Name: בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: למדו לבודד נגזרות מיקרו-ווסקולריות מרקמת שומן מורין ליצירת יחידות הווסקולריזציה להנדסת רקמות. שיטה זו מאפשרת בידוד מהיר ללא עיבוד מורכב בתרבית ומייעלת חקר מנגנוני יצירת רשתות כלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים על הסיוע הטכני המצוין של ג&#39;נין Becker, קרוליין Bickelmann ורות ניקלס. מחקר זה מומן על ידי מענק של (DFG - קרן המחקר הגרמנית) - LA 2682 / 7-1.

כל הנהלים בוצעו על פי המכון הלאומי הנחיות הבריאות לשימוש בחיות מעבדה ועקבו הנחיות מוסדיים (Landesamt für Soziales, Gesundheit und Verbraucherschutz, אבט. Lebensmittel- und Veterinärwesen, ה&quot;צנטרלשטלה&quot;, זארבריקן, גרמניה). 1. הכנת מכשירים כירורגיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור מוכנים מספריים לנתיחה, מלקחיים כירורגיים, מספרי הכנה קטנים, מלקחיים בסדר צלחת פטרי סטרילית עם 15 בינוני הנשר השונים של המ&quot;ל Dulbecco (DMEM; 10% נסיוב עגל עוברי (FCS), 100 פניצילין U / mL, 0.1 מ&quot;ג / mL סטרפטומיצין עבור) קציר רפידות שומן epididymal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את מכשירי ניתוח לפתרון חיטוי עבור 5 דקות. לחלופין, לעקר אותם (עיקור קיטור; 121 ° C, 20 דקות). </li></ol> 2. בעלי חיים הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר בקפידה את זן של עכברים כמצוין לחקר ואת<html> הנושא תחת חקירה. הערה: במחקר זה השתמשנו C57BL / 6 עכברי-בר זכר כתורמות עבור קצירת השומן epididymal. מעניין, אד-MVF ניתן לבודד גם מחלבון ניאון ירוק מהונדסות (GFP) חיות תורמות -positive (C57BL / 6-Tg (CAG-EGFP) 1Osb / J) 22. זו נושאת את היתרון העיקרי שרסיסי ניתנים לזיהוי בקלות על ידי מכתים immunohistochemical GFP לאחר ההשתלה לתוך עכברי-בר GFP שלילי 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיות עם זריקה intraperitoneal של xylazine (15 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו קטמין (75 מ&quot;ג / ק&quot;ג). ודא כי בעלי החיים מורדמים עמוק על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן עם כל תגובה. חומר סיכת עין אינה שמוזכר בתור החיות התורמות מוקרבות לאחר קצירת שומן. הערה: ודא כי שיכוך כאבים ועקר כירורגיים עולים בקנה אחד עם ההנחיות המתאימות של המדינה ואת המוסד שבו הניסויים מתוכננים. </li></ol>le &quot;&gt; 3. קציר רפידות epididymal שומן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החיה אל שולחן הניתוח. מניחים את חיה במצב שכיבה תחת סטראו כירורגי לאשר הרדמה עמוקה באמצעות צביטה הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את הכפות ידי מקליט אותם לעטוף כירורגית ולחטא את הבטן עם חיטוי פתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את עור הבטן ללא שכבת השריר הבסיסית עם מספריים לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצעו פיום קו האמצע עם מספריים לנתיחה ו רוחבית נפרשים סגר היטב את דופן הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בילטרלי לזהות האשכים, יותרת האשך ואת כרית שומן epididymal באמצעות מלקחיים עדינים (איור 1). אל תפגעו מבני המעיים כדי למנוע זיהום צואתי של רפידות השומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר רפידות שומן epididymal עם מספרי הכנה קטנים מלקחי הקנס תחת סטראו. שמור מרווח ביטחון של כמה מ&quot;מ בין יותרת האשך ואת השומןלהפחית את הסיכון של קצירת epididymal בשוגג. הערה: הליך זה יכול להתבצע גם ללא סטראו. עם זאת, זה עלול להגביר עוד יותר את הסיכון של פגיעה בשוגג של יותרת האשך ואת מיתרי הזרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רפידות שומן epididymal לתוך צלחת פטרי המכילה 15 מיליליטר של DMEM מחומם מראש על 37 מעלות צלזיוס להובלה למעבדת התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב את החיה על ידי חתך של אבי העורקים בבטן או נקע בצוואר הרחם. </li></ol> בידוד 4. של אד-MVF <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שלוש מנות סטרילי פטרי עם 15 