Name: הדמית פליטת אור קרוב אינפרא אדום של אופטיק בעצב המוח דלקת במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-01T10:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: למד הדמיה ביולומינסצנטית של נויריטיס אופטי ודלקת מוח במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים SJL/J. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחרי התקדמות המחלה ויעילות טיפולית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי Forschungsgemeinschaft דויטשה (CRC1039 A3) והתוכנית למימון מחקר &quot;Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz&quot; (LOEWE) של מדינת הסן, מרכז מחקר ברפואת Translational ופרמקולוגיה TMP וקרן Else קרונה-Fresenius (EKFS), ומחקר הדרכת קבוצת Translational Research Innovation - פארמה (תשמ&quot;ה).

1. אינדוקציה EAE ב SJL / עכברים J <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש נקבה בת 11 שבועות SJL / עכברי J ולאפשר להם להרגיל לחדר הניסיון במשך כ 7 ימים. השתמש ב- N = 10 עכברים בכל קבוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להערכת השפעות של תרופות, את התרופה לבין הפלצבו לקבוצת הביקורת באופן רציף באמצעות מי שתייה או באמצעות כדורי מזון החלו 3 או 5 ימים לאחר החיסון (n = 10 בכל קבוצה). בתקופת השיא של המחלה, לנהל תרופה או פלצבו עם חלב או 3 סוכר% מים ספוגי פתיתי תירס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומר חיסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ערכת אינדוקציה EAE המורכב של אנטיגן (פפטיד של חלבון proteolipid, PLP139-151, 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​אמולסיה) ב תחליב עם אדג&#39;ובנט של פרוינד מלא (CFA, שחפת Mycobacterium-נהרג חום H37 Ra) ו -2 בקבוקונים (5 מיקרוגרם כל אחת) רעלן שעלת lyophilized (PTX). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את PTX (2 מיקרוגרם / מ&quot;ל) ב שנאגרו מלוחים פוספט 1x (PBS; כלומר, &lt;/ Em&gt; להוסיף 1.5 מ&quot;ל של PBS על צינור אחד PTX, ומערבבים היטב, להסיר עם אותו קצה pipet, ולהוסיף 1 מ&quot;ל של PBS בצינור 50 מ&quot;ל); לערבב היטב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הִתחַסְנוּת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק מתחת לעור PLP / CFA ב 2 חלקים, כל 100 μL, הן בבסיס הזנב. אין להזריק לתוך החלק האחורי של הצוואר, כי כל תגובה חיסונית בעור בחלק האחורי או הצוואר העליון יפריע הדמיה של הראש ובחוט השדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 100 μL של PTX intraperitoneally (IP), פעמיים לכל עכבר, 1 הראשון - h 2 לאחר חיסון והשני ב 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור העכברים השליטים, להזריק CFA ללא PLP (2 מנות של 100 μL) בתוספת PTX ללא PLP. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר טיפול לאחר חיסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול העכברים כל עד לפני כמה ימים עד היום 7, ולאחר מכן לשקול אותם מדי יום. הערה: עכברים לאבד כ 1 - 2 גרם של משקל הגוף במהלך EAE. הירידה מסמנת את תחילתה של EAE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את הסימפטומים הקליניים מדי יום בין בהסכמה יום 7ing אל מערכות ניקוד סטנדרטי (כלומר, ציון 0: אין שינויים ברורים תפקודים מוטוריים; להבקיע 0.5: שיתוק הדיסטלי של זנב; ניקוד 1: שיתוק זנב שלם; להבקיע 1.5: paresis קלה של אחד או שתי הרגליים האחוריות; להבקיע 2: paresis החמורה של רגליים אחוריות; להבקיע 2.5: שיתוק מלא של רגל אחורית אחת; להבקיע 3: שיתוק מלא של שני רגליו האחוריות; להבקיע 3.5:. שיתוק מלא של רגליים אחוריות paresis של רגל אחת מול להרדים עכברים עם ציונים של 3.5 ומעלה עבור &gt; 12 שעות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> EAE כמובן והשעה של הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את ההדמיה הראשונה בתחילת המחלה, כאשר העכברים ולהשגה עוד&gt; 1, אשר תתרחש בסביבות יום 10 - 12 אחרי החיסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע ההדמיה השנייה בשיא, אשר יושג 1 או 2 ימים לאחר הסימפטומים הראשוניים לפתח ויימשך 1 - 3 ימים. הערה: כתוצאה מכך, העכברים יתאוששו באופן מלא בתוך 7 עד 10 ימים. הדמיה במהלך המרווחים עדיין עשויה להראות דליפות בכלי דם,אבל האינדיקטורים דלקת צריכים להיות שליליים. </li></ol></li></ol> 2. Bioluminescent והדמיה האינפרה-אדום הקרוב של אופטיק בעצב המוח דלקת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנה של מערכת ההדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע in vivo הדמיה עם כל ציוד המאפשר ניתוח של פליטת אור ואותות האינפרה-אדום הקרוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור עכברים תחת 2 - 2.5% isoflurane הרדמה במהלך כל הליכי ההדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפקיד אחד או שניים עכברים לצד זה במנגנון באמצעות אספקת הגז באמצע. מקם את עמוד השדרה העליון במרכז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש שני עכברים בו זמנית, אחד לכל קבוצה, להערכת השפעות של תרופות להשוות זוגות. זה חשוב עבור הדמיה bioluminescent. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגן על האתר של חיסון עם בד שחור ולקחת תמונת תצלום ואת הבסיס להעריך את המיקום הנכון של העכבר / עכברים. השתמש פוקוס B עם מרחק 6.5 ס&quot;מ למצלמה עבור כל התמונות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקת הדמיה של חללית דלקת bioluminescent <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בהגדרות מערכת הדמיה in vivo: Epi-BLI, Em לסנן פתוח, בלוק מסנן אקס, fStop 1, binning 8, להתמקד B = 6.5 ס&quot;מ, חשיפת המודעה 120 s; לקחת תמונת בסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 100 μL IP של מגיב chemiluminescent מוכן לשימוש (40 מ&quot;ג / מ&quot;ל). מערבבים היטב לפני מילוי המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלמו תמונות פליטת אור 5, 10, ו -15 דקות לאחר ההזרקה. קורס הזמן של שיא bioluminescent שונה בין בעלי החיים. הערה: השיא יתרחש 5 - 10 דקות לאחר ההזרקה; ירידה בשיעור של 15 דק &#39;ניתן ללמוד שאין נדרשות תמונות נוספות. השתמש זוגות עכבר של קבוצות ביקורת והטיפול לחסל הטיות קטין בשל קורסי זמן שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא בתיאורים רלוונטיים לניסוי. שימו תיבת דו-שיח יצוץ באופן אוטומטי; זה כולל מידע, כגון זן עכבר, סקס, נקודת זמן, בזמן הזרקת בדיקה, קבוצה וכו &#39;. שמור את כל הקבצים ב oתיקיית ne; הם יצטרכו תגי זמן וכל התיאורים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקה והדמיה של חלקיקי ניאון האינפרה-אדום קרוב שלמות BBB <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קרוב אינפרא אדום הדמיה epifluorescence ב B-focus (מרחק: 6.5 ס&quot;מ). מקסימום עירור / פליטה של ​​חלקיקים ניאון pegylated הם 675/690 ננומטר. לכידת שתי תמונות באורכי גל שונים, ב Ex640 / Em700 ו Ex675 / Em720; להשתמש חשיפה 2-s, binning 8, ו fStop 2. קח תמונה הבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 70 μL של חלקיקים אינפרא אדום ניאון pegylated iv דרך וריד הזנב ולדמיין את h עכברים 3 ו -24 שעות לאחר ההזרקה באמצעות ההגדרות הנ&quot;ל. מערבבי באר הפתרון לפני מילוי המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק נתרן כלורי 0.9% בעכברים שליטים, אשר יהיה צורך להעריך את הספציפיות של האות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקת הדמיה של החללית פלורסנט האינפרה-אדום הקרוב לפעילות MMP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח או את שער הראש uבאזור עמוד השדרה pper בזהירות יום אחד לפני שלקח את התמונה הבסיסית. העור צריך לא להיפגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קרוב אינפרא אדום הדמיה