Name: השתלת עור בעובי מלא Murine (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: למדו השתלת עור בעובי מלא בעכברים לחקר תגובות חיסון אלוגניות ודחיית שתלים. שיטה זו מאפשרת מעקב ישיר אחרי מצב השתל ומספקת מודל אמין להערכת תגובות חיסוניות בביולוגיית השתלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי NIH מענק R01AI077610.

כל הנהלים בוצעו בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המכון הלאומי לבריאות (NIH) ואושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת ג&#39;ונס הופקינס ושימוש (JHUACUC). הנהלים הספציפיים בוצעו תחת MO13M292 פרוטוקולי ACUC המאושרות MO13M370. קציר עור תורם 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר התורם עם isoflurane (מאדה אינדוקציה ב 4% אחזקה ל 1 - 2% דרך חרוט העכבר). השתמש רפלקס נסיגת קמצוץ בוהן כדי לפקח על עומק ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מכונת גילוח חשמלית, לגלח את הגב של החיה ולחטא אותו ביוד povidone 10% (למשל, בבטאדין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספרי סטריליות, כפפות, וטכניקה ספטית, עור בחזרה תורם קציר ממותן עד הצוואר, עם דיסקציה קהה ברמה של רקמת חיבור areolar. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדימו על ידי נקע בצוואר הרחם לאחר קצירתשתל עור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ, להפריד את רקמת חיבור, רקמת שומן, מִרפָּד carnosus מהעור בחזרה באמצעות מספרי tenotomy בסדר. Carnosus מִרפָּד הוא שריר דק, שקוף אחראי תנועות מתעוות עור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות טכניקה בכלים סטריליים, לגזור שתלי 15 מ&quot;מ x 15 מ&quot;מ מהעור בחזרה במשך 10 מ&quot;מ 10 מ&quot;מ x 15 מ&quot;מ x המיטה שתל 15 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את השתלים על gauzes ספוגה פוספט שנאגר המלוח סטרילית (PBS) בצלחת פטרי על קרח. הערה: 8 - 10 שתלים ניתן להשיג עכבר תורם אחד. </li></ol> השתלת 2. נמען עור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר הנמען עם isoflurane (מאדה אינדוקציה ב 4% אחזקה ל 1 - 2% דרך חרוט העכבר). השתמש רפלקס נסיגת קמצוץ בוהן כדי לפקח על עומק ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל 0.02 מ&quot;ג / ק&quot;ג BW של עצירות להקלה על הכאב לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הצד של החלק האחורי של החיה שבו wi שתלll להיות מוכנס ולחטא עם יוד povidone 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים, לחתוך 10 מ&quot;מ x 10 מ&quot;מ עד 15 מ&quot;מ x 15 מ&quot;מ מרובע של העור. גודל הפגם צריך להיות מעט גדול (10%) מאשר את השתל. גזור באופן שטחי ככל האפשר. תשמור על עצמך כדי לשמר את מִרפָּד carnosus וכלי. Carnosus מִרפָּד ניתן להבחין מן fascia הבסיסית על ידי הניידות שלה ואת כלי הדם שמופעלים שטחי אליו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את השתל על מיטת השתל, הימנעות קפלים בשולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח 8 תפרים על הפינות על האמצע של כל קצה. עבור כל תפר, להעביר את המחט דרך השתל ולאחר מכן דרך carnosus מִרפָּד של השתל למיטה מתחת לעור הנמען שמסביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מסכת ההרדמה ולתת החיה להתאושש חלקית מן ההרדמה לפני החלת פלסטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עוטף את עכבר נמען תחבושת דבקה עם גזה מקופלת על השתל. הפוך את התחבושת על ידי שילוב של שתי תחבושות, חיתוךהחלק הדבק של אחד והעמיד יחד שתי רפידות סופגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג את העכבר מקרוב במהלך שחזור כדי להבטיח את התחבושת אינה הגבלת טיול חזה ונושמת. הסר את התחבושת אם קצב הנשימה פוחת או החיה מתחילה להשתנק או נשימה שטחית. </li></ol> 3. טיפול לאחר הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל Enrofloxacin 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג לאחר ניתוח טיפול מונע זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את העכבר המושתל בתוך כלוב נקי מעל כרית חימום במיקרוגל עד שהוא מתאושש לחלוטין מן ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכבר עבור שעה 1 לאחר ניתוח לפני החזרת אותו למוקד הדיור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבעה ימים לאחר הניתוח, להרדים את העכבר כמו בשלב 2.1. הסר את התחבושת על ידי חיתוך רק דרך צד הגחון של התחבושת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתבונן למשש את השתל למחרת סימנים של scabbing, התכווצות, או קשיות. אם הווה, את השתל אולי לא נחל vasculariza הנאהtion וצריך להיחשב כשל טכני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג יום סימנים של דחייה. שקול שתלי דחה כאשר ≥90% של רקמת שתל הופך נמקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיות דחו ולקצור אותם לניתוח. </li></ol>

