Name: הערכה של דופאמין הומאוסטזיס בעכברים באמצעות ניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית, דופמין Synaptosomal ספיגת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-21T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: למדו להעריך הומאוסטזיס של דופאמין בעכברים באמצעות שיטות HPLC וספיגה סינפטוזומלית. הפרוטוקול מאפשר מדידת תכולת דופאמין ברקמת הסטריאטום ופונקציונליות של נשא הדופאמין לאחר מניפולציות in-vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המצוינות של התוכנית 2016 (U.G., ע. ר, K.J.) UCPH, קרן לונדבק (M.R.) קרן לונדבק המרכז Biomembranes של ננו-רפואה (U.G.), לאומי המכון של בריאות מענקים P01 התובע 12408 (U.G.), הדנית המועצה מחקר עצמאי - מדעי הרפואה (U.G.).

<ol><li>Tritsch, N. X., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+modulation+of+synaptic+transmission+in+cortex+and+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic modulation of synaptic transmission in cortex and striatum.</a> Neuron. 76, 33-50 (2012).</li>
<li>Cartier, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biochemical+and+functional+protein+complex+involving+dopamine+synthesis+and+transport+into+synaptic+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A biochemical and functional protein complex involving dopamine synthesis and transport into synaptic vesicles.</a> J Biol Chem. 285, 1957-1966 (2010).</li>
<li>Kristensen, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLC6+neurotransmitter+transporters%3A+structure%2C+function%2C+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">SLC6 neurotransmitter transporters: structure, function, and regulation.</a> Pharmacol Rev. 63, 585-640 (2011).</li>
<li>Gainetdinov, R. R., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoamine+transporters%3A+from+genes+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Monoamine transporters: from genes to behavior.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 261-284 (2003).</li>
<li>Runegaard, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserved+dopaminergic+homeostasis+and+dopamine-related+behaviour+in+hemizygous+TH-Cre+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Preserved dopaminergic homeostasis and dopamine-related behaviour in hemizygous TH-Cre mice.</a> Eur J Neurosci. 45, 121-128 (2017).</li>
<li>Whittaker, V. P., Michaelson, I. A., Kirkland, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+separation+of+synaptic+vesicles+from+nerve-ending+particles+%28%27synaptosomes%27%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">The separation of synaptic vesicles from nerve-ending particles ('synaptosomes').</a> Biochem J. 90, 293-303 (1964).</li>
<li>Hornykiewicz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+%283-hydroxytyramine%29+and+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Dopamine (3-hydroxytyramine) and brain function.</a> Pharmacol Rev. 18, 925-964 (1966).</li>
<li>Schultz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+dopamine+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral dopamine signals.</a> Trends Neurosci. 30, 203-210 (2007).</li>
<li>Beaulieu, J. M., Gainetdinov, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology%2C+signaling%2C+and+pharmacology+of+dopamine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">The physiology, signaling, and pharmacology of dopamine receptors.</a> Pharmacol Rev. 63, 182-217 (2011).</li>
<li>Giros, B., Jaber, M., Jones, S. R., Wightman, R. M., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperlocomotion+and+indifference+to+cocaine+and+amphetamine+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hyperlocomotion and indifference to cocaine and amphetamine in mice lacking the dopamine transporter.</a> Nature. 379, 606-612 (1996).</li>
<li>Torres, G. E., Amara, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+and+monoamine+transporters%3A+new+visions+of+form+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Glutamate and monoamine transporters: new visions of form and function.</a> Curr Opin Neurobiol. 17, 304-312 (2007).</li>
<li>Jones, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+neuronal+plasticity+in+response+to+inactivation+of+the+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Profound neuronal plasticity in response to inactivation of the dopamine transporter.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 4029-4034 (1998).</li>
<li>Gabriel, L. R., Wu, S., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+slice+biotinylation%3A+an+ex+vivo+approach+to+measure+region-specific+plasma+membrane+protein+trafficking+in+adult+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain slice biotinylation: an ex vivo approach to measure region-specific plasma membrane protein trafficking in adult neurons.</a> J Vis Exp. , (2014).</li>
<li>Rickhag, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+C-terminal+PDZ+domain-binding+sequence+is+required+for+striatal+distribution+of+the+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A C-terminal PDZ domain-binding sequence is required for striatal distribution of the dopamine transporter.</a> Nat Commun. 4, 1580(2013).</li>
<li>Dunkley, P. R., Jarvie, P. E., Robinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+Percoll+gradient+procedure+for+preparation+of+synaptosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes.</a> Nat Protoc. 3, 1718-1728 (2008).</li>
<li>Whittaker, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thirty+years+of+synaptosome+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Thirty years of synaptosome research.</a> J Neurocytol. 22, 735-742 (1993).</li>
<li>Schmitz, Y., Benoit-Marand, M., Gonon, F., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+regulation+of+dopaminergic+neurotransmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Presynaptic regulation of dopaminergic neurotransmission.</a> J Neurochem. 87, 273-289 (2003).</li>
<li>Yang, L., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+neurotransmitter+levels+in+models+of+Parkinson%27s+disease+by+HPLC-ECD%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Determination of neurotransmitter levels in models of Parkinson's disease by HPLC-ECD.</a> Methods Mol Biol. 793, 401-415 (2011).</li>
<li>Earles, C., Schenk, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotating+disk+electrode+voltammetric+measurements+of+dopamine+transporter+activity%3A+an+analytical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Rotating disk electrode voltammetric measurements of dopamine transporter activity: an analytical evaluation.</a> Anal Biochem. 264, 191-198 (1998).</li>
<li>Wu, Q., Reith, M. E., Kuhar, M. J., Carroll, F. I., Garris, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+increases+in+nucleus+accumbens+dopamine+after+systemic+cocaine+administration+are+caused+by+unique+characteristics+of+dopamine+neurotransmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Preferential increases in nucleus accumbens dopamine after systemic cocaine administration are caused by unique characteristics of dopamine neurotransmission.</a> J Neurosci. 21, 6338-6347 (2001).</li>