epifluorescence ב B-focus (מרחק: 6.5 ס&quot;מ). מקסימום עירור / פליטה של ​​החללית activatable MMP הם 680/700 ננומטר. לכידת שתי תמונות באורכי גל שונים, ב Ex640 / Em700 ו Ex675 / Em720; להשתמש חשיפה 1-s, binning 8, ו fStop 2. קח תמונה הבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 200 μL של 1x PBS על צינור 1.5 מ&quot;ל של פתרון מוכן לשימוש (20 nmol / 1.5 מ&quot;ל PBS 1x) כך שהוא יהיה מספיק עבור 10 עכברים; ומערבבים היטב לפני מילוי המזרק. הערה: ההיקף הניתנים לא לוקח בחשבון שחלק הנפח הולך לאיבוד במהלך מילוי מזרק להזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 150 μL של iv החללית דרך וריד הזנב 24 שעות לפני הדמיה. להזריק PBS רק חיות בקרה להעריך את הספציפיות של האות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב 24 שעות לאחר ההזרקה, לקחת תמונות Epi-FL לפחות בשני אורכי גל, Ex640 / Em700 ו אקס 675 / Em720, עם הגדרות שהוסבר לעיל (1-s חשיפה, מיקוד B, binning 8, ו fStop 2). הערה: השימוש בשני אורכי גל מאפשר unmixing ספקטרלי על ידי הפחתת האות הנוקבת. </li></ol></li></ol> 3. ניתוח תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח פליטת אור (BLI) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ פעמיים על התוכנה כדי לפתוח אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשורת התפריטים העליונה, לחץ על הסמל דפדפן קבצים, ללכת לספרייה של התיקיה של הניסוי, ובחר אותו; זה יפתח את כל הקבצים בתיקייה בטבלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את העמודות המראות את התיאורים רלוונטיים לניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור בקרת איכות, לחץ פעמיים על קובץ של עכבר שאינו מגיב ללא סימפטומים של EAE ו / או עכבר נאיבי כדי לבדוק את הספציפיות של אותות EAE. הערה: לא צריך להיות שום אות בעכברים נאיביים אות מינימאלית בעכברים שאינם מגיבים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את תמונת הבסיס לפני הזריקה של פרולהיות עבור כל עכבר כשליטה נוספת של הספציפיות של האות; זה צריך להיות שלילי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבחור תמונה, לחיצה כפולה על הקובץ הראשון של העכבר EAE הראשונה ולבדוק את עוצמת bioluminescent (טווח בר LUT) ולוקליזציה. בדוק את כל התמונות בזו אחר זו. סגור את הקובץ עם העוצמת הנמוכה ביותר עבור כל עכבר (כלומר, לשמור 2 מתוך 3 תמונות לכל עכבר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאמה ועל ייצוא תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ לחיצה כפולה על הקובץ הראשון לכימות. להתבונן מוקפץ חלון חדש. תחת &quot;אפשרויות&quot; (בתפריט העליון), להתאים אישית את התוויות כדי להציג כל תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחלונית הכלי הנכונה, עבור אל &quot;התאמת תמונה.&quot; כברירת מחדל, עוצמות מינימום ומקסימום מוגדרות &quot;אוטומטי&quot; ומוצגות קשת pseudocolor. בחר &quot;ידני&quot; כדי לשנות את ההגדרות במידת הצורך. הערה: לדוגמה, את כל התמונות המיוצאות עלולות להכיל פסי LUT הזהה (ומינימום זהה מקסימום) כדי להשוות בקלות.ההתאמה של ומינימום ו מקסימום אין השפעה על תוצאות כמותיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על יצוא תמונות, png הנבחר, ספרייה, וכן שם תמונה </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כימות של אזורים של עניין (ROI) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור אל כלי &quot;ROI&quot; בלוח כלי. בחר את שיטת ההחזר על ההשקעה (עיגול, מלבני, אוטומטי, או-יד חופשית) ומספר ROIs. שים את חלון ROI צץ בחלון התמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות העכבר, להתאים את הגודל והמיקום. השתמש ספי ROI זהים עבור כל התמונות אם הכלי האוטומטי ROI משמש. השתמש בתחומים זהים עבור כל התמונות אם גדל עמדות ROI מוגדרים באופן ידני (למשל, ROIs המעגלי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;למדוד RO.I. לצפות מוקפץ חלון חדש. התאמה אישית של העמודות (למשל, שם קובץ, מספר בעלי חיים, קבוצה, ניסוי, אזור, ספירת הכל, ספירת ממוצע, ספירת SD, דקות ומקס סופרות, אזור, זמן נקודה, בזמן הזרקת בדיקה, וכו &#39;). שמור את ההגדרות המותאמות אישית. כאשר מחדשעדי, לבחור את כל (Ctrl + A), להעתיק ולהדביק השולחן לתוך גיליון אלקטרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצא את התמונה כקובץ png עם ROIs במקום. שמור וסגור את קובץ התמונה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזרו על התהליך (שלבי 3.1.6 - 3.1.7) עבור כל קבצי התמונה שצריך לכמת. העתק את כל quantifications ROI לתוך הגיליון האלקטרוני. הערה: כאן, ניתן למיין את התוצאות על ידי הקבוצה, נקודת זמן, וכו &#39;ונותחו סטטיסטית. השתמש ספירת הכולל של אותות פליטת אור ב ROIs עבור ניתוחים סטטיסטיים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח קרוב אינפרא אדום (NIR) של חלקיקים פלורסנט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הפקדים בתוכנה, להתאים את הסף של התמונה. הערה: זו אין השפעה על התוצאה כמותית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראייה להשוות את התמונות שנתפסו אקס / Em 675/720 ו Ex / Em 640/700 להעריך את הספציפיות של האות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש התמונות שנתפסו אקס / Em 675/720 עבור ניתוח כמותי (מקסימום עירור: 680 ננומטר). גדר ROIs, שעבורם הכלי האוטומטי ROI ניתן להשתמש. התאם את הסף האוטומטי ROI ולהשתמש בו עבור כל התמונות. לכמת את היעילות הכוללת קורנת ROIs (ראה שלב 3.1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח קרוב אינפרא אדום (NIR) של החללית פרוטאז רגיש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות פקדי תוכנה, להתאים את הסף של התמונה. הערה: זו אין השפעה על התוצאה כמותית. בצע unmixing ספקטרלי של הקרינה האוטומטית. כלי unmixing מיושם Living תמונה. האוטומטי unmixing משתמשת 640/700 Ex / Em כמו ספציפיים 675/720 כתמונת אוטומטי ניאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את התמונה הצרופה ולהגדיר את ROIs, כפי שתואר לעיל. השתמש יעילות הכוללת קורנת ROIs עבור ניתוחים כמותיים וסטטיסטיים. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Compston, A., Coles, A. <a target="_blank" href="http://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(08)61620-7/abstract">Multiple sclerosis.</a> Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).</li>
<li>Dunn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+mobility+impairment+on+the+burden+of+caregiving+in+individuals+with+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Pharmacoecon+Outcomes+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis.</a> Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).</li>
<li>Dutta, R., Trapp, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+neuronal+dysfunction+and+degeneration+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis.</a> Prog Neurobiol. 93 (1), 1-12 (2011).</li>
<li>Sawcer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+risk+and+a+primary+role+for+cell-mediated+immune+mechanisms+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis.</a> Nature. 476 (7359), 214-219 (2011).</li>
<li>Schmitz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((R-flurbiprofen+attenuates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">R-flurbiprofen attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice.</a> EMBO Mol Med. 6 (11), 1398-1422 (2014).</li>
<li>Balls, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+early+days+of+the+Three+Rs+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The origins and early days of the Three Rs concept.</a> Altern Lab Anim. 37 (3), 255-265 (2009).</li>
