מודל הלב הפוכה עבור אוסף transstate Interstitial מן הלב עכברוש מבודד

המטרה הכוללת של מודל לב הפוך זה היא לאסוף טרנסודאט אינטרסטיציאלי לבבי מלב חולדה מבודד. בתוך הלב הפועם, החוש האינדיבידואלי של הלב משחרר גורמים פרקריניים והם משחררים אותם לחלל הנוזל הבין-רקמתי שמסביב. זה חשוב, מכיוון שחלל הנוזל הבין-רקמתי, הוא נושא מידע לתקשורת בין תאי הלב.

וזה חשוב במיוחד בתנאים של דלקת והתחדשות של שריר הלב האוטם. בסרטון זה, משתפי הפעולה שלי, ד"ר דינג וטאן, יראו לכם את הטכניקות שבאמצעותן אנו כאן, באהבה זו, אוספים נוזל ביניים מפני השטח של לב עכברוש מבודד. כדי להכין את כיסוי הלב הלטקס, או הכובע, יש תבנית אלומיניום התואמת את הגודל הממוצע של לב חולדה ומלוטשת בנייר אמרי עדין במיוחד.

מקבעים אנכית את צוואר התבנית למכונת הטחינה ומתחילים לסובב לאט את התבנית. לאחר מכן, יוצקים 20 מיליליטר לטקס נוזלי לכוס זכוכית של 50 מיליליטר, ומורידים את התבנית המסתובבת לתוך הלטקס עד לטבילה. לאחר מכן, הרם אותו לאט החוצה והמשיך לסובב את התבנית למשך 15 דקות נוספות עד שהלטקס מתמצק.

הסיבוב חיוני להכנת המוס הזה ולפזר באופן שווה את שכבת הלטקס הנוזלי על פני התבנית. לכן, וודאו שהתבנית מסתובבת כשהיא מורמת מהלטקס. לאחר שהלטקס יבש, מצפים את הלטקס באבקת טלק כדי למנוע נזק ללטקס.

עצור את הסיבוב ולאחר מכן נתק בעדינות את התבנית מהמכונה. מוציאים בזהירות את הלטקס מהתבנית. כעת, חבר צינור סיליקון באורך 25 ס"מ לשקע שעל מכסה הלטקס.

צינור זה משמש לאיסוף הטרנסודאט הלבבי הבין-רקמתי, או CT. לאחר מכן, חבר היטב את בלון החדר בגודל חולדה על צינורית מתכת בצורת L, המחוברת למזרק מלא מים של מיליליטר. ומלאו את בלון החדר בגודל חולדה במים. ודא שהבלון אטום על ידי ניפוחו וניפוחו מספר פעמים באמצעות המזרק.

לאחר מכן, חבר את הצינורית למתמר לחץ, באמצעות עצירה תלת-כיוונית. לבסוף, סמן על המזרק היכן הבלון ימלא את חלל החדר למדידת לחץ תוך חדרי. לפני שתמשיך בהכנת הלב, הכינו את מערכת הזלוף של לנגנדורף על פי פרוטוקול הטקסט.

כעת, לאחר הרדמה מלאה של חולדת וויסטאר זכר במשקל 300 עד 350 גרם, העבירו אותה לשולחן ניתוח בטמפרטורת החדר. עם ניסיון, השלבים הבאים המובילים לקנולציה של הלב אמורים להימשך כשלוש דקות בלבד. הרם את העור והשריר ממש מתחת לעצם החזה, בעזרת מלקחיים, וחתוך סביב השוליים התחתונים של הצלעות בעזרת מספריים כבדים.

לאחר מכן, בעזרת מספריים עדינים, בצע חתך קטן בסרעפת בשולי הצלעות. לאחר מכן, חותכים את הצלע בזנב כדי ליצור דש של כל דופן בית החזה הגחוני. כעת, אחזו בעדינות בלב, וחיו אותו לאט לאט עד שכלי הלב מתחילים להימתח.