<li>Schonfuss, D., Reum, T., Olshausen, P., Fischer, T., Morgenstern, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+constant+potential+amperometry+for+investigations+of+dopaminergic+neurotransmission+kinetics+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Modelling constant potential amperometry for investigations of dopaminergic neurotransmission kinetics in vivo.</a> J Neurosci Methods. 112, 163-172 (2001).</li>
<li>Hoover, B. R., Everett, C. V., Sorkin, A., Zahniser, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+regulation+of+dopamine+transporters+by+tyrosine+kinases+in+rat+neuronal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Rapid regulation of dopamine transporters by tyrosine kinases in rat neuronal preparations.</a> J Neurochem. 101, 1258-1271 (2007).</li>
<li>Hansen, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Missense+dopamine+transporter+mutations+associate+with+adult+parkinsonism+and+ADHD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Missense dopamine transporter mutations associate with adult parkinsonism and ADHD.</a> J Clin Invest. 124, 3107-3120 (2014).</li>
<li>Damier, P., Hirsch, E. C., Agid, Y., Graybiel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+substantia+nigra+of+the+human+brain.+II.+Patterns+of+loss+of+dopamine-containing+neurons+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The substantia nigra of the human brain. II. Patterns of loss of dopamine-containing neurons in Parkinson's disease.</a> Brain. 122 (Pt 8), 1437-1448 (1999).</li>
<li>Atack, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+dopamine+by+a+modification+of+the+dihydroxyindole+fluorimetric+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The determination of dopamine by a modification of the dihydroxyindole fluorimetric assay.</a> Br J Pharmacol. 48, 699-714 (1973).</li>
<li>Yoshitake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-sensitive+liquid+chromatographic+method+for+determination+of+neuronal+release+of+serotonin%2C+noradrenaline+and+dopamine+monitored+by+microdialysis+in+the+rat+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">High-sensitive liquid chromatographic method for determination of neuronal release of serotonin, noradrenaline and dopamine monitored by microdialysis in the rat prefrontal cortex.</a> J Neurosci Methods. 140, 163-168 (2004).</li>
<li>Decressac, M., Mattsson, B., Lundblad, M., Weikop, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+neurodegenerative+and+behavioural+changes+induced+by+AAV-mediated+overexpression+of+alpha-synuclein+in+midbrain+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Progressive neurodegenerative and behavioural changes induced by AAV-mediated overexpression of alpha-synuclein in midbrain dopamine neurons.</a> Neurobiol Dis. 45, 939-953 (2012).</li>
<li>Huot, P., Johnston, T. H., Koprich, J. B., Fox, S. H., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-DOPA+pharmacokinetics+in+the+MPTP-lesioned+macaque+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">L-DOPA pharmacokinetics in the MPTP-lesioned macaque model of Parkinson's disease.</a> Neuropharmacology. 63, 829-836 (2012).</li>
<li>Mikkelsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP-induced+Parkinsonism+in+minipigs%3A+A+behavioral%2C+biochemical%2C+and+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">MPTP-induced Parkinsonism in minipigs: A behavioral, biochemical, and histological study.</a> Neurotoxicol Teratol. 21, 169-175 (1999).</li>
<li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Dempsey, C., Fields, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+profiling+of+dopamine+regulation+in+substantia+nigra+and+ventral+tegmental+area%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Comprehensive profiling of dopamine regulation in substantia nigra and ventral tegmental area.</a> J Vis Exp. , (2012).</li>
<li>Van Dam, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+distribution+of+biogenic+amines%2C+amino+acids+and+cholinergic+markers+in+the+CNS+of+the+C57BL%2F6+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Regional distribution of biogenic amines, amino acids and cholinergic markers in the CNS of the C57BL/6 strain.</a> Amino Acids. 28, 377-387 (2005).</li>
<li>Barth, C., Villringer, A., Sacher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+hormones+affect+neurotransmitters+and+shape+the+adult+female+brain+during+hormonal+transition+periods%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sex hormones affect neurotransmitters and shape the adult female brain during hormonal transition periods.</a> Front Neurosci. 9 (37), (2015).</li>
<li>Corthell, J. T., Stathopoulos, A. M., Watson, C. C., Bertram, R., Trombley, P. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+bulb+monoamine+concentrations+vary+with+time+of+day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory bulb monoamine concentrations vary with time of day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Zhuang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivity+and+impaired+response+habituation+in+hyperdopaminergic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hyperactivity and impaired response habituation in hyperdopaminergic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 1982-1987 (2001).</li>
<li>Ungerstedt, U., Pycock, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4371656">Functional correlates of dopamine neurotransmission.</a> Bull Schweiz Akad Med Wiss. 30, 44-55 (1974).</li>
<li>Wickham, R. J., Park, J., Nunes, E. J., Addy, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+Rapid+Dopamine+Dynamics+with+Fast+Scan+Cyclic+Voltammetry+During+Intra-oral+Tastant+Administration+in+Awake+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats.</a> J Vis Exp. , e52468(2015).</li>
<li>Phillips, P. E., Robinson, D. L., Stuber, G. D., Carelli, R. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurements+of+phasic+changes+in+extracellular+dopamine+concentration+in+freely+moving+rats+by+fast-scan+cyclic+voltammetry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Real-time measurements of phasic changes in extracellular dopamine concentration in freely moving rats by fast-scan cyclic voltammetry.</a> Methods Mol Med. 79, 443-464 (2003).</li>
<li>Callaghan, P. D., Irvine, R. J., Daws, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+the+in+vivo+dynamics+of+neurotransmitter+release+and+serotonin+uptake+after+acute+para-methoxyamphetamine+and+3%2C4-methylenedioxymethamphetamine+revealed+by+chronoamperometry%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Differences in the in vivo dynamics of neurotransmitter release and serotonin uptake after acute para-methoxyamphetamine and 3,4-methylenedioxymethamphetamine revealed by chronoamperometry.</a> Neurochem Int. 47, 350-361 (2005).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

