Name: בידוד, אפיון, טיהור של מקרופאגים רקמות מושפעות על ידי דלקת הקשורות להשמנת יתר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: למד לבודד ולאפיין מקרופאגים מרקמות דלקתיות בכבד הנגרמות מהשמנת יתר. שיטה זו מאפשרת חקר תפקידם במחלות דלקתיות כרוניות ובהפרעות מטבוליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות על המתקן הליבה Cytometry זרימה ב- פנסילבניה המדינה אוניברסיטת המילניום מדע מורכבים.

<ol><li>Davies, L. C., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophages%3A+Then+and+Now%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophages: Then and Now.</a> Immunology. 144 (4), 541-548 (2015).</li>
<li>Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+linking+obesity+to+insulin+resistance+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes.</a> Nature. 444 (12), 840-846 (2006).</li>
<li>Van Gaal, L. F., Mertens, I. L., De Block, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+linking+obesity+with+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms linking obesity with cardiovascular disease.</a> Nature. 444 (12), 875-880 (2006).</li>
<li>Jung, U., Choi, M. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+and+Its+Metabolic+Complications%3A+The+Role+of+Adipokines+and+the+Relationship+between+Obesity%2C+Inflammation%2C+Insulin+Resistance%2C+Dyslipidemia+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Obesity and Its Metabolic Complications: The Role of Adipokines and the Relationship between Obesity, Inflammation, Insulin Resistance, Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> Int J Mol Sci. 15 (4), 6184-6223 (2014).</li>
<li>Emanuela, F., Grazia, M., Marco, D. R., Maria Paola, L., Giorgio, F., Marco, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+as+a+link+between+obesity+and+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">Inflammation as a link between obesity and metabolic syndrome.</a> Nutr Metab. 2012, 1-7 (2012).</li>
<li>Vieira-Potter, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+macrophage+modulation+in+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Inflammation and macrophage modulation in adipose tissues.</a> Cell Microbiol. 16 (10), 1484-1492 (2014).</li>
<li>Chawla, A., Nguyen, K. D., Goh, Y. P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-mediated+inflammation+in+metabolic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage-mediated inflammation in metabolic disease.</a> Nat Rev Immunol. 11 (11), 738-749 (2011).</li>
<li>Dey, A., Allen, J., Hankey-giblin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+and+polarization+of+macrophages+in+inflammation+%3A+blood+monocytes+versus+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny and polarization of macrophages in inflammation : blood monocytes versus tissue macrophages.</a> Front Immunol. 5 (1), 1-15 (2015).</li>
<li>Mills, C. D., Lenz, L. L., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+at+the+fork+in+the+road+to+health+or+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophages at the fork in the road to health or disease.</a> Front Immunol. 6 (2), 1-6 (2015).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5 (8), 1-22 (2014).</li>
<li>Guilherme, A., Virbasius, J. V., Vishwajeet, P., Czech, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+dysfunctions+linking+obesity+to+insulin+resistance+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Adipocyte dysfunctions linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 9 (5), 367-377 (2008).</li>
<li>Cummins, T. D., Holden, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+remodeling+of+white+adipose+tissue+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Metabolic remodeling of white adipose tissue in obesity.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 307 (3), 262-277 (2014).</li>
<li>Fujisaka, S., Usui, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+Mechanisms+for+Adipose+Tissue+M1+and+M2+Macrophages+in+Diet+Induced+Obese+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Regulatory Mechanisms for Adipose Tissue M1 and M2 Macrophages in Diet Induced Obese Mice.</a> Diabetes. 58 (9), 2574-2582 (2009).</li>
<li>Lumeng, C. N., Bodzin, J. L., Saltiel, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+induces+a+phenotipic+switch+in+adipose+tissue+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Obesity induces a phenotipic switch in adipose tissue macrophage polarization.</a> J Clin Invest. 117 (1), 175-184 (2007).</li>
<li>Qureshi, K., Abrams, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+liver+disease+of+obesity+and+role+of+adipose+tissue+in+the+pathogenesis+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Metabolic liver disease of obesity and role of adipose tissue in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease.</a> World J Gastroenterol. 13 (26), 3540-3553 (2007).</li>
<li>Bedossa, P., Paradis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+extracellular+matrix+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Liver extracellular matrix in health and disease.</a> J Pathol. 200 (4), 504-515 (2003).</li>
<li>Tilg, H., Moschen, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+inflammation+in+nonalcoholic+fatty+liver+disease%3A+The+multiple+parallel+hits+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Evolution of inflammation in nonalcoholic fatty liver disease: The multiple parallel hits hypothesis.</a> Hepatology. 52 (5), 1836-1846 (2010).</li>
<li>Milic, S., Lulic, D., Stimac, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-alcoholic+fatty+liver+disease+and+obesity%3A+Biochemical%2C+metabolic+and+clinical+presentations%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Non-alcoholic fatty liver disease and obesity: Biochemical, metabolic and clinical presentations.</a> World J Gastroenterol. 20 (28), 9330-9337 (2014).</li>
<li>Williams, I. L., Wheatcroft, S. B., Shah, A. M., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+atherosclerosis+and+the+vascular+endothelium%3A+mechanisms+of+reduced+nitric+oxide+bioavailability+in+obese+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obesity%22%5BJournal%5D)">Obesity, atherosclerosis and the vascular endothelium: mechanisms of reduced nitric oxide bioavailability in obese humans.</a> Int J Obesity. 26 (12), 754-764 (2002).</li>
