Name: Morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: חקור שינויים מורפומטריים ותאיים בראש הלסת התחתונה של עכברים בעקבות עומס לחץ. השיטה משלבת צילומי רנטגן והיסטולוגיה לניתוח מבני ותאי מפורט.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להודות ד ר דוד רואו מתבקשים לספק את העכברים הטרנסגניים Li Chen על הסיוע היסטולוגית.
המחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי את נבחרת המכון של שיניים ותחקיר ואסטתיים של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר K08DE025914 על ידי האמריקאי האגודה של אורתודונטי לקרן Sumit Yadav.

<ol><li>LeResche, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Temporomandibular+Disorders%3A+Implications+for+the+Investigation+of+Etiologic+Factors%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+functional+loading+causes+differential+effects+in+the+subchondral+bone+and+condylar+cartilage+in+the+temporomandibular+joint+from+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Altered functional loading causes differential effects in the subchondral bone and condylar cartilage in the temporomandibular joint from young mice.</a> Osteoarthr Cartil. 17 (3), 354-361 (2009).</li>
<li>Pirttiniemi, P., Kantomaa, T., Sorsa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+decreased+loading+on+the+metabolic+activity+of+the+mandibular+condylar+cartilage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Orthod%22%5BJournal%5D)">Effect of decreased loading on the metabolic activity of the mandibular condylar cartilage in the rat.</a> Eur J Orthod. 26 (1), 1-5 (2004).</li>
<li>Chavan, S. J., Bhad, W. A., Doshi, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+temporomandibular+joint+changes+in+Twin+Block+and+Bionator+appliance+therapy%3A+a+magnetic+resonance+imaging+study%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Orthod%22%5BJournal%5D)">Comparison of temporomandibular joint changes in Twin Block and Bionator appliance therapy: a magnetic resonance imaging study.</a> Prog Orthod. 15 (57), (2014).</li>
<li>Dutra, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+Matrix+Response+of+the+Mandibular+Condylar+Cartilage+to+Botulinum+Toxin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Cellular and Matrix Response of the Mandibular Condylar Cartilage to Botulinum Toxin.</a> PLoS ONE. 11 (10), 0164599(2016).</li>
<li>Benjamin, M., Ralphs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+fibrocartilage+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Biology of fibrocartilage cells.</a> Int Rev Cytol. 233, 1-45 (2004).</li>
<li>Shen, G., Darendeliler, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Adaptive+Remodeling+of+Condylar+Cartilage-+A+Transition+from+Chondrogenesis+to+Osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Adaptive Remodeling of Condylar Cartilage- A Transition from Chondrogenesis to Osteogenesis.</a> J Dent Res. 84 (8), 691-699 (2005).</li>
<li>Utreja, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+matrix+response+of+temporomandibular+cartilage+to+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Cell and matrix response of temporomandibular cartilage to mechanical loading.</a> Osteoarthr Cartil. 24 (2), 335-344 (2016).</li>
<li>Kaul, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Altered+Loading+on+Mandibular+Condylar+Cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The Effect of Altered Loading on Mandibular Condylar Cartilage.</a> PLoS ONE. 11 (7), 0160121(2016).</li>
<li>Dyment, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput%2C+Multi-Image+Cryohistology+of+Mineralized+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Throughput, Multi-Image Cryohistology of Mineralized Tissues.</a> J Vis Exp. , e54468(2016).</li>
<li>Kawamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+new+adhesive+film+for+the+preparation+of+multi-purpose+fresh-frozen+sections+from+hard+tissues%2C+whole-animals%2C+insects+and+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of a new adhesive film for the preparation of multi-purpose fresh-frozen sections from hard tissues, whole-animals, insects and plants.</a> Arch Histol Cytol. 66 (2), 123-143 (2003).</li>
<li>Hayman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tartrate-resistant+acid+phosphatase+%28TRAP%29+and+the+osteoclast%2Fimmune+cell+dichotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) and the osteoclast/immune cell dichotomy.</a> Autoimmunity. 41 (3), 218-223 (2008).</li>
</ol>