כתב יד זה מתאר שימושי פרוטוקולים ניסיוני ניסחו DA הומאוסטזיס כל דגם העכבר של בחירה. אנו מספקים פרוטוקולים מפורט עבור מדידת רמות של DA ברקמת המוח של עכברים באמצעות HPLC ספיגת DA synaptosomal כדי להעריך פונקציונלי DA התחבורה באמצעות ידיים למעלה הנהלים, הפרוטוקולים ואת מגבלות עבור ניסוי HPLC ו synaptosomal assay ספיגת DA נכרוך להלן.
פרוטוקול ספיגת synaptosomal יכול לספק תובנות שימושיות הפונקציונליות של במבטאו משולבים עם הניסוי פני השטח biotinylation13, ניתן להשיג את הידע ע...

דופמין (DA) הוא נוירוטרנסמיטור modulatory קריטי עבור התנהגות מוטורית, פרס, התפקוד הקוגניטיבי1,7,8,9. חוסר איזון ב- DA הומאוסטזיס הם מעורבים מספר מחלות מנוטלי כמו הפרעת קשב-קשב, התמכרות לסמים, דיכאון, מחלת פרקינסון1. DA משוחרר מן הנוירון presynaptic לתוך החריץ סינפטית, איפה זה נקשר ומפעילה רצפטורים על קרום קדם ו postsynaptic, ובכך נוסף העברת האות. הרמה דה ב הסינפסה לאחר שחרור במרחב של חנותם נשלטת על ידי DAT3,10. המשגר מרחיק דא מן המרחב חוץ-תאית, ובכך ומקיימת פיזיולוגיים DA רמות3,11. הסרת גנטי של DAT בעכברים גורמת פנוטיפ hyperdopaminergic מאופיין על ידי רמות גבוהות DA סינפטית, דלדול של בריכות DA תאיים ושינויים עמוקה DAergic postsynaptic איתות10,12.
. הנה, שני פרוטוקולים נפרדים מוצגים, שיטה אחת מדד דה רקמות התוכן של אחר כדי להעריך את הפונקציונליות של במבטאו משולבים עם וזמינותו biotinylation פני השטח המתואר על ידי גבריאל ואח13 שתי שיטות אלו מספקים מידע אודות DA תוכני ופונקציונאלי רמות של DAT הערכה יסודית של DA הומאוסטזיס. באמצעות שיטות אלה DA הומאוסטזיס של העכברים הטרנסגניים או מחלת מודלים שונים יכול להיות מאופיין, תיאר. כלים אלו מיושמות, מותאם הן שימוש רגיל במעבדות שלנו. מבחני הנוכחי שמשו לחקור את ההשלכות על הומאוסטזיס DA של שינוי על C-הטרמינל DAT14 ולהבעת Cre recombinase תחת טירוזין hydroxylase (ה) יזם 5.

