Name: מיקרוסקופית Intravital ו אינדוקציה פקיק ב התנוך של עכבר חסר שיער (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: למד מיקרוסקופיה פלואורסצנטית intravital להיווצרות פקיקים בכלי דם זעירים באוזן עכבר SKH1-Hrhr. שיטה זו מאפשרת מחקר תרופות ואזואקטיביות וזיהוי חומרים אנטי-תרומבוטיים חדשים למניעת סיבוכי ספסיס והשתלות רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

יש המחברים שום תודות.

כל הניסויים vivo ב (7221.3-1-006 / 15) נערכו בהתאם לחקיקה גרמנית על הגנה על בעלי חיים מדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (Institute of Resources בחיות מעבדה, המועצה הלאומית למחקר). שמירת 1. כללי של בעלי החיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הניסויים עם עכברים SKH1-HR HR זכר בגילאי 4 עד 6 שבועות. משתמשים בבעלי חיים עם משקל בין 20 ו 25 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את החיות במתקן הפתוגן נטול בתנאים סטנדרטיים של 24 עד 26 מעלות צלזיוס וכ לח 60% ביחס, עם גישה קבועה כדי כרצונך מים ומזון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור עד חמש חיות זכר בכלוב אחד. ספקו מצעים וחומר העשרה במהלך הדיור של בעלי חיים ורווחתם. </li></ol> 2. סידור מכוון של בעלי החיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול עכבר וטען את התרופה המתאימה (למשל, קנבינואידים, 5 מ &#39;משקל גוף g / kg (BW)) לתוך מזרק אינסולין. נהל דק תרופת 30 לפני גיוס פקיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על ידי החזקת הצוואר של העכבר בין האגודל לבין האצבע המורה ואת הזנב של העכבר עם האצבע הקטנה, למתוח את החיה ואת להזריק את התרופה intraperitoneally (IP) לתוך ברבע השמאלי התחתון של הבטן. שים את החיה בחזרה לתוך הכלוב עבור 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן הרדמה עם קטמין (90 מ&quot;ג / ק&quot;ג BW) ו xylazine (25 מ&quot;ג / ק&quot;ג BW). 15 דקות לפני אינדוקציה פקיק, להרדים את העכבר. שים את העכבר בכלוב, למשוך את הזנב מעט, ולהזריק את ip הרדמה עם מזרק אינסולין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכבר בחזרה לתוך הכלוב עד תחילת ההרדמה. כדי לאמת הרדמה מספיק, לצבוט את הזנב עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען 0.05 מ&quot;ל של dextran isothiocyanate שכותרתו והעמסת מופשר (FITC-dextran; 5%, 150 KDA) לתוך מזרק אינסולין. תוך מילוי המזרק, להבטיח כי אין בועות אוויר להישאר, כי intravenousl הקטנה אפילוy (iv) בועות אוויר -administered יכול להיות קטלני עבור החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר הרדים על צלחת חימום בעמדה כלפי מטה. התאם את צלחת חימום עד 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שם משחת עיניים על הקרנית של העכבר. לחטא את העור ולהשתמש בכלים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Stitch שני תפרים של פוליפרופילן 7/0 לתוך קצה הגולגולת ואת הזנב של האוזן הימנית. מניח את התפרים קרובים לקצה וכפי הפרוקסימלי לבסיס ככל האפשר (1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכבר למצב הגבי. לתקן את כל הרגליים לפלטפורמת acrylglass באמצעות רצועות דבקות. הוק תפר תחת השיניים הקדמיות ולמקם את הראש ב dorsiflexion ידי דבק תפר את acrylglass עם רצועות דבקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Translocate חיה על הפלטפורמה תחת סטראו הפעולה. השתמש גדלת 16X. </li></ol> 3. הכנת וריד הצוואר שמאל הזרקת FITC-dextran הערה: מיקרופוןroscopy של האוזן הימנית, להכין את וריד הצוואר השמאלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל, ליצור חתך 5 מ&quot;מ בעור בצד השמאלי של הצוואר לכיוון סקראל הזנב. לנתח את הרקמה התת עורית עם microforceps ו microscissors. כך או כלי למעבר ולקשור עם התפרים פוליאסטר 8/0 או עם electrocoagulation. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את הווריד מן adventitia שלה באמצעות microforceps ו microscissors בלי לגעת הספינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מזרק אינסולין מוכן להזרקה של צבע פלואורסצנטי. בזהירות לתפוס את הקיר כלי עם microforceps, ללא ניקוב הווריד. לחדור את דופן כלי נפוחה עם המזרק להזריק iv FITC-dextran. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעצור את הדימום לאחר משיכת מזרק באמצעות צמר גפן. הימנע דם לצבוע זיהום של האוזן. </li></ol> 4. מיצוב של האוזן הימנית עבור מיקרוסקופ פלואורסצנטי Intravital <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החיה על צלחת חימום ל C acrylglassonstruction עם חריץ עבור צלחת חימום מטוס 0.5 סנטימטר גבוה עבור מיצוב לאוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את פן חיה מטה על צלחת החימום באמצעות רצועות דבקות. מניח את הסחוס החזק קמור יחסית בבסיס האוזן ליד המטוס 0.5 סנטימטר הגבוה עבור האוזן (האיור 1B) כך שחלק הפסגה של האוזן ניתן למקם שטוח על המטוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף טיפה אחת של-בטמפרטורת החדר 0.9% NaCl למטוס acrylglass כדי למקם את האוזן. מניח את האוזן הימנית, עם התפרים המוסכמים על צד הגחון הקעור שלה פונים כלפי מטה, על הירידה של 0.9% NaCl. באמצעות צמר גפן, לספוג ירידה של NaCl ולתת לכוחות נימי לצרף את המטוס האוזן אל acrylglass. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלט את התפרים אל acrylglass כדי לתקן את העמדה של האוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף טיפה אחת של NaCl הטמפרטורה 0.9% מקום בצד הגבי הקמור של האוזן. בזהירות לשים coverslip אחד (0.5 ס&quot;מ קוטר) על האוזן מבלי לדחוס כלי הבסיס הזנת האוזן דואר. באמצעות צמר גפן, להסיר NaCl ככל האפשר מתחת coverslip כדי למזער את המרחק בין coverslip וכלי יעד אוזן. </li></ol> 5. מיקרוסקופ פלואורסצנטי Intravital ו פקיק אינדוקציה של האוזן הימנית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital עבור להדמיה FITC-dextran (450 - 490 ננומטר; FT: 510; LP: 520). השתמש מנורת כספית משתנה 100-W כמקור אור. חבר מצלמה CCD ברזולוציה גבוהה, בשחור-לבן כדי צורב DVD. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החיה על acrylglass המכיל את צלחת חימום עם האוזן נחטף קבוע לדלפק של מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות גדלת 20X (20X / צמצם מספרי 0.95) ו 20% עוצמת אור, לחפש כלי ורידים 50 - 60 מיקרומטר בקוטר עם זרימת דם האנטרוגרד של 400 - 600 מיקרומטר / s. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף טיפה אחת של מים בטמפרטורת החדר כדי coverslip עבור טבילה במים של 63x magnificatioמטרת n (63X / 0.95 צמצם מספרי). השתמש במזרק עם צינורית בקוטר 1 מ&quot;מ ומניחים את הירידה על המטרה של מיקרוסקופ. להוסיף מספיק מים כדי לפנות coverslip ואת המטרה עם טיפת מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר היישום של טיפת המים, להתחיל להקליט את הכלי עבור 20 s עם 20% עוצמת אור עבור המדידה המחוברת של הזרימה בקוטר ודם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל אינדוקציה פקיק 5 דקות לאחר הזרקה של-dextran FITC. לשם כך, להעלות את עוצמת האור עד 100%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך אינדוקצית פקיק, לסגור את הצמצם של מיקרוסקופ עבור 2 ימים בתוך תקופה של 30-ים כדי לבדוק את זרימת הדם. במקרה של התמדת זרימת דם, לפתוח את הצמצם שוב. במקרה של זרימת דם פסיק, לבחון את הכלי עבור 30 s. הערה: הכלי מסווג האפיל אם הזרימה עומדת מלכה עבור 30 s או יותר או אם הדם זורם retrogradely. אם זרימת הדם orthograde מתחיל שוב, לגמרי לפתוח את הצמצם ואת Contin<html> UE אינדוקציה פקיק עד חסימת כלי מתרחשת כפי שתואר לעיל. במהלך אינדוקציה פקיק מוקדם, להבטיח כי פעמים כאשר הצמצם היה סגור כדי לבדוק את זרימת הדם הם קצרים ככל האפשר על מנת לשמור כמעט EPI-תאורה רציפה. מאוחר יותר, במהלך צמיחת פקיק, הספינה perfused עם צבע פלואורסצנטי פחות, אז זה יכול להיות שנצפה ברציפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר לחסום 5 ספינות לכל אוזן. הגבל את הזמן של אינדוקציה פקיק תחת מיקרוסקופ כ 1 שעות לאחר הזרקה של-dextran FITC. </li></ol> 6. פעילויות המשך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע סגירת הפצע של הצוואר באמצעות פוליפרופילן transcutaneous 6/0 תפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך ההתאוששות מההרדמה, לשים את העכבר בחזרה לתוך הכלוב ולחמם את החיה באמצעות אור אינפרא אדום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הנתונים שנרשמו מן מקליט DVD לתוכנה המאפשר מדידה של קוטר כלי ומהירות זרימת הדם. </li></ol>_title &quot;&gt; 7. בחינת האוזן השמאלית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו החיה להתאושש ולחסל מוזרק כל FITC-dextran עבור 48 h. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרץ שוב את השלבים המתוארים לעיל, והפעם הכנת וריד תקין הצוואר ואת האוזן השמאלית. </li></ol> 8. רקמות Asservation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital של האוזן השמאלית, מדגם 0.5 מ&quot;ל של דם מן מקלעת וריד retrobulbar של העין באמצעות נימי זכוכית. בזהירות לחדור זווית palpebral הפנימית עם תנועות דופקות, עד דם ורידים זורם דרך הנימים. אסוף את החללית בחומצת ethylenediaminetetraacetic (EDTA) צינור דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לקיחת דמים, להקריב את החיה על ידי הזרקת 500 מ&quot;ג / ק&quot;ג BW קטמין לווריד הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאי הדם באמצעות נתח המטולוגיה עבור הערכה כמותית של לויקוציטים, אריתרוציטים, טרומבוציטים, המוגלובין, המטוקריט ו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה דם EDTA הנותרים 2500 טמפרטורת XG ואת מקום 10 מ &#39;ב. פיפטה להקפיא את הפלזמה בדם לחקירות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים, לחתוך את auricles ולתקן אותם בפורמלין 4% עבור בדיקה היסטולוגית. </li></ol>