המחברים יש אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

כתב יד זה תיאר שיטות morphometric מדידה וניתוח הסלולר של מאתר condyles mandibular הלסת. המדידות morphometric רדיוגרפי יכול לשמש גם כדי לנתח אחרים עצמות של חיות ניסוי קטן. בנוסף, הניתוח הסלולר (כימות תא ומיפוי הסחוס מרחק) אינם מוגבלים מכרסם בעצם הלסת, אך יכול לשמש כדי לכמת מקטעים היסטולוגית של רקמות רבות.
מודלים מהונדס העכבר לבטא כתבים פלורסנט הן כלי מעולה להבין באופן חזותי שינויים בביטוי הגנים. המודל העכבר כתב פלורסנט כפול-קולגן (Col2a1XCol10a1) נעשה שימוש בדו ח זה היה מתאים במיוחד עבור חקר MC...

למפרק לסתי-רקתי ג'וינט-נושאת ייחודי הממוקם באזור ואסטתיים, בנוי fibrocartilage. MCC של למפרק לסתי-רקתי הוא חיוני עבור תפקוד המפרקים, כולל תנועת הלסת בוויטנברג באין מפריע תוך כדי דיבור, masticating, אבל זה מושפע בדרך כלל מחלות ניווניות, כולל דלקת מפרקים ניוונית1. למפרק לסתי-רקתי יש את היכולת להסתגל לגירויים חיצוניים והשינויים הטעינה, מובילים לשינויים מבניים הסלולר הרכיבים של4,53,2,MCC. מאפייני-נושאת MCC יכולה להיות מוסברת על ידי האינטראקציות בין המרכיבים שלה, כולל מים, הרשת קולגן, וארזו בצפיפות proteoglycans. MCC ה יש ארבעה אזורי הסלולר ברורים המבטאים סוגים שונים של קולגן, הלא-קולגן חלבונים: 1) לאזור שטחית או במפרק; 2) אזור המקדימות, מורכב של תאים mesenchymal מובחן זה מגיב טעינת דרישותיהם; 3) אזור prehypertrophic, המורכבת chondrocytes בוגרת לבטא קולגן מסוג 2; . ו-4) הסתיידות באזור, האזור בו chondrocytes היפרטרופית לבטא קולגן להקליד 10 אמות ומבצעת היפרטרופית. האזור הלא-על בסיס מינרלים מן הוא עשיר proteoglycans המספקים עמידות בפני כוחות compressive6.
. יש רציף מינרליזציה באיזור היפרטרופית של מפקד צוות משימה, שבו מתרחש המעבר chondrogenesis פרכת, המבטיח המבנה מינרל עמיד של עצם subchondral של בעצם הלסת7. שינויים סלולריים באזורים unmineralized, על בסיס מינרלים מן בסופו של דבר להוביל שינויים מבניים מורפולוגיים בעצם הלסת, לסת תחתונה. תחזוקת הומאוסטזיס בכל אזורי הסלולר MCC, את מינרליזציה של החלק subchondral חיוניים לבריאות, תומך קיבולת ותקינות למפרק לסתי-רקתי.
המודל העכבר הטרנסגניים מרובים קולגן (כמתואר על-ידי. Utreja et al.) 8 הוא כלי נהדר לשימוש להבין שינויים בביטוי קולגן כי כל transgenes באים לידי ביטוי MCC. עבור הערכה היסטולוגית מעמיק, כתמי היסטולוגית משמשים ללמוד מטריקס התצהיר, מינרליזציה, התפשטות תאים, אפופטוזיס, וכן ביטוי חלבון שכבות תאים שונים MCC.
זה כתב היד, היסטולוגית וניתוחים morphometric משמשים להעריך את השינויים תאיות בעצם MCC ו- subchondral של בעצם הלסת של עכברים. בנוסף, שיטת כימות תא, עבור ניתוח תמונות היסטולוגית פלורסנט, מיפוי שקופיות מיקרוסקופ אור, מתואר. לסתי סטטי compressive העמסת שיטה, אשר גורמת שינויים מורפולוגיים הסלולר MCC ו- subchondral עצם9, מומחש גם כדי לאמת את השיטות שלנו.
ניתן להשתמש בשיטות המתוארות כאן כדי לקבוע morphometric ושינויים היסטולוגית בעצם הלסת, לסת תחתונה של מכרסמים או כדי לנתח את האזורים האחרים של התקשות endochondral ואת המורפולוגיה של רקמות על בסיס מינרלים מן נוספים.