<table><tbody><tr><td>מעכב COMT</td><td>סיגמא אולדריץ', גרמניה</td><td>RO-41-0960</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr> <tr><td>[3H]-דופמין</td><td>פרקין-אלמר מדעי החיים, בוסטון, MA, ארה"ב</td><td>NET67-3001MC</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>מסנני מיקרופייבר זכוכית</td><td>GF/C Whatman, GE Healthcare Life Sciences, Buckinghamshire</td><td>1822-024</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>HiSafe נוזל נצנוץ</td><td>פרקין אלמר</td><td>1200-437</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>MicroBeta2</td><td>פרקין אלמר</td><td></td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>ערכת בדיקת חלבון BCA Thermo</td><td>Scientific Pierce</td><td>23225</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Life Science</td><td>H3375</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>Sigma Life Science</td><td>S7903</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma Life Science</td><td>S3014</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma Life Science</td><td>P9541</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Merck KGaA</td><td>10043-52-4</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma Life Science</td><td>63065</td><td>לפרוטוקול ספיגת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>חומצה אסקורבית</td><td>סיגמא מדעי החיים</td><td>A0278</td><td>לפרוטוקול ספיגת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>D-גלוקוז</td><td>סיגמא מדעי החיים</td><td>G7021</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>Pargyline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-8013</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>Desipramine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D3900</td><td>לספיגת DA סינפטוזומלי פרוטוקול</td></tr><tr><td>דופמין</td><td>סיגמא מדעי החיים</td><td>H8502</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>קוקאין</td><td>סיגמא מדעי החיים</td><td>C5776</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>מכשירי ASI</td><td>מטריצת מוח</td><td>RBM2000C</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי</td></tr><tr><td>משבש טפלון מכני קפאנו</td><td>Buch & הולם</td><td>הופסק</td><td>לפרוטוקול קליטת DA סינפטוזומלי (הומוגניזציה)</td></tr><tr><td>Antec Decade (גלאי אמפרומטרי)</td><td>אנטק, ליידן, הולנד</td><td>הופסק: דגם חדש DECADE Elite / Lite&trade; גלאי אלקטרוכימי מסוג 175 ו-176</td><td>עבור פרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>Avantec 0.22 &mu; m מסנן זכוכית</td><td>Frisenette ApS, דנמרק</td><td>13CP020AS</td><td>עבור פרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>טור: Prodigy 3 &mu; ODS-3 C18</td><td>Phenomenex, YMC אירופה, צ'רמבק, גרמניה</td><td>מספר חלק: 00A-3300-E0</td><td>לפרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>תוכנת פתרון LC</td><td>תחנת עבודה מסדרת</td><td>Shimadzu</td> LabSolutions <td>לפרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>חומצה פרכלור 0.1M</td><td>Fluka אנליטי</td><td>35418-500 מ"ל</td><td>לפרוטוקול HPLC (הכנת רקמות)</td></tr> <tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E5134-50g</td><td>לפרוטוקול</td></tr> <tr><td>HPLCNatriumdihydrogenphosphar</td><td>Bie& Berntsen</td><td>1.06346 1000 גרם</td><td>לפרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>נתרן 1-אוקטנסולפונאט מונוהידראט</td><td>אולדריץ'</td><td>74885 -10 גרם</td><td>לפרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>אצטוניטריל, איזוקרטי HPLC כיתה</td><td>Scharlau</td><td>AC03402500</td><td>לפרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>Filtre 0.22um</td><td>Frisenette ApS, דנמרק</td><td>Avantec 13CP020AS</td><td>לפרוטוקול HPLC (הכנת רקמות)</td></tr> <tr><td>חומצה אורתו-זרחתית 85%</td><td>Merck</td><td>1.00563. 1000 מ"ל</td><td>לפרוטוקול HPLC</td></tr><tr><td>אלקטרודה</td><td>Antec, ליידן, הולנד</td><td>AN1161300</td><td>לפרוטוקול HPLC (ראה מדריך מקוון)</td></tr><tr><td>תוכנית גלאים על גלאי אלקטרוכימי DECADE II</td><td>Antec, ליידן, הולנד</td><td>Lite&trade; גלאי אלקטרוכימי מסוג 175 ו-176</td><td>לפרוטוקול HPLC</td></tr></tbody></table>

הערכה של דופאמין הומאוסטזיס בעכברים באמצעות ניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית, דופמין synaptosomal ספיגת