מ&quot;ל של בופר פוספט (PBS), פוליפרופילן 14 מ&quot;ל סטרילי (PP) צינורות, בקבוק 50 מ&quot;ל Erlenmeyer סטרילית, צינורות microcentrifuge חרוטי 1.5-מ&quot;ל סטרילי מספריים קנס מעוקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלוש פעמים לשטוף את רפידות שומן בצלחות פטרי עם 15 מ&quot;ל של PBS מתחת למכסה המנוע זרימה למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את השומן לתוך צינור 14 מ&quot;ל PP. לקבוע את עוצמת הקול של רקמת שומן שנקטפה (ב מיליליטר) באמצעות tהוא בהיקף הצינור. לרכך את רקמת השומן מכאני עם המספריים בסדר עד השעית רקמה הומוגנית מתקבלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רקמה טחון עם שני כרכים של collagenase NB4G (0.5 U / mL PBS) לתוך בקבוק 50 מ&quot;ל Erlenmeyer באמצעות 10 מ&quot;ל מדידת פיפטה. הנפח הכולל הופך שלוש פעמים את נפח רקמת שומן נמדדה צעד 4.3. בצע לעיכול רקמה באינקובטור במשך 10 דקות תחת בחישה נמרצת באמצעות בוחש אוטומטי (בגודל של בר ומערבבים מגנטי: 25 מ&quot;מ) ב- 37 ° C ותנאים אטמוספריים humidified עם 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו שבריר קטן (10 μL) של הרקמה מתעכל תחת מיקרוסקופ כדי לשפוט האם ניתן לעצור את תהליך העיכול. שיבטיח כי העיכול בעיקר מכיל &quot;חינם&quot; אד-MVF ליד תאים בודדים, המציין את הנקודה המתאימה כדי לעצור את תהליך עיכול אנזימטי (איור 2). הערה: שלב זה דורש ניסיון עם ההליך הוא קריטי לאיכותשל אד-MVF מבודד. ממושכת תוצאות עיכול שומן השעית תא בודד ללא פרסומות MVF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל את האנזים עם שני כרכים של PBS / 20% FCS. הנפח הכולל הופך שלוש פעמים את עוצמת הקול של השעית תא-כלי בשלב 4.4. מעביר את השעית תא-כלי בחזרה לתוך צינורות PP חדשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על השעיית עבור 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס להפריד אד-MVF מן הנותרים שומן על ידי כוח הכבידה. אז בזהירות להסיר את supernatant השומן העיקרי עם טפטף דיוק 1-מיליליטר. חזור על מחזור זה כמה פעמים עם טפטף דיוק 100-μL עד ההשעיה שנראית ללא שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים מסנן 500 מיקרומטר על גבי צינור צנטריפוגות חרוטי 50 מ&quot;ל. מעבירים את ההשעיה-כלי התא עם טפטפת מדידה 10 מ&quot;ל מן הצינורות PP 14 מ&quot;ל על הממברנה הסינון כדי להסיר הנותרים קרישי שומן. מעבירים את ההשעיה מסונן לתוך צינורות חדשים 14 מ&quot;ל PP לפי מספר מודעה-MVF הפרט מבודד עבור הניסויים המתוכננים. הערה: ב vitrמבחני o התמקדות ביצירת רשת כלי הדם, זה עשוי להיות מועיל יותר כדי לטהר את ההשעיה-כלי התא כדי לשפר את איכות ההדמיה במהלך ניתוחים מיקרוסקופיים. לשם כך, על השעיית ניתן לסנן גם פעם עם מסנן 20 מיקרומטר להסיר תאים בודדים מהמודעה-MVF שנאספו על המסנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה-כלי התא (600 XG, 5 דקות, בטמפרטורת החדר) כדי להשיג גלולה המכילה אד-MVF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר צנטריפוגה, להסיר את supernatant עד 1 מ&quot;ל שנשאר. Resuspend גלולה עם אד-MVF ב 1 זה מ&quot;ל ולהעביר את ההשעיה לתוך צינור microcentrifuge 1.5 מ&quot;ל חרוטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה אד-MVF בצינור microcentrifuge (600 XG, 5 דק &#39;) כדי להשיג גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatant מחדש להשעות את הגלולה בהיקף הסופי הנדרש של PBS / 20% FCS. הערה: מספר המודעה-MVF לכל לבודד ניתן להעריך על ידי ספירה מיקרוסקופית. לשם כך, 1/10 של התא-vesse הסופיl ההשעיה היא מדוללת 1:10 ב PBS ו 100 μL של דילול זה מועברים לתוך באר של צלחת 96-היטב. המספר השלם של אד-MVF מציג מורפולוגיה כלי דמוי נספר אז אקסטרפולציה לבודד כולו. ריכוז אד-MVF נדרש וטיהור ניתן להתאים באופן אישי את המתאימים במבחנה או ביישום vivo של אד-MVF. זה יכול לכלול את וההטבעה של MVF המודעה ג&#39;ל קולגן לניתוח במבחנה של היווצרות רשת כלי דם או הזריעה של אד-MVF על פיגומים להשתלת in vivo לתוך פגמים ברקמות. </li></ol>