<table><tbody><tr><td>מערכת רדיוגרפיה MX20</td><td>Faxitron X-Ray LLC&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת דיג'מייזר תדמית&nbsp;</td><td>MedCalc Software</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryomatrix הטמעת שרף</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>ידני Axio Imager Z1</td><td>Carl Zeiss</td><td>208562</td><td></td></tr><tr><td>מסנן חלבון פלואורסצנטי צהוב&nbsp; - EYFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49003</td><td></td></tr><tr><td>מסנן חלבון פלואורסצנטי ציאן - ECFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49001</td><td></td></tr><tr><td>מסנן חלבון פלואורסצנטי אדום - Cy5</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49009</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אצטט נטול מים</td><td></td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>נתרן L-טרטרט די-בסיסי דיהידרט&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>228729</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ניטריט&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>237213</td><td></td></tr><tr><td>ELF97 מצע</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>E6600</td><td></td></tr><tr><td>ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS ערכת</td><td>Life Technologies</td><td>C10339&nbsp;</td><td>כולל EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)&nbsp;</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד)</td><td>Thermo Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3264</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט מונובסיסי&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>טולואידין כחול O&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>אדובי פוטושופ&nbsp;</td><td>Adobe Systems Incorporated</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טבליות מלח עם חוצץ פוספט (PBS)</td><td>מוצרי מחקר בינלאומיים</td><td>P32080-100T</td><td></td></tr><tr><td>CNA Beta III ללא ניקל</td><td>Archwire Ortho Organizers, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פריזמה של GraphPad&nbsp;</td><td>תוכנת GraphPad, בע"מ</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת

A Morphometric and Cellular Analysis Method for the Murine Mandibular Condyle

מפרק לסתי-רקתי (TMJ) יש את היכולת להסתגל לגירויים חיצוניים, טעינת שינויים יכול להשפיע על המיקום של condyles, כמו גם את הרכיבים הסלולר מבניים של הסחוס condylar mandibular (MCC). כתב יד זה מתאר שיטות לניתוח שינויים אלה, שיטה לסירוס ועיקור הטעינה של למפרק לסתי-רקתי בעכברים (קרי, compressive סטטי TMJ טעינה). ההערכה מבניים מאויר כאן היא גישה פשוטה morphometric משתמשת התוכנה Digimizer, מבוצע במסגרת צילומי רנטגן של עצמות קטנות. בנוסף, הניתוח של הסלולר משתנה מובילים שינויים בביטוי קולגן, עצם שיפוץ, חלוקת התא, הפצה פרוטאוגליקן MCC מתואר. כימות של שינויים אלה בסעיפים היסטולוגית - על ידי ספירת הפיקסלים פלורסנט חיובי באמצעות תמונה תוכנה ומדידת מרחק המיפוי והמוכתמות אזור עם Digimizer - גם הוכח. השיטות המוצגות כאן אינם מוגבלים למפרק לסתי-רקתי מאתר, אך יכול לשמש על נוספים עצמות של חיות ניסוי קטן ובאזורים אחרים של התקשות endochondral.

סטטיסטיקה תיאורית בוצעו כדי לבחון את חלוקת morphometric מידות (אורך הלסת, condylar אורך, רוחב condylar) וניתוחים היסטולוגית. התוצאות הושוו בין הקבוצה טעון (קרי, עכברים נתון טעינה compressive עם המעיין טיטניום בטא) קבוצת הביקורת (קרי, התאמת עכברים שליטה שלא קיבלו בכל הליך). הבדלים משמעותיים סטטיסטית בין ממוצעי נקבעו על ידי אינטראקצית-t-test, ערך-p של < 0.05 הוערך להיות משמעותיים מבחינה סטטיסטית.
מדידות Morphomet...

כתב יד זה מציג שיטות לניתוח morphometric, שינויים סלולריים בתוך בעצם הלסת של מכרסמים.

Morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת

The temporomandibular joint (TMJ) has the capacity to adapt to external stimuli, and loading changes can affect the position of condyles, as well as the ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא לבחון את ההשפעות של עומס דחיסתי בסחוס המבני של השליש התחתון של הלסת התחתונה (mandibular condylar cartilage) בעכברים, באמצעות מדידות מורפומטריות בצילומי רנטגן ואנליזה היסטולוגית. מדדים אלו יכולים לסייע במתן תשובה לשאלות מפתח הנוגעות לשינויים מבניים ותאיים בתוך השליש התחתון של הלסת התחתונה במכרסמים. היתרון המרכזי של הטכניקה המוצגת כאן הוא שניתן להשתמש בה כדי לנתח בעלי חיים קטנים אחרים בעלי שלד או כאלו המשתתפים בניסוי.עבור פרוטוקול זה, הכינו לסני השכן מבודדים ומנוסחים שמוכנים לשימוש. העבירו את הלסניאות לתוך מערכת קבינה לצילומי רנטגן על גבי צלח פטרי. לאחר מכן, בצעו צילומי רנטגן במתח של 26 kilovolts למשך חמש שניות.כעת, פתחו את התמונות בתוכנת הניתוח כדי לבצע מדידות מורפומטריות. ראשית, השתמשו בכפתור היחידות כדי להגדיר את סרגל הציר (scale bar). לאחר מכן, בחרו שש נקודות אנטומיות באמצעות סגנון סימון 2.ראשית, בחרו את הנקודות האחוריות ביותר של תבלול הלסת התחתונה (mandibular condyle) כנקודה אחת. לאחר מכן, בחרו את בליטת החיתוך (incisored process) עבור נקודה שתיים. לאחר מכן, בחרו את הנקודה העמוקה ביותר במגרעת הסיגמואידית (sigmoid notch) עבור נקודה שלוש.בשלב הבא, בחרו את הנקודה העמוקה ביותר בקיעור של זרוע הלסת התחתונה (mandibular ramus), נקודה ארבע, ולאחר מכן בחרו את הנקודה הקדמית ביותר של פני השטח המפרקייים של התהודה (condylar articular surface), נקודה חמש. כעת, בחרו את הנקודה האחורית ביותר של פני השטח המפרקייים של התהודה כנקודה שש והמשיכו בבדיקת מדידות אורך באמצעות כלי המדידה של האורך. לאחר מכן, השתמשו בכלי הקו המאונך מנקודות שלוש וארבע כדי למדוד את אורך ראש התהודה, שהוא אורך המאונך מנקודה אחת לקו שבין נקודות שלוש וארבע.לאחר מכן, מדדו את אורך הלסת התחתונה, בין נקודות אחת ושתיים. לסיום, מדדו את רוחב ראש התהליך המפרקי (condyle head), שנמצא בין נקודות חמש ושש. כדי לשמור את הנתונים, העתיקו את רשימת המדידות בצד ימין של המסך.לפני הטמעת הלסתות התשובות, אך שאינן דקלציפיות, השרה אותן למשך לילה בסוכרוז בריכוז 30% ב-PBS. למחרת, הסר בניתוח רקמות רכות עודפות וגזור בזהירות את התהודה המנדיבולרית (mandibular condyle). כעת, הנח את הדגימות בתבניות פלסטיק, כאשר הפני המדיאלי של התהודה פונה לבסיס התבנית והדגימה מקבילה לתחתית התבנית.לאחר מכן, טבול אותם בשרף להטמעה וקרר את השרף באמצעות פיסת קרח יבש. בשלב הבא, מלא את התבניות עד הסוף בעוד שרף להטמעה. העבר אותם למתיל בוטאן דו-מתיל קר, שקולל באמצעות מקפיא או קרח יבש.לאחר הקירור, יש לשמור את הדגימות בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס או 80- מעלות צלזיוס לצורך חיתוך. כדי לכמת את הביטוי של Col10a1 ב-MCC של חיתכים סגיטליים של קונדילים, יש לפתוח את התמונות ההיסטולוגיות בתוכנה לניתוח תמונות ולבחור את אזור העניין באמצעות כלי הלסו (lasso). במקרה זה, נבחר אזור ה-MCC.שימו לב למספר הפיקסלים באזור, כפי שמופיע בתיבת ההיסטוגרמה. לאחר מכן, בחרו את הפיקסלים האדומים של Col10a1 על ידי התאמת טווח הצבעים. השתמשו בכלי הטפטפת כדי לבחור פיקסל אדום מהתמונה ולחצו על OK. לאחר מכן, רשמו את מספר הפיקסלים האדומים באזור, כפי שמופיע בתיבת ההיסטוגרמה.שבריר הפיקסלים האדומים באזור מייצג את כמות הביטוי של Col10a1. כעת, באמצעות אותה טכניקה בסיסית, כמת את פעילות ה-TRAP ב-MCC ובעצם הסובכונדרלית. ראשית, בחר את הסחוס באזורי העצם הסובכונדרלית כאזורים לניתוח ורשום את סך הפיקסלים.לאחר מכן, בחרו את הפיקסלים הצהובים שנוצרו על ידי תסבכת ה-ELF97. רשמו את מספר הפיקסלים החיוביים וחשבו את חלקם של הפיקסלים החיוביים ל-TRAP. כעת, כבדו את מספר התאים החיוביים ל-EDU שצבעו כנגד בכחול על ידי DEPI.שוב, בחרו את אזור העניין ולאחר מכן כמתו את הפיקסלים הכחולים בתוכו. השתמשו בשיטה זו גם כדי לקבוע את מספר הפיקסלים החיוביים ל-EDU באותו אזור. מדידות מורפומטריות של עכברים, שהוכבלו לעומס דחיסה של ה-TMJ, הראו כי העומס הגדיל באופן משמעותי את אורך הלסת התחתונה ואת ראש העשן (condyle head).עם זאת, העמסה לא הובילה לשינוי משמעותי ברוחב הקונדיל. כימות של פיזור הקולגן גילה עלייה משמעותית בביטוי של Col10a1 וב-MCC של הקונדילים בבעלי חיים שהועמסו. מנגד, ביטוי של Col2a1 לא היה שונה באופן משמעותי מקבוצת הביקורת.פעילות TRAP עלתה באזור הסובכונדרלי של הקונדילים ובעכברים תחת עומס, וכך גם הפרוליפרציה. צביעת EDU מציינת את מספר התאים הפרוליפרטיביים. התפלגות הפרוטאוגליקן ב-MCC כוונתה על ידי הערכת השטח שנצבע ב-Toluidine blue ומפת המרחקים.נרשמה עלייה משמעותית במיפוי המרחקים ב-MCC של הcondyles בקבוצה שהופעלה עליה עומס. עם זאת, שטח הצביעה של הפרוטאוגליקנים לא היה שונה באופן סטטיסטי בין הקבוצות. לאחר צפייה בסרטון זה, תגיעו להבנה טובה של אופן ניתוח השינויים התאיים והמבניים ב-mandibular condyle של מכרסמים.

