Name: אינדוקציה של תגובה דלקתית בתרבויות Hepatocyte הראשי מעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: למדו שיטת בידוד אנזימטית של הפטוציטים הראשיים מכבד עכברים לחקר תגובות דלקתיות. השיטה מאפשרת ניתוח מהיר וחוזר של ציטוקינים כמו CRP ו-IL6 באמצעות ELISA ו-PCR בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH (R01HL128714 כדי CF) ו- (F31DK10236101 כדי KS) ואת איגוד הלב האמריקני (CF ו AG).

כל הפרוטוקולים בעלי חיים הפרוצדורות אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש (IACUC) מאוניברסיטת מיאמי מילר מבית הספר לרפואה. 1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת וכבדה זלוף כבד מחממים לעכל תקשורת באמבט מים ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גדר משאבת זלוף (30 mL / min). בזהירות ולמלא מראש את מערכת הצינורות של המשאבה עם תקשורת זלוף הכבד. הימנע מכל בועות אוויר במערכת ולהכין המיקרוסקופ stereotactic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנות תרבית תאים מעיילות באמצעות קולגן סוג אני על פי הפרוטוקול של היצרן. </li></ol> 2. שחזור כבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר התורם באמצעות / חמצן משאיפת isoflurane (isoflurane 4% / 2 ליטר / דקה חמצן). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על הרדמה באמצעות הורדת isoflurane ל 2-2.5% או על ידי הזרקת קטמין (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג של משקל הגוף intraperitoneally) ו xylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף intraperitoneally). הרדמה isoflurane רציפה עדיפה מאז קטמין מורידה את לחץ הדם ויכול לגרום לרעילות כבדית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את העכבר מורדם על כרית ספיגה. תקן את הגפיים של העכבר עם סרט דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח ולחטא את הבטן של העכבר ולבצע פיום בטן גחון מן החיק לגבול גולגולתי של הכבד באמצעות מספרי כירורגיות עם טיפים חדים / קהים. לחתוך את דופן הבטן לשני הצדדים, זנב של הסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הווריד הנבוב הנח (IVC) על ידי הזזת המעי בזהירות לצד ימין. בזהירות לנתח רקמות שומן סביב IVC באמצעות מטליות קצה כותנה סטרילית מלקחיים קצה זוויתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הסרעפת suprahepatic ולפתוח את חלל בית החזה על ידי שני חתכים לרוחב באמצעות מספריים כירורגיות בסדר עם טיפים חד / חדות. ולקשור את IVC החזה באמצעות משי כירורגית (5/0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cannulate את IVC infrarenal באמצעות צנתר iv מוגן, להוציא את המחט בזהירות,לחבר את משאבת זלוף ולהתחיל מרוססת הכבדה. אם ביצע כראוי, הכבד צריך מיד להתחיל מחווירות להתנפח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect פורטל וריד המאפשר ניקוז מתאים של תקשורת דם זלוף באמצעות מספרי כירורגיות בסדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perfuse את הכבד עם כ 30 מ&quot;ל של התקשורת זלוף הכבד, ולאחר מכן לעבור הכבד לעכל מדיה (30 מ&quot;ל). כבה את המשאבה זלוף ולהסיר את הצינורית פעם זלוף תושלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לחשוף את האזור המרכזי של הכבד ולאתר את רקמת חיבור המקשרת את האונה של הכבד. תפוס את סיבי חיבור המרכזיים ובזהירות לנתח כל הרקמות מחזיקות הכבד במקום בעדינות להסיר את הכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד להעביר את הכבד לתוך צינור חרוטי פוליפרופילן 50 מ&quot;ל המכיל 15 מ&quot;ל של הכבד לעכל התקשורת. הערה: אין זמן אונליין ספציפי עבור שלב זה. לאחר זלוף, הכבד נשאר תקשורת לעכל להובלה כדי ברדס תרבית תאים סטריליים. כל זהצעדים ubsequent צריכה להתבצע בסביבה סטרילית. </li></ol> 3. בידוד וטיפול של תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך מכסה מנוע תרבית תאים, להעביר את הכבד מתקשורת העיכול המכילה צינור חרוטי פוליפרופילן 50 מיליליטר לתוך צלחת רקמת סטרילית תרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים סטריליות, לקרוע את אונות הארבע בעדינות של הכבד. אם ביצע כראוי, בינוני העיכול צריך להיות עכורים בשל לבודד hepatocytes מהכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת קצה פיפטה סטרילית 25 מיליליטר, לסנן מדיום העיכול העכור דרך מסננת תא ניילון 70 מיקרומטר לתוך צינור חרוטים 50 מיליליטר פוליפרופילן חדש כדי להסיר חלקיקי רקמות מעוכלים ופסולת תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 3.2 ו -3.3 עם פוספט שנאגר מלוח סטרילית (PBS). זה מסייע בהסרת hepatocytes שיורית כל מהכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב 50 XG במשך 2 דקות ב 4 °. לשאוב supernatant המכיל פסולת התא עודף מחדש להשעות התאים בעדינות 25 1x מ&quot;ל קרהבינונית &#39;וויליאמס E. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת קצה פיפטה סטרילית 25 מ&quot;ל, לסנן מחדש ההשעיה דרך מסננת תא ניילון חדש 70 מיקרומטר לתוך צינור חרוטי פוליפרופילן 50 מ&quot;ל להשיג השעיה מנקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 3.5 ו -3.6 עבור שלושה שוטף נוסף באמצעות &#39;הקר וויליאמס הבינוני E 1x לקבל השעית תא ברורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שלב הכביסה הסופי, לשאוב supernatant כדי להסיר שאריות תאים עודפות. Re- להשעות ותאי מסנן 25 מ&quot;ל חם 1x E מדיה &#39;וויליאמס המכיל הפשרת hepatocyte העיקרי ותוספי ציפוי דרך מסננת תא ניילון חדש 70 מיקרומטר לתוך צינור חרוטי פוליפרופילן 50 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים בתוך 25 ההשעיה תא מ&quot;ל באמצעות hemocytometer. צופים בממוצע 15 - 20 מיליון תאים לכל כבד מבוגר. לקבוע כדאיות התא באמצעות מכתים trypan כחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט תאים 2 מ&quot;ל של וויליאמס &#39;מדיה E 1x המכיל הפשרת hepatocyte העיקרי ותוספי ציפוי על קולגן מצופה ce 6 בארll אשכול תרבות (9 x 10 5 תאים לכל טוב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 4 שעות, לשנות התקשורת 1x E מדיה &#39;וויליאמס המכיל תוספי תחזוקה hepatocyte העיקרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 24 שעות, סרום להרעיב תאים עם מדיום הנשר השונה של Dulbecco (DMEM) תקשורת 1x במשך 6 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנקו את התאים עם PBS כמו רכב, FGF23 (25 ng / mL), LPS (100 מיקרוגרם / מ&quot;ל) או IL-6 (50 ng / mL) במדיום סרום ללא דגירה במשך 24 שעות. </li></ol> בידוד 4. של RNA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן RNA באמצעות ערכת טור הספין מסחרית על פי הוראות היצרן. </li></ol> 5. יצירת cDNA מ- RNA מבודד על ידי שעתוק לאחור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 200 ננוגרם של מדגם RNA בודד לצינור PCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 14 μL של endonuclease ללא H 2 O PCR צינור משלב 5.