<li>Barthelmes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis+in+Mice+and+Evaluation+of+the+Disease-dependent+Distribution+of+Immune+Cells+in+Various+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues.</a> J Vis Exp. (111), (2016).</li>
<li>Leahy, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+trajectory+of+osteoarthritis+development+in+a+mouse+model+by+serial+near-infrared+fluorescence+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the trajectory of osteoarthritis development in a mouse model by serial near-infrared fluorescence imaging of matrix metalloproteinase activities.</a> Arthritis Rheumatol. 67 (2), 442-453 (2015).</li>
<li>Scales, H. E., et al. Assessment of murine collagen-induced arthritis by longitudinal non-invasive duplexed molecular optical imaging. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aScales%2C+HE+%22Rheumatology+%28Oxford%29%22">Rheumatology (Oxford)</a>. 55 (3), 564-572 (2016).</li>
<li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+channel+optical+tomographic+imaging+of+leukocyte+recruitment+and+protease+activity+in+the+healing+myocardial+infarct%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Dual channel optical tomographic imaging of leukocyte recruitment and protease activity in the healing myocardial infarct.</a> Circ Res. 100 (8), 1218-1225 (2007).</li>
<li>Eaton, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tomographic+imaging+of+near+infrared+imaging+agents+quantifies+disease+severity+and+immunomodulation+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Optical tomographic imaging of near infrared imaging agents quantifies disease severity and immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo.</a> J Neuroinflammation. 10, (2013).</li>
<li>Kandagaddala, L. D., Kang, M. J., Chung, B. C., Patterson, T. A., Kwon, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+activation+of+matrix+metalloproteinase-9+and+NADPH+oxidase+in+tissues+and+plasma+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression and activation of matrix metalloproteinase-9 and NADPH oxidase in tissues and plasma of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice.</a> Exp Toxicol Pathol. 64 (1-2), 109-114 (2012).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+fluorescence+imaging+of+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">In situ fluorescence imaging of myelination.</a> J Histochem Cytochem. 58 (7), 611-621 (2010).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.jneurosci.org/content/31/7/2382">Longitudinal near-infrared imaging of myelination.</a> J Neurosci. 31 (7), 2382-2390 (2011).</li>
<li>Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+involved+in+T+cell+migration+across+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms involved in T cell migration across the blood-brain barrier.</a> J Neural Transm. 113 (4), 477-485 (2006).</li>
<li>Badawi, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+EAE+and+prevention+of+blood-brain+barrier+breakdown+after+vaccination+with+novel+bifunctional+peptide+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Suppression of EAE and prevention of blood-brain barrier breakdown after vaccination with novel bifunctional peptide inhibitor.</a> Neuropharmacology. 62 (4), 1874-1881 (2012).</li>
<li>Simmons, S. B., Pierson, E. R., Lee, S. Y., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+heterogeneity+of+multiple+sclerosis+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Modeling the heterogeneity of multiple sclerosis in animals.</a> Trends in immunology. 34 (8), 410-422 (2013).</li>
<li>Lin, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+fMRI+detects+white-matter+dysfunction+in+mice+with+acute+optic+neuritis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Diffusion fMRI detects white-matter dysfunction in mice with acute optic neuritis.</a> Neurobiol Dis. 67, 1-8 (2014).</li>
<li>Knier, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+IL-17+protects+the+optic+nerve+from+autoimmune+pathology+and+prevents+retinal+nerve+fiber+layer+atrophy+during+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Neutralizing IL-17 protects the optic nerve from autoimmune pathology and prevents retinal nerve fiber layer atrophy during experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Autoimmun. 56, 34-44 (2015).</li>
<li>Schellenberg, A. E., Buist, R., Yong, V. W., Del Bigio, M. R., Peeling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+blood-spinal+cord+barrier+disruption+in+mice+with+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Magn+Reson+Med%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of blood-spinal cord barrier disruption in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Magn Reson Med. 58 (2), 298-305 (2007).</li>
<li>Mori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+pathological+alterations+of+lower+lumbar+cords+detected+by+ultrahigh-field+MRI+in+a+mouse+multiple+sclerosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunol%22%5BJournal%5D)">Early pathological alterations of lower lumbar cords detected by ultrahigh-field MRI in a mouse multiple sclerosis model.</a> Int Immunol. 26 (2), 93-101 (2014).</li>
<li>Bittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+TWIK-related+potassium+channel-1+%28TREK1%29+regulates+immune-cell+trafficking+into+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial TWIK-related potassium channel-1 (TREK1) regulates immune-cell trafficking into the CNS.</a> Nat Med. 19 (9), 1161-1165 (2013).</li>
<li>Theien, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+treatment+with+a+small-molecule+VLA-4+antagonist+before+and+after+onset+of+relapsing+EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential effects of treatment with a small-molecule VLA-4 antagonist before and after onset of relapsing EAE.</a> Blood. 102 (13), 4464-4471 (2003).</li>
<li>Hawkins, B. T., Davis, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%2Fneurovascular+unit+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease.</a> Pharmacol Rev. 57 (2), 173-185 (2005).</li>
<li>Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+Natalizumab+blocks+adhesion+but+not+initial+contact+of+human+T+cells+to+the+blood-brain+barrier+in+vivo+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis.</a> J Immunol. 182 (10), 5909-5913 (2009).</li>
<li>Andresen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution intravital microscopy.</a> PLoS One. 7 (12), e50915(2012).</li>
<li>Bukilica, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+suppression+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress-induced suppression of experimental allergic encephalomyelitis in the rat.</a> Int J Neurosci. 59 (1-3), 167-175 (1991).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