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

דופמין (DA) הוא נוירוטרנסמיטור modulatory שליטה פעילות מוטורית, תהליכים גמול ועל התפקוד הקוגניטיבי. ירידת ערך של דופאמין (DAergic) עצבית הוא קשור מאוד עם מספר מחלות הקשורות במערכת העצבים המרכזית כגון מחלת פרקינסון, תשומת לב-קשב-היפראקטיביות וסמים התמכרות1,2 3, ,4. בהתוויית מנגנוני המחלה מעורבים דה איזון תלויה באופן ביקורתי מודלים בעלי חיים כדי לחקות את ההיבטים של המחלות, ובכך פרוטוקולים של להעריך חלקים ספציפיים של הומאוסטזיס DA חשובים לספק תובנות הרומן האפשר טיפולית מטרות עבור מחלות אלו.
כאן, אנו מציגים שני פרוטוקולים ניסיוני שימושי זה בשילוב לספק read-out תפקודית של מערכת DAergic בעכברים. פרמטרים ביוכימיים ופונקציונליים על הומאוסטזיס DA מתקבלים באמצעות הערכה של DA רמות דופמין טרנספורטר (. DAT) פונקציונליות5. כאשר חוקרים את מערכת DA, היכולת למדוד באופן מהימן רמות אנדוגני של DA מהמוח למבוגרים הוא חיוני. לכן, אנו מציגים כיצד לבצע ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) על רקמת המוח של עכברים כדי לקבוע רמות של המחוזי. אנו מבצעים את הניסוי על רקמות הגבי סטריאטום (dStr), גרעין האקומבנס (NAc), אך השיטה מתאים גם באזורים אחרים במוח דה-innervated.
DAT הוא חיוני עבור ספיגה חוזרת של DA בטרמינל presynaptic, ובכך שולט הפעילות הגיאופוליטיות והמרחביות הטמפורלי של המחוזי שפורסמו לדעת את רמות והפונקציונליות של DAT ב סטריאטום זה חשיבות רבה בעת הערכת DA הומאוסטזיס. כאן, אנו מספקים פרוטוקול המאפשר להסיק מידע על פני רמות ותפקוד שימוש assay ספיגת של synaptosomal6 DA בו זמנית.
שיטות בשילוב עם פרוטוקולים סטנדרטיים immunoblotting מספקים החוקר עם כלים רלוונטיים כדי לאפיין את המערכת DAergic.

הפרוטוקול ספיגת DA הנוכחי (איור 1) כולל את כל הצעדים הדרושים כדי להעריך את הפונקציונליות של DAT ב synaptosomes של עכברים. הנתונים שלנו נציג של השיטה ספיגת DA (איור 2) מתארת עקומה רוויה עם נתונים מקוריים (איור 2B) וסידר נתונים (איור 2 א). עקומת רוויה מציג תפיסה פראי סוג עכברים. בדרך כלל אחד יעשה דה ספיגת להשוואה עם עכבר מוטציה, שתוביל עקומה רוויה עבור כל גנוטיפ<sup class=...

ספיגת דופמין synaptosomal ו כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים ניתוח מייצגים ניסוי כלים לחקור דופמין הומאוסטזיס בעכברים על-ידי הערכת את הפונקציה של המשגר דופמין, רמות הדופמין ברקמת striatal, בהתאמה. כאן אנו מציגים פרוטוקולים למדוד דופמין רקמות תוכן, להעריך את הפונקציונליות של המשגר דופמין.

הערכה של דופאמין הומאוסטזיס בעכברים באמצעות ניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית, דופמין Synaptosomal ספיגת