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 4 μL של transcriptase הפוך צינור PCR משלב 5.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re- להשעות תוכן בעדינות לעשות תערובת הומוגנית; צנטריפוגות בעדינות. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים צינור PCR המכיל את התערובת לתוך thermocycler. thermocycler לרוץ שעתוק לאחור: 1 מחזור של 25 מעלות צלזיוס (5 דקות), 42 ° C (30 דק &#39;), 85 ° C (5 דקות) ולאחר מכן החזק על 4 מעלות צלזיוס. התוצר הסופי יהיה cDNA הרצוי. </li></ol> 6. ניתוח של תאים על ידי PCR כמותי בזמן אמת (qPCR) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את צלחת 96-היטב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כל מרכיבי התגובה qPCR על הקרח: 1 μL cDNA, .25 פריימר קדימה מיקרומטר, .25 פריימר הפוכה מיקרומטר, 5 μL SYBR גרין, 3.5 מים כיתה μL PCR כדי בהיקף כולל של 10 μL. באמצעות SYBR הירוק, להכין תערובת הורים כדי להפעיל את כל דגימות בשלושה עותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לערבב מאסטר יושלם, מערבולת לעשות הומוגנית. Aliquot 9 μL של qPCR תערובת אמן לבאר כל צלחת 96-WLL. לאחר, בזהירות להוסיף 1 μL של cDNA לבאר כל אחד. עוצמת התגובה סך הכל יהפוך 10 μL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הטעינה הושלמה, לאטום צלחת 96-היטב עם אופטיסרט דבק צלחת 96-היטב בקצרה צנטריפוגות (50 XG דקות 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות מפעילים מכשיר Real Time-PCR. מניחים צלחת 96-היטב אטום לתוך מכשיר Real Time-PCR ודוגמאות לרוץ לפי המלצות היצרן המכשיר. דוגמאות של מחזורי רגיל ומהיר כלולות להלן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הפרמטרים רכיבה רגיל, השתמש בנוסחה הבאה: denaturation הראשונית ב 94 מעלות צלזיוס למשך 120 שניות, ואז 40 מחזורים של 94 מעלות צלזיוס למשך 15 שניות, 60 מעלות צלזיוס למשך 60 שניות, ולאחר מכן החזק אופציונלי על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הפרמטרים רכיבה מהירה: השתמש בנוסחה הבאה: denaturation הראשונית ב 94 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, ואז 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס למשך 5 שניות, 58 מעלות צלזיוס למשך 15 שניות, ולאחר מכן 72 מעלות צלזיוס למשך 10 שניות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיין במדריך מכשיר להדרכה כיצד לנתח נתונים. </li></ol> ניתוח 7. Supernatants Cell ידי ELISA הערה: כל הצעדים מבוצעים על פי הפרוטוקול של היצרן. </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר 398 μL של diluent לתוך צינורות נפרדים. פיפטה 2 μL של המדגם supernatant התא לתוך הצינור diluent 398 μL. זה יספק קפל דילול של 200. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 7.1.1 עבור כל דגימה להיבדק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תהליך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 100 μL של פי 200 מדגם בדילול ורמה לתוך הבארות של צלחת 96-היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת צלחת 96-היטב של 25 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות על שייקר microplate ב 150 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את בארות 5 פעמים עם פתרון חיץ לשטוף 1x. לאחר לשטוף האחרון הושלם, להסיר את כל הפתרון לשטוף שיורית עם נייר סופג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 500 μL של מגיב HRP-המצומד לבאר כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 7.2.2 - 7.2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 100 μL של tetramethylbenzidine (TMB) מגיב לבאר כל צלחת 96-היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות מערבבים בצלחת 96-גם על 25 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות על microplateשייקר ב 150 סל&quot;ד. עצור את התגובה על ידי הוספת ישירות 100 μL של פתרון להפסיק היטב כל ומערבבים בעדינות. לאחר הפתרון להפסיק מתווסף הצבע צריך להפוך צהוב. זה מודיע כי הפתרון להפסיק כבר מעורבב כהלכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות קורא צלחת microtiter, לקבוע את הצפיפות האופטית ב 450 ננומטר בתוך 5 הדקות הראשונות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב התוצאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב טבלת ערכים ספיגת הממוצע (450) עבור כל דגימה כל תקן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב עקומת סטנדרט ידי התוויית מתכוון 450 של כל תקן נגד ריכוז הסטנדרטי שלה ב ng / mL על גרף ליניארי. אפשר ציר x לייצג את הריכוז ואת ציר y לייצג 450 ערכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניצול מתכוון 450 מכל מדגם בדילול מלא, לקבוע את הריכוז של החלבון הרצוי ב ng / mL מעקום סטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכפל את הריכוז מדגם על ידי הדילול פקטוr. זה יאפשר לקביעת ריכוז בפועל של החלבון הרצוי במדגם supernatant התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגרש השולחן בנוי דגימות לתוך גרף קו. אם ערכי OD 450 ליפול מחוץ עקומת סטנדרט, דגימות צריך להיות מדולל כראוי ו-נבדק מחדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נרמל תוצאות 500,000 תאים. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Silverstein, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+chronic+kidney+disease%3A+role+in+the+progression+of+renal+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephro%22%5BJournal%5D)">Inflammation in chronic kidney disease: role in the progression of renal and cardiovascular disease.</a> Pediatr Nephro. 24 (8), 1445-1452 (2008).</li>