<ol><li>White, R. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12814979">The epidemiology of venous thromboembolism.</a> Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).</li>
<li>Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2646590/">The hairless mouse in skin research.</a> J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).</li>
<li>Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+endogenous%2C+phyto+and+synthetic+cannabinoids+on+thrombogenesis+and+platelet+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biofactors%22%5BJournal%5D)">Differential effects of endogenous, phyto and synthetic cannabinoids on thrombogenesis and platelet activity.</a> Biofactors. , (2016).</li>
<li>Eriksson, E., Boykin, J. V., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+in+vivo+microscopy+of+the+cutaneous+microcirculation+of+the+hairless+mouse+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Method for in vivo microscopy of the cutaneous microcirculation of the hairless mouse ear.</a> Microvasc Res. 19 (3), 374-379 (1980).</li>
<li>Barker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hairless+mouse+ear+for+in+vivo+studies+of+skin+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The hairless mouse ear for in vivo studies of skin microcirculation.</a> Plast Reconstr Surg. 83 (6), 948-959 (1989).</li>
<li>Goertz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+novel+polihexanide-preserved+wound+covering+gel+on+dermal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a novel polihexanide-preserved wound covering gel on dermal wound healing.</a> Eur Surg Res. 44 (1), 23-29 (2010).</li>
<li>Goertz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+microcirculatory+changes+and+angiogenesis+in+a+model+of+frostbite+injury+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Determination of microcirculatory changes and angiogenesis in a model of frostbite injury in vivo.</a> J Surg Res. 168 (1), 155-161 (2011).</li>
<li>Roesken, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+quantitative+in+vivo+microscopic+analysis+of+thrombus+formation+and+vascular+recanalisation%3A+the+ear+of+the+hairless+%28hr%2Fhr%29+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">A new model for quantitative in vivo microscopic analysis of thrombus formation and vascular recanalisation: the ear of the hairless (hr/hr) mouse.</a> Thromb Haemost. 78 (5), 1408-1414 (1997).</li>
<li>Sorg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombin+is+as+effective+as+heparin+and+hirudin+to+prevent+formation+of+microvascular+thrombosis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemos%22%5BJournal%5D)">Antithrombin is as effective as heparin and hirudin to prevent formation of microvascular thrombosis in a murine model.</a> Thromb Haemos. 96 (3), 371-377 (2006).</li>
<li>Sorg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+antithrombin+in+the+prevention+of+microvascular+thrombosis+during+endotoxemia%3A+an+intravital+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Efficacy of antithrombin in the prevention of microvascular thrombosis during endotoxemia: an intravital microscopic study.</a> Thromb Res. 121 (2), 241-248 (2007).</li>
<li>Kovács, I. B., Sebes, A., Trombitás, K., Csalay, L., Görög, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proceedings%3A+Improved+technique+to+produce+endothelial+injury+by+laser+beam+without+direct+damage+of+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Diath+Haemorrh%22%5BJournal%5D)">Proceedings: Improved technique to produce endothelial injury by laser beam without direct damage of blood cells.</a> Thromb Diath Haemorrh. 34 (1), 331(1975).</li>
<li>Laschke, M. W., Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dorsal+skinfold+chamber%3A+window+into+the+dynamic+interaction+of+biomaterials+with+their+surrounding+host+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mat%22%5BJournal%5D)">The dorsal skinfold chamber: window into the dynamic interaction of biomaterials with their surrounding host tissue.</a> Eur Cell Mat. 20 (22), 147-167 (2011).</li>
<li>Grambow, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+hydrogen+sulfide+donor+GYY4137+on+platelet+activation+and+microvascular+thrombus+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Effect of the hydrogen sulfide donor GYY4137 on platelet activation and microvascular thrombus formation in mice.</a> Platelets. 25 (3), 166-174 (2014).</li>
<li>Fiebig, E., Ley, K., Arfors, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+leukocyte+accumulation+by+spontaneous+rolling+and+adhesion+in+the+exteriorized+rabbit+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microcirc+Clin+Exp%22%5BJournal%5D)">Rapid leukocyte accumulation by spontaneous rolling and adhesion in the exteriorized rabbit mesentery.</a> Int J Microcirc Clin Exp. 10 (2), 127-144 (1991).</li>
<li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender-specific+ischemic+tissue+tolerance+in+critically+perfused+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks.+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Gender-specific ischemic tissue tolerance in critically perfused skin.</a> Langenbecks. Arch Surg. 395 (1), 33-40 (2010).</li>
<li>Langer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polyvinylpyrrolidone-iodine+liposomal+hydrogel+on+wound+microcirculation+in+SKH1-hr+hairless+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of polyvinylpyrrolidone-iodine liposomal hydrogel on wound microcirculation in SKH1-hr hairless mice.</a> Eur Surg Res. 38 (1), 27-34 (2006).</li>
<li>Saniabadi, A. R., Umemura, K., Matsumoto, N., Sakuma, S., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+wall+injury+and+arterial+thrombosis+induced+by+a+photochemical+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Vessel wall injury and arterial thrombosis induced by a photochemical reaction.</a> Thromb Haemost. 73 (5), 868-872 (1995).</li>
<li>Herrmann, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+aggregation+induced+in+the+hamster+cheek+pouch+by+a+photochemical+process+with+excited+fluorescein+isothiocyanate-dextran%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet aggregation induced in the hamster cheek pouch by a photochemical process with excited fluorescein isothiocyanate-dextran.</a> Microvasc Res. 26 (2), 238-249 (1983).</li>
<li>Rumbaut, R. E., Slaff, D. W., Burns, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+thrombosis+models+in+venules+and+arterioles+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Microvascular thrombosis models in venules and arterioles in vivo.</a> Microcirculation. 12 (3), 259-274 (2005).</li>
<li>Lee, W. M., Lee, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+coronary+atherosclerosis+in+swine+produced+by+combination+of+balloon-catheter+injury+and+cholesterol+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Advanced coronary atherosclerosis in swine produced by combination of balloon-catheter injury and cholesterol feeding.</a> Exp Mol Pathol. 23 (3), 491-499 (1975).</li>
<li>Callahan, A. B., Lutz, B. R., Fulton, G. P., Degelman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+and+thrombus+thresholds+to+unipolar+stimulation+of+small+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle and thrombus thresholds to unipolar stimulation of small blood vessels.</a> Angiology. 11, 35-39 (1960).</li>
<li>Rosen, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158 (5), 1613-1622 (2001).</li>
<li>Agero, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+mutalysin+II+on+vascular+recanalization+after+thrombosis+induction+in+the+ear+of+the+hairless+mice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">Effect of mutalysin II on vascular recanalization after thrombosis induction in the ear of the hairless mice model.</a> Toxicon. 50 (5), 698-706 (2007).</li>
<li>Menger, M. D., Rösken, M., Rücker, M., Seiffge, D., Vollmar, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14518203">Antithrombotic and thrombolytic effectiveness of rhirudin in microvessels.</a> Langenbecks Arch Chir. 115 (1), 19-20 (1998).</li>
<li>Bilheiro, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thrombolytic+action+of+a+proteolytic+fraction+%28P1G10%29+from+Carica+candamarcensis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">The thrombolytic action of a proteolytic fraction (P1G10) from Carica candamarcensis.</a> Thromb Res. 131 (4), 175-182 (2013).</li>
<li>Kram, L., Grambow, E., Mueller-Graf, F., Sorg, H., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-thrombotic+effect+of+hydrogen+sulfide+is+partly+mediated+by+an+upregulation+of+nitric+oxide+synthases%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">The anti-thrombotic effect of hydrogen sulfide is partly mediated by an upregulation of nitric oxide synthases.</a> Thromb Res. 132 (2), 112-117 (2013).</li>
</ol>