<ol><li>Langer, R., Vacanti, J. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Science%22%5BJournal%5D)%20AND%205110%5BIssue%5D)%20AND%20Langer%5BAuthor%5D">Tissue engineering.</a> Science. 260 (5110), 920-926 (1993).</li>
<li>Khademhosseini, A., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decade+of+progress+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A decade of progress in tissue engineering.</a> Nat Protoc. 11 (10), 1775-1781 (2016).</li>
<li>Novosel, E. C., Kleinhans, C., Kluger, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+is+the+key+challenge+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Vascularization is the key challenge in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 63 (4-5), 300-311 (2011).</li>
<li>Rouwkema, J., Khademhosseini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+and+Angiogenesis+in+Tissue+Engineering%3A+Beyond+Creating+Static+Networks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vascularization and Angiogenesis in Tissue Engineering: Beyond Creating Static Networks.</a> Trends Biotechnol. 34 (9), 733-745 (2016).</li>
<li>Laschke, M. W., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+in+tissue+engineering%3A+angiogenesis+versus+inosculation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Vascularization in tissue engineering: angiogenesis versus inosculation.</a> Eur Surg Res. 48 (2), 85-92 (2012).</li>
<li>Sarker, M., Chen, X. B., Schreyer, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+approaches+to+vascularisation+within+tissue+engineering+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomater+Sci+Polym+Ed%22%5BJournal%5D)">Experimental approaches to vascularisation within tissue engineering constructs.</a> J Biomater Sci Polym Ed. 26 (12), 683-734 (2015).</li>
<li>Frueh, F. S., Menger, M. D., Lindenblatt, N., Giovanoli, P., Laschke, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+emerging+vascularization+strategies+in+skin+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Current and emerging vascularization strategies in skin tissue engineering.</a> Crit Rev Biotechnol. 20, 1-13 (2016).</li>
<li>Utzinger, U., Baggett, B., Weiss, J. A., Hoying, J. B., Edgar, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+time+series+microscopy+of+neovessel+growth+during+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Large-scale time series microscopy of neovessel growth during angiogenesis.</a> Angiogenesis. 18 (3), 219-232 (2015).</li>
<li>Laschke, M. W., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevascularization+in+tissue+engineering%3A+Current+concepts+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Prevascularization in tissue engineering: Current concepts and future directions.</a> Biotechnol Adv. 34 (2), 112-121 (2016).</li>
<li>Baiguera, S., Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelialization+approaches+for+viable+engineered+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelialization approaches for viable engineered tissues.</a> Angiogenesis. 16 (1), 1-14 (2013).</li>
<li>Wagner, R. C., Kreiner, P., Barrnett, R. J., Bitensky, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+characterization+and+cytochemical+localization+of+a+catecholamine-sensitive+adenylate+cyclase+in+isolated+capillary+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Biochemical characterization and cytochemical localization of a catecholamine-sensitive adenylate cyclase in isolated capillary endothelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 69 (11), 3175-3179 (1972).</li>
<li>Wagner, R. C., Matthews, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+and+culture+of+capillary+endothelium+from+epididymal+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">The isolation and culture of capillary endothelium from epididymal fat.</a> Microvasc Res. 10 (3), 286-297 (1975).</li>
<li>Laschke, M. W., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments%3A+natural+vascularization+units+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments: natural vascularization units for regenerative medicine.</a> Trends Biotechnol. 33 (8), 442-448 (2015).</li>
<li>Laschke, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularisation+of+porous+scaffolds+is+improved+by+incorporation+of+adipose+tissue-derived+microvascular+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Vascularisation of porous scaffolds is improved by incorporation of adipose tissue-derived microvascular fragments.</a> Eur Cell Mater. 24, 266-277 (2012).</li>
<li>Frueh, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+improve+vascularization%2C+lymphangiogenesis+and+integration+of+dermal+skin+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments improve vascularization, lymphangiogenesis and integration of dermal skin substitutes.</a> J Invest Dermatol. 137 (1), 217-227 (2017).</li>
<li>McDaniel, J. S., Pilia, M., Ward, C. L., Pollot, B. E., Rathbone, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+multilineage+potential+of+cells+derived+from+isolated+microvascular+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization and multilineage potential of cells derived from isolated microvascular fragments.</a> J Surg Res. 192 (1), 214-222 (2014).</li>
<li>Nakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+autotransplantation+of+microvessel+fragments+on+experimental+random-pattern+flaps+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of autotransplantation of microvessel fragments on experimental random-pattern flaps in the rat.</a> Eur Surg Res. 30 (3), 149-160 (1998).</li>
<li>Nakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+autotransplantation+of+microvessel+fragments+into+the+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Successful autotransplantation of microvessel fragments into the rat heart.</a> Eur Surg Res. 31 (3), 240-248 (1999).</li>
<li>Shepherd, B. R., Hoying, J. B., Williams, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+transplantation+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Microvascular transplantation after acute myocardial infarction.</a> Tissue Eng. 13 (12), 2871-2879 (2007).</li>
<li>Pilia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+perfusion+of+microvascular+fragments+in+a+rodent+model+of+volumetric+muscle+loss+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Transplantation and perfusion of microvascular fragments in a rodent model of volumetric muscle loss injury.</a> Eur Cell Mater. 28, 11-23 (2014).</li>
<li>Laschke, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+from+aged+donors+exhibit+an+impaired+vascularisation+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments from aged donors exhibit an impaired vascularisation capacity.</a> Eur Cell Mater. 28, 287-298 (2015).</li>
<li>Okabe, M., Ikawa, M., Kominami, K., Nakanishi, T., Nishimune, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Green+mice%27+as+a+source+of+ubiquitous+green+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">'Green mice' as a source of ubiquitous green cells.</a> FEBS Lett. 407 (3), 313-319 (1997).</li>
<li>Honek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+age-related+insulin+sensitivity+by+VEGF-dependent+vascular+plasticity+in+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Modulation of age-related insulin sensitivity by VEGF-dependent vascular plasticity in adipose tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (41), 14906-14911 (2014).</li>
<li>Cho, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+role+of+LYVE-1-positive+macrophages+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue.</a> Circ Res. 100 (4), e47-e57 (2007).</li>
<li>Han, S., Sun, H. M., Hwang, K. C., Kim, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-Derived+Stromal+Vascular+Fraction+Cells%3A+Update+on+Clinical+Utility+and+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Eukaryot+Gene+Expr%22%5BJournal%5D)">Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cells: Update on Clinical Utility and Efficacy.</a> Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 25 (2), 145-152 (2015).</li>
<li>Chen, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Differentiation+of+Adipose-Derived+Stem+Cells+from+Porcine+Subcutaneous+Adipose+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues.</a> J Vis Exp. (109), e53886(2016).</li>
<li>Guillaume-Jugnot, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+adipose-derived+stromal+vascular+fraction+in+patients+with+systemic+sclerosis%3A+12-month+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Autologous adipose-derived stromal vascular fraction in patients with systemic sclerosis: 12-month follow-up.</a> Rheumatology (Oxford). 55 (2), 301-306 (2016).</li>
<li>Tissiani, L. A., Alonso, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Prospective+and+Controlled+Clinical+Trial+on+Stromal+Vascular+Fraction+Enriched+Fat+Grafts+in+Secondary+Breast+Reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">A Prospective and Controlled Clinical Trial on Stromal Vascular Fraction Enriched Fat Grafts in Secondary Breast Reconstruction.</a> Stem Cells Int. , 2636454(2016).</li>
<li>Calcagni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+treatment+of+SVF-enriched+fat+grafting+for+painful+end-neuromas+of+superficial+radial+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">The novel treatment of SVF-enriched fat grafting for painful end-neuromas of superficial radial nerve.</a> Microsurgery. , (2016).</li>
<li>Hoying, J. B., Boswell, C. A., Williams, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+potential+of+microvessel+fragments+established+in+three-dimensional+collagen+gels%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Angiogenic potential of microvessel fragments established in three-dimensional collagen gels.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32 (7), 409-419 (1996).</li>
<li>Kirkpatrick, N. D., Andreou, S., Hoying, J. B., Utzinger, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+collagen+remodeling+during+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Live imaging of collagen remodeling during angiogenesis.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (6), H3198-H3206 (2007).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