a-morphometric-cellular-analysis-method-for-murine-mandibular

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ארגון תא של עצמות craniofacial כבר שיערו ארוך אבל אף פעם לא דמיין ישירות. תיוג תא Multi-רפאים ובשידור חי vivo   הדמיה מאפשרת הדמיה של התנהגות הדינמית של תאים בלסת תחתונה דג הזברה. כאן, אנו פירוט הפרוטוקול לתמרן Zebrabow דג מהונדס וישירות להתבונן עיבור תא ושינויים מורפולוגיים של כונדרוציטים בסחוס של מקל.

ויזואליזציה של הכונדרוציטים עיבור וכיוונית למניעת הפצת נשק באמצעות ניתוח תא משובט Zebrabow בסחוס של העוברית מקל

מבנים ביולוגיים רבים חסרים ציוני דרך להגדרה בקלות, מה שהופך אותו קשה ליישם שיטות morphometric המודרנית. כאן אנו מדגימים שיטות ללמוד את baculum העכבר (עצם הפין), כולל לנתיחה וסריקת microCT, ואחריו שיטות חישוביות להגדיר-ציוני למחצה המשמשים לכמת גודל וצורת וריאציה.

ניתוח Dissection, סריקה microCT ו morphometric של Baculum

אנו מציגים שיטה להערכת מידת המרחבי פציעה/מות תאים על המשטח במפרק של המפרקים מאתר ללא פגע לאחר היישום של המון מכני מבוקר או השפעות. בשיטה זו יכול לשמש כדי לחקור כיצד דלקת מפרקים ניוונית, גורמים גנטיים ו/או משטרי העמסה שונים משפיעים על פגיעות בחיי עיר chondrocytes.