<li>Isakova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+23+is+elevated+before+parathyroid+hormone+and+phosphate+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 23 is elevated before parathyroid hormone and phosphate in chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 79 (12), 1370-1378 (2011).</li>
<li>Faul, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF23+induces+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">FGF23 induces left ventricular hypertrophy.</a> J Clin Invest. 121 (11), 4393-4408 (2011).</li>
<li>Gutiérrez, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+23+and+mortality+among+patients+undergoing+hemodialysis%5BTitle%5D)+AND+%22N+England+J+Med%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 23 and mortality among patients undergoing hemodialysis.</a> N England J Med. 359 (6), 584-592 (2008).</li>
<li>Munoz Mendoza, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+23+and+Inflammation+in+CKD%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 23 and Inflammation in CKD.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 7 (7), 1155-1162 (2012).</li>
<li>Hanks, L. J., Casazza, K., Judd, S. E., Jenny, N. S., Gutiérrez, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+of+Fibroblast+Growth+Factor-23+with+Markers+of+Inflammation%2C+Insulin+Resistance+and+Obesity+in+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Associations of Fibroblast Growth Factor-23 with Markers of Inflammation, Insulin Resistance and Obesity in Adults.</a> PLoS ONE. 10 (3), e0122885(2015).</li>
<li>Singh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+23+directly+targets+hepatocytes+to+promote+inflammation+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 23 directly targets hepatocytes to promote inflammation in chronic kidney disease.</a> Kidney Int. , 1-12 (2016).</li>
<li>Howard, R. B., Christensen, A. K., Gibbs, F. A., Pesch, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enzymatic+preparation+of+isolated+intact+parenchymal+cells+from+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The enzymatic preparation of isolated intact parenchymal cells from rat liver.</a> J Cell Biol. 35 (3), 675-684 (1967).</li>
<li>Moshage, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+interleukin-1%2C+interleukin-6+and+its+interrelationship+on+the+synthesis+of+serum+amyloid+A+and+C-reactive+protein+in+primary+cultures+of+adult+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Bioch+Biophysi+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">The effect of interleukin-1, interleukin-6 and its interrelationship on the synthesis of serum amyloid A and C-reactive protein in primary cultures of adult human hepatocytes.</a> Bioch Biophysi Res Commun. 155 (1), 112-117 (1988).</li>
<li>Soldatow, V. Y., LeCluyse, E. L., Griffith, L. G., Rusyn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+for+liver+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro models for liver toxicity testing.</a> Toxicol. Res. 2 (1), 23-39 (2013).</li>
<li>Lee, S. M. L., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Human+Hepatocytes+by+a+Two-step+Collagenase+Perfusion+Procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of Human Hepatocytes by a Two-step Collagenase Perfusion Procedure.</a> J Vis Exp. (79), (2013).</li>
<li>Kegel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+Isolation+of+Primary+Human+Hepatocytes+and+Corresponding+Major+Populations+of+Non-parenchymal+Liver+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Protocol for Isolation of Primary Human Hepatocytes and Corresponding Major Populations of Non-parenchymal Liver Cells.</a> J Vis Exp. (109), (2016).</li>
<li>Moshage, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+the+hepatic+acute+phase+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cytokines and the hepatic acute phase response.</a> J Pathol. 181 (3), 257-266 (1997).</li>
<li>Klaunig, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+liver+cell+culture.+I.+Hepatocyte+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22In+vitro%22%5BJournal%5D)">Mouse liver cell culture. I. Hepatocyte isolation.</a> In vitro. 17 (10), 913-925 (1981).</li>
<li>Lu, Y. C., Yeh, W. C., Ohashi, P. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1782563/">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42 (2), 145-151 (2008).</li>
<li>Schmidt-Arras, D., Rose-John, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+pathway+in+the+liver%3A+From+physiopathology+to+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">IL-6 pathway in the liver: From physiopathology to therapy.</a> J Hepatol. 64 (6), 1403-1415 (2016).</li>
<li>Grabner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Cardiac+Fibroblast+Growth+Factor+Receptor+4+Causes+Left+Ventricular+Hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Activation of Cardiac Fibroblast Growth Factor Receptor 4 Causes Left Ventricular Hypertrophy.</a> Cell Metab. 22 (6), 1020-1032 (2015).</li>
<li>Shulman, M., Nahmias, Y. Chapter 17, Long-Term Culture and Coculture of Primary Rat and Human Hepatocytes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShulman%2C+M+%22Methods+Mol+Biol%22">Methods Mol Biol</a>. 945, 287-302 (2012).</li>
</ol>

אין מחברי ניגוד העניינים להכריז.

בידוד hepatocytes העיקרי מעכברים הוא כלי מהיר, זול ואמין ללמוד תגובות דלקתיות vivo לשעבר. אם מבוצע כהלכה, יכול להיווצר תוצאות בקלות לשכפל מבעוד מועד וחסכוניים. הנקודות הבאות יש לבחון בזהירות כדי להבטיח בידוד מוצלח. החתך כירורגית ואת cannulation של IVC צריכה להתבצע תחת הרדמה כללית ולא אחרי המתת חסד. חוקר צעיר, חסר ניסיון צריך יותר זמן בהתחלה כדי להכיר את התכונות אנטומיות של הבטן בעכברים ולבצע cannulation ...

מחלת כליות כרונית (CKD) יכולה להיות מוגדרת כמדינה של דלקת חריפה וכרונית 1. בחולים עם מחלת כליות כרונית, רמות בסרום של גורם גדילה פיברובלסטים הורמון phosphaturic 23 (FGF23) בהדרגה לעלות על מנת לשמור על הומאוסטזיס 2 פוספט בסרום. רמות FGF23 אצלה עלו קשורות באופן עצמאי עם תחלואה ותמותה קרדיו-וסקולרית בקרב חולים אשר מתחילים המודיאליזה טיפול 3, 4. יתר על כן, מספר מחקרים קליניים הראו קשר חזק בין רמות גבוהות FGF23 ורמות של C-reactive protein (CRP), אינטרלאוקין 6 (IL-6) ו גידול נמק α פקטור (TNFα) 5, 6. יתר על כן, במחקר ניסיוני, אנחנו הוכחנו לאחרונה כי FGF23 יכול למקד ישירות hepatocytes ולגרום לתגובה דלקתית על ידי הגדלת CRP ו- IL-6 עמ &#39;roduction בכבד 7. לפיכך, FGF23 עשוי לפעול כגורם במחזור שתורם דלקת מערכתית CKD. בשנות ה -70 המוקדמות, hepatocytes העיקרי היו מבודדים למד בפעם הראשונה 8. מאז העיקרי תאים בכבד תרבותי נעשה שימוש נרחב לבחון עיבוד מטבולית, תפקוד הורמונלי, מטבוליזם התרופה ורעילות כמו גם חסינות ותגובות דלקתיות 9, 10. פרוטוקולים הקודם בעיקר תארו את הבידוד האנזימטית של hepatocytes העיקרי מרקמות כבדות אנושי 11, 12. בעוד מודל מצוין, זה משמיט את היכולת ללמוד כיצד מניפולציה גנטית משפיע מנגנוני איתות כבדה מורכבים כמו גם השלכות תפקודיות על סוגים של גירויים שונים. בחלק הבא, אנו מתארים את הבידוד של hepatocytes העיקרי murine. יש לציין, כי השפעת מספר מתווכים של התגובה חריפה פאזיים בכבד, כגון lipopolysaccharide (LPS), IL-6 ו- FGF23 ניתן לנתח באופן קל, מהיר לשחזור 13. בזאת, אנו מציגים פרוטוקול עבור הבידוד האנזימטית של hepatocytes מעכברים בוגרים, ואנחנו מראים כי מעוררים הוקמו של דלקת, כגון LPS ו- IL-6, כמו גם מתווכים דלקתיים רומן כגון FGF23, יכול ישירות לעורר ביטוי הפרשה ציטוקינים דלקתיים, כגון CRP ו- IL-6 ב hepatocytes תרבותי.