במחקר זה אנו מציגים פרוטוקול ומבוסס על הבידוד של אד-MVF. קבלת פרסומות MVF מרקמות שומן בעכברים היא הליך פשוט עם כמה צעדים קריטיים. עכברים להפגין תת עורית שונה ופיקדונות שומן intraabdominal. כפי שתואר לעיל עבור חולדות, מקור שומן המתאים ביותר עבור בידוד של אד-MVF הם רפידות שומן epididymal בשל גודלם, מבנה הומוגני זיהום מינימלי עם כלי דם גדול 11, 12. לעומת זאת, מצבורי שומן תת עורי בעכברים הם הרבה יותר קטנים יותר חסיד אל הרקמה ש...

הנדסת רקמות מתמקדת הייצור של תחליפי רקמה ואיבר מקיימים, לשחזר או להגדיל את הפונקציה של שמיש ב עמיתיהם vivo 1, 2. גורלם של מבני רקמות מהונדסים תלוי באופן מכריע על כלי דם הולם 3. רשתות כלי דם בתוך המבנים האלה צריכים להיות מאורגנים באופן היררכי עם arterioles, נימים, ו venules לאפשר טפטוף דם יעיל אחרי inosculation אל כלי הדם של הנמען 4. הדור של רשתות כאלה הוא בין האתגרים המרכזיים בתחום הנדסת רקמות. לשם כך, קשת רחבה של אסטרטגיות כלי דם ניסיוני כבר הציגה במהלך שני העשורים האחרונים 5, 6. גישות אנגיוגנזה לעורר את ingrowth של microvessels הנמען Tiss מהונדסיםUES באמצעות שינוי פיגום מבני או physicochemical, כגון השילוב של צמיחת גורמי 7. עם זאת, עבור כלי דם של המבנים התלת-ממדי גדול, אסטרטגיות תלויי אנגיוגנזה מוגבלים במידה ניכרת בשיעורי צמיחה איטית של פיתוח microvessels 8. לעומת זאת, מושג prevascularization שואף עבור הדור של רשתות כלי דם פונקציונליות בתוך רקמת הבונה לפני ההשתלה שלהם 9. Prevascularization הקונבנציונלי כרוך לתרבות המשותפת של תאים מייצרי כלי, כגון תאי אנדותל, תאי ציור קיר או תאי גזע 10, בתוך פיגומים. לאחר היווצרות רשת כלי דם, מבני prevascularized לאחר מכן ניתן מושתלים לתוך פגמים ברקמות. ראוי לציון, גישת prevascularization זה קשה ליישם במסגרת רפואית, משום שהיא מבוססת על קומפלקס זמן רב במבחנה &lt;/ em&gt; נהלים, אשר מוגבלים על ידי מכשולים רגולטוריים מרכזיים 9. בהתאם לכך, יש עדיין צורך לפיתוח אסטרטגיות prevascularization רומן כי הם יותר מתאימים יישום קליני רחב. אסטרטגיה כזו prevascularization עשויה להיות היישום של שברי כלי דם נגזר רקמה שומני (ad-MVF). אד-MVF מייצג יחידות של כלי דם חזקים כי ניתן לקצור בכמויות גדולות מרקמת השומן של חולדות 11, 12 ו עכברים 13. הם מורכבים arteriolar, נימים, ומגזרי כלי venular, אשר מציגים מורפולוגיה microvessel פיזיולוגית עם לומן ותאי perivascular ייצוב 14, 15. תכונה ייחודית זו מאפשרת ההשתלה המיידית של פיגומי אד-MVF זרע לתוך פגמי רקמות ללא precultivation. יש, במודעה-MVF במהירות להרכיב מחדש בלרשתות כלי דם פונקציונליות. יתר על כן, אד-MVF מייצג מקור עשיר של תאי גזע mesenchymal 16, אשר עשוי גם לתרום יכולת ההתחדשות הבולטת שלהם. בהתאם לכך, אד-MVF משמש יותר ויותר בתחומים שונים של הנדסת רקמות 14, 15, 17, 18, 19, 20, 21. בידודו של אד-MVF כבר נקבע במקור בחולדות 11, 12. בזאת, אנו מתארים פרוטוקול, אשר מאפשר בידוד הסטנדרטי של MVF מודעה בעכברים מן רפידות שומן epididymal. זה עשוי לספק תובנות נוספות המנגנונים המולקולריים שבבסיס פונקציה אד-MVF באמצעות מודלים עכבר מהונדס.