<li>Mestas, J., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-Endothelial+Cell+Interactions+in+the+Development+of+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Monocyte-Endothelial Cell Interactions in the Development of Atherosclerosis.</a> Trends Cardiovasc Med. 18 (6), 228-232 (2008).</li>
<li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+biology+in+development%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li>
<li>Davies, L. C., Jenkins, S. J., Allen, J. E., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.nature.com/ni/journal/v14/n10/full/ni.2705.html">Tissue-resident macrophages.</a> Nat Rev Immunol. 14 (10), 986-995 (2013).</li>
<li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+specific+cell+population+by+fluorescence+activated+cell+sorting+%28FACS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Purification of specific cell population by fluorescence activated cell sorting (FACS).</a> J Vis Exp. (41), e1546(2010).</li>
<li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization%2C+Identification%2C+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> J Vis Exp. (94), e52174(2014).</li>
<li>Smedsrød, B. Protocol for preparation of mouse liver Kupffer cells and liver sinusoidal endothelial cells. 1, Available from: 
 <a target="_blank" href="http://munin.uit.no/handle/10037/4575">http://munin.uit.no/handle/10037/4575</a> 1-10 (2012).</li>
<li>Butcher, M. J., Herre, M., Ley, K., Galkina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+analysis+of+immune+cells+within+murine+aortas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas.</a> J Vis Exp. (53), e2848(2011).</li>
<li>Salamone, M., Saladino, S., Pampalone, M. <a target="_blank" href="http://www.aidic.it/cet/14/38/042.pdf">Tissue Dissociation and Primary Cells Isolation Using Recombinant Collagenases Class I and II.</a> Chemical Engineering Transactions. 38, Matsushita 1994 247-252 (2014).</li>
<li>Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+matrix+stiffness+in+regulating+cell+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The role of matrix stiffness in regulating cell behavior.</a> Hepatology. 47 (4), 1394-1400 (2008).</li>
<li>Fain, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Free+Brown+and+White+Fat+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Isolation of Free Brown and White Fat Cells.</a> Diabetologia. 375 (1964), 555-561 (1968).</li>
<li>Seglen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+isolated+rat+liver+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Method+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of isolated rat liver cells.</a> Method Cell Biol. 13, 29-83 (1976).</li>
<li>Yu, S., Allen, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ron+Receptor+Tyrosine+Kinase+Regulates+Macrophage+Heterogeneity+and+Plays+a+Protective+Role+in+Diet-Induced+Obesity%2C+Atherosclerosis%2C+and+Hepatosteatosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Ron Receptor Tyrosine Kinase Regulates Macrophage Heterogeneity and Plays a Protective Role in Diet-Induced Obesity, Atherosclerosis, and Hepatosteatosis.</a> J Immunol. 197 (1), 256-265 (2016).</li>
<li>Yu, Y. R. A., O'Koren, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLoS ONE. 11 (3), 1-23 (2016).</li>
<li>Zizzo, G., Hilliard, B. A., Monestier, M., Cohen, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+clearance+of+early+apoptotic+cells+by+human+macrophages+requires+%26%2334%3BM2c%26%2334%3B+polarization+and+MerTK+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Efficient clearance of early apoptotic cells by human macrophages requires &#34;M2c&#34; polarization and MerTK induction.</a> J Immunol. 100 (2), 130-134 (2012).</li>
<li>Jablonski, K. A., Amici, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+markers+to+delineate+murine+M1+and+M2+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Novel markers to delineate murine M1 and M2 macrophages.</a> PLoS ONE. 10 (12), 5-11 (2015).</li>
<li>Rőszer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+Mysterious+M2+Macrophage+through+Activation+Markers+and+Effector+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+of+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Understanding the Mysterious M2 Macrophage through Activation Markers and Effector Mechanisms.</a> Mediators of Inflamm. 2015, 1-16 (2015).</li>
<li>Cho, K. W., Morris, D. L., Lumeng, C. N. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24480353">Flow Cytometry Analysis of Adipose Tissue Macrophages.</a> Methods Enzymol. 4 (164), 297-314 (2011).</li>
<li>Kim, Y. -J., Brox, T., Feiden, W., Weickert, J. Technical Note: Flow Cytometry Controls, Instrument Setup, and the Determination of Positivity. Cytometry A. 71 (1), 8-15 (2007).</li>
<li>Tung, J. W., Heydari, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+Flow+Cytometry%3A+A+Practical+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Modern Flow Cytometry: A Practical Approach.</a> Clin Lab Med. 27 (3), 453-468 (2007).</li>
<li>Martinez, F. O., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+M1+and+M2+paradigm+of+macrophage+activation%3A+time+for+reassessment%5BTitle%5D)+AND+%22F1000%22%5BJournal%5D)">The M1 and M2 paradigm of macrophage activation: time for reassessment.</a> F1000. 6 (3), 13(2014).</li>
<li>Porcheray, F., Viaud, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+switching%3A+An+asset+for+the+resolution+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation switching: An asset for the resolution of inflammation.</a> Clin Exp Immunol. 142 (3), 481-489 (2005).</li>
<li>Plouffe, B. D., Murthy, S. K., Lewis, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+and+Application+of+Magnetic+Particles+in+Cell+Isolation+and+Enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22Rep+Prog+Phys%22%5BJournal%5D)">Fundamentals and Application of Magnetic Particles in Cell Isolation and Enrichment.</a> Rep Prog Phys. 1 (78), 1-6 (2010).</li>
</ol>