החוקרים אין לחשוף.

ישנם מספר שלבים קריטיים עבור אינדוקצית פקיק המוצלחת התנוך של עכברי hr SKH1-HR. לפתרון בעיות, את הצעדים המתאימים של הפרוטוקול מסומנים בסוגריים. תנאי בחינה הם אידיאליים בחיות צעירות בגיל 4 - 6 שבועות עם cornification הנמוכה של האפידרמיס. אצל בעלי חיים מבוגרים, האיכות להדמיה של הכלי גרועה ופחות דומה בשל המרחק הגבוה בין משטח העור וכלי היעד (שלב 1.1). <p class="jove_content" style=";text-align:right;dir...

מטרת המאמר הנוכחי היא לתאר את הטכניקה של מיקרוסקופיה intravital להחיל את אפרכסת עכבר ללא שיער עבור תצפית ישירה וניתוח מיקרו מחזורי, היווצרות קריש דם, והאבולוציה פקיק. עם שיעור ההיארעות של 1 ב 1000, פקקת ורידים היא עדיין גורם שכיח לתחלואה. למרות אבחון, אסטרטגיות מניעות, טיפולים פותחו בשנים האחרונות, שליש פקק ורידים מבטאים כמו תסחיף ריאתי 1. פקק עורקים משחק תפקיד קריטי מחלות לב וכלי דם, אשר הם הגורם השכיח ביותר למוות במדינות תעשייתיות. פקקת עורקים מבוסס על קרע של פלאק טרשת עורקים מעורב התקפי לב, אוטם mesenteric, חרון וחמה. כל ניתוח חושף מבני subendothelial לרכיבי דם, משנה את הדינמיקה של זרימת דם, ומשתק את החולה. בניתוח endoprosthetic של הגפיים התחתונות, לא איברransplantation ו פקק דש ניתוח הם גורמים שכיחים של סיבוכים. פקקת כלי הדם בפרט לעיתים קרובות גורם לנזק בלתי הפיך, בשל היעדר סימפטומים קליניים. כמו כן, פקקת כלי הדם ממלא שלטון מכריע בכמה מחלות, כולל ארגמנת תרומבוציטופנית טרומבוטיים, אלח דם, קרישה תוך-כלית מפושטת, תסמונת antiphospholipid, ו-ספיקה ורידית כרונית, בין היתר. תרופות חדשות אחדות עבור הטיפול והמניעה של פקק פותחו בשנים האחרונות, אבל טסיות תרופות נגד קרישת דם עדיין יש תופעות לוואי, אנטגוניסטים חוסר, וכוללות תופעות משך זמן. ליקויים אלה להוביל לבעיות בטיפול רפואי דחוף. לפיכך, יש צורך במחקר נוסף כדי לחשוף את התהליכים המורכבים המתרחשים במהלך פקק, אשר בקושי ניתן לדמות במבחנה. עכבר hr SKH1-HR השיער התגלה 1926 בגן חיות בלונדון.בשל פגם גנטי בכרומוזום 14, החיה מאבדת את הפרווה שלה אחרי יום הלידה 10. זה הופך את מיקרוסקופיה היטב vascularized אפרכסת נגישה intravital של כלי. העובי הממוצע של האוזן הוא 300 מיקרומטר. הוא מורכב משתי שכבות של הדרמיס, אשר מופרדים על ידי סחוס. בצד הגב הקמור של הסחוס, 3 חבילות וסקולרית להיכנס התנוך. קשתות וסקולריים Apical ו shunts הבסיס לחיבור שלושת חבילות. Venules יש בקטרים ​​בין 200 מיקרומטר (basal) ו 10 מיקרומטר (פסגה). נימים-מרושתים לסגור המקיפים את השיער הריק זקיקי 2. האנטומיה של העכבר hr SKH1-HR שיער הופכת את אפרכסת מודל עוצמה וחסכוני למחקר פקקת.

