DiI זלוף כשיטת ויזואליזציה של כלי הדם Ambystoma מקסיקניום

המטרה הכוללת של הליך זה היא לדמיין את כלי הדם של האקסולוטל. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרפואה הרגנרטיבית לגבי המורכבויות של רה-וסקולריזציה של רקמות מתחדשות באקסולוטל. היתרון העיקרי של טכניקת הדמיה וסקולרית זו הוא שניתן לצלם בקלות את כל כלי הדם בבעל החיים במיקרוסקופ פלואורסצנטי רגיל.

למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי התחדשות גפיים אקסולוטליות, ניתן ליישם אותה גם על רקמות אחרות, כגון הזנב, הלב, העיניים, הזימים או איברים אחרים. לפני פתיחת חזה אקסולוטל, ודא תחילה את רמת ההרגעה המתאימה על ידי צביטת הבוהן. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כירורגיים כדי לצבוט את העור לאורך הציר המרכזי של החזה, ממש מתחת לקו הכתפיים.

בעזרת אזמל, בצע חתך במקום שבו העור נמשך כלפי מעלה והסר כתם מרובע של עור מעל החזה כדי לחשוף שתי לוחות סחוס. לאחר מכן, פתחו חלון מעל חלל בית החזה וקרעו בזהירות את רקמת החיבור מבלי לחתוך כלי דם גדולים. השתמש במלקחיים כדי להרים כל לוחית סחוס בנפרד, תוך כריתת כל צלחת במספריים כירורגיים.

צבטו בזהירות את קרום הלב החשוף בעזרת המלקחיים. משיכת הרקמה כלפי מעלה וניקובה עם המספריים הכירורגיים, עמוק מספיק כדי להסיר את קרום הלב מבלי לפגוע בלב. לאחר מכן, הסר בעדינות את קרום הלב כדי לחשוף את הלב ואת אבי העורקים, כדי לראות בבירור את הלב במרחק של כחמישה מילימטרים של אבי העורקים, המסתעף מהלב.

כדי לחלחל את האקסולוטל, הניחו מעמד מהדק עם מחט פרפר טעונה ליד מסגרת קצף פוליסטירן, כך שזרוע המהדק ניתנת למניפולציה בקלות לצורך החדרת מחט. הפעל משאבה פריסטלטית כדי לשטוף 0.7x PBS דרך צינור המשאבה וכוון את קצה המחט לכיוון ההיבט הרוסטרלי. החלק את המלקחיים מתחת לקשת אבי העורקים ומשוך מעט כלפי מעלה.

לאחר מכן, תמרן את שילוב מהדק המחט, כך שהמחט עוברת לאורך אבי העורקים לכיוון ראש החיה, והכנס את המחט כחמישה מילימטרים לתוך אבי העורקים, תוך שמירה על המלקחיים מאחורי אבי העורקים לתמיכה. ניתן לאשר החדרה מוצלחת על ידי הגדלה נראית לעין של פרוזדורי הלב. קרע במהירות פרוזדור אחד ואפשר לדם להתנקז.

לאחר מכן, החדירו את האקסולוטל בכ-20 עד 30 מיליליטר PBS. לאחר זלוף מוצלח, החיה צריכה להשתנות מצבע ורוד בהיר ללבן. לאחר שכל ה-PBS הוזנק, השהה את המשאבה הפריסטלטית והעבר את הקצה החופשי של הצינור, לתוך שפופרת של 15 מיליליטר של תמיסת דיל.

הפעל מחדש את המשאבה, הקפד להימנע מיצירת בועות בצינור ולהחדיר את החיה עם כל מלאי הדיל העובד. בזילוף מוצלח, האקסולוטל ישתנה לצבע ורוד בוהק שיהיה מורגש ביותר בזימים. לאחר שכל ה-Dil עבר עירוי, השהה את המשאבה והנח את הקצה החופשי של הצינור בתמיסת 4% פרפורמלדהיד

לאחר מכן, הפעל מחדש את המשאבה והחדיר לפחות 10 מיליליטר מהקיבוע. לאחר מתן כל הפרפורמלדהיד, עצור את המשאבה והסר את המחט. העבירו את האקסולוטל על צלחת פלסטיק, והניחו את המנה על במת מיקרוסקופ פלורסנט.

לאחר מכן, כשהאורות כבויים, בחר מסנן המאפשר עירור של דיל, הפולט אור כתום אדום. לאחר זלוף מוצלח, כתם הדיל נראה כאות כניסה אדום בכל רקמות האקסולוטל, כולל הזנב, הגפיים, הזימים והעיניים. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך שעה אחת אם היא מבוצעת כראוי.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להקפיד לא לקרוע את כלי הדם העיקריים או את הלב בעת פתיחת חלל החזה ולהחדיר את המחט בקו אחד עם אבי העורקים כדי למנוע דקירות דרך ודרך. בעקבות הליך זה ניתן לבצע שיטות אחרות כמו תכשירים לשלד כדי לענות על שאלות נוספות. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הביו-רפואי לחקור את כלי הדם של מינים שונים.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע זלוף לב של האקסולוטל עם צבע הקרבוציאנית, Dil. אל תשכח, שעבודה עם מחטים ופרפורמלדהיד עלולה להיות מסוכנת ביותר וכי תמיד יש לנקוט באמצעי זהירות, כגון לבישת ציוד המגן האישי המתאים, בעת ביצוע ההליך.