<ol><li>Furtmuller, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+Hind+Limb+Transplantation+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse.</a> J Vis Exp. , (2016).</li>
<li>Oh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Microsurgical+Model+for+Heterotopic%2C+En+Bloc+Chest+Wall%2C+Thymus%2C+and+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice.</a> J Vis Exp. , (2016).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. , e50753(2014).</li>
<li>Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+identifies+selectins+that+regulate+T+cell+traffic+into+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts.</a> J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).</li>
<li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+innate+and+adaptive+immune+responses+underlying+allograft+rejection+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy.</a> Nat Med. 17, 744-749 (2011).</li>
<li>Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behaviour+and+fate+of+skin+autografts+and+skin+homografts+in+rabbits%3A+A+report+to+the+War+Wounds+Committee+of+the+Medical+Research+Council%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council.</a> J Anat. 78, 176-199 (1944).</li>
<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+studies+on+tissue+transplantation+immunity.+I.+The+survival+times+of+skin+homografts+exchanged+between+members+of+different+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice.</a> Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).</li>
<li>Garrod, K. R., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+skin+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine skin transplantation.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+tail+skin+to+study+allogeneic+CD4+T+cell+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice.</a> J Vis Exp. , e51724(2014).</li>
<li>Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+numbers+and+distribution+of+Langerhans+cells+in+skin+with+unique+immunologic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties.</a> J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).</li>
<li>Chen, H. D., Silvers, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+Langerhans+cells+on+the+survival+of+H-Y+incompatible+skin+grafts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats.</a> J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).</li>
<li>Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+and+limits+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Lessons and limits of mouse models.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495(2013).</li>
<li>Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+technique+for+experimental+free+skin+grafting+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Surg%22%5BJournal%5D)">A surgical technique for experimental free skin grafting in mice.</a> Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).</li>
<li>McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Skin allograft rejection.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).</li>
<li>Lee, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+Allograft+Rejection+by+Targeting+Immune+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism.</a> Cell reports. 13, 760-770 (2015).</li>
<li>Pollizzi, K. N., Powell, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+canonical+and+metabolic+signalling+programmes+in+the+regulation+of+T+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses.</a> Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).</li>
<li>Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fueling+immunity%3A+insights+into+metabolism+and+lymphocyte+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function.</a> Science. 342, 1242454(2013).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

מאז השקתו ידי מךוואר, ראשון במחקרים בבני אדם ולאחר מכן בארנבות ועכברים, השתלת עור כבר מודל יסולא בפז לחקר תגובות חיסוניות אלוגנאית 6,7. בכתב היד הזה, אנו מציגים מודל של בקנה מידה גדול, הלא vascularized, השתלת עור בעובי מלא באמצעות העור הגב העליון והתחתון. שיטות חלופיות שונות, לרבות באמצעות עור הזנב או עור אוזן של העכבר כמקור רקמות השתל, דווחו עד היום 8,9. מודלים אלה מרחיבים את היתרון הברור של פשטות טכנית ולאפשר העברת נתונים גבוהים כרכים. המחסור היחסי של תאי א...