<table><tbody><tr><td>ניתן לרכוש עכברי SKH-1/hr</td><td>Charles River</td><td>477</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מזון מעבדה סטנדרטי</td><td>ssniff Spezialdiaeten</td><td>V1594-0&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מבצע סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica&nbsp;</td><td>M651/M655&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ תוך-חיוני</td><td>Zeiss</td><td>Axiotech Vario 100&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>אובייקטיבי (20X/0.95)&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>20x/0.50 W; תוכנית-NEOFLUAR&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>אובייקטיבי (63X/0.95)</td><td>Zeiss</td><td>63x/0,95 W; אכרופלן&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מצלמת CCD בשחור-לבן&nbsp;</td><td>פייפר&nbsp;</td><td>FK 6990 IQ-S&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מקליט DVD</td><td>Panasonic</td><td>DMR-EX99V&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>בראון</td><td>5/12612055/1011</td><td>ניתן לרכוש אצל ספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>קטמין 10%</td> <td>Bela pharm</td><td>F3901-6</td><td>ניתן לרכוש אצל דוכנים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>קסילזין 2%</td><td>באייר</td><td>6293841.00.00</td><td>אפשר לקנות אצל דוכנים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>FITC-דקסטרן 5%</td><td>סיגמא&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש 46945-100MG-F</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש משחת עיניים dexapanthenol 5%</td><td>Bayer</td><td>6029009.00.00</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>פורמלדהיד 4%</td> <td>סיגמא</td><td>HT501128-4 ליטר</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr>ניתן לרכוש <td>472301 DMSO</td><td>Sigma</td><td></td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>כיסויים 5 x 5 x 1 מ"מ</td><td>Menzel</td><td>L4339</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש רצועות דבק</td><td>Leukosilk</td><td>4683400</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש צנטריפוגה</td><td>בקמן קולטר</td><td>CLGS 15</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr>ניתן לרכוש <td>מנתח המטולוגיה</td><td>Sysmex</td><td>KX-21 A6980</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש את צינור הדם EDTA</td><td>Sarstedt</td><td>201,341</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr>ניתן <tr>לרכוש <td>צמר גפן</td><td>Sanyo</td><td>604-A-1</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>אור אינפרא אדום</td><td>Beurer</td><td>5/13855</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>סינרינג חד פעמי</td><td>בראון&nbsp;</td>ניתן לרכוש את <td>2020-08</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מזרק אינסולין</td><td>Braun</td><td>9161502</td><td>ניתן לרכוש אצל ספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש מחטים היפודרמיות חד פעמיות</td><td>בראון</td><td>465 7640</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr>ניתן לרכוש נימי <td>Sarstedt</td><td>19,447</td> <td>מקצה לקצה</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש פלטת חימום</td><td>Klaus Effenberg</td><td>OP-T 185/03</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מספריים 14.5 ס"מ</td><td>Aesculap</td><td>BC259R</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Aesculap</td><td>BM081R</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש מיקרו-מלקחיים</td><td>Aesculap</td><td>BD331R</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>ניתן לרכוש מספריים</td><td>Aesculap</td><td>OC496R</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>אזמל 21</td><td>Dahlhausen</td><td>11.000.00.511</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr>ניתן לרכוש את <td>Prolene 7-0</td><td>Ethicon</td><td>XNEH7470</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>פרולן 6-0</td><td>אתיקון</td><td>XN8706. ניתן לרכוש P33</td><td>מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>צריבה חשמלית</td><td>Servoprax</td><td>H40140</td><td>ניתן לרכוש מספקים אחרים&nbsp;</td></tr><tr><td>כרית אקרילגלס</td><td></td><td></td><td>חימום משולב, 0.5&nbsp; מישור גבוה ס"מ</td></tr></tbody></table>