לעורכים יש אינטרסים לא לחשוף.

דיאטה-induced הפרעות מטבוליות בדגמי לחקות morbidities שיתוף כגון טרשת עורקים, steatosis פשוטה, steatohepatitis ואף סוכרת מסוג 2 נמצאים בשימוש נרחב כדי להבין טוב יותר את המנגנונים המולקולריים שבבסיס של התקדמות המחלה. עיכול תלויים collagenase משמש לעתים קרובות מביצועם רקמות לשחרר תאים16,מטריצה חוץ-תאית (ECM)27. אנזימים כמו collagenase לשבש קולגן אשר מספק תמיכה מבנית השכנה תאים. הקומפוזיציה של הרקמות מבנית מכתיבה את הקשיחות מטריקס רקמות (התנגדות דפורמציה), איזה מוצר...

העכבר מודלים היו בשימוש נרחב ללמוד את הדינמיקה של מחלות אנושיות. בידוד תקין של רקמות תאים תושב עכברים בתוך מדינה חולה יכול לספק פלטפורמה להבנת מולקולרית, תאית התרומות בפתוגנזה של המחלה1. הפרעה אחת זה חשיבות קריטית היא השמנת יתר. שכיחות ההשמנה ממשיכה לעלות בכל העולם במקביל לאינסולין סוג 2 סוכרת מחלות לב וכלי דם, מחלת כבד שומני2,3. צריכת מזון נוסף מוטה על ידי ירידה פעילות גופנית מפעילה שינו אותות שמקורם רקמת שומן, אשר יכול לשנות את חצרו הסלולר של רקמות היקפיים אחרים כגון אב העורקים ואת הכבד4. כזה שיבוש הומאוסטזיס המטבולית גורמת לדלקת מערכתית כרונית נמוך בכיתה5.
הפעלה קלאסית של מקרופאגים תושב העורקים ואת הכבד, כמו גם את הגיוס שומן לבן (וואט) הוכח ליזום dysregulation של אותות מטבולי אלא גם לקיים דלקת6,7. הטרוגניות פנוטיפי ופונקציונליים של מקרופאגים קשורה חזק בפתוגנזה של השמנת יתר הקשורים לעבודה morbidities7. הפלסטיות דינמי ב מקרופאג קיטוב מאפשר תאים אלה שהפגינו מגוון פנוטיפים מופעל זה לתאם את התקדמות והרזולוציה של דלקת8. בעוד בסגנון קלאסי מופעל מקרופאגים (M1) הם מעורבים על התפשטות של דלקת, לחלופין מופעל מקרופאגים (M2) קושרו עם רזולוציה ורקמות תיקון9,10.
כפי הגוף עובר מתח מטבולית, שומן לבן מצטבר באופן חריג. רקמת שומן המורחב מושך, שומר על תאים דלקתיים שמשנות עמוקות adipocyte רגילה פונקציה כדי לקדם את תנגודת לאינסולין, היפרגליקמיה, בסופו של דבר סוכרת סוג 2, תנגודת לאינסולין או היפרגליקמיה11, 12. במקביל, remodels שומן לבן בתגובה אותות דלקתיים שפורסמו על ידי הסתננו מופעל באופן קלאסי (M1) רקמת שומן מקרופאגים (כספומטים)13,14. איבר זה רב תאית מפעילה מפל של אותות זה תוקע את התיפקוד הרגיל של איברים אחרים בגוף כגון אבי העורקים, כבד4.
הכבד הוא עוצמתי מטבולית המסתגל בתגובה לגירויים שמקורם dysregulated הסמוך וואט15. מקרופאגים כבדית או תאים Kupffer, כתגובה לשינויים מטבוליים, מפרישים ציטוקינים דלקתיים שהופכים שניהם parenchymal ו תא הלא-parenchymal פנוטיפ ולקדם רקמות. הצטברות שומנים בדם הכבד, דלקת, פיקדונות מופרז מטריצה חוץ-תאית, נמק, הפונקציה בסופו של דבר אובדן כדלקמן העלבונות דלקתיות לתרום ספקטרום רחב של פגיעה בכבד הקשורים אלכוהוליים מחלת כבד שומני 1617,,18.