השתלת איברים היא טיפול הבחירה בחולים עם כשל איברים סופנית, ותוצאות השתפרו פלאים עם ההתקדמות ניתוחים ופרוטוקולים דיכוי חיסוני. עם זאת, דיכוי מערכת חיסוני לטווח ארוך קשור לתופעות לוואי משמעותיות, לבין ההתפתחות של אסטרטגיות חדשות המקדמות סובלנות נשארת מטרת מחקר השתלה המודרנית. במודלים של בעלי חיים רבים פותחו למחקר בסיסי בהשתלות, כדי לחקור את המנגנונים של דחייה של השתל וכדי לבחון גישות דיכוי חיסוני למניעת דחיית שתל ו לקידום סובלנות לטווח ארוך 1-3. מודלי העכבר הפכו התווך של מחקר האימונולוגי בשל הזמינויות הבלעדיות מכריעות של נוגדני אבחון וטיפול ומוגדרים היטב זנים טהורים ו מהונדסים. השתלת עור היא הליך פשוט שאינו דורש מיומנויות microsurgical מיוחדות והוא יכולבקלות להיות במעקב אחרי הניתוח. יחדיו, השתלת עור העכבר כבר כלי יוצא דופן ללמוד היבטים רבים המעורבים בתגובה alloimmune, כולל משלוח אנטיגן, סחר התא, והרס רקמות במהלך דחיית שתל 4,5. כאן, אנו מציגים את הצעד-אחר-צעד הליך השתלת עור בעובי מלא תוך שימוש במודל העכבר, אנו מתארים את הצעדים החשובים הכרחיים עבור engraftment מוצלח של העור המושתל.

<table><tbody><tr><td>ישר מיקרו מלקחיים</td><td>Sigma</td><td>F4017</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו מלקחיים מעוקלים</td><td>Aesculap</td><td>BD333R</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מעוקלים סטיבנס טנוטומיה</td><td>Aesculap</td><td>BC905R</td><td></td></tr><tr><td>מאיו מספריים לניתוח</td><td>Sigma</td><td>S3146</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט מיקרו</td><td>Aesculap</td><td>BM563R</td><td></td></tr><tr><td>גזה סטרילית</td><td>Covidien</td><td></td><td></td>441218</tr><tr><td>6-0 תפר ניילון</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>רצועות פלסטיק להקה&#45; סיוע</td><td>לג'ונסון & ג'ונסון</td><td></td><td>שהושג מבית מרקחת</td></tr><tr><td>צלחת פטרי 10 ס"מ</td><td>פישרברנד</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>איכות ביולוגית</td><td>119069131</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td></td><td></td><td>מספר DEA נדרש; מושג מבית המרקחת של בית החולים</td></tr><tr><td>Enrofloxacin</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלת עור בעובי מלא murine

Murine Full-thickness Skin Transplantation

השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל in vivo ומבוסס ללמוד alloimmune תגובת דחיית שתל. למרות היישום המוגבל שלה לבני אדם, השתלת עור בעכברים הועסקה נרחבת למחקר השתלה. הנוהל הוא קל ללמוד ולבצע, וזה אינו דורש טכניקות מייקרו עדינות ולא הכשרה מקיפה. יתר על כן, דחיית שתל במודל זה מתרחשת תגובה אימונולוגית מאוד לשחזור מנוטר בקלות על ידי בדיקה ישירה ומישוש. בנוסף, השתלת עור משני עם שתלים בהתאמה או צד שליש עור יכולה להתבצע על מודלי השתלה מורכבים יותר כמו שיטה חלופית ולא מסובכת להעריך סובלנות תורם ספציפי. הסיבוכים נמוכים והם בכלל מוגבלים יתר הרדמה או מצוקה נשימתית לאחר ההליך. לכישלון השתל, מצד שני, בדרך כלל מתרחשת כתוצאה הכנה לקויה של גרמיצוב ומאחור, שגוי במיטת השתל, או מיקום לא ראוי של התחבושת. במאמר זה, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת עור בעובי מלא בעכברים ולתאר הצעדים החשובים דרושי הליך מוצלח.