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

בפרוטוקול זה אנו מציגים שתי טכניקות. המטרה של הראשונה היא להעריך את תפקוד נשא הדופמין על ידי מדידת ספיגת דופמין מהכנות סינפטוזומליות. השנייה נועדה להעריך רמות של דופמין ברקמה באמצעות אנליזת HPLC.שיטות אלו מספקות פרמטרים חשובים של הומאוסטזיס של דופמין על ידי הדגמה כיצד למדוד את תכולת הדופמין ברקמות ולהעריך את התפקוד של נשא הדופמין בעכברים. היתרון המרכזי של טכניקות אלו הוא שניתן לבצען לאחר מניפולציות in-vivo, כגון מניפולציות כימוגנטיות, טיפולים תרופתיים in-vivo או אימון התנהגותי של בעלי החיים. את הליך ה-HPLC תדגים Pia Weikop, פרופסור חברה במעבדה לנוירופסיכיאטריה.כדי להתחיל בהליך זה, חשפו את הגולגולת על ידי חיתוך העור והסרת רקמות עודפות. לאחר מכן, חתכו את הגולגולת לאורך ה-sutura sagittalis, עד לקדמתה. הניחו את קצות המספריים בעיניים והסִירו את שארית הגולגולת על ידי חיתוכה.הוצא את המוח במהירות והנח אותו ב-PBS קר בקרח. לאחר מכן, באמצעות מטריצת מוח (brain matrix), בצע חיתוך קורונלי של 3 מילימטרים מהסטריאטום. לאחר מכן בצע דיסקציה עדינה יותר באמצעות מחט (puncture).לאחר מכן, העבירו את הרקמות למסורת מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר לצורך שקילה. לאחר מכן, חזרו על הפעולות עבור המוח השני. לאחר קבלת המשקל עבור שני המוחות, העבירו את הרקמות למכתש הומוגניזציה המכיל 1 מיליליטר של באפר הומוגניזציה קר מאוד (בטמפרטורת קרח).לאחר מכן, הומוגניזרו את הרקמה באמצעות פסטל מונע על ידי מנוע. לאחר מכן, העבירו את ההומוגנאט לשפופרת מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר ואספו את שאריות ההומוגנאט מכלי הזכוכית להומוגניזציה על ידי שטיפתו עם 0.5 מיליליטר נוספים של בופר הומוגניזציה. לאחר מכן, השקיפו את הגרעינים ושאריות התאים באמצעות צנטריפוגה.לאחר מכן, העבירו את העל-נוזל המכיל את ממברנות התאים והציטופלזמה לשפופרות מיקרו-צנטריפוגה חדשות בנפח 1.5 מיליליטר וסובבו בצנטריפוגה למשך 20 דקות בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס. לאחר מכן, השליכו את העל-נוזל המכיל את הציטופלזמה ותלו את המשקע המכיל סינפטוזומים גולמיים ב-40 מיקרוליטר למיליגרם רקמה של באפר הומוגניזציה. בשלב זה, הוסיפו 440 מיקרוליטר של באפר ספיגה, ליגנד וקוקאין ל-12 שפופרות מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר ייעודיות, ו-440 מיקרוליטר של באפר ספיגה וליגנד ל-36 שפופרות המיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר שנותרו.סמן שש מבחנות מיקרו-צנטריפוגה בנפח שני מיליליטר כ-10, 5, 2.5, 1.25, 0.62 ו-0.31. לאחר מכן, הוסף 750 µL של באפר ספיגה (uptake buffer) וליגנד לחמש מבחנות המיקרו-צנטריפוגה בעלות המספר הנמוך ביותר. לאחר מכן, הוסף למבחנה המסומנת ב-10 כ-1,455.4 µL של באפר ספיגה וליגנד, 14.6 µL של דופמין לא מסומן ו-30 µL של דופמין טריטיומי.בשלב הבא, העבירו 750 microliters של התערובת מהמבחנה המסומנת ב-10 למבחנה המסומנת ב-5. ערבבו היטב והעבירו 750 microliters של התערובת ממבחנה זו למבחנה המסומנת ב-2.5. חזרו על דילול זה עם שאר המבחנות.לאחר מכן, שטפו מקדימה את מסנני המיקרופייבר מזכוכית עם ארבעה מיליליטר של באפר ספיגה (uptake buffer) לאחר הצבתם בדלי סינון בעל 12 בארי. לאחר מכן, הוסיפו 10 מיקרוליטר של תרחיף ממברנת הסינפטוזומים ל-24 מבחנות מיקרו-צנטריפוגה ראשונות בנפח 1.5 מיליליטר המכילות 440 מיקרוליטר באפר. ערבבו בעזרת וורטקס בזהירות וסובבו קצרות בצנטריפוגה כדי להבטיח שהסינפטוזומים טבולים בבאפר.לאחר מכן, השאירו אותם בטמפרטורה של 37 degree celsius למשך 10 דקות. לאחר 10 דקות, הוסיפו 50 microliters של dopamine בריכוזים של 10 micromolar ו-five micromolar לשתי העמודות הראשונות והשאירו אותן בטמפרטורה של 37 degrees celsius למשך חמש דקות תוך써 ניעור. לאחר חמש דקות, הפסיקו את התגובה על ידי הוספה של one milliliter של uptake buffer קר מהקרח; חזרו על הפעולה עם הריכוזים 2.5 micromolar ו-1.25 micromolar, ולאחר מכן עם 0.62 micromolar ו-0.31 micromolar.