במקביל וואט פרוץ, תפקודי כבד, עורקים גדולים לצבור שומנים בתוך קיר עורקים כפי הגוף עובר מתח מטבולית כרונית19. הצטברות שומנים בדם עורקי מפעיל את הפרשת נוגדנים על ידי תאי אנדותל מופעל והגיוס עוקבות של monocytes20. ברגע גייס, ומונוציטים להתרבות, להבדיל, להבלע lipoproteins, להפוך לתאי קצף. Atherogenesis יזם, נגרם על ידי פעילות הפרו דלקתיים גייס ו רקמות לאדן השומנים תושב מקרופאגים. להיכנע האותות חוץ-תאית, תאיים סטרס נמסר ב- microenvironment atherogenic הזה, מקרופאגים האלה ואז לעסוק מוות איתות בהתאם להיררכית הקשרים. כאשר תאים אלה קצף מתים, הם תורמים את תוכנם השומנים מלא אל ליבה נמק של הנגע, מה שמוביל ואז קרע פלאק, אוטם שריר הלב ושבץ.
באופן קולקטיבי, הטרוגניות של פנוטיפים מקרופאג האחראית בחלקו השמנת יתר הנגרמת על ידי שינויים דלקתיים שנצפתה dysregulated רקמות כגון וואט, הכבד, אבי העורקים8,21. אפיון גייס, מקרופאגים תושב רקמות יכול לספק תובנות פוטנציאליים מטרות מולקולריות שמטפלות מקרופאג פנוטיפ1. לאפיין ביעילות מקרופאגים רקמות מודלק השמנת יתר-induced, ניתן לקבל השעיה תא בודד באמצעות עיכול אנזימטי. פרוטוקולים דיסוציאציה כזה חייב להיות יעיל דיו משפילים רקמת חיבור תוך מזעור מוות של תאים חיסוניים, מתן תשואה אופטימלית בתא. התערובת אנזים הוא תלוי בסוג הרקמה איפור המבני שלה. רקמות גמיש כמו אבי העורקים דורש פעילות אנזימטי חזק יותר, לעומת הכבד ו וואט, כדי להשיג רקמה דיסוציאציה. מן התליה תא בודד, מקרופאגים תושב רקמות ניתן חד משמעית מאופיין או מבודדים עבור נוסף במורד הזרם ניתוחים כגון יצירת פרופיל תעתיק.
כאן פרוטוקול רקמות ספציפיות מתואר המשתמשת תלויי-collagenase רקמות לעיכול, cytometry זרימה צבעוני לבודד ביעילות לאפיין את רקמת תושב מקרופאגים המתקבל השמנה דיאטה מסורתי המושרה, טרשת עורקים, פשוט steatosis ומודלים steatohepatitis העכבר. סימולטני מכתים של סמני פני שטח התא עם נוגדנים נגד ליקוציט-(CD45 או CD11b) וגם מקרופאג - אנטיגנים ספציפיים (F4/80) משמשת לעתים קרובות כדי לזהות אוכלוסיות מקרופאג22. תא לפעיל על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיון (FACS) היא אסטרטגיה רב עוצמה המשמש למיון אוכלוסיות אלה שזוהו על טוהר גבוהה. אז ניתן להעריך האוכלוסייה ממוינים לפרופילי גנים ספציפיים פנוטיפ באמצעות אנליזה מולקולרית במורד הזרם (כגון תגובת שרשרת של פולימראז בזמן אמת כמותית)23. למרות cytometry זרימה רגילה ומיון תא מבוססי cytometry זרימה כלים רבי-עוצמה בהבחנה מקרופאגים בתוך השעיה תא הטרוגנית מאוד, הפרוטוקולים לשעבר חייב להיות מוטבת כדי להבטיח פלט מוצלחת. במחקר זה, פרוטוקולים של ביעילות לבודד, לאפיין את רקמת קיימא מקרופאגים ספציפיים מתוארים; חשוב יותר, מחקר זה מספק תובנה מכריע בנושאים טכניים הנובעים לעתים קרובות, כמו גם אסטרטגיות פרואקטיבית וגישה לפתרון בעיות כדי למנוע ו/או לפתור אותן.