המיקום של התחבושת על עכבר הנמען הוא צעד חשוב של ההליך. שתל עור ממוקם על גזע הנמען, בין הכתף, הירך ועמוד השדרה (איור 1). התחבושת הוא עשה עם גזה מקופלת ושילוב של שתי תחבושות דבקות פלסטיק. עכבר הנמען מושם עם השתל למטה על הגזה על המרכז את התחבושת. שימוש בשני מלקחי מייקרו מעוקלים, בקצה התחתון של התחבושת הוא המשך ראשון, ולאחר מכן את החלק העליון של התחבושת הוא עטוף על העכבר כדי בבטן. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pag...

השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל ומבוסס ללמוד דחייה בסביבת alloimmune. כאן, אנו מספקים הדרכה של כל שלב המעורב בביצוע BALB / ג - השתלת עור&gt; C57BL / 6 בעובי מלא.

השתלת עור בעובי מלא Murine

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

המטרה הכללית של מאמר וידאו זה היא לבצע השתלה של עור בעובי מלא, ולתאר את השלבים החשובים הדרושים להליך מוצלח. השתלת עור בעובי מלא בעכברים היא מודל מבוסס לחקר תגובות אלואימוניות ודחיית שתלים. ההליך פשוט לביצוע ואינו דורש טכניקות מיקרו-כירורגיות עדינות.דחיית השתלה, במודל זה, מתרחשת כתגובה אימונולוגית הניתנת לשחזור רב, וניתן לנטרה בקלות באמצעות בדיקה ישירה ומישוש. בנוסף, ניתן לבצע השתלת עור משנית עם גרפטים של עור תואם לתורם או מצד שלישי במודלי השתלה מורכבים יותר, כשיטה חלופית ופשוטה להערכת סבילות ספציפית לתורם. לאחר הרדמת עכבר תורם בהתאם לפרוטוקול הכתוב, השתמש במכונת גילוח חשמלית כדי לגלח את גב בעל החיים.חטא את העור באמצעות 10% povidone-iodine. בעזרת מספריים ודיסקציה קהה, קצור את עור הגב של התורם מהירך ועד לצוואר בגובה הרקמה החיבורית האריאולרית. הנח את עור הגב תחת מיקרוסקופ, והשתמש במספרי טנוטומיה עדינים כדי להפריד את הרקמה החיבורית ואת ה-panniculus carnosus מהעור.גזרו שתלים בגודל 15 על 15 מילימטר מהעור של הגב עבור מיטת השתלה בגודל של 10 על 10 עד 15 על 15 מילימטר. אחסנו את השתלים על גזה ספוגה ב-PBS בתוך צלחת פטרי, והניחו אותה על קרח. הרדימו את העכבר המקבל בהתאם לפרוטוקול הכתוב.גלחו את צידו האחורית של בעל החיים, במקום שבו תושב הש Transplant, ולאחר מכן ניתן 0.02 מיליגרם לקילוגרם של buprenorphine להקלה על כאבים לאחר הניתוח. השתמשו ב-10% povidone-iodine לחיטוי האזור. בעזרת מספריים, ובצורה השטחית ביותר האפשרית, גזרו ריבוע עור בגודל של 10 על 10 עד 15 על 15 מילימטר.הקפידו לשמור על ה-panniculus carnosus ועל כלי הדם העוברים שטחיים לו. לאחר מכן, מקמו את הש transplanted על מצע השתלה, תוך הימנעות מקפלים לאורך הקצוות. לאחר מכן, הניחו שמונה תפרים בפינות השתלה ובמרכז כל אחד מהקצוות, על ידי העברת המחט דרך השתלה ולאחר מכן דרך ה-panniculus carnosus של מצע השתלה, מתחת לעור המקבל מסביב.הניחו גזה מקופלת מעל תחבשה כפולה, ולאחר מכן מקמו את בעל החיים על התחבשה, כאשר צד השתל פונה כלפי מטה, והסירו את מסכת ההרדמה כדי לאפשר לבעל החיים להתאושש חלקית. לאחר מכן, גלגלו את התחבשה סביב בעל החיים. הגורם הקריטי ביותר בתהליך השתבצות השתל הוא רבסכולריזציה של רקמת השתל באמצעות צמיחה פנימה של כלי דם מהמארח אל השתל.