<table><tbody><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה חרוטי 1.5 מ"ל</td><td>VWR, קלסטרבאך, גרמניה</td><td>700-5239</td><td></td></tr><tr><td>100-& L פיפטה דיוק</td><td>אפנדורף, המבורג, גרמניה</td><td>4920000059</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה מדידה 10 מ"ל</td><td>Costar, Corning Inc., ניו יורק, ארה"ב</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>צינורות PP 14 מ"ל</td><td>Greiner bio-one, Frickenhausen, גרמניה</td><td>187261</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה דיוק 1 מ"ל</td><td>Eppendorf, המבורג, גרמניה</td><td>4920000083</td><td></td></tr><tr><td>500-&micro; מסנן m (pluriStrainer 500 ומיקרו; m)</td><td>HISS Diagnostics, פרייבורג, גרמניה</td><td>43-50500-03</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה חרוטי 50 מ"ל</td><td>Greiner bio-one, פריקנהאוזן, גרמניה</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל בקבוק Erlenmeyer</td><td>VWR, קלסטרבאך, גרמניה</td><td>214-0211</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 96 בארות</td><td>Greiner bio-one, פריקנהאוזן, גרמניה</td><td>65518</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת ניתוק תאים (Accutase)</td><td>eBioscience, סן דיאגו, קליפורניה ארה"ב</td><td>00-4555-56</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 עכברים</td><td>צ'ארלס ריבר, קלן, גרמניה</td><td>027</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)1עכברי Osb/J</td><td>מעבדת ג'קסון, בר הרבור, ארה"ב</td><td>003291</td><td></td></tr><tr><td>CD117-FITC</td><td>BD Biosciences, היידלברג, גרמניה</td><td>553373</td><td></td></tr><tr><td>CD31-PE</td><td>BD Biosciences, היידלברג, גרמניה</td><td>553354</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז NB4G&nbsp;</td><td>Serva Electrophoresis GmbH, היידלברג, גרמניה</td><td>17465.02</td><td>לוט נבדק על ידי היצרן לפעילות אנזימטית</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>דיסקציה Braun Aesculap AG & CoKG, Melsungen, גרמניה</td><td>לפני הספירה 601</td><td></td></tr><tr><td>צבע קושר DNA (Bisbenzimide H33342)</td><td>Sigma-Aldrich, Taufkirchen, גרמניה</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הנשר השונה של Dulbecco (DMEM)&nbsp;</td><td>PAN Biotech, Rickenbach, גרמניה</td><td>P04-03600</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FCS)</td><td>Biochrom GmbH, ברלין, גרמניה</td><td>S0615</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>S& T AG, נויהאוזן, שוויץ</td><td>FRS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>World Precision Instrumets, סרסוטה, פלורידה, ארה"ב</td><td>503261</td><td></td></tr><tr><td>תחליף עור עורי (אינטגרה)</td> <td>Integra Life Sciences, Sain Priest, צרפת</td><td>62021</td><td></td></tr><tr><td>קטמין&nbsp;</td><td>Serumwerk Bernburg AG (גרמניה ברנבורג</td><td>) 7005294</td><td></td></tr><tr><td>M-IgG2akAL488&nbsp; &nbsp;</td><td>eBioscience, סן דייגו, קליפורניה ארה"ב</td><td>53-4724-80</td><td></td></tr><tr><td>אוקטנידרם (תמיסת חיטוי)</td><td>Sch&uuml; לקה & Mayer, Norderstedt, Germany</td><td>118211</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Biochrom, ברלין, גרמניה</td><td>A2213</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Greiner bio-one, Frickenhausen, גרמניה</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)</td><td>Lonza Group, באזל, שוויץ</td><td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>pluriStrainer 20-&micro; M (20 ומיקרו; m filter)</td><td>HISS Diagnostics, פרייבורג, גרמניה</td><td>43-50020-03</td><td></td></tr><tr><td>Rat-IgG2akFITC</td><td>BD Biosciences, היידלברג, גרמניה</td><td>553988</td><td></td></tr><tr><td>Rat-IgG2akPE</td><td>BD Biosciences, היידלברג, גרמניה</td><td>553930</td><td></td></tr><tr><td>מספריים להכנה קטנה</td><td>S& T AG, נויהאוזן, שוויץ</td><td>SDC-15 R-8S</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים</td><td>Braun Aesculap AG & CoKG, Melsungen, גרמניה</td> קלטת <td>BD510R</td><td></td></tr><tr><td>(Heftpflaster Seide) 1.25 ס"מ</td><td>פינק & Walter GmbH (גרמניה Mechweiler)</td><td>1671801</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine&nbsp;</td><td>Bayer Vital GmbH, לברקוזן, גרמניה</td><td>1320422</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-SMA-AL488</td><td>eBioscience, סן דייגו, קליפורניה ארה"ב</td><td>53-9760-82</td><td>תיוג תוך-תאי דורש בנוסף ציטופיקס/ציטופרם (BD Biosciences, היידלברג, גרמניה; #554722)</td></tr></tbody></table>