<table><tbody><tr><td>26 גרם x 5/8 במחטים</td><td>BD</td><td>305115</td><td></td></tr><tr><td>23 גרם x 0.75 במחט x 12 אינץ' סט איסוף דם</td><td>BD</td><td>367297</td><td>משמש לקנולציה של IVC תת-כבדי במהלך זלוף כבד</td></tr><tr><td>21 גרם 1 1/2 אינץ'. מחטים</td><td>BD</td><td>305156</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל עם עצירות גומי</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל</td> מזרק <td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל BD</td><td></td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>F4/80 PE</td><td>Biolegend</td><td>123110</td><td></td></tr><tr><td>CD11c PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>117318</td><td></td></tr><tr><td>CD11b PE/Cy5</td><td>eBioscience</td><td>15-0112-81</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD16/32 FC בלוק&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>CD45 פסיפיק כחול</td><td>Biolegend</td><td>103126</td><td></td></tr><tr><td>PE חולדה IgG2a</td><td>Biolegend</td><td>400508</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 אוגר ארמני IgG</td><td>Biolegend</td><td>400922</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy5 חולדה IgG2b</td><td>Biolegend</td><td>400610</td><td></td></tr><tr><td>חולדה כחולה פסיפית IgG2c</td><td>Biolegend</td><td>400717</td><td></td></tr><tr><td>דולבקו s מדיום נשר שונה (DMEM)&nbsp;</td><td>Cellgro</td><td>15-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>1x מי מלח פוספט חוצץ (PBS)</td><td>Cellgro</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; מסנני תאים m</td><td>קורנינג, בע"</td>מ<td>352350</td><td></td></tr><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה 1.7 מ"ל&nbsp;</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה מימית פרפורמלדהיד -16x</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>CAS #30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו חיתוך, 3.5 אינץ ', ישר, 23 מ"מ, חד&nbsp;</td><td>Stoelting</td><td>52132-10P</td><td>משמש למטרות ניתוח כלליות</td></tr><tr><td>מיקרו מלקחיים, 4 אינץ', עקומה מלאה, 0.8 מ"מ</td><td>Stoelting</td><td>52102-37P&nbsp;</td><td>משמש למטרות ניתוח כלליות</td></tr><tr><td>מספריים לחיתוך קפיץ &ndash; 3 מ"מ קצה חיתוך&nbsp;</td><td>כלי מדע עדין</td><td>15000-10</td><td>משמש לדיסקציה של אבי העורקים שלבים 1.3.3.17 עד 1.3.3.28</td></tr><tr><td>מעוקל 0.07 מ"מ x 0.04&nbsp; מלקחיים עם קצה מ"מ</td><td>כלי מדע עדין</td><td>11297-10</td><td>משמש לדיסקציה של אבי העורקים שלבים 1.3.3.17 עד 1.3.3.28</td></tr><tr><td>מלקחיים המוסטטיים (מעוקלים)</td> <td>כלי מדע עדין</td><td>13021-12</td><td></td></tr><tr><td>מלח נתרן הפרין</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>9041-08-1</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ תרבית תאים/צלחות פטרי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-565-90</td><td></td></tr><tr><td>כלי פטרי פוליסטירן (10 ס"מ) עם מכסה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-757-100D</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה חרוטיים (פוליפרופילן)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה חרוטיים&nbsp;( פוליפרופילן)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל צינורות פוליסטירן תחתונים עגולים&nbsp;</td><td>Fischer Scientific</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (מלאי אתיל אלכוהול מפוגל, Anyhydrous)</td><td>Millipore</td><td>EX0285-1</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>רוקלנד</td><td>BSA-50</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג II</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>קולגנס סוג XI</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C7657</td><td></td></tr><tr><td>היאלורונידאז סוג I</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>DNAse</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג I</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>1310-73-2&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma Aldrich</td><td>449709-10G</td><td></td></tr><tr><td>500 מ"ל&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>02-540M</td><td></td></tr><tr><td>4 ס"מ מהדק המוסטטי</td><td>סטולטינג</td><td>52120-40</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עם שיניים</td><td></td><td>52104-33P</td><td></td></tr><tr><td>50 &mu; m מסננים חד פעמיים</td><td>Systemex</td><td>04-0042-2317</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג IV</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום כלוריד אשלגן (ACK)</td><td>ThermoFischer Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>A1049201</tr><tr><td>סכיני גילוח (0.22 מ"מ (0.009 אינץ')))</td> <td>VWR International</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>Texas Red Live/Dead Stain</td><td></td><td></td><td>Red כתם כדאיות אדום (ב<חזק>איור 1A</חזק>)</td></tr></tbody></table>