הנתיחה של ה-panniculus carnosus והנחתו הנכונה של התחבושת הם השלבים החשובים ביותר. מיד לאחר הניתוח, ניתן 5 milligrams per kilogram של enrofloxacin למניעת זיהומים. מקמו את העכבר המשתול בכלוב נקי עד להחלמתו המלאה מההרדמה.יש לעקוב אחר העכבר במשך שעה אחת לאחר הניתוח, לפני החזרתו למתקן הגידול. יש לנטר את העכבר מקרוב במהלך ההתאוששות כדי לוודא שהתחבושת אינה מגבילה את תנועת בית החזה ואת הנשימה. שמונה ימים לאחר מכן, יש לבחון ולמשש את השתל כדי לזהות סימנים של קשרית, התכווצות או קשיות.אם מופיעים מי הסימנים הללו, ייתכן שהש transplanted לא השיג וסקולריזציה תקינה, ויש להחשיב זאת ככישלון טכני. יש לנטר את הש transplanted מדי יום כדי לזהות סימני דחייה. הש transplanted ייחשב כנדחה כאשר 90% או יותר מרקמת הש transplanted תהפוך לנקרוטית.במודלים של חוסר התאמה מלא, השתמרות של השתמרות עור בעובי מלא נדחית בדרך כלל תוך שמונה עד 12 ימים. במודלים של חוסר התאמה חלקי, תגובות הדחייה הן איטיות יותר, משתנות יותר, ומראה הש Transplant מאופיין בשינויים פחות מובהקים, כגון התכווצות או איבוד שיער. דחייה חריפה של השתמרות מתחילה בדרך כלל בבפיחה ובאריתמה של השתמרות.לאירועים אלו עוקבים ייבוש של הש transplanted, היווצרות קשרית והתכווצות, כפי שניתן לראות כאן. בהתאם למידת חוסר ההתאמה של ה-MHC ולפרוטוקול הדיכוי החיסוני, דחייה עשויה להתרחש בתהליך סב-אקוטי המאופיין בשינויים עדינים, כגון איבוד שיער, פיגמנטציה, רכסים עוריים ונפח הש transplanted. במקרים אלו, הש transplanted שנדחה נראה מבריק, לבן ונטול שיער, עם קצוות לא אחידים.תוך שימוש בעכברים מסוג BALB/c כתורמים וב-C57 black 6 כקבלי השתלה, נצפתה תוצאה לפיה עיכוב הגליקוליזה והפוספורילציה החמצונית, או עיכוב של מטבוליזם הגלוטמין לבדו, האריכו את הישרדות השתל העורי. עם זאת, חסימה של שלושת המסלולים בו-זמנית הובילה להגדלה משמעותית של הישרדות השתל. יתרה מכך, טיפול מטבולי משולש היה יעיל יותר משימוש קונבנציונלי ב-cyclosporine או ב-rapamycin.בנוסף, ההיסטולוגיה של השתולי עור מקבוצת הטיפול המטבולי הראתה יישור רקמה שלם יותר, ופחות חדירה דלקתית לימפוציטית, בהשוואה לרקמה שלא טופלה. תוצאות של השתלות איברים השתפרו באופן ניכר עם ההתקדמות בפרוצדורות כירורגיות ובפרוטוקולים של דיכוי חיסוני. עם זאת, דיכוי חיסוני ארוך טווח קשור לתופעות לוואי משמעותיות, ואסטרטגיות חדשות המקדמות סבילות נותרות המטרה של מחקר ההשתלות המודרני.חשיבותו של חילוף החומרים (מטבוליזם) בוויסות תאי T ידועה היטב. על ידי עיכוב של גליקוליזה, פוספורילציה חמצונית ומטבוליזם של גלוטמין, הצלחנו להגדיל משמעותית את הישרדות השתל האלוגנאי (allograft). גישה חדשנית זו הייתה יעילה יותר מהטיפול הקונבנציונלי, והיא מייצגת שינוי פרדיגמה בגישה הפוטנציאלית לוויסות חיסוני ולהשתלות.

murine-full-thickness-skin-transplantation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--&gt; השתלת C57BL / 6 העור.