הסרטון הנוכחי מראה טכניקות פליטת אור פלואורסצנטי האינפרה-אדום הקרוב בתחום ההדמיה vivo של EAE בעכברים SJL / J. אנו מראים כי הדמיה פליטת אור באמצעות בדיקה רגיש-דלקת בעיקר תערוכות דלקת בעצב הראיה, ואת כימות מסכים עם הערכה קלינית של חומרת EAE ואת ההשפעות של התרופה. עם זאת, שיטת הדמית פליטת אור לא הייתה מסוגלת לזהות דלקת של חוט השדרה המותני, שהנו אתר ראשי של ביטוי EAE 17, ככל הנראה משום האות נספגה על ידי עמוד השדרה. <p class="jove_content" ...

טרשת נפוצה נגרמת על ידי התקפה והרס בתיווך אוטואימוני של מעטפת המיאלין במוח ובחוט השדרה1. עם שכיחות כוללת של כ-3.6 מקרים לכל 100,000 אנשים בשנה בנשים וכ-2.0 בגברים, טרשת נפוצה היא הגורם השני בשכיחותו לנכות נוירולוגית בקרב מבוגרים צעירים, אחרי פציעות טראומטיות2,3. הפתולוגיה של המחלה תורמת על ידי גורמים גנטיים וסביבתיים4 אך עדיין אינה מובנת לחלוטין. לימפוציטים מסוג T אוטוראקטיביים נכנסים למערכת העצבים המרכזית ומעוררים מפל דלקתי הגורם לחדירות מוקדיות בחומר הלבן של המוח, חוט השדרה ועצב הראייה. ברוב המקרים, ההסתננויות הללו הפיכות בתחילה, אך ההתמדה עולה עם מספר הנסיגות. פותחו מספר מודלים של מכרסמים כדי לחקור את הפתולוגיה של המחלה. ה-EAE ההתקפי-הפוגתי בעכברי SJL/J וה-EAE הראשוני-פרוגרסיבי בעכברי C57BL6 הם הדגמים הפופולריים ביותר.
ציוני EAE הקליניים, המתארים את היקף הליקויים בתפקוד המוטורי, ומשקל הגוף הם תקני הזהב להערכת חומרת EAE. סימנים קליניים אלה תואמים את היקף חדירת תאי החיסון והרס המיאלין בחוט השדרה ומנבאים במידה בינונית את יעילות הטיפול התרופתי בבני אדם5. עם זאת, סימנים אלה משקפים בעיקר את הרס דרכי סיבי הגחון בחוט השדרה. נכון לעכשיו, אין שיטה קלה, לא פולשנית, אמינה וניתנת לשחזור להערכת חדירת מוח in vivo ודלקת עצב הראייה בעכברים חיים. 
הדמיה in vivo תואמת את שלושת עקרונות ה-"R" של ראסל וברץ' (1959), הטוענים למיקום R, חינוך R ו-Rשל ניסויים בבעלי חיים6, מכיוון שהדמיה מגדילה את הקריאות של חיה אחת בכמה נקודות זמן ומאפשרת הפחתה של המספרים הכוללים. נכון לעכשיו, דלקת או מצב מיאלין מוערכים בעיקר ex vivo באמצעות אימונוהיסטוכימיה, ניתוח FACS או שיטות ביולוגיות מולקולריות שונות7, כולן דורשות עכברים שעברו המתת חסד בנקודות זמן ספציפיות. 
מספר בדיקות מערכת הדמיה in vivo פותחו כדי להעריך דלקת בעור, במפרקים ובמערכת כלי הדם. הטכניקות מסתמכות על הפעלה של מצעים פלואורסצנטיים ביולוגיים או אינפרא אדום קרוב על ידי פרוקסידאזות רקמות, כולל מיאלופרוקסידאז (MPO), מטריקס מטאלופרוטאינאזות (MMPs)8, ו-cathepsins9 או cyclooxygenase2. בדיקות אלה אומתו בעיקר במודלים של דלקת מפרקים או טרשת עורקים9,10. בדיקה רגישה לקטפסין שימשה גם להדמיה טומוגרפית מולקולרית פלואורסצנטית של EAE11. MMPs, במיוחד MMP2 ו-MMP9, תורמים להפרעה ב-BBB בתיווך פרוטאז ב-EAE ומווסתים באתרים של חדירת תאי חיסון12, מה שמצביע על כך שבדיקות אלה עשויות להיות שימושיות להדמיית EAE. הדבר נכון גם לגבי בדיקות מבוססות פרוקסידאז או קטפסין. מבחינה טכנית, הדמיה של דלקת במוח או בחוט השדרה היא מאתגרת יותר באופן משמעותי מכיוון שהגולגולת או עמוד השדרה סופגים אותות ביולומינסנטים ואינפרא אדום קרוב. 
בנוסף למדדי דלקת, תוארו כימיקלים פלואורסצנטיים, הנקשרים באופן ספציפי למיאלין ועשויים לאפשר כימות של מיאלינציה13. בדיקה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום, 3,3'-diethylthiatricarbocyanine iodide (DBT), נמצאה נקשרת באופן ספציפי לסיבים מיאליניים ואומתה ככלי כמותי במודלים של עכברים של פגמים במיאלינציה ראשונית וב-demyelination14. ב-EAE, אות ה-DBT היה מוגבר למדי, מה שמשקף את הדלקת של סיבי המיאלין5. 
סימן היכר נוסף של EAE וטרשת נפוצה הוא פירוק ה-BBB, וכתוצאה מכך חדירות מוגברת של כלי הדם והפרשה של תאי דם, נוזל חוץ-תאי ומקרומולקולות לפרנכימה של מערכת העצבים המרכזית. זה יכול להוביל לבצקת, דלקת, נזק לאוליגודנדרוציטים, ובסופו של דבר, דמיאלינציה15,16. לפיכך, הדמיה של דליפת ה-BBB באמצעות בדיקות פלואורסצנטיות, כגון אלבומין5, שבדרך כלל מתפשט לאט מאוד מדם לרקמה, עשוי להיות שימושי להערכת EAE.
במחקר הנוכחי, הערכנו את התועלת של בדיקות שונות ב-EAE והראינו את הנוהל לטכניקת האור הביולוגי האמינה והחזקה ביותר. בנוסף, אנו דנים ביתרונות ובחסרונות של בדיקות אינפרא אדום קרוב לפעילות MMP ושלמות BBB.