ויזואליזציה בזמן אמת וניתוח Chondrocyte לפציעה בגלל העמסה מכנית ב Explants הסחוס מאתר באופן מלא ללא פגע

פרוטוקול זה מתאר מיקרוניתוח לכידת לייזר עבור הבידוד של סחוס ועצם מחלקים קפואים טריים של העובר העכבר. סחוס ועצם יכול להיות דמיינו במהירות על ידי cresyl סגול כתמים ונאסף בדיוק כדי להניב RNA באיכות גבוהה עבור ניתוח transcript.

לכידת לייזר מיקרו חיתוך של העכבר סחוס ועצם עבור ניתוח ביטוי גנים

אנו מציגים פרוטוקול ליצירת תנועת שן אורתודונטית בעכברים ושיטות להדמיה תלת מימדית של סיבי הקולגן וכלי הדם של רצועה חניכיים ללא חתך.

הדמיה תלת מימדית של סיבי קולגן PDL במהלך תנועת שן אורתודונטית במודל מורין מנדיבולרי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את שריטות המיקרובלייד המבוקרות על פני השטח של הסחוס המפרקי לאחר ערעור היציבות של ברך העכבר על ידי חיתוך הרצועה המיניסקוטיבית המדיאלית. מודל חייתי זה מציג צורה מואצת של דלקת מפרקים ניוונית (OA) המתאימה לחקר היווצרות אוסטאופיטים, אוסטאוסקלרוזיס וכאבים בשלב מוקדם.

ערעור היציבות של המניסקוס המדיאלי ושריטה הסחוס מודל מורין של דלקת מפרקים ניוונית מואצת

פרוטוקול זה מדגים שלב אחר שלב פרטים כיצד לחלץ את הטוחנת הראשונה המנדיבולרית בעכבר. הוא מספק שיטה חלופית לחוקרים המתמקדים בריפוי והתחדשות עצם הלסת.

הקמת מודל ריפוי שקע מיצוי מולארי מנדיבולרי מורין

כאן אנו מדגימים שלב אחר שלב פרוטוקול תנועת שיניים אורתודונטי הניתן לניהול המופעל על פי מודל מקסילרי מורין. עם הסבר מפורש של כל שלב והדגמה חזותית, החוקרים יכולים לשלוט במודל זה וליישם אותו על צרכי הניסוי שלהם עם כמה שינויים.

הקמת מודל אורתודונטי מקסילרי מורין

כאן אנו מציגים פרוטוקול לחקר תנועת שיניים אורתודונטית (OTM), המשמש מודל מתאים לחקר מנגנוני הסתגלות העצם, ספיגת שורשים ותגובת תאי עצם לגירויים מכניים. מדריך מקיף זה מספק מידע מפורט על מודל OTM, רכישת טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת וניתוח עוקב.

חקר תנועת שיניים אורתודונטית בעכברים

כאן, אנו מתארים לעומק שיטה, המבוססת על טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת, לפלח ולמדוד מודלים תלת-ממדיים של עצמות קרניומקסילופציאליות בעכברים, להערכה טובה יותר של התפתחות עצם קרניומקסילופציאלית בעכברים ממה שמתאפשר בשיטות הנוכחיות.

ניתוח מומים קרניומקסילופציאליים בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת תלת מימדית

במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקול שלב אחר שלב ומדגישים את הפרטים העיקריים לקביעת מאפיינים מורפולוגיים של מיטוכונדריה בתאים חיים, כולל הכנת דגימות, רכישת תמונה וניתוח נתונים. שיטה זו משמשת בדרך כלל לבחינת מורפולוגיה מיטוכונדריאלית לחקר מצבים שונים.

קביעת מורפולוגיה מיטוכונדריאלית בתאים חיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

חקור שינויים מורפומטריים ותאיים בראש הלסת התחתונה של עכברים בעקבות עומס לחץ. השיטה משלבת צילומי רנטגן והיסטולוגיה לניתוח מבני ותאי מפורט.

Morphometric ושיטת ניתוח הסלולר עבור המפרקתי הנמוך מאתר הלסת

גלה סרטונים נוספים