לאחר מכן, כרתו את הלב עד שאבי העורקים נחשף במלואו והעבירו את הלב לכוס של 100 מיליליטר המכילה 50 מיליליטר KHB קר כקרח. כעת, קחו מיד את הלב למנגנון השפע, והרכיבו את אבי העורקים על צינורית מטפטפת. אבטח אותו היטב עם תפר 4-0, כך ששום בועות אוויר לא יוכלו להיכנס ללב.

לאחר מכן, הפעל לחץ שפע קבוע או זרימת שפע. כדי לבסס את מערך הלב ההפוך, סובב תחילה בעדינות את צינורית אבי העורקים עד שהדופן האחורית של הנבל נמצאת בפנים. לאחר מכן, גזור את רקמת החיבור כדי לחשוף את הפתח לאטריום השמאלי.

לאחר מכן, תפסו בעדינות את הלב והפכו אותו על פיו. הרכיבו את הלב על בלון החדר המוכן, כשהבלון מנופח, והזינו אותו לחדר השמאלי. הלב מיוצב כעת מכנית במצב זקוף, תוך שימוש במכלול צנתר הבלון כתמיכה.

נפחו את הבלון עד שהוא ממלא את כל חלל החדר, על ידי קידום הבוכנה לסימן המילוי. אבטח את הלב כך שיהיה לחץ מינימלי על שורש אבי העורקים. חלק זה של ההליך דורש תרגול.

כעת, התבונן במד שעל הבלון, והתאם את הלחץ הדיאסטולי לשלושה עד חמישה מילימטרים של כספית. טיפות קטנות אמורות להיווצר על האפיקרדיום אם הלחץ מוגדר כהלכה. לאחר מכן, משוך בעדינות את מכסה הלטקס מעל הלב.

אפילו המשטח החדר ביותר צריך להיות מכוסה. לפני שתמשיך, בדוק אם יש בועות אוויר בתוך המכסה. כדי להסיר בועות אוויר, השתמש ביניקה עדינה מהמזרק.

כעת, מקם את קצה צינור השחרור 10 סנטימטרים מתחת ללב. אסוף את ה-CT המטפטף לתוך צינור של 1.5 מיליליטר ושמור את הצינור מתחת לארבע מעלות צלזיוס על ידי הטמעתו בתערובת 1:1 של קרח ונתרן כלורי. אספו בין 0.15 ל-1.5 מיליליטר CT, ואז שקלו את הדגימה והקפיאו אותה בחנקן נוזלי.

אחסן אותו במינוס 80 מעלות צלזיוס עד שניתן יהיה לעבד אותו. בעת החדרת מודל הלב ההפוך בלחץ קבוע של 100 סנטימטרים של מים, ניתן היה לאסוף בין 1/10 ל-1% מהשפכים הוורידיים הכליליים. תכולת החלבון של ה-CT נמדדה בבדיקת BCA, ועמדה בממוצע על 1.1 מיליגרם למיליליטר.

אלקטרופורזה פשוטה של ג'ל חשפה ספקטרום רחב של חלבונים. דגימות רגילות הושוו לדגימות מלבבות שעברו 50 דקות של איסכמיה באמצעות DIGE דו-ממדי. נמצאו מספר חלבונים מווסתים ב-CT של הלבבות האיסכמיים.

ניתוח פרוטאומי בוצע על החלבונים המווסתים. גם פורינים היו מעניינים מאוד. פורינים הם מולקולות איתות מרכזיות המווסתות את התגובה החיסונית הלבבית, טונוס כלי הדם ותפקוד הלב, במיוחד לאחר פגיעה איסכמית.

ניתוח HPLC של ה-CT הראה ריכוזים גבוהים של פורינים רבים בלבבות הפגועים. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור שטרנס-אין דייט לבבי שנוצר בלב מבודד, לא יחקה לחלוטין את ההרכב האמיתי של מצבי ה-in-vee-vuh.