<table><tbody><tr><td>AngioSpark-680</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA</td><td>NEV10149</td><td>בדיקת הדמיה, ננו-חלקיקים פגיליים, שימושי להדמיה של שלמות מחסום הדם-מוח</td></tr><tr><td>MMP-sense 680</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA</td><td>NEV10126</td><td>בדיקת הדמיה, הניתנת להפעלה על ידי מטריקס מטאלופרוטאינאזות, שימושית להדמיית דלקת</td></tr><tr><td>XenoLight RediJect Inflammation Probe</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב</td><td>760535</td><td>בדיקת הדמיה, הניתנת להפעלה על ידי אוקסידאזות, שימושית להדמיית דלקת</td></tr><tr><td>תחליב PLP139-151/CFA&nbsp;</td><td>Hooke Labs, St Lawrence, MA</td><td>EK-0123</td><td>ערכת אינדוקציה EAE</td></tr><tr><td>Pertussis Toxin</td><td>Hooke Labs, St Lawrence, MA</td><td>EK-0123</td><td>ערכת אינדוקציה EAE</td></tr><tr><td>IVIS Lumina Spectrum</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב</td><td></td><td>מערכת הדמיה ביולומינסנציה ואינפרא אדום</td></tr><tr><td>LivingImage 4.5 תוכנה&nbsp;</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב</td><td>CLS136334</td><td>תוכנת ניתוח IVIS</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Labs, אילינוי, ארה"ב</td><td>26675-46-7</td><td>הרדמה</td></tr></tbody></table>