בידוד, אפיון, טיהור של מקרופאגים רקמות מושפעות על ידי דלקת הקשורות להשמנת יתר

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

השמנת יתר מקדמת מדינה דלקתית כרונית בעיקר מתווך על ידי רקמת תושב מקרופאגים, כמו גם נגזר מונוציט מקרופאגים. דיאטה-induced השמנת יתר (דיו) הוא מודל ערך לומד את התפקיד של הטרוגניות מקרופאג; עם זאת, ומשום מקרופאג נאותה קשים לרכוש רקמות מודלק. ב פרוטוקול זה, אנו מכינים את הצעדים בידוד ואת ההנחיות הדרושות לפתרון בעיות נגזר מן המחקרים שלנו להשגת אוכלוסייה מתאימים של מקרופאגים רקמות תושב של עכברים לאחר 18 שבועות עתירת שומן (HFD) או שומן/תיכון-כולסטרול ( התערבות תזונה HFHCD). פרוטוקול זה מתמקד שלוש רקמות הולמרק למד ב השמנת יתר, טרשת עורקים, כולל הכבד, רקמות adipose לבן (וואט) של העורקים. אנחנו להדגיש השימוש איך דואלית של זרימה cytometry ניתן להשיג מימד חדש של בידוד ואפיון של רקמות תושב מקרופאגים. מקטע יסוד של פרוטוקול זה מטפל המורכבות הבסיסית digestions אנזימטי רקמות ספציפיות מקרופאג בידוד, ואת הבאים נוגדן תא-פני מכתים לניתוח cytometric זרימה. פרוטוקול זה מטפל המורכבות הקיימת בבסיס תא לפעיל על-פלורסנט מיון (FACS) ומציגה הבהרות על המורכבות כדי להשיג אפיון במגוון רחב של אוכלוסיות תאים ממוינים כראוי. שיטות חלופיות העשרה הינם כלולים למיון תאים, כגון הכבד צפופה, ומאפשר גמישות וניהול זמן בעת עבודה עם FACS. בקצרה, פרוטוקול זה מסייע החוקר להעריך מקרופאג הטרוגניות של שפע של רקמות מודלק במחקר נתון, ומספק עצות לפתרון בעיות תובנה כי כבר מוצלח עבור בידוד תאית חיובית ואפיון של תאים חיסוניים בדלקת בתיווך דיו.

בעת שימוש לקוי אפוליפופרוטאין E עכברים (ספקיות KO) C57BL/6 (BL6) שמרו על דיאטה גבוה כולסטרול גבוה שמן (HCHFD או HCD) 18 שבועות, עונה 1 פרק 10-4 - 2 x 104 CD45+F4/80+ מקרופאגים אבי העורקים ניתן לבודד בעת ששתי הדגימות במאגר. כבדי גזור מן HFHCD-fed ספקיות KO עכברים, הפיק גדול מ- 5 x 105 ממוין Kupffer תאים (אשר תלוי זמן פנוי המיון). בעת שימוש בשומן (HFD) ניזון פראי סוג (WT) עכברים C57BL/6, 5 x 105 ל 1 x 106 תושב רקמת...

פרוטוקול זה מאפשר חוקר לבודד ולאפיין רקמות תושב מקרופאגים שונות הולמרק רקמות מודלק שחולצו מן הדיאטה-induced מודלים של הפרעות מטבוליות.

