הפרדת תערובות באמצעות משקעים

1. משקעים של CaCO₃

1. הכן 5 מ"ל של 1 M CaCl_2.
2. הכן 5 מ"ל 1 M_{Na 2}CO_3.
3. בצינור צנטריפוגה קטן (1.5 מ"ל), להוסיף 750 μL של CaCl₂ ו 750 μL של Na₂CO₃.
4. המתן 2 דקות עד שהתגובה תתרחש. הפתרון צריך להפוך מעונן.
5. צנטריפוגות התערובת ב 10,000 × גרם במשך 5 דקות.
6. דקאנט סופר-טבעי.
7. מוסיפים 1 מ"ל של מים קרים לכדור.
8. Resuspend הכדור על ידי ערבוב במערבל מערבולת במשך 10 s.
9. צנטריפוגות התערובת ב 10,000 × גרם במשך 5 דקות.
10. דקאנט סופר-טבעי.

2. משקעים של חלבוני חלב

1. יוצקים את החלב לתחבת ומוסיפים בר ערבוב.
2. מחממים חלב בעדינות עד 40 מעלות צלזיוס בצלחת חמה ומערבבת. אין לחמם מעל 40 °C (60 °F).
3. הכן 15% (v/v) של חומצה אצטית על ידי ערבוב 7.5 מ"ל של חומצה אצטית ודילול במספיק מים כדי להגיע 50 מ"ל.
4. לטבול את האלקטרודה של מד pH בחלב חם, ולנטר את ה- pH.
5. מוסיפים את החומצה האצטית טיפה-חכם לחלב עד pH של 4.6 הוא הגיע.
6. סינון חלב
   1. חליל פיסת נייר סינון ומניחים אותו במשפך.
   2. מניחים את המשפך בבקבוקון, ויוצקים את תמיסת החלב החומצית למשפך.
   3. כאשר הפתרון נשפך, נייר המסנן עלול להיסתם. בעזרת מוט ערבוב, להסעיר את הפתרון ולסנן נייר מדי פעם כדי לפתוח. אם זה לא משפר את המעבר של פתרון, לשנות את נייר הסינון.
   4. מניחים נייר סינון חדש על הספסל העליון ומעבירים כמה שיותר מהתמצית הרטובה לנייר המסנן החדש. זה צריך לספוג יותר מים מהתמצית.
   5. אם נייר הסינון החדש נרטב מדי, המשיכו לשנות אותו עד שתהיה כמות מינימלית של רטיבות על נייר הסינון. לחץ עליו קלות כדי לספוג יותר מים במידת הצורך.
   6. קח את מוצק מיובש להשעות מחדש על 70% אתנול. סנן שוב את המוצק לאחר שלבים 2.6.1 עד 2.6.5.
7. צנטריפוגה של חלב (כחלופה לסינון)
   1. מעבירים 50 מ"ל חלקים מהתערובת לצינורות צנטריפוגות של 50 מ"ל.
   2. צנטריפוגה ב 4,500 × g במשך 10 דקות, ולאחר מכן decant supernatant.
   3. מוסיפים 50 מ"ל 70% אתנול לכדור.
   4. בעזרת מוט ערבוב, יש להקנות מחדש את הכדור באתנול.
   5. צנטריפוגה השעיה זו בעקבות שלב 2.7.2.
8. יש תחסן מחדש את הכדור במאגר לניתוח נוסף כגון SDS-PAGE, אחרת אחסן אותו ב- 4°C.

3. נסיגה של KCl

1. שוקלים 50 גרם של KCl בבקבוק ארלנמייר, ומוסיפים 100 מ"ל מים
2. מחממים את התערובת עד שהמים רותחים. ודאו שכל אבקת ה-KCl מומסת. זיהומים מסוימים עשויים לא להתמוסס במים.
3. מחממים בקבוקון נוסף (ריק) של ארלנמאייר יחד עם התערובת ושומרים עליו חם מאוד.
4. מניחים משפך עם נייר סינון בבקבוקון החם והריק.
5. יוצקים את הפתרון דרך נייר הסינון כדי להסיר זיהומים לא פתורים. הבקבוקון המקבל נשמר חם כדי לוודא שלא יתרחשו שינויי טמפרטורה במהלך הסינון, אחרת ייווצר מזרז גולמי. אם זה קורה, לחמם מחדש את התערובת עד שכל המשקעים מתמוססים.
6. הסר את הבקבוקון עם הפתרון מהחום.
7. שמור אותו במקום קריר בחדר ולתת לו להתקרר לאט במשך כ 30 דקות, או עד שהוא כבר לא חם למגע.
8. לאחר התקררות לטמפרטורת החדר, מניחים את הבקבוק באמבט קרח כדי להוריד עוד יותר את הטמפרטורה. לחלופין, ניתן להשאיר את הבקבוק בתוך המקרר או חדר מבוקר טמפרטורה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
9. ניתן לקצור גבישים על ידי סינון כמו בשלבים 3.4-3.5 (השתמש בקבוקון משפך בטמפרטורת החדר).