בידוד של נגזרות רקמה שומנית murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

רשת כלי דם פונקציונלית היא בעל חשיבות המרכזית להישרדות והאינטגרציה של מבני רקמות מהונדסים. לשם כך, מספר אסטרטגיות אנגיוגנזה ו prevascularization הוקמו. עם זאת, רוב הגישות מבוססות תאים כוללות גוזלת זמן במבחנת צעדים ליצירת רשת כלי דם. לפיכך, הם אינם מתאימים נהלי צעד אחד תוך ניתוחיים. רקמת שומן הנגזרת שברי כלי דם (ad-MVF) מייצג יחידות כלי דם הבטיח. הם יכולים להיות בקלות לבודד מרקמות שומן ולהציג מורפולוגיה microvessel פונקציונלית. יתר על כן, הם להרכיב מחדש במהירות לתוך רשתות כלי דם חדשות לאחר השתלת in vivo. בנוסף, אד-MVF הוכח לגרום lymphangiogenesis. לבסוף, הם מקור עשיר של תאי גזע mesenchymal, אשר עשוי לתרום לפוטנציאל כלי הדם הגבוה שלהם. במחקרים קודמים אנו הדגמנו את vascularizati המדהיםעל יכולת של MVF מודעת תחליפי עצם ועור מהונדסים. במחקר הנוכחי, אנו מדווחים על פרוטוקול סטנדרטי עבור הבידוד אנזימטי של אד-MVF מרקמות שומן בעכברים.

במחקר הנוכחי ביצענו שש פרוצדורות בידוד אד-MVF עם רקמת השומן בין 7 ל wild-type זכר בן 12 חודש C57BL / 6 עכברים (משקל הגוף הממוצע: 35 ± 1 g). איור 1 מדגים את הקצירה של רפידות שומן epididymal בעכברים עם בידוד מכנים האנזימטית שלאחר מכן אד-MVF. הזמן הדרוש קצירת השומן היה 30 דקות ו לבידוד של אד-MVF היה 120 דקות. בסך הכל, ההליך לקח 150 דקות. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rt...

אנו מציגים פרוטוקול לבודד שברי כלי דם ברקמה שומני נגזרות המייצגים יחידות כלי דם הבטיח. הם יכולים להיות מבודדים במהירות, אינו דורש עיבוד במבחנה, ובכך, ניתן להשתמש prevascularization צעד אחד בתחומים שונים של הנדסת רקמות.

בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבודד מקטעי מיקרו-כלי דם מרקמת שומן של עכברים לצורך יצירת יחידות התוספות כלי דם (vascularization units) להנדסת רקמות. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הנדסת הרקמות בנוגע לווסקולריזציה in vivo של תחליפי רקמה. יתרון של טכניקה זו הוא שהיא מניבה מקטעי מיקרו-כלי דם תפקודיים באופן מלא ללא עיבוד in vitro מורכב, אותם ניתן לזרוע על פיגומים (scaffolds) ולהשתיל בתוך פגמים ברקמות.ניתן להחיל שיטה זו גם על מערכות אחרות, כגון בדיקות אנגיוגנזה in vitro, כדי לחשוף מנגנונים מולקולריים העומדים בבסיס ההיווצרות והעיצוב מחדש של רשתות מיקרו-וסקולריות. התחל בהנחת עכבר זכר מסוג C57 black six wild type מורדם במצב גב גב (supine) תחת מיקרוסקופ סטריאו כירורגי, ואשש את היעדר התגובה לצביטה באצבעות. קבע את הכפות עם סרט הדבקה וחטא את הבטן.בשלב הבא, השתמשו במספרי דיסקציה כדי להפריד את שכבת הבטן מרקמת השריר שמתחתיה ובצעו לפרוטומיה בקו האמצע. פתחו לצדדים את מקטורי דופן הבטן וזהו באופן דו-צדדי את האשכים, האפידידימיס ואת רפידי השומן של האפידידימיס. לאחר מכן, השתמשו במספרי הכנה קטנים ובפינצטה עדינה כדי לקצור את רפידי השומן, תוך הקפדה לא לאסוף רקמה כלשהי מהאפידידימיס, והניחו את רפידי השומן בתוך צלחת פטרי המכילה 15 ml של DMEM בטמפרטורה של 37 degrees celsius.במנדף זרימה למינרית, שטפו את פדי השומן בשלוש צלחות פטרי נפרדות המכילות 15 ml של PBS והעבירו את השומן השטוף לשפופרת פוליפרופילן ריקה של 14 ml. השתמשו בסרגל שפופרת כדי לקבוע את נפח השומן שנאסף. לאחר מכן, השתמשו במספריים עדינים כדי לקצוץ מכנית את רקמת השומן.כאשר מתקבל תChatItem רקמה הומוגני, השתמש בפיפט מדידה של 10 mL כדי להעביר את הרקמה הקצוצה עם שני נפחים של collaginase NB 4G לתוך בקבוק ארלנמאייר של 50 mL המכיל מקערת ערבוב של 25 מילימטר. הנח את הבקבוק באינקובטור לתרביות תאים למשך 10 דקות תחת ערבוב נמרץ. לאחר מכן, בחן 10 mcL מהרקמה שעברה עיכול תחת מיקרוסקופ.השלב הקשה ביותר בהליך בידוד זה הוא זיהוי הזמן המתאים להפסקת העיכול. עיכול ממושך מדי של כריות השומן יוביל לתליה של תאים בודדים ללא מקטעים מיקרו-וסקולריים. אם תוצר העיכול מכיל מקטעים מיקרו-וסקולריים שנגזרו מרקמת שומן חופשית לצד תאים בודדים, יש לנטרל את האנזים באמצעות שני נפחים של PBS מועשר ב-20% FCS ולהעביר את תליית התאים לכלי פוליפרופילן חדשים.דגרו את התמיסה במשך חמש דקות בטמפרטורה של 37 °C כדי להפריד את מקטעי המיקרו-vessels מהשומן שנותר באמצעות כבידה. לאחר מכן, השתמשו בפיפט דיוק של 1 mL כדי להסיר בזהירות 1 mL מהמרכיב העליון השומני (supernatant), ולאחר מכן השתמשו בפיפט דיוק של 100 µL כדי להסיר את שאר המרכיב העליון עד שהסספנסיון נראה נקי משומן. לאחר הסרת כל השומן, השתמשו בפיפט מדידה של 10 mL כדי לסנן את סספנסיון כלי התאים דרך מסננת של 50 מיקרון לתוך מבחנה קונית של 50 mL, והעבירו את הסספנסיון המסונן למבחנת פוליפרופילן חדשה של 14 mL עבור כל בידוד של מקטע מיקרו-vessel בודד.אספו את משקעי פסיגמנטים המיקרו-וסקולריים באמצעות סנטריפוגציה והסירו את כל הנוזל העליון (supernatant) מכל מבחנה, למעט ה-1 mL האחרון. השעיקו מחדש את המשקעים בנוזלים העליונים שנותרו. לאחר מכן, העבירו כל תרחיף למבחנות מיקרו-צנטריפוגה קוניות נפרדות של 1.5 mL וצנטריפוגו שוב את הפסיגמנטים המיקרו-וסקולריים למשקיעים לצורך השעיה מחדש בנפח סופי מתאים של PBS ו-20%FCS עבור הניתוחים המתוכננים בהמשך.כאן מוצגת התהלוכות של אורך מקטעי מיקרו-כלי דם שבודדו acabado ממספרם שש עכברי C57 black six מסוג פרא (wild type), בני שבעה עד שנים עשר חודשים, כאשר נצפה אורך ממוצע של כ-42 micrometers. כפי שמוצג במריחה זו של תרחיף תאי כלי דם מייצגת, ניתן להבחין במקטעי מיקרו-כלי דם גדולים, בינוניים וקטנים, כמו גם בתאים בודדים, כאשר רקמת השומן עברה עיכול מספיק. הגדלה גבוהה יותר מגלה כי מקטעי מיקרו-כלי הדם מראים מורפולוגיה של מיקרו-כלי דם בוגר עם מקטעי מיקרו-כלי דם היררכיים.אפיון של פרגמנטים מיקרו-וסקולריים באמצעות ציטומטריה של זרימה מעיד על כך שהם מכילים תאי אנדותל חיוביים ל-CD31, תאים פרי-וסקולריים חיוביים ל-alpha smooth muscle acton ותאי גזע מזנכימליים חיוביים ל-CD117, המבטאים מרקרים אלו. לאחר זריעה על תחליף עור דרמלי, פרגמנטים מיקרו-וסקולריים גדולים יותר ממוקמים בעיקר על פני השטח של השתל, כאשר חלק ממקטעי כלי דם נימיוניים זוהו בתוך ליבת השתל. צביעה אימונוהיסטוכימית של הפרגמנטים המיקרו-וסקולריים שנזרעו חושפת עוד תצורות פיזיולוגיות של כלי דם מיקרוסקופיים עם פרגמנטים דמויי ארטריולות, ונולות ונימיים.לאחר רכישת המיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו תוך שעתיים אם היא מבוצעת כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של האופן שבו מבודדים מקטעי מיקרו-vessels מרקמה שומנית של עכברים כיחידות וסקולריזציה עבור הנדסת רקמות.