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד ולאפיין ביעילות מקרופאגים מרקמות המושפעות בדרך כלל מדלקת המושרית על ידי תזונה, כגון הכבד. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחומי האימונולוגיה והדלקת בנוגע לאופן שבו הפנוטיפ של מקרופאגים תלויי-רקמה יכול להכתיב את התקדמותן של מחלות דלקתיות כרוניות. היתרון המרכזי בכך הוא שהפרוצדורה מייעלת את שלבי הבידוד הדרושים להשגת תרחיפי תאים בודדים המופקים מרקמות המושפעות מדלקת כרונית נמוכה המתווכת על ידי השמנה.את הפרוצדורה תדגים ג'וסלין אלן, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלי. כדי לבודד את הכבד, ראשית הניחו עכבר שהורדם באתנול במנח גב (supine) על לוח ניתוח מקצף פוליסטירן וקבעו את הכפות הקדמיות והאחוריות. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה בעלת חוד בינוני כדי לתפוס את עור הבטן ליד פתח הש尿etra (שופכה) והשתמשו במספרי ניתוח חדים כדי לבצע חתך קטן בעור המורם.החדירו את הלהב התחתון של המספריים לתוך החתך שבין העור לבין הפריטונאום ובצעו חתך רוחבי מהמפשעה ועד לסנטר. משכו בעדינות את העור לאחור כדי לחשוף את חלל הפריטונאום השלם ואת דופן בית החזה, ובצעו חתך רוחבי דרך הפריטונאום. הרימו את העצם הסטרנום וחתכו בזהירות את הסרעפת.לאחר מכן, הזיזו את איברי מערכת העיכול הצידה ואתרו את הווריד הרחב התחתון התת-כבדי (subhepatic inferior vena cava או IVC). בעזרת פינצטות המוסטטיות, סגרו את ה-IVC העל-כבדי (suprahepatic IVC) כדי לשמור על פרפוזיה מקומית, וחברו מזרק מלא במסיינא פרפוזיה שחומם מראש למערכת איסוף והזרקת דם בעלת מחט בכילוי 23.קניולציה נכונה של ה-IVC מבטיחה שסבב הדיסוציאציה יופץ באופן מקומי בכל הכבד והרקמות ההיקפיות, ובכך יאופטימי את עיכול הרקמה. השתמשו בתסמיך המוסטטי באורך ארבעה סנטימטרים כדי לקבע את המחט במקומה, ולחצו בעדינות על הבוכנה כדי להתחיל את הפרפוזיה. אם המחט ממוקמת כראוי, הצבע יישטף במהירות מהכבד והאונויות יתרחבו.חתכו מיד את וריד השער (portal vein) כדי לאפשר לתמיסת הפרופוזיה לזרום בחופשיות דרך הכבד, תוך עיסוי עדין מדי פעם של האונות בין האגודל והאצבע כדי להקל על הוצאת הדם. כאשר נותרו חמישה מיליליטרים בלבד של תמיסת הפרופוזיה, החליפו את מזרק תמיסת הפרופוזיה במזרק מלא בתמיסת דיסוציאציה שחוממה מראש, והמשיכו לעסות בעדינות את האונות ולבצע פרופוזיה לכבד עד לעיכולו המלא. ודאו כי העיכול הצליח על ידי לחיצה עדינה של הקצה הקהה של פינצטה אל תוך האונה השמאלית הלטראלית.על פני השטח צריכה להופיע שקע שיתמלא לאט לאחר הסרת הפינצטה. לאחר מכן, הוצא את המחט והשתמש בלהב קצר וישר של מספרי דיסקציה כדי לחתוך בזהירות את הרצועות המחברות, לצורך כריתה של הכבד כולו ושל כיס המרה. העבר את הכבד לצלחון של 10 centimeter המכיל 10 milliliters של DMEM קר מאוד, והשתמש בפינצטה משננת כדי לתפוס את ה-IVC הסופרה-הפאטי החתוך.באמצעות פינצטה בינונית, בצעו תנועות גריפה מהירות בכל אונה כדי לשחרר את התאים מקפסולת גליסון (Glisson's Capsule), והעבירו את ה-DMEM הרווי דרך מסנן תאים של 70 מיקרומטר אל תוך מבחנה קונית של 50 מיליליטר על קרח. ניתן להשיג תתי-יבולים גבוהים של תאים חיוניים רק על ידי דיסוציאציה נכונה של תאי הכבד מקפסולת גליסון. לאחר איסוף כל התאים, הפכו את המבחנה כדי לערבב בעדינות את סספנסיית התאים והשקיעו את התאים באמצעות סנטריפוגציה.העבירו את העילוי למבחנה קונית חדשה של 50 מיליליטר עבור שלוש סבבים נוספים של סבב צנטריפוגה במהירות נמוכה. לאחר הסבב האחרון, העבירו את העילוי למבחנה חדשה של 50 מיליליטר וסבבו את התאים פעם אחת נוספת במהירות גבוהה יותר. לאחר מכן, השעיקו מחדש את משקע התאים הלא-פארנכימליים בבופר FACS לצורך ספירה, ודללו את תאי הכבד לריכוז המתאים בהתאם ליישום ההמשכי שלהם במבחנות פוליסטירן בעלות תחתית עגולה של חמישה מיליליטרים מסומנות.עכברים שהוזנו בתזונה עשירה בשומן או בתזונה עשירה בשומן ובכולסטרון מראים חדירה מוגברת של מקרופאגים M1 מופעלים קלאסיים ברקמות שנפגעו, כגון באורטה. מקרופאגים ב-אורטה החיוביים ל-CD45 ו-F4/80 המבטאים את הקולטן RON, המדגימים פנוטיפ אנטי-דלקתי, מופיעים בכמות מופחתת בעכברים שהוזנו בתזונה עשירה בשומן ובכולסטרון, בעוד שמקרופאגים פרו-דלקתיים החיוביים ל-CD45, F4/80 ו-CD11c נמצאים במספרים מוגברים באורטות שבודדו מבעלי חיים אלו. יתרה מכך, מקרופאגים המבטאים את הקולטן RON שמומנו מאורטות שעברו עיכול, מראים ביטוי מוגבר של הגן Arginase 1, המהווה סמן מוכר של מקרופאגי M2.ואכן, אפיון של מקרופאגים השוכנים בכבד חושף פנוטיפ דומיננטי של תתי-אוכלוסיות המבטאות את הקולטן RON, עם אוכלוסיות מקרופאגים פרו-דלקתיים חיוביים ל-CD11c המראות ביטוי מופחת של גנים הקשורים באופן חזק לפנוטיפ M2 אנטי-דלקתי. מגמות דומות נצפו באוכלוסיות מקרופאגים שבודדו מרקמת שומן לבנה שעברה עיכול, כאשר אוכלוסיות מקרופאגים בעלות פנוטיפ פרו-דלקתי הראו ביטוי משטחי מופחת של הקולטן RON. לאחר רכישת מיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו ב-20 עד 30 דקות לבעל חיים, במידה והיא מבוצעת כהלכה.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות נוספות כגון ציטומטריה זרימה (flow cytometry), מיון תאים מופעל פלואורסצנציה (fluorescent-activated cell sorting), ו/או qPCR כמותי כדי לאפיין באופן מעמיק יותר את הפנוטיפ של המקרופאגים התושבים ברקמה שהופקו מהכבד. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן הנכון לבידוד מקרופאגים תושבי רקמה מכבדים חולים. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

isolation-characterization-purification-macrophages-from-tissues

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

שיטה חדשנית להשיג מקרופאגים מתרבות העיקרי של תאים בכבד חולדה מתואר. שיטה זו מנצלת את ריבוי של מקרופאגים בתרבות, ואחריו רעד של צלוחיות תרבות וטיהור על ידי התקשרות סלקטיבית מנות פלסטיק. טכניקה זו יעילה מספק מקרופאגים הכבד ללא ציוד מיומנויות מורכבות.