הדמית פליטת אור קרוב אינפרא אדום של אופטיק בעצב המוח דלקת במודל eae של טרשת נפוצה בעכברים

Bioluminescence and Near-infrared Imaging of Optic Neuritis and Brain Inflammation in the EAE Model of Multiple Sclerosis in Mice

encephalomyelitis אוטואימוניות ניסויית (EAE) בעכברים SJL / J הוא מודל לטיפול בטרשת נפוצה בשלב ההתקפי (RRMS). קליניים עשרות EAE המתאר גירעונות בתפקוד המוטורי הם readouts היסוד של דלקת בתיווך החיסונית של חוט השדרה. עם זאת, עשרות ומשקל הגוף אינם מאפשרים הערכה in vivo של דלקת המוח דלקת בעצב הראיה. זו האחרונה היא ביטוי מוקדם ותכוף בערך 2/3 של חולי טרשת נפוצה. כאן, אנו מציגים שיטות פליטת אור והדמיה האינפרה-אדום הקרוב חי להעריך EAE עורר דלקת בעצב הראיה, דלקת המוח, ואת מחסום הדם-מוח (BBB) שיבוש בעכברים חיים באמצעות מערכת הדמיה vivo. המצע bioluminescent מופעל על ידי oxidases הראה דלקת בעצב הראיה בעיקר. האות היה ספציפי ואפשר ההדמיה של שפעות תרופה וקורסי זמן מחלה, אשר הקבילה ציונים הקליניים. חלקיקים פלורסנט PEGylated שנותרו בתוך vasculaturדואר לפרקי זמן שימשו להעריך את היושרה BBB. קרוב אינפרא אדום ההדמיה חשפה דליפת BBB בשיא המחלה. האות היה החזק סביב העיניים. מצע קרוב אינפרא האדום metalloproteinases מטריקס שמש להערכת דלקת EAE העורר. Auto-קרינה הפריעה האות, מחייב unmixing ספקטרלי כימות. בסך הכל, הדמית פליטת אור הייתה שיטה אמינה להערכת תופעות EAE קשור אופטיות בעצב תרופות והייתה מעולה לטכניקות האינפרה-אדום הקרובים במונחים של סגוליות אות, איתן, קלות כימות, ועלות.

<html> זמן הקורס של פליטת אור של אופטיק דלקת עצבים אות פליטת האור של חללית הדלקת הייתה החזקה סביב העיניים התרחשה באופן בלעדי בעכברי EAE עם דלקת בעצב ראיה. אות התרחשה לא העכברים הלא EAE ולא העכברים לא מוזרקים עם חללית הדלקת. האות נעלמה כאשר העכברים התאוששו. לפיכך, האות היא ספציפית עבור דלקת בעצב הראיה, ואת השיא של האות מקביל לשיא של ...

אנו מציגים טכניקה פליטת אור in vivo חי קרוב אינפרא אדום הדמיה של בעצב הראייה דלקת המוח של encephalomyelitis אוטואימוניות הניסוי (EAE) מודל לטרשת נפוצה בעכברים SJL / J.

הדמית פליטת אור קרוב אינפרא אדום של אופטיק בעצב המוח דלקת במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in SJL/J mice is a model for relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS). Clinical EAE scores describing ...