השתלת עור Murine

בדו"ח זה, אנו מתארים את העור תלת ממדי לשחזר מודל אשר מחקה העור האנושי באדריכלות הרכב. הפיזיולוגיה מלנוציט, התקדמות מלנומה גורל בתאי גזע עורי נחקרו באמצעות העור לשחזר מודל. המודל שימושית גם ככלי קליני להערכת תרופות.

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

סרטון זה מדגים שיטה להשתלת עור אנושי על עכבר מדוכא חיסון עם תגובת נויטרופילים מדוכאת. השיטה כוללת מריחת עור אנושי בעובי מפוצל על מיטת השתל של העכבר, אטימתו וכיסויו להתאוששות. בסופו של דבר, העור האנושי נצמד לעור העכבר, מבסס את כלי הדם ואת זרימת הדם, וכתוצאה מכך קסנוגרפט עור מוצלח.

טכניקה להשתלת עור אנושי במודל עכבר

כלי דם הוא מפתח לגישות בהנדסת רקמות מוצלחת. לכן, טכנולוגיות אמינות נדרשות כדי להעריך את ההתפתחות של רשתות כלי דם ברקמות מבנים. כאן אנו מציגים שיטה פשוטה, יעיל וחסכונית כדי לחזות ולכמת כלי דם בגוף חי.

עור מלא פגמים דגם להערכת כלי דם של Biomaterials<em&gt; בVivo</em

השתלת עור זנב היא מודל רב עוצמה לחקר דחייה תלויה בתאי T והשראת סבילות במהלך תגובות חיסוניות אלוגניות בעכברים. היתרונות של פרוטוקול זה הם ניתוח פולשני קל, וקלות ניטור ללא צורך להקריב את העכבר המקבל.

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

במהלך התפתחות היונקים, פצעי עור הריון מוקדמים נרפאים ללא צלקת. כאן אנו מפרטים מודל אמין וניתן לשחזור של ריפוי פצעים עובריים ללא צלקת בגב העורי של עוברי עכברים E16.5 (ללא צלקת) ו-E18.5 (צלקות).

דגם עור עכבר עוברי של תיקון פצע צלקות

מטרת המחקר הזה היתה לפתח מודל מורטין של ריפוי פצע כוויות. כוויה תרמית המושרה על העור החלק של עכברים באמצעות תבנית פליז מחומם מראש. הרקמה הנשרפה הייתה מצופה בשתל עור שנקטפו מזנבו של עכבר תורם דומה גנטית.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתיל עור אנושי בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD)-scid interleukin-2 קולטן שרשרת גמא (NSG). בדו"ח נכללים תיאור מפורט של הכנת עור אדם להשתלה, הכנת עכברים להשתלה, השתלת עור אדם בעובי מפוצל והליך התאוששות לאחר ההשתלה.

מודל Xenograft לעור למניפולציה של תגובות חיסוניות אנושיות in vivo

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

אנו מציגים מודל עכבר שניתן לשחזור של אלוטרנסלנטציה מורכבת של גפיים אחוריות לצוואר הטרוטופית. פרוטוקול סופר-מיקרוכירורגי זה, הכולל אנסטומוזות כלי דם בקוטר 0.3-0.5 מ"מ, משלב הנחיית חוטי ניילון ושרוול ורידי. הוא מספק פלטפורמה אמינה למחקרים תרגומיים על סבילות, פגיעות איסכמיה-רפווזיה, ומנגנונים אימונולוגיים באלוטרנסרפלנטציה של כלי דם מרוכב.

השתלת גפה אחורית לצוואר הטרוטופית בעכבר: מודל סופר-מיקרוכירורגי של אלוטרנספלינצ'נציה מורכבת וסקולרית

למדו השתלת עור בעובי מלא בעכברים לחקר תגובות חיסון אלוגניות ודחיית שתלים. שיטה זו מאפשרת מעקב ישיר אחרי מצב השתל ומספקת מודל אמין להערכת תגובות חיסוניות בביולוגיית השתלות.

השתלת עור בעובי מלא Murine

גלה סרטונים נוספים