<table><tbody><tr><td>מסננת <חזקה>מתכלה</חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תאים מסננת 70 &mu; m מסננת תא ניילון</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard</td><td>BD</td><td>381412</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור חרוטי פוליפרופילן</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>100 אפליקטורים עם קצה כותנה בגודל 6 אינץ'&nbsp;</td><td>מזרק אינסולין פוריטני</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>1cc U-100 28 גרם 1/2</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>329420</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות 100 x 20 מ"מ סגנון</td><td>קורנינג</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>6 בארות אשכול תרבית תאים</td><td>Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>5/0 משי כירורגי קלוע שחור (100 יארד)</td><td>LOOK</td><td>SP115</td><td></td></tr><tr><td><חזק>שם</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td><חזק>מספר קטלוגי</חזק></td><td><חזק>הערות</חזק></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיניפולס 3 משאבת זלוף</td><td>גילסון</td><td>F155007</td><td></td></tr><tr><td>ערכות המציטומטר, פרופר</td><td>VWR</td><td>48300-474</td><td></td></tr><tr><td>משקפי כיסוי המציטומטר, פרופר</td><td>VWR</td><td>48300-470</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים - חד/קהה</td><td>FST</td><td>14001-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים איריס-ToughCut ישר</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>דומונט SS-45 מלקחיים</td><td>FST</td><td>11203-25</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לרקמות סטודנטים</td><td>FST</td><td>991121-12</td><td></td></tr><tr><td>שם</td><td>חברה</td><td>מספר קטלוגי</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Reagents</תמיסת</td> חומצה אצטית חזקה><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>חזקה, 2.0 N</td><td>סיגמא</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; A8976-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן, USP 250 מ"ל</td><td>Piramal Healthcare</td><td>&nbsp; &nbsp; 66794-013-25</td><td></td></tr><tr><td>KetaVed 1,000 מ"ג/10 מ"ל (100 מ"ג/מ"ל)</td><td>VEDCO</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; 50989-161-06</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין 100 מ"ג/מ"ל</td><td>הזרקת AnaSed</td><td>139-236</td><td></td></tr><tr><td>Willams' Medium E (1x)</td><td>gibco</td><td>12551-032</td><td></td></tr><tr><td>Liver Perfusion Medium (1x)</td><td>gibco</td><td>17701-038</td><td></td></tr><tr><td>Liver Digest Medium (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>17703034</td><td></td></tr><tr><td>תוספי הפשרה וציפוי ראשוניים של הפטוציטים</td> טכנולוגיות <td>חיים</td><td>CM3000</td><td></td></tr><tr><td>תוספי תחזוקה ראשוניים של הפטוציטים</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>CM4000</td><td></td></tr><tr><td>מאגר פוספט מלח (PBS) pH 7.4</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>קולגן סוג 1</td><td>קורנינג</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפן</td><td>VWR</td><td>45000-717</td><td></td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של תגובה דלקתית בתרבויות hepatocyte הראשי מעכברים

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

הכבד ממלא תפקיד מכריע בוויסות דלקת מערכתית. במחלת כליות כרונית בפרט, הכבד מגיב בתגובה המילייה אורמיה, סטרס חמצוני, endotoxemia ואת אישור ירד מחזורי ציטוקינים מעודדי דלקת על ידי הפקת מספר רב של המגיבים-השלב האקוטי. כלי ניסיוני ללמוד דלקת והתפקיד הבסיסי של hepatocytes הם קריטיים להבנת הרגולציה תרומת ציטוקינים כבדים לתגובה בשלב חריף מערכתית תרחיש הפר דלקתי ממושך, במיוחד בסביבה מורכבת כגון מחלת כליות כרונית. מאז לימוד מנגנונים מורכבים של דלקת in vivo נותר מאתגר, עתירי משאבים ובדרך כלל מחייב את השימוש של חיות טרנסגניות, hepatocytes מבודד העיקרי לספק כלי חזק כדי להשיג תובנות מכניסטית לתוך תגובה חריפה פאזיים בכבד. מאז טכניקה במבחנה זה כוללת עלויות מתונות, גבוה מחדשproducibility וידע טכני משותף, hepatocytes המבודד העיקרי יכולים גם לשמש בקלות כגישת הקרנה. כאן אנו מתארים שיטה אנזימטית מבוססי לבודד hepatocytes murine העיקרי, ואנחנו מתארים את הערכה של תגובה דלקתית בתאים אלה באמצעות ELISA ו- PCR כמותי בזמן אמת.