המטרה הכוללת של טכניקת דימות זו היא להדמיות וכמות של דלקת בחוט העצב האופטי (optic neuritis) ודלקת במוח במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים חיים. השיטה יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הנוירו-אימונולוגיה, כגון מנגנונים חדשים המשפיעים על מהלך ה-EAE והטרשת הנפוצה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לצפות ולכמת דלקת בחוט העצב האופטי ודלקת במוח שהסתירו על ידי EAE בעכברים חיים לאורך כל מהלך המחלה.להשלכות של טכניקה זו יש משמעות טיפולית, כיוון שבאמצעותה ניתן להבחין בהשפעת תרופות שאינה ניכרת במדדי ה-EAE. בהליך זה, המיסו את PTX בריכוז של 2 µg/mL ב-1x PBS וערבבו היטב. לאחר מכן, הזרקו 100 µL של PLP/CFA באופן תת-עורי לעכברים, פעמיים בבסיס הזנב, תחת הרדמה קצרה של איזופלורן.אין להזריק לחלק האחורי של הצוואר, כיוון שתגובות חיסוניות כלשהן בעור הגב העליון או בצוואר יפריעו לדימות של הראש ושל חוט השדרה. שעה עד שעתיים לאחר החיסון, הזריקו לעכברים 100 microliters של PTX באופן תוך-peritoneal. לאחר מכן, 24 שעות אחרי החיסון, הזריקו שוב לעכברים 100 microliters של PTX.עבור עכברי הביקורת, הזרק 100 microliters של CFA ללא PLP פעמיים לבסיס הזנב. מהיום השביעי לאחר החיסון, העरक את התסמינים הקליניים מדי יום בהתאם למערכות הניקוד הסטנדרטיות. כאשר העכברים יגיעו לניקוד הגבוה מ-1, דבר שיקרה בערך ביום ה-10 עד 12 לאחר החיסון, בצע את הדמיית הראשית עם תחילת המחלה.לאחר מכן בצעו את ההדמיה השנייה בשיא המחלה, כיום עד יומיים לאחר הופעת התסמינים הראשוניים, אשר תימשך בין יום לשלושה ימים. לאחר מכן, העכברים יחלימו באופן מלא תוך שבעה עד 10 ימים. הדמיה במהלך המרווחים עשויה להראות עדיין דליפות כלי דם, אך מדדי הדלקת צריכים להיות שליליים.לביצוע דימות in vivo, החזיקו את העכברים תחת הרדמה של 2% עד 2.5% isoflurane במהלך כל הליכי הדימות. מקמו שני עכברים זה לצד זה במכשיר, ומקמו את עמוד השדרה העליון של העכברים במרכז. לאחר מכן, כסו את אתר החסון בבד שחור.פתחו את התוכנה ללכידת תמונות ואתחלו את המצלמה. לאחר מכן, צלמו תמונת בסיס כדי להעריך את המיקום הנכון של העכברים. לאחר מכן, השתמשו במיקוד B במרחק של 6.5 centimeter מהמצלמה לצורך לכידת כל התמונות.לאחר מכן, ערבבו את الريאגנט הכמילומניסצנטי המוכן לשימוש בריכוז של 40 milligrams per milliliter לפני מילוי המזרק. לאחר מכן, מזריקו 100 microliters ממנו לעכברים באופן אינטרה-פריטוניאלי וצלמו תמונות ביו-לומינסצנציה חמש, 10 ו-15 דקות לאחר ההזרקה. במהלך הליך זה, פתחו את התוכנה לניתוח ביו-לומינסצנציה.בסרגל התפריטים העליון לחצו על סמל דפדפן הקבצים (File Browser). עברו לספרייה של תיקיית הניסוי ופתחו את הקבצים, ולאחר מכן הגדירו את העמודות המציגות את התיאורים הרלוונטיים לניסוי. לצורך בקרת איכות, לחצו על קובץ של עכבר שאינו מגיב (non-responder) ללא תסמיני EAE, או על עכבר נאיבי (naive), כדי לבדוק את הספציפיות של אותות ה-EAE.כביקורת נוספת לסגוליות האות, יש לבדוק את תמונת הבסיס לפני הזרקת הגשש עבור כל עכבר, אשר צריכה להיות שלילית. כדי לבחור תמונה, לחצו על הקובץ הראשון של עכבר ה-EAE הראשון ובדקו את עוצמת הביולומינסנציה ואת המיקום. בדקו את כל התמונות אחת אחת.לצורך כימות, השתמשו בתמונה בעלת האות החזק ביותר עבור כל עכבר. כדי להתאים ולייצא את התמונה, לחצו פעמיים על הקובץ הראשון שברצונכם לכמת. בחלון חדש שייפתח, תחת כפתור ה-Options, התאימו את התוויות שיוצגו בכל מסך.בלוח כלי העבודה הימני, עברו ל-Image Adjustment. כברירת מחדל, עוצמות המינימום והמקסימום מוגדרות כ-auto ומוצגות בצבעי פסאודו-קשת. בחרו ב-Manual כדי לשנות את ההגדרות במידת הצורך.בשלב הבא, לחצו על Image Export, בחרו ב-PNG, בתיקייה ובשם לתמונה. לצורך כימות של אזורי העניין, עברו לכלי ה-ROI במארז הכלים. בחרו את שיטת ה-ROI ואת מספר ה-ROIs.בחלון ה-ROI בתוך חלון התמונה, התאם את הגודל והמיקום של ה-ROI. השתמש בספי thresholds זהים עבור כל התמונות כאשר נעשה שימוש בכלי ה-auto ROI. השתמש באזורים זהים עבור כל התמונות אם הגודל והמיקום של ה-ROI נקבעים באופן ידני.לאחר מכן, לחצו על Measure ROI. התאימו אישית את העמודות בפרטי הניסוי בחלון קופץ חדש ושמרו אותן. כשאתם מוכנים, בחרו הכל, העתיקו והדביקו את הטבלה לתוך גיליון אלקטרוני.לאחר מכן, ייצאו את התמונה כקובץ PNG כאשר ה-ROIs נמצאים במקומם. לאחר מכן, שמרו וסגרו את קובץ התמונה. להלן דוגמאות של שני עכברי SJL/J שצולמו ביום ה-10 וה-14 לאחר השראת EAE.האות הביולומינסצנטי סביב העיניים היה בשיאו ביום ה-10, ונעלם כאשר העכברים החלו להחלים. תרשימי העמודות כאן מציגים את הכימות של האותות הביולומינסצנטיים ביום 10 ו-14, בעוד שציוני ה-EAE הקליניים מוצגים כאן. באיור זה, תמונות ביולומינסצנטיות של חמישה עכברים בכל קבוצה מראות את השפעת התרופה, שבה נצפתה הפחתה של דלקת עצב הראייה בעכברים שטופלו ב-R-flurbiprofen.הכמות של סך ספירות הביולומינצנציה ב-ROIs איששה את יעילות הטיפול המשמעותית. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעתיים עד שלוש שעות, בהתאם למספר העכברים שיש לדגום. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להשתמש בעכברים לבנים ולעקוב מקרוב אחר המהלך הקליני של EAE.בעקבות נוהל זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון אנליזת FACS או אימונוהיסטוכימיה כדי לענות על שאלות נוספות, כגון חדירת תאי מערכת החיסון אל חוט השדרה. לאחר צפייה בסרטון, צריכה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להעריך דלקת של העצב האופטי ודלקת מוח במודל EAE של טרשת נפוצה באמצעות דימות ביולומינסצנטי.

bioluminescence-near-infrared-imaging-optic-neuritis-brain

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים הליך להערכת הפרעה במחסום דם-מוח במודל עכבר EAE. צבעים פלואורסצנטיים בגדלים שונים מוזרקים רטרו-מסלולית וזורמים דרך כלי הדם במוח. הצבע הקטן יותר דולף דרך רווחים לתוך רקמת המוח, ואילו הצבע הגדול יותר נכנס רק אם ההפרעה חמורה, בקורלציה עם מידת הנזק למחסום.