שיטה פשוטה ויעילה על מנת לבודד המקרופאגים מתרבויות ראשי מעורבות של תאים בכבד למבוגרים

המאמר מתאר את הסתגלות קלה...

חקירה של קיטוב Macrophage שימוש המקרופאגים נגזרים מח עצם

רקמת שומן (AT) היא אתר של הפעלת תא חיסונית חזקה ואינטראקציה. כמעט בכל התאים של המערכת החיסונית נמצאים בAT ויחסים שלהם שונו על ידי השמנת יתר. בידוד נכון, כימות, ואפיון של אוכלוסיות בתא חיסון הם קריטיים להבנת תפקידם במחלה immunometabolic.

בידוד של תאים חיסוני רקמת שומן

אנו מציגים פרוטוקול פשוט ויעיל לייצור מקרופאגים אנושיים. מעילים באפי מעובדים על ידי צנטריפוגה הכפולה שיפוע צפיפות ולאחר מכן מונוציטים מבודדים נבדלים למקרופאגים בשקיות תרבית תאים מצופים טפלון. זה ממקסם תשואות מקרופאג ומקל על קצירת תאים לניסויים הבאים.

בידוד של אדם מונוציטים ידי זוגי Gradient צנטריפוגה והבידול שלהם להמקרופאגים בתיקי תרבית תאים מצופים טפלון

מקרופאגים הם תאי המפתח המעורבים בפתוגניות של המארח. מקרופאגים מציגים מגוון פנוטיפי ותפקודי שניתן לנתח ולזהות על ידי ניתוח פרוטאומי. מאמר זה מתאר כיצד לבצע אלקטרופורזה דו-ממדית של תרביות ראשוניות של מקרופאגים אנושיים המובחנים לפנוטיפ M1 או M2.

Proteomic פרופיל של המקרופאגים על ידי 2D אלקטרופורזה

אנו מתארים כאן פרוטוקול פשוט לבידוד מקרופאגים צפקיים של עכברים. לאחר הליך זה מיצוי RNA לביצוע ניתוח ביטוי גנים על גירוי קולטנים דמויי טול.

בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי

מאמר זה מתאר שיטה לניתוח תוכן תא החיסון של רקמת שומן על ידי בידוד של תאים חיסוניים של רקמת שומן וניתוח עוקבות באמצעות cytometry זרימה.

אפיון של תאים חיסוניים בתוך רקמת שומן אנושי באמצעות Cytometry זרימה

אנו מציגים פרוטוקול כדי להשיג חתימות פרוטיאומיה מבנית של מקרופאגים האנושית ואת ליישם את זה נחישות ההשפעה של סביבה חמצן נמוך על מקרופאג קיטוב.

ניתוח פרוטיאומיה מבנית של קיטוב מקרופאג האנושי תחת סביבה חמצן נמוך

פרוטוקול זה מספק שיטת עיכול יעילה של collagenase לבידוד של אדיפוציטים בני קיימא ותאי SVF של מקטע כלי דם סטרומה משומן בטני אנושי בתהליך יחיד, כולל מתודולוגיה להשגת RNA באיכות גבוהה מאדיפוציטים ופנוטיפפיקציה של SVF-מקרופאגים באמצעות צביעה של סמנים מרובים הקשורים לממברנה לניתוח על ידי ציטומטריית זרימה.

בידוד אדיפוציטים בני קיימא ומקטע כלי דם סטרומלי מרקמת השומן הקרבית האנושית המתאימה לניתוח RNA ופנוטיפ מקרופאגים

הגודל והשבריריות של אדיפוציטים בוגרים הגבילו את הטכניקות והכלים הזמינים למחקר ולבידוד שלהם. כאן, מתואר פרוטוקול לבידוד של אדיפוציטים עכברים בוגרים, שניתן להתאים בקלות למחסני שומן שונים ולדיאטות עכברים.

בידוד ותרבות של אדיפוציטים עכבריים ראשוניים מעכברים רזים והשמנים

למד לבודד ולאפיין מקרופאגים מרקמות דלקתיות בכבד הנגרמות מהשמנת יתר. שיטה זו מאפשרת חקר תפקידם במחלות דלקתיות כרוניות ובהפרעות מטבוליות.

בידוד, אפיון, טיהור של מקרופאגים רקמות מושפעות על ידי דלקת הקשורות להשמנת יתר

גלה סרטונים נוספים