<html> היסטולוגיה נציג תמונות מיקרוסקופ האור של תאים מבודדים בתרבית ראשוניים מתוארות באיור 1A. ניתוח Immunocytochemical מוכיח כי hepatocytes מבודד מאוד להביע אלבומין (אדום) כמו גם הקולטן לגורם הצמיחה פיברובלסטים 4 (FGFR4) (ירוק). גרעינים מגואלים 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (כחול). (איור 1 ב). <p clas...

כאן, אנו מציגים גישה האנזימטית לבודד hepatocytes העיקרי של עכברים בוגרים, ואנחנו מתארים כימות של תגובה דלקתית באמצעות ELISA ו- בזמן אמת PCR.

אינדוקציה של תגובה דלקתית בתרבויות Hepatocyte הראשי מעכברים

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד בהצלחה הפטוציטים תפקודיים של עכברים, לצורך חקר הביטוי וההפרשה של ציטוקינים דלקתיים כגון CRP ו-IL6 בתגובה למתווכים של תגובת הפאזה החריפה של הכבד. שיטה זו עשויה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח הנוגעות לתפקוד התאי הכבדי ולתרומתם של ציטוקינים כבדיים לסביבה דלקתית ממושכת, כפי שניתן למצוא במחלה כרונית של הכליות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מספקת כלי חסון לניתוח פשוט, מהיר וניתן לשחזור של מטבולומיקה של הכבד ודלקת, כמו גם לבחינת התגובה לתרופות.כדי להתחיל, חממו מראש את תמינת הפרופוזיה של הכבד ואת תמינת עיכול הכבד במקלח מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. הגדירו משאבת פרופוזיה כפי שמוצג כאן. לאחר מכן, השתמשו בתמינת הפרופוזיה של הכבד כדי למלא בזהירות מראש את מערכת הצינורות של המשאבה.נסו להימנע מהיווצרות בועות אוויר במערכת. הכינו את המיקרוסקופ הסטריאוטקטי להליך הפרפוזיה. לאחר הרדמת עכבר תורם בהתאם לפרוטוקול הכתוב, הניחו את החיה המורדמת על פד סופג.השתמשו בסרט דביק כדי לקבע את גפיו של העכבר. לאחר מכן, גלחו וחטאו את בטנו של העכבר. לאחר מכן, השתמשו במספריים כירורגיים עם קצוותים חדים-קהים כדי לבצע לפרוטומיה בבטנית מהפיובס ועד לגבול הקרניאלי של הכבד.בצעו חתך בדופן הבטן משני הצדדים במיקום זנבי (caudal) לסרעפת. חשפו את הווריד הרחב התחתון (inferior vena cava או IVC) על ידי הזזה זהירה של המעי לצד ימין באמצעות מקלוני צמר סטריליים. בעזרת מספריים כירורגיים עדינים בעלי קצוות חדים, בצעו חתכים לטראליים לרוחב הסרעפת שמעל הכבד ופתחו את חלל בית החזה.לאחר מכן, השתמשו במשי 5-0 כירורגי כדי לקישור את ה-IVC החזי. בעזרת קטטר IV ממוגן, בצעו קנולציה של ה-IVC התת-כלייתי. חברו את משאבת הפרפוזיה והתחילו בפרפוזיה של הכבד.אם הפעולה בוצעה כהלכה, הכבד אמור להתחיל להבהיר ולהנפח באופן מיידי. לאחר מכן, בעזרת מספריים כירורגיים עדינים, חתכו את הווריד השער (portal vein), כדי לאפשר ניקוז תקין של דם ומדיום פרפוזיה. לאחר ביצוע פרפוזיה לכבד עם כ-30 milliliters של מדיום פרפוזיה לכבד, הפסיקו את פעולת משאבת הפרפוזיה.עברו למדיום עיכול כבד והפעילו מחדש את המשאבה. עם השלמת הפרפוזיה, הסירו את הקנולה. חשפו בעדינות את האזור המרכזי של הכבד ואתרו את רקמת החיבור המחברת בין האונות של הכבד.תפסו את סיבי החיבור המרכזיים והסִירו בזהירות את כל הרקמות המקבעות את הכבד במקומו. לאחר מכן, הוציאו בעדינות את הכבד. העבירו מיד את האיבר לתוך מבחנה קונית מ-polypropylene בנפח 50 milliliter המכילה 15 milliliters של תמיסת עיכול כבד (liver digest medium).בזמן העבודה תחת מנדף תרביות תאים, העבירו את הכבד מהמבחנה הקונית מポリפרופילן בנפח 50 מיליליטר אל צלחת תרבית רקמות סטרילית. בעזרת פינצטה סטרילית, קרעו בעדינות את ארבעה האוני של הכבד. אם הפעולה בוצעה כהלכה, תרשום תמיסת העיכול עכירות עקב בידוד של hepatocytes מהכבד.