קביעת הפרעה במחסום הדם-מוח באמצעות צבעים פלואורסצנטיים במודל עכבר EAE

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

מקור: Breid, S., et. al. הדמיה ביולומינסנציונית של דלקת עצבית בעכברים טרנסגניים לאחר חיסון היקפי של סיבי אלפא-סינוקלאין. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את הדמיית הביולומינסנציה של דלקת עצבית בעכברים טרנסגניים, ומציג תגובות לוציפראז-לוציפרין באסטרוציטים פעילים. הפרוטוקול מאפשר כימות לא פולשני של הפעלה אסטרוציטית, ומסייע למחקרים על דלקת במערכת העצבים המרכזית ויעילות טיפולית.

הדמיה ביולומינסנציה של דלקת עצבית בעכבר טרנסגני

מקור: Schmitz, K., et al., bioluminescence והדמיה קרובה לאינפרא אדום של דלקת עצב הראייה ודלקת מוחית במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים. J. Vis. Exp. (2017).סרטון זה מדגים את השיטה להמחשה וניטור של דלקת מוח אוטואימונית ניסיונית או דלקת הנגרמת על ידי EAE בעצב הראייה באמצעות הדמיית ביולומינסנציה. זה כולל מיקום העכבר, הזרקת ריאגנטים ולכידת תמונות עוקבות כדי לנטר שינויים בביולומינסנציה לאורך זמן.

הדמיית ביולומינסנציה במודל עכבר EAE

אנו מתארים שיטה להשתלה ותחזוקה של חלונות זכוכית מעל חוט השדרה החשוף של עכברים בוגרים לחקר דלקת מוח אוטואימונית ניסיונית. חלונות אלה מספקים גישה אופטית כרונית לחוט השדרה לניטור דינמיקת התאים ברמה התת-תאית בבעלי חיים חיים באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית.

השתלת זכוכית חוט השדרה של Windows בעכברים בוגרים עם ניסיון אוטואימוניות Encephalomyelitis

כתב יד זה מתאר את השיטות לאינדוקציה וניקוד של מודל דלקת המוח האוטואימונית הניסויי (EAE), יחד עם הערכת התפלגות תאי החיסון ורמות ציטוקינים mRNA בבלוטות הלימפה, הטחול, הדם וחוט השדרה באמצעות ציטומטריית זרימה ו-PCR כמותי, בהתאמה, בשלבי מחלה שונים.

אינדוקציה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis עכברים וההערכה של הפצת מחלות התלויה של תאים חיסוניים ברקמות שונות

הזרקה היקפית של סיבים-synuclein אלפא לתוך הצפק או הלשון של Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים, המבטאים אלפא-synuclein אדם עם מוטצית A53T משפחתית בלוציפראז גחלילית, יכול לגרום בנוירופתולוגיה, כולל neuroinflammation , במערכת העצבים המרכזית שלהם.

הדמית פליטת אור של neuroinflammation בעכברים טרנסגניים לאחר היקפיים הרכבה של אלפא-Synuclein סיבים

פרוטוקול זה מתאר איך ברזולוציה גבוהה טכניקות הדמיה כגון טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי, סריקת לייזר ophthalmoscopy יכול להיות מנוצל מכרסמים קטנים, באמצעות מערכת פלטפורמה אופטלמולוגיות הדמיה, כדי לקבל מידע על עובי רשתית, microglial תא הפצה, בהתאמה.

אין ויוו הדמיה של עכברים כתב Cx3cr1gfp/gfp עם תחומים הספקטרום טומוגרפיה אופטית קוהרנטית, סריקת לייזר Ophthalmoscopy

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים לחקור ליקוי של היחידה נוירו-וסקולריים במהלך ניסיוני אוטואימוניות דלקת המוח וחוט השדרה ויוו. אנו הכתובת באופן ספציפי כיצד לקבוע את מחסום הדם - מוח חדירות ופעילות gelatinase מעורבים בהעברה ליקוציט לרוחב limitans עכשיו, דונלד.

להמחיש ירידת ערך של המחסומים אנדותל, גליה של היחידה נוירו-וסקולריים במהלך ניסיוני אוטואימוניות דלקת המוח וחוט השדרה In Vivo

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי המשתמש בגליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים וניטור תהליך המחלה באמצעות מערכת ניקוד קלינית. תסמינים אוטואימוניים ניסיוניים הקשורים לאנצפלומיאליטיס מנותחים באמצעות ניתוח טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת של עצם הירך ובדיקת שדה פתוח כדי להעריך את תהליך המחלה באופן מקיף.

אינדוקציה ומדדי הערכה מגוונים של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) משמשת כמודל של בעלי חיים לטרשת נפוצה. מאמר זה מתאר גישה לניקוד דלקת בחוט השדרה, דמיאלינציה ופגיעה אקסונלית ב- EAE. בנוסף, מוצגת שיטה לכימות רמות האור של נוירופילמנט מסיס בסרום העכברים, המאפשרת הערכה של פגיעה אקסונלית בעכברים חיים.

ניקוד דלקת במערכת העצבים המרכזית, דמיאלינציה ופגיעה באקסון באנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

למד הדמיה ביולומינסצנטית של נויריטיס אופטי ודלקת מוח במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים SJL/J. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחרי התקדמות המחלה ויעילות טיפולית.

הדמית פליטת אור קרוב אינפרא אדום של אופטיק בעצב המוח דלקת במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים

גלה סרטונים נוספים