מיקרוסקופית intravital ו אינדוקציה פקיק ב התנוך של עכבר חסר שיער

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

סיבוכים טרומבוטיים של מחלות כלי דם הם גורם מוביל אחד לתחלואה ולתמותה במדינות מתועשות. בשל יחסי הגומלין המורכבים בין מרכיבי דם הסלולר בלתי תאיים במהלך היווצרות פקיק, מחקרים אמינים של הפיסיולוגיה והפתופיזיולוגיה של פקק יכולים להתבצע רק in vivo. לכן, במאמר זה מציג מודל האוזן בעכברים חסרי שיער ומתמקדת in vivo ניתוח מיקרו מחזורי, היווצרות קריש דם, והאבולוציה פקיק. באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital ואת תוך הוורידים (iv) היישום של צבעי ניאון בהתאמה, ניתוח חוזר של מייקרו ב האפרכסת יכול להתבצע בקלות, ללא צורך בהכנה כירורגי. יתר על כן, המודל הזה ניתן להתאים ללימודי in vivo של נושאים שונים, כולל ריפוי פצעים, פגיעה reperfusion, או אנגיוגנזה. לסיכום, האוזן של עכברים חסרי שיער הוא מודל אידיאלי עבור ב vivמחקר o מייקרו מחזור עור בתנאים פיסיולוגיים או pathophysiological ועבור ההערכה של התגובה שלה לטיפולים מערכתיים או אקטואליים שונים.

ההשפעות של טיפול הקנבינואידיים Thrombogenesis לאחר הזרקה של 0.05 מ&quot;ל של FITC-dextran, אינדוקציה פקיק phototoxic מוביל הנגע האנדותל היווצרות תקע טסיות הקודקודית (איורים 2 ו 3). במחקר הנוכחי, אינדוקציה פקיק לאחר הזרקת ip של קנבינואידים (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג BW) או הרכב הביא חסימת כלי טרומבוטיים בכל venules <strong...

המודל האוזן של העכבר SKH1-HR HR שיער מאפשר מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital מיקרו מחזורי ואינדוקציה פקיק phototoxic בלי הכנה כירורגית מוקדמת במיטה בחן כלי הדם. לכן, האוזן של העכבר ללא שיער היא מעולה במודל vivo ללמוד את יחסי הגומלין המורכבים במהלך היווצרות פקיק כלי דם, התפתחות פקיק, ו thrombolysis.