באמצעות טיפ של פיפטה סטרילית בנפח 25 מיליליטר, סננו את מדיום העיכול העכור דרך מסנן תאים מניילון בנקבים של 70 מיקרומטר אל תוך פפיל פלסטיק קוני חדש בנפח 50 מיליליטר, כדי להסיר חלקיקי רקמה שלא עובדו ושאריות תאים. סובבו במרכז פוגה את התסננת המאוחדת ב-50 ×g בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך שתי דקות, לאחר מכן שאבו את supernatant המכיל שאריות תאים עודפות והשתמשו ב-25 מיליליטר של 1X William's Medium E קר כדי לחדד בעדינות את התאים. לאחר חזרה על פעולות הסינון והשטיפה של ההפטוציטים שלוש פעמים, שאבו את ה-supernatant כדי להסיר שאריות תאים עודפות.יש להשעות מחדש את התאים ב-25 milliliters של 1X William's Medium E חמים המכיל תוספים להפשרה ולהזריעה של הפטוציטים ראשוניים, ולסנן את התוךית דרך מסננת תאים חדשה מנילון של 70 micrometer אל תוך מבחנה קונית של 50 milliliter. לאחר ספירת התאים, יש להזריעם ב-two milliliters של William's Medium E המכיל תוספים להפשרה ולהזריעה של הפטוציטים ראשוניים, בתוך פלטת תרבית תאים של שש בארות מצופה בקולגן. לאחר שתי החלפות של המצע כדי להרעיב את התאים בסופו של דבר, יש לטפל בתאים ב-PBS כחומר נשאי (vehicle), 25 nanograms per milliliter של FGF23, 100 micrograms per milliliter של LPS, או 50 nanograms per milliliter של IL6 במצע נטול סרום.דגרו את התרביות למשך 24 שעות. לאחר הכנת RNA באמצעות ערכת עמודת ספין (spin column kit) לפי הוראות היצרן, הוסיפו 200 ננוגרם של ה-RNA המבודד לפקעת PCR. לאחר מכן, הוסיפו לפקעת 14 מיקרוליטר של מים נקיים מאנדונוקלאז (endonuclease-free water) וארבעה מיקרוליטר של reverse transcriptase.מקם את מבחורת ה-PCR בטרמוסייקלר והפעל את תוכנית השעתוק ההפוך הבאה להפקת cDNA. לצורך ביצוע qPCR כמותי, ערבב את רכיבי תערובת ה-QPCR master mix הבאים במבחורה על קרח. ערבב את תערובת ה-master mix באמצעות וורטקס.לאחר מכן, חלקו תשעה מיקרוליטרים מהתמיסה לכל באער של פלטת 96 באערים. הוסיפו בזהירות מיקרוליטר אחד של cDNA לכל באער, והכינו שלושה באערים עבור כל דגימה. לבסוף, הריצו את הדגימות במכשיר real-time PCR ונתחו את הנתונים בהתאם לפרוטוקול הכתוב.כאן מוצגת תמונה מייצגת במיקרוסקופיה של אור של תאים מבודדים ומטופחים ראשוניים. ניתוח אימונו-ציטוכימי מדגים כי הפטוציטים המבודדים מביעים רמה גבוהה של albumin וכן של fibroblast growth factor receptor 4. בניסוי זה, הפטוציטים הראשוניים המבודדים טופלו ב-FGF23, LPS או IL6 למשך 24 שעות, ורמות ה-mRNA של CRP ו-IL6 נותחו באמצעות quantitative real-time PCR.LPS, IL6 ו-FGF23 העלו באופן משמעותי את הביטוי של CRP ו-IL6. כפי שמוצג כאן, תמיסות העל של תרביות תאים מהפטוציטים ראשוניים מבודדים נותחו באמצעות ELISA למדידת רמות CRP. כפי שהודגם בניתוח QPCR, טיפולים ב-LPS, IL6 ו-FGF23 העלו באופן משמעותי את רמות ה-CRP בתמיסות העל של התאים בהשוואה לתאים שטופלו ב-PBS.לאחר השליטה בטכניקה זו, ניתן לבצעה תוך מספר שעות בודדות במידה שהיא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לשמור על סביבה סטרילית. בשל העבודה עם תרבית ראשונית, צמצום הסיכון לזיהום אפשרי הוא הגורם החשוב ביותר להשגת תוצאות אופטימליות.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לבודד בהצלחה הפטוציטים של עכברים למחקר של תפקודי תאי כבד שונים, כגון ביטוי והפרשה של ציטוקינים כבדיים.

induction-an-inflammatory-response-primary-hepatocyte-cultures-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

זיהום של עכברים עם adenovirus להביע autoantigen אדם גדול ציטוכרום P450 2D6 (hCYP2D6) המוכרים על ידי סרה של חולים הסובלים מסוג 2 תוצאות אוטואימוניות הפטיטיס בצורה מתמשכת של מחלה אוטואימונית בתיווך הכבד המאופיינת סיסטיק נרחב צהבת, ואת הדור של CYP2D6 ספציפית התגובה החיסונית.