isolation-murine-adipose-tissue-derived-microvascular-fragments-as

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד וטיפוח תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) המסומנים באופן פלואורסצנטי מרקמת השומן של קשת פריאורטית. לאחר הבידוד, NCADSCs מזוהים, ממוינים באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות, ולאחר מכן תרבית על צלחת, קידום התפשטות תאים.

בידוד תאי גזע שמקורם בשומן מרקמת שומן פריאורטית מורין

. בעזרת מכשיר מערכת סגור שיטה חדשה זו מאפשרת בידור של אשכולות תת-מילימטר של רקמת האדיפוז המתאימים להשתלה vivo, בתרבות החוץ-גופית ובבידוד תאים נוסף ואפיון.

מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

פרוטוקול זה מפרט שיטה לכריתת מחסני שומן של עכברים ולבידוד ועיכול של העורקים המתאימים כדי לשחרר ולאחר מכן לזהות את אוכלוסיית תאי האנדותל. תאים מבודדים טריים המשמשים ביישומים במורד הזרם יקדמו את ההבנה של הביולוגיה של תאי כלי הדם והמנגנונים של תפקוד לקוי של כלי הדם.

בידוד וזיהוי של תאי אנדותל וסקולריים ממחסני שומן נפרדים ליישומים במורד הזרם

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט המתאר את השימוש בשברים מיקרו-וסקולריים שבודדו מרקמת מכרסם או מרקמת שומן אנושית כגישה פשוטה להנדסת רקמת שומן פונקציונלית בצבע בז' וסקולרית.

תרבית תלת מימדית של רקמת שומן תרמוגנית וסקולרית מקטעים מיקרו-וסקולריים

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

במאמר זה אנו מתארים את הבידוד, התרבית והאינדוקציה האידיפוגנית של קדם-אדיפוציטים שמקורם בשברי כלי דם סטרומה מרקמת השומן הפריאו-אורטית של עכבר, מה שמאפשר לחקור את תפקוד רקמת השומן הפריווסקולרית ואת הקשר שלה עם תאי כלי הדם.

בידוד, תרבית ואינדוקציה אדיפוגנית של פרדיפוציטים שמקורם בשבר כלי דם סטרומה מרקמת שומן פריאורטית של עכבר

מחקר זה ביסס שיטה יציבה ויעילה לבידוד, תרבית וקביעה תפקודית של תאי גזע שוכני דופן כלי דם CD34+ (CD34+ VW-SCs). שיטת בידוד קלה למעקב וחסכונית בזמן זו יכולה לשמש חוקרים אחרים כדי לחקור את המנגנונים הפוטנציאליים המעורבים במחלות לב וכלי דם.

בידוד אימונומגנטי של תאי גזע CD34+ תושבי דופן כלי הדם מעכברים

PGS אלסטומרי פיגומים עם כלי הדם לתאי שריר חלק בתרבית bioreactor זרימה pulsatile עלול להוביל בקוטר קטן בונה מבטיח עורקי עם ייצור ECM יליד בתקופה התרבות קצר יחסית.

PGS אלסטומרי פיגומים להנדסת רקמות העורקים

פיגומים Electrospun יכול להיות מעובד הייצור עבור יישומים הנדסת רקמות. כאן אנו מתארים שיטות ספינינג פיגומים מורכבים (על ידי ספינינג רצופים), להכנת פיגומים עבים יותר (על ידי שכבות רב באמצעות אדי חום או חישול), להשגת עקרות (ייצור מזוהם או פירסום הייצור עיקור) ו להשגת תכונות ביומכניים המתאימים.

Postproduction עיבוד Fibres Electrospun עבור הנדסת רקמות

רקמת שריר מהונדסת יש פוטנציאל גדול ברפואת רגנרטיבית, כמודל מחלה וגם כמקור חלופי לבשר. כאן אנו מתארים ההנדסיים של מבנה שרירים, במקרה זה מתאי עכבר והיצמדות לאב, והגירוי על ידי פולסים חשמליים.

רקמות שריר שלד הנדסה מתאי Murine היצמדות מולידו ויישום של גירוי חשמלי

למדו לבודד נגזרות מיקרו-ווסקולריות מרקמת שומן מורין ליצירת יחידות הווסקולריזציה להנדסת רקמות. שיטה זו מאפשרת בידוד מהיר ללא עיבוד מורכב בתרבית ומייעלת חקר מנגנוני יצירת רשתות כלי דם.

בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות

גלה סרטונים נוספים