הוסף את הדגימות למסנני מיקרו-סיב ששוטפו מראש ושטוף אותם עם חמישה מנתים של 4 mL של uptake buffer קר מאוד. לאחר שנוספו למסננים 12 הדגימות הראשונות, העבר את המסננים למבחנות סינטילציה. חזור על פעולה זו עם 12 הדגימות הבאות.הכינו שלוש מבחנות ספירה מקסימליות על ידי הנחת מסנן מיקרוסיבים בתחתית מבחנות סנצילציה, 49 עד 51, והוספה של 25 µL של דופמין בריכוז מקסימלי של 10 µM מעליהם. לאחר מכן, השאירו את כל 51 מבחנות הסנצילציה במנדף במשך שעה אחת. לאחר מכן, הוסיפו 3 mL של נוזל סנצילציה לכל מבחנת סנצילציה ונערה בעוצמה על שייקר למשך שעה אחת.כדי לספור דופמין טריטיומי במספר בטא למשך דקה אחת, פתחו את התוכנה ובחרו את ההגדרות המתאימות. לקביעת ריכוז החלבון, השתמשו בערכה סטנדרטית לבדיקת חלבון BCA, כדי לקבוע את ריכוזי החלבון של הסינפטוזומים לצורך התאמות ולהשוואה נכונה של הספיגה בין הדגימות. להכנת הרקמה, הוסיפו 500 microliters של תמיסת הומוגניזציה לכל דגימה והומוגניזו את כל הדגימות באמצעות הומוגניזר אולטרה במהירות מלאה למשך כ-30 שניות.שמרו את הדגימות במי קרח במהלך ההומוגניזציה. לאחר מכן, סבבו את הדגימות בצנטריפוגה למשך 30 דקות בטמפרטורה של 4 °C, במהירות של 14,000 x G. לאחר מכן, העבירו כ-200 µL מכל דגימה למסנן זכוכית של 0.22 micron לפני ניתוח הדגימות בשיטת EC-HPLC. כדי להגדיר את הגלאי, הגדירו את הפלט ל-700 mV ואת הטמפרטורה בתוך תנור הגלאי ל-32 °C.הניחו את המבחנות בדוגם האוטומטי. הגדירו תוכנית טווח באמצעות המדריך המקוון והוסיפו את תוכנית הזמנים בהתאם לטבלה 2. הגדירו את המערכת על ידי פתיחת התוכנית.בשלב הבא, הקלידו את מזהה המשתמש והסיסמה ולחצו על אישור. לאחר מכן, המתינו עד שהתוכנה תתחבר למכשירים. לאחר מכן, עברו לטבלת האצוות (batch table) ומלאו את נתוני המידע.שמרו את הקובץ על ידי מעבר לתפריט קובץ (file), לאחר מכן לחצו על שמור קובץ אצווה בשם (save batch file as) ובסיום על שמור (save). לאחר מכן, הזרקו את הדגימה הראשונה על ידי לחיצה על התחל אצווה (start batch). לאחר מכן, עברו לרכישת נתונים (data acquisition) כדי לעקוב אחר הכרומטוגרמה עם סיום ניתוח הדגימות.לאחר מכן, עברו לניתוח לאחר ההרצה של ה-LC ובחרו את שם הקובץ. לאחר מכן, לחצו על view. בסרגל האינטגרציה הידנית, הוסיפו את כל הפסגות שיש לבצע להן אינטגרציה, לאחר מכן, עברו לדו"ח הנתונים והדפיסו את קריאת התוצאות.לאחר הוספת התוכנית לגלאי, צור עקומת כיול בעלת שלוש נקודות על ידי הזרקת הסטנדרט שהוכן בנפחים של 5, 10 ו-15 µL. באיור זה, הנתונים המייצגים מראים את עקומת הרוויה של ספיגת דופמין באמצעות נשא הדופמין מדגימי סינפטוזומים של עכברים מסוג פראי (wild type). הנקודות השחורות הן הערכים של ארבעת העכברים המוצגים בנפרד.העקומה הירוקה מראה כיצד נתונים מוצגים בדרך כלל על ידי שילוב נתונים מארבעה עד שישה עכברים לקבוצה. כאן מוצג גרף הרוויה של הנתונים הגולמיים לפני התאמה לריכוז החלבון הממשי של הדגימות. גרף זה מציג את הספירות מהדגימות המכילות קוקאין, המשמשות להחסרת הרקע מנתוני הספיגה.בקרה זו חיונית לקביעת מהימנות נתוני הספיגה. היסטוגרמה זו מראה את קיבולת הספיגה של נשא הדופמין, והיסטוגרמה זו מראה כי ה-Km עבור נשא הדופמין הוא 0.1 פלוס או מינוס 0.03 µM, נתון התואם היטב לשיטת הוולטאמטריה של דיסק מסתובב, המצביעה על ערכי Km של נשא הדופמין בטווח של 0.6 עד 1.2 µM. בעת ביצוע הפרוצדורה האופטית של הסינפטוזומים, חשוב לשמור על הרקמה על קרח בכל עת במהלך הכנת הסינפטוזומים.בעקבות בדיקת ספיגת דופמין בסינפטוזומים, ניתן לבצע הליכים נוספים, כגון בדיקת ביוטיניליזציה של פני השטח, כדי לקבוע האם פגיעה בספיגת הדופמין ניתנת להסבר על ידי ביטוי משתנה של נשא הדופמין על פני השטח. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי הדרכים לחקור את הומוסטזיס הדופמין בעכברים באמצעות בדיקת התפקוד של נשא הדופמין ורמות הדופמין בדגימות רקמה מהסטריאטום.