מיקרוסקופית Intravital ו אינדוקציה פקיק ב התנוך של עכבר חסר שיער

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא ללמוד את השפעתם של תרופות פוטנציאליות בעלות השפעה על כלי דם (vasoactive drugs) על היווצרות קרישי דם במיקרו-סרקולציה (microvascular thrombus) in vivo. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בנוגע להיווצרות קרישי דם, כגון זיהוי חומרים אנטי-תרומבוטיים חדשים שיכולים לעזור במניעת היווצרות קרישי דם במיקרו-סרקולציה, המהווה אחת מהסיבוכים העיקריים באלספסיס ובמהלך השתלת רקמות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שמודל האוזן של העכבר חסר הפרווה מאפשר מיקרוסקופיית פלואורסצנציה בתוך הגוף (intravital fluorescence microscopy) וייצור קרישי דם באמצעות פוטוטוקסיות ללא צורך בהכנה כירורגית מוקדמת במיטת כלי הדם הנבדקת.התחילו בשקילה וברישום משקלו של העכבר. לאחר מכן, טענו לנפח המתאים של החומר הנבדק למזרק אינסולין. ניתן את התרופה 30 דקות לפני השראת הקריש.לאחר הרדמת העכבר 15 דקות לפני השראת הקריש, החזירו את העכבר לכלוב עד לתחילת השפעת ההרדמה. כדי לוודא הרדמה מספקת, צבטו את הזנב בעזרת פינצטה ושימו לב להיעדר תגובה. לאחר מכן, העבירו 0.05 ml של 50 Dextran שהופשר למזרק אינסולין.לאחר מילוי המזרק, ודאו שלא נותרו בועות אוויר, מכיוון שגם בועות אוויר קטנות המוזרקות לווריד עלולות להיות קטלניות עבור בעל החיים. הניחו את העכבר המורדם על משטח acroglass עם פלטת חימום מובנית במצב הפוך (פנים כלפי מטה). כוון את פלטת החימום ל-37 °C.כסו את קרניות עיני העכבר במשחה עינית. לאחר מכן, השריגו שתי תפרים של polypropylene 7.0 לקצה הקרניאלי (עליון) והקודאלי (תחתון) של האוזן הימנית. מקמו את התפרים קרוב ככל האפשר לקצה ובמיקום הפרוקסימלי ביותר לבסיס.העבירו את העכבר למצב גבי (dorsal). קבעו את כל הרגליים לפלטפורמה באמצעות פלסטרים. השחילו תפר מתחת לשיניים הקדמיות ומקמו את הראש בכיפוף גבי (dorsiflexion) על ידי קיבוע התפר לפלטפורמה עם פלסטרים.הניחו את בעל החיים על הפלטפורמה תחת המיקרוסקופ הסטריאוסקופי. השתמשו בהגדלה של 10X. לצורך מיקרוסקופיה של האוזן הימנית, הכינו את הווריד הג'וגולרי השמאלי על ידי יצירת חתך של 5 mm בעור הצוואר בכיוון קרניו-קודלי.לאחר מכן, השתמשו בפינצטה מיקרוסקופית ובמספריים מיקרוסקופיים כדי לנתח את הרקמה התת-עורית. לאחר מכן, שחררו את הווריד מהסביבה שלו (adventia) ללא מגע בכלי הדם. כעת, השתמשו במזרק האינסולין שהוכן מראש להזרקת הצבע הפלואורסצנטי.תפסו בזהירות את דופן כלי הדם באמצעות המיקרופורספס מבלי לנקב את הווריד. חדרו דרך דופן כלי הדם המורחבת עם מחט המזרק והזריקו 50 Dextran תוך הווריד. הוציאו את המחט ועצרו את הדימום באמצעות מקלוני צמר.יש למנוע זיהום של האוזן על ידי דם וצבע. העבר את החיה הנמצאת על פלטת החימום למבנה זכוכית אקרו (acro glass) הכולל רכיב תמיכה לפלטת החימום ומישור בגובה 0.5 cm למיקום האוזן. קבע את החיה במצב שכיבה על הבטן על פלטת החימום באמצעות תחבושת דביקה.הניחו את הסחוס הקמור בבסיס האוזן לצד המישור עבור האוזן, כך שניתן יהיה להניח את החלק האפיקלי של האוזן בצורה שטוחה על המישור. הוסיפו טיפה אחת של aqua בטמפרטורת החדר ללוח זכוכית acro. בעזרת מקלוני צמר גפן, ספגו את טיפת ה-aqua, והניחו לכוחות קפילריים להצמיד את מישור האוזן לזכוכית ה-acro.יש להניח את האפרכסת בצורה שטוחה ככל האפשר, למרות שהסחוס מעניק לאפרכסת צורה קמורה. לכן, רק החלק הדיסטלי והגמיש יותר של האפרכסת צריך להיות מונח על לוחית הזכוכית האקרילית. כדי למנוע נזק לרקמה ובריחה של נוזלים וצבע, יש לגעת באוזן עם הפינצטה כמה שפחות.בשלב הבא, הוסיפו טיפה של aqua לצד הגבי (dorsal) הקמור של האוזן. הניחו בזהירות זכוכית כיסוי אחת על האוזן, ללא דחיסה של כלי הדם הבסיסליים הנכנסים לאוזן. השתמשו במקלונים של צמר גפן כדי להסיר כמה שיותר aqua מתחת לזכוכית הכיסוי, במטרה למזער את המרחק בין זכוכית הכיסוי לבין כלי הדם המיועדים באוזן.התחילו בהתאמת מיקרוסקופ הפלואורסצנציה תוך-חי (intravital) להדמיה של Dextran 50. העבירו את החיה המוכנה למסב של מיקרוסקופ הפלואורסצנציה תוך-חי. באמצעות הגדלות של 5X, 10X ו-20X, ובעוצמת תאורה של 20%, חפשו כלי דם ורידיים שקוטרם 50 עד 60 מיקרון ובעלי זרימת דם קדמית (anterograde).הוסף טיפה אחת של מים בטמפרטורת החדר לזכוכית המכסה עבור טבילה במים של העדשה בעלת הגדלה של 63X. מיד לאחר הנחת טיפת המים, התחל בהקלטת הכלי למשך 20 שניות לצורך הערכת בסיס של הקוטר וזרימת הדם. התחל את השראת הקריש חמש דקות לאחר הזרקת 50 Dextran.לשם כך, העלה את עוצמת התאורה ל-100%. במהלך השראת התסחיף הפוטוטוקסי, סגור את מפתח המיקרוסקופ למשך שתי שניות בתוך פרק זמן של 30 שניות כדי לבדוק חסימה של זרימת הדם. אם זרימת הדם נמשכת, פתח שוב את המפתח. כלי הדם יסווג כחסום אם הזרימה נעצרת למשך 30 שניות או יותר, או אם זרימת הדם היא רטרוגרדית.בחרו וחסמו חמישה כלי דם בכל אוזן בתוך פרק זמן של שעה לאחר הזרקה של 50 Dextran. במקרה זה, בעלי החיים טופלו ב-vehicle או בקנבינואידים, anandamide, WIN 155, 212-2 או cannabidiol לפני הזרקת 50 Dextran וקדמה להשראת קריש. Anandamide, אך לא CBD ו-WIN 155, 212-2, האיצו באופן משמעותי את צמיחת הקריש לאחר טיפול חד-פעמי בהשוואה לביקורת ה-vehicle.במסגרת ניסוי אחר, anandamide שולב עם indomethacin כדי להעריך את ההשפעה של תוצרים תלוי-cyclooxygenase על היווצרות קריש דרך anandamide. מתן משולב של indomethacin ביטל את ההשפעה הפרו-תרומבוטית של anandamide. לפיכך, חשיפה חריפה ל-anandamide מעוררת השפעה פרו-תרומבוטית תלוית-cyclooxygenase in vivo.לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע השראה של קריש בכלי דם צרים תוך 90 דקות, כולל ההכנה. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לטפל ב-auricle בזהירות רבה בכל פעם שנוגעים בה כדי למנוע דליפה של הנוזלים והצבע. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי היווצרות קרישים, ניתן להחיל אותה גם על מערכות אחרות, כגון ריפוי פצעים, כישלון של רקמה מושתלת (flap failure) ואנגיוגנזה.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה של יישום צבע פלואורסצנטי תוך-ורידי, מיקום הפיננה והארה של כלי דם ספציפיים לצורך ביצוע השראה של קריש פוטוטוקסיקה תוך-חיים.

intravital-microscopy-thrombus-induction-earlobe-hairless

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מיקרוסקופיה Intravital לעקוב אחרי האירועים hemodynamic ו דלקתיות ומרחב ב microcirculation pial.

מיקרוסקופית Intravital של microcirculation המוח עכבר באמצעות חלון גולגולתי סגור

סרטון זה מדגים את ההליך ליצירת שבץ פוטוטרומבוטי במודל עכבר על ידי הארת לייזר של גולגולת שלמה לאחר מתן צבע רגיש לאור.

מידול שבץ פוטוטרומבוטי במודל עכבר: טכניקת הארה בלייזר דרך גולגולת עכבר בעקבות מתן צבע רגיש לאור כדי לגרום לפוטוטרומבוזיס

סרטון זה מדגים את טכניקת המיקרוסקופ הפלואורסצנטי התוך-חיוני לחקר היווצרות פקקת במודל עכבר. העכבר מוזרק עם פוליסכריד עם תווית פלואורופור כדי לפקח על זרימת הדם. עם הארה עם אור בעוצמה גבוהה, אינדוקציה פוטוטוקסית של פציעה בכלי הדם של האוזן מובילה להיווצרות פקקת, אשר אושרה על ידי הדמיה של החסימה בזרימת הדם.

מיקרוסקופ פלואורסצנטי תוך חיוני לחקר היווצרות פקקת מיקרו-וסקולרית

מקור: Kim, D., et. al. הדמיה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום וטומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת להדמיה ישירה של טרומבואמבולי מוחי. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיה של פקקת מוחית בעכברים באמצעות הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (מיקרו-CT). מודל של עכבר פקקת מוח מוזרק עם ננו-חלקיקי זהב ממוקדי פיברין הפועלים כחומר מנוגד. העכבר מונח על מצע של מכונת מיקרו-CT, והתמונות מתקבלות מזוויות מרובות. באמצעות תוכנה מתאימה, התמונות משוחזרות ומעובדות.

הדמיה של פקקת מוחית בעכבר באמצעות הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת

כאן אנו מדווחים טכניקה ניסויית של מיקרוסקופיה intravital פלואורסצנטי לדמיין אינטראקציות heterotypic טסיות דם נויטרופילים על האנדותל הופעל במהלך דלקת כלי דם והיווצרות קרישים בעכברים חיים. טכנולוגיה מיקרוסקופית זה תהיה יקרה כדי לחקור את המנגנון המולקולרי של מחלת כלי דם ולבדוק סוכנים תרופתיים בתנאי pathophysiological.

הדמיה בזמן אמת של אינטראקציות heterotypic טסיות דם-נויטרופילים על האנדותל הופעל במהלך דלקת של כלי דם והיווצרות קרישים בעכברים חיים

המטריצה ​​תאית עוברת שיפוץ משמעותי בריפוי פצעים, דלקות והיווצרות גידול. אנו מציגים גישה מיקרוסקופית immunofluorescence intravital רומן כדי להמחיש את הדינמיקה של סיבי, כמו גם רכיבי מטריצת רשת כמו עם רזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה באמצעות epifluorescence או שני פוטונים במיקרוסקופ.

לטווח ארוך Intravital Immunofluorescence הדמיה של רקמות מטריקס רכיבים עם Epifluorescence ומיקרוסקופי שני פוטונים

יישום פשוט זה של מיקרוסקופיה תוך-חיונית של ורידי מזנטריה בעכברים יכול לשמש במודלים שונים של דלקת כדי לצפות באינטראקציות לויקוציטים-אנדותל וטסיות-לויקוציטים.

אינטראקציות מיקרוסקופית Intravital של יקוציט-האנדותל וטסיות דם-יקוציט בMesenterial ורידים בעכברים

אנו מדווחים הליך מעודן של כלוריד Ferric (FeCl 3) מודלים פקקת -induced על העורק הראשי ואת mesenteric וכן וריד, מאופיין באמצעות מיקרוסקופ intravital ביעילות לפקח הזמן Occlusive היווצרות thrombi.

מי כלוריד-induced Ferric מודלים פקקת Murine

פרוטוקול זה מתאר את האינדוקציה של מודל איסכמיה-רה-פרפוזיה (IR) על עור אוזן עכבר באמצעות הידוק מגנט. באמצעות מודל הדמיה intravital שהותקן, אנחנו לומדים בתגובות דלקתיות vivo-רה-פרפוזיה פוסט. הרציונל מאחורי הפיתוח של טכניקה זו היא להרחיב את ההבנה של איך לויקוציטים להגיב פגיעה בעור IR.

פגיעה איסכמיה reperfusion התרמה בעור האוזן עכבר Intravital multiphoton הדמיה של המערכת החיסונית

אנו מתארים כאן את השיטה להדמיית מגהקריוציטים ופרופלטלטים במח העצם הגולגולתית של עכברים חיים באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית.

ב-Vivo הדמיה דו-פוטונית של מגהקריוציטים ופרופלטלטים במח העצם של גולגולת העכבר

הפרוטוקול מציג כלי חדש לפישוט הדמיה תוך חיונית באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי הפוך.

גישת הדמיה תוך-חיונית יעילה לניטור ארוך טווח של דינמיקה של רקמת אפיתל במיקרוסקופ קונפוקלי הפוך

למד מיקרוסקופיה פלואורסצנטית intravital להיווצרות פקיקים בכלי דם זעירים באוזן עכבר SKH1-Hrhr. שיטה זו מאפשרת מחקר תרופות ואזואקטיביות וזיהוי חומרים אנטי-תרומבוטיים חדשים למניעת סיבוכי ספסיס והשתלות רקמות.

מיקרוסקופית Intravital ו אינדוקציה פקיק ב התנוך של עכבר חסר שיער

גלה סרטונים נוספים