל הגידול ותגובה לטיפול בשיטות מדויקות ובזמן. המתודולוגיה שהוצגה זוגות הזרקת גידול תוך גולגולתי עם ניתוח הדמיית תהודה מגנטית, אשר בשילוב, מטפח זריקות מדויקות ועקביות, ניטור משופר של בעלי חיים, ומדידות מדויקות של נפח הגידול.

מידול גרורות מוח באמצעות הזרקה תוך גולגולתית והדמיית תהודה מגנטית

אנו מתארים מודל עכבר xenograft של גרורות במוח של סרטן השד שנוצרו באמצעות הזרקת ורידים בזנב של קו תאי סרטן שד דלקתי מוגבר אנדוגניים HER2.

מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

גרורות במוח הן גורם לתחלואה קשה ולתמותה בחולי סרטן. רוב המודלים של עכברי גרורות במוח מסובכים על ידי גרורות מערכתיות מבלבלות ניתוח של תמותה ותוצאות התערבות טיפולית. מוצג כאן פרוטוקול להזרקת קרוטיד פנימית של תאים סרטניים המייצר גידולים תוך גולגולתיים עקביים עם גידולים סיסטמיים מינימליים.

מידול גרורות במוח על ידי הזרקת עורק הצוואר הפנימי של תאים סרטניים

גידולים במערכת העצבים המרכזית (CNS) הם הגורם המוביל למוות הקשור לסרטן בקרב ילדים, וטיפולים מבוססי מערכת החיסון נבדקים יותר ויותר עבור חולים בניסויים קליניים. פרוטוקול זה מתאר שיטות להשתלת צינורית לוקו-אזורית בעכברים לצורך הערכה פרה-קלינית של עירויים אימונותרפיים המכוונים לגידולים במערכת העצבים המרכזית.

השתלת צינורית תוך גולגולתית עבור קולטן אנטיגן כימרי טורי (CAR) עירוי תאי T בעכברים

תיקון עורק התרדמה במודל עכברי לאחר הזרקה מחזיר את זרימת הדם לעורק מבלי להשפיע לרעה על פיזור החומר המוזרק. תיקון אתר ההזרקה מאפשר זריקות עוקבות דרך אותו עורק ומונע איסכמיה מוחית בזני עכברים חסרי מעגל שלם של וויליס.

הקלה על הזרקות חוזרות תוך קרוטיד במודלים של עכברים על ידי טכניקת תיקון אתר הזרקה חדשנית

כתב יד זה מספק את ההליך המפורט של הזרקת עורק תוך כסל (IIA), טכניקה להעברת תאים סרטניים במיוחד לרקמות הגפיים האחוריות כולל עצמות כדי ליצור גרורות ניסיוניות בעצמות. למרות שהוקם בתחילה עם מודלים של גידולי שד, ניתן להרחיב פרוטוקול זה בקלות לסוגי סרטן אחרים.

הזרקת עורק Intra-כסל עבור דוגמנות יעילה וסלקטיבי של מיקרוסקופיים עצם גרור

למד טכניקת הזרקת תאי סרטן תוך עורקית ליצירת מודלי גרורות מוח בעכברים. שיטה זו מאפשרת שחזוריות גבוהה ומגוון נמוך בתוצאות, ומסייעת בבדיקת טיפולים חדשים לגרורות מוח.

Cell הזרקת הסרטן Intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור

גלה סרטונים נוספים