השתלת עור בעובי מלא Murine

המטרה הכללית של מאמר וידאו זה היא לבצע השתלה של עור בעובי מלא, ולתאר את השלבים החשובים הדרושים להליך מוצלח. השתלת עור בעובי מלא בעכברים היא מודל מבוסס לחקר תגובות אלואימוניות ודחיית שתלים. ההליך פשוט לביצוע ואינו דורש טכניקות מיקרו-כירורגיות עדינות.

דחיית השתלה, במודל זה, מתרחשת כתגובה אימונולוגית הניתנת לשחזור רב, וניתן לנטרה בקלות באמצעות בדיקה ישירה ומישוש. בנוסף, ניתן לבצע השתלת עור משנית עם גרפטים של עור תואם לתורם או מצד שלישי במודלי השתלה מורכבים יותר, כשיטה חלופית ופשוטה להערכת סבילות ספציפית לתורם. לאחר הרדמת עכבר תורם בהתאם לפרוטוקול הכתוב, השתמש במכונת גילוח חשמלית כדי לגלח את גב בעל החיים.

חטא את העור באמצעות 10% povidone-iodine. בעזרת מספריים ודיסקציה קהה, קצור את עור הגב של התורם מהירך ועד לצוואר בגובה הרקמה החיבורית האריאולרית. הנח את עור הגב תחת מיקרוסקופ, והשתמש במספרי טנוטומיה עדינים כדי להפריד את הרקמה החיבורית ואת ה-panniculus carnosus מהעור.

גזרו שתלים בגודל 15 על 15 מילימטר מהעור של הגב עבור מיטת השתלה בגודל של 10 על 10 עד 15 על 15 מילימטר. אחסנו את השתלים על גזה ספוגה ב-PBS בתוך צלחת פטרי, והניחו אותה על קרח. הרדימו את העכבר המקבל בהתאם לפרוטוקול הכתוב.

גלחו את צידו האחורית של בעל החיים, במקום שבו תושב הש Transplant, ולאחר מכן ניתן 0.02 מיליגרם לקילוגרם של buprenorphine להקלה על כאבים לאחר הניתוח. השתמשו ב-10% povidone-iodine לחיטוי האזור. בעזרת מספריים, ובצורה השטחית ביותר האפשרית, גזרו ריבוע עור בגודל של 10 על 10 עד 15 על 15 מילימטר.

הקפידו לשמור על ה-panniculus carnosus ועל כלי הדם העוברים שטחיים לו. לאחר מכן, מקמו את הש transplanted על מצע השתלה, תוך הימנעות מקפלים לאורך הקצוות. לאחר מכן, הניחו שמונה תפרים בפינות השתלה ובמרכז כל אחד מהקצוות, על ידי העברת המחט דרך השתלה ולאחר מכן דרך ה-panniculus carnosus של מצע השתלה, מתחת לעור המקבל מסביב.

הניחו גזה מקופלת מעל תחבשה כפולה, ולאחר מכן מקמו את בעל החיים על התחבשה, כאשר צד השתל פונה כלפי מטה, והסירו את מסכת ההרדמה כדי לאפשר לבעל החיים להתאושש חלקית. לאחר מכן, גלגלו את התחבשה סביב בעל החיים. הגורם הקריטי ביותר בתהליך השתבצות השתל הוא רבסכולריזציה של רקמת השתל באמצעות צמיחה פנימה של כלי דם מהמארח אל השתל.

הנתיחה של ה-panniculus carnosus והנחתו הנכונה של התחבושת הם השלבים החשובים ביותר. מיד לאחר הניתוח, ניתן 5 milligrams per kilogram של enrofloxacin למניעת זיהומים. מקמו את העכבר המשתול בכלוב נקי עד להחלמתו המלאה מההרדמה.

יש לעקוב אחר העכבר במשך שעה אחת לאחר הניתוח, לפני החזרתו למתקן הגידול. יש לנטר את העכבר מקרוב במהלך ההתאוששות כדי לוודא שהתחבושת אינה מגבילה את תנועת בית החזה ואת הנשימה. שמונה ימים לאחר מכן, יש לבחון ולמשש את השתל כדי לזהות סימנים של קשרית, התכווצות או קשיות.

אם מופיעים מי הסימנים הללו, ייתכן שהש transplanted לא השיג וסקולריזציה תקינה, ויש להחשיב זאת ככישלון טכני. יש לנטר את הש transplanted מדי יום כדי לזהות סימני דחייה. הש transplanted ייחשב כנדחה כאשר 90% או יותר מרקמת הש transplanted תהפוך לנקרוטית.

במודלים של חוסר התאמה מלא, השתמרות של השתמרות עור בעובי מלא נדחית בדרך כלל תוך שמונה עד 12 ימים. במודלים של חוסר התאמה חלקי, תגובות הדחייה הן איטיות יותר, משתנות יותר, ומראה הש Transplant מאופיין בשינויים פחות מובהקים, כגון התכווצות או איבוד שיער. דחייה חריפה של השתמרות מתחילה בדרך כלל בבפיחה ובאריתמה של השתמרות.

לאירועים אלו עוקבים ייבוש של הש transplanted, היווצרות קשרית והתכווצות, כפי שניתן לראות כאן. בהתאם למידת חוסר ההתאמה של ה-MHC ולפרוטוקול הדיכוי החיסוני, דחייה עשויה להתרחש בתהליך סב-אקוטי המאופיין בשינויים עדינים, כגון איבוד שיער, פיגמנטציה, רכסים עוריים ונפח הש transplanted. במקרים אלו, הש transplanted שנדחה נראה מבריק, לבן ונטול שיער, עם קצוות לא אחידים.

תוך שימוש בעכברים מסוג BALB/c כתורמים וב-C57 black 6 כקבלי השתלה, נצפתה תוצאה לפיה עיכוב הגליקוליזה והפוספורילציה החמצונית, או עיכוב של מטבוליזם הגלוטמין לבדו, האריכו את הישרדות השתל העורי. עם זאת, חסימה של שלושת המסלולים בו-זמנית הובילה להגדלה משמעותית של הישרדות השתל. יתרה מכך, טיפול מטבולי משולש היה יעיל יותר משימוש קונבנציונלי ב-cyclosporine או ב-rapamycin.

בנוסף, ההיסטולוגיה של השתולי עור מקבוצת הטיפול המטבולי הראתה יישור רקמה שלם יותר, ופחות חדירה דלקתית לימפוציטית, בהשוואה לרקמה שלא טופלה. תוצאות של השתלות איברים השתפרו באופן ניכר עם ההתקדמות בפרוצדורות כירורגיות ובפרוטוקולים של דיכוי חיסוני. עם זאת, דיכוי חיסוני ארוך טווח קשור לתופעות לוואי משמעותיות, ואסטרטגיות חדשות המקדמות סבילות נותרות המטרה של מחקר ההשתלות המודרני.

חשיבותו של חילוף החומרים (מטבוליזם) בוויסות תאי T ידועה היטב. על ידי עיכוב של גליקוליזה, פוספורילציה חמצונית ומטבוליזם של גלוטמין, הצלחנו להגדיל משמעותית את הישרדות השתל האלוגנאי (allograft). גישה חדשנית זו הייתה יעילה יותר מהטיפול הקונבנציונלי, והיא מייצגת שינוי פרדיגמה בגישה הפוטנציאלית לוויסות חיסוני ולהשתלות.