CYP2D6 מודל החיה: כיצד לגרום דלקת כבד אוטואימונית עכברים

הפרעה בזרימת המרה גורמת לפגיעה דלקתית חמורה בכבד כולסטטי עם רצף אופייני תלוי זמן של שינויים מורפולוגיים. כאן אנו מציגים פרוטוקול לקשירה כירורגית של צינור המרה המשותף בעכברים המאפשר לגרום לתגובה פיברוטית חזקה לאחר 21 עד 28 יום.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

כאן אנו מתארים שיטה נפוצה כדי לגרום נזק כבד כרונית בעכברים על ידי האכלה של תזונה לקויה כולין, בתוספת ethionine (CDE). נדגים לניטור תקינות זלוף בכבד, בידוד, שימור. קורס זמן של 6 שבועות ניתן להודיע על פגיעה בכבד, pathohistology, פיברוזיס, דלקתיות, ותגובות תא קדמון בכבד.

מאתר כולין לקויה, בתוספת Ethionine (CDE) דיאטה מודל של פגיעה כרונית בכבד

אנו מתארים מודל הפטיטיס חיסון in vivo בעכברי BALB/c שניתן להשתמש בו כדי לחקור את הפתוגנזה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות, כולל הבדלי מין שנראו במחלה זו. נתאר כיצד מודל זה מדגים ניתוחים הניתנים לשחזור באמצעות טכניקות ניסיוניות in vivo ו- in vitro.

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

דיאטה פשוטה ואמינה המושרה בעלי חיים מכרסם מודל עבור steatohepatitis שאינם אלכוהוליים (נאש) מתואר, מושגת באמצעות דיור ללא SPF של בעלי חיים וניהול של תזונה מסוימת גבוהה שומן. אנו מתארים זיהוי של תת הכבד והאדיפוז מערכות המשנה של תאים חיסוניים כדי ללכוד את התנאים האימונולוגיים אנושיים על ידי חשיפת עכברים חיידקים סביבתיים.

מודל Murine מתקדם לאגודה לדלקת כבד Nonatoin עם סוכרת מסוג 2

במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקול מפורט לגרימת הכבד שלפוחית השומן בתאי HepaRG עם חומצות שומן מלח נתרן לרדוף ולהעסיק שיטות זיהוי וכימות של הצטברות שומנים בדם, כולל anti-סטוקס קוהרנטי פיזור ראמאן (מכוניות) מיקרוסקופ, ניתוח ציטופלוורימטרי, שמן אדום כתמים ו-qPCR.

גרימת ואפיון שלפוחית הזרע ב הבדיל תאים HepaRG

מוצג כאן הוא פרוטוקול לבידוד של העכבר hepatocytes מתוך כבדי העכבר למבוגרים באמצעות שונה קולגן הטכניקה הפרו הפרזיה. גם תיאר הוא התרבות ארוכת טווח של hepatocytes בקביעת כריך קולגן תלת-ממד, כמו גם immunolabeling של מרכיבים ציטושלד לחקר היווצרות המרה והתגובה שלה לטיפול.

בידוד וכריך קולגן 3D תרבות של העכבר הראשי Hepatocytes כדי ללמוד את התפקיד של שלד ציטוזה היווצרות של המרה בתוך מחוץ לגופית

הפטוציטים ראשוניים הם כלי רב ערך לחקר תגובת הכבד ומטבוליזם במבחנה. תוך שימוש בריאגנטים הזמינים באופן מסחרי, פותח פרוטוקול משופר ויעיל בזמן ובעבודה לבידוד הפטוציטים ראשוני של עכברים.

פרוטוקול יעיל יותר בזמן ובעבודה לבידוד הפטוציטים ראשוני של עכברים

וידאו זה מראה כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL וכיצד להעריך חומרתה ידי histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

למדו שיטת בידוד אנזימטית של הפטוציטים הראשיים מכבד עכברים לחקר תגובות דלקתיות. השיטה מאפשרת ניתוח מהיר וחוזר של ציטוקינים כמו CRP ו-IL6 באמצעות ELISA ו-PCR בזמן אמת.

אינדוקציה של תגובה דלקתית בתרבויות Hepatocyte הראשי מעכברים

גלה סרטונים נוספים