assessment-dopaminergic-homeostasis-mice-use-high-performance-liquid

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פרוטוקול לביצוע חד צדדיים 6-OHDA נגעים של צרור המוח הקדמי המדיאלי בעכברים מתואר. שיטה זו יש שיעור תמותה נמוך (13.3%) עם 89% מבעלי החיים ששרדו מראה&gt; אובדן 95% של דופמין striatal ו 90.63 ± -4.02% הטיה לכיוון הסיבוב ipsiversive בצד של הנגע.

פיתוח מודל חד צדדי, lesioned מאוס 6-OHDA של מחלת פרקינסון

טכניקת amperometric מודדת שחרור דופאמין מתא בודד על ידי גילוי נוכחי חמצונים המיוצרים על ידי חמצון דופמין ספונטני. מהדק המתח סימולטני ומתודולוגיה amperometry לחשוף את מערכת היחסים בין מכניסטית "הפעילות" הכוללת של טרנספורטר דופאמין ותפקיד הרגולציה של פעילות זו על ההובלה ההפוכה של דופמין.

מדידת תא בודדה של שחרור דופמין במתח-clamp וAmperometry סימולטני

דופאמין הוא מוסדר בבירור בגרעין המוח התיכון, אשר מכילים תאים הגופות דנדריטים של נוירונים דופאמין. כאן נתאר את הגישה לנתיחה ו מדגם הטיפול על מנת למקסם את התוצאות, ולכן מסקנות ותובנות, על ויסות הדופמין בגרעין המוח התיכון של nigra substantia (SN) ואזור tegmental הגחוני (VTA) במכרסמים.

פרופיל מקיף של הסדרת substantia nigra הדופמין ואזור Tegmental הגחון

סרטון זה מדגים את הערכת ספיגת הדופמין בסינפטוזומים שנאספו ממוחות עכברים. הוא מתאר שלבים להכנת סינפטוזומים לספיגת דופמין באמצעות מובילי דופמין, טיפול בהם בריכוזים משתנים של דופמין עם תווית רדיו, בידוד הסינפטוזומים ומדידת רדיואקטיביות כדי לכמת את ספיגת הדופמין.

מדידת ספיגת דופמין בסינפטוזומים במוח עכבר באמצעות דופמין עם תווית רדיו

בהפרעות ומחל פרקינסון תנועה באופן כללי, מבחני התנהגות רגישים ואמינים הם חיוניים לבדיקה הרפוי פוטנציאלי חדשה. כאן, אנו מתארים לניהול סוללה של בדיקות הסנסורית לעכברים שרגישים לדרגות שונות של פגיעה במערכת nigrostriatal ושימושית למחקרים פרה.

הערכת התפקוד הסנסורית בעכברי מודל של מחלת פרקינסון

כאן אנו מתארים שני מבחני שנקבעו ללמוד ניוון מוחיים תלוי גיל של דופאמין (DA)...

הערכת פנוטיפים ניווניות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; נוירונים דופאמין על ידי מבחני לאז וimmunostaining מוח כל

ליפוקסיג'נאז (LOX) isozymes יכול לייצר מוצרים שעשויים להגדיל או להקטין נוירואינפלמציה ו ניוון עצבי. מחקר אינטראקציה גנטית-סביבה יכול לזהות LOX השפעות ספציפיות isozyme. באמצעות 1-מתיל-4-פניל-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) מודל של נזק nigrostriatal בשני קווים מהונדסים LOX isozyme לקוי מאפשר להשוות את התרומה של איזוזימים LOX על שלמות דופאמין ודלקת.

מודלים לאינטראקציה בין סביבת גנים כדי לחשוף מנגנוני רגישות במחלת פרקינסון

מאמר זה מפרט השימוש של הקלטות amperometric פוטנציאל קבוע באמצעות אלקטרודות סיב פחמן וטכנולוגיה ביוסנסור אנזימטיות כדי למדוד את שחרורו של דופמין, גלוטמט עם רזולוציה טמפורלית גבוהה במהלך טבעי מתגמל התנהגות אוגר נקבה.

מדידת In Vivo שינויים עצביים חוץ-תאית במהלך טבעי מתגמל בהתנהגויות של אוגרים סוריים הנשי

נציג של מיצוי מוצק-פאזי נוח מצמידים כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC) עם זיהוי אלקטרוכימי (ECD) נחישות סימולטני של נוירוטרנסמיטרים מונואמין שלוש ושתיים של מטבוליטים שלהם בשתן תינוקות. אנחנו גם לזהות את המטבוליט MHPG כמו סמן פוטנציאלי לאבחון מוקדם של נזק מוחי תינוקות.

שיטה נוחה עבור חילוץ וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה של נוירוטרנסמיטורים קטכולאמין מטבוליטים שלהם

זיהוי של דופמין קולטן D1-אלפא גרעין האקומבנס חיוני שהבהרת בתפקוד קולטן D1 בזמן מחלה במערכת העצבים המרכזית. ביצענו את הרומן RNA בחיי עיר הכלאה assay להמחיש מולקולות RNA יחיד באזור ספציפי במוח.

זיהוי של דופמין קולטן D1-אלפא בתוך מכרסמים גרעין האקומבנס על ידי טכנולוגיה חדשנית RNA בחיי עיר זיהוי

שיטה זו מציגה טכניקה פשוטה לזיהוי של שחרור מונואמין אנדוגני באמצעות פרוסות מוח חריפות. ההתקנה משתמשת בלוח 48 באר המכיל מחזיק רקמות לשחרור מונואמין. מונואמין ששוחרר מנותח על ידי HPLC יחד עם זיהוי אלקטרוכימי. בנוסף, טכניקה זו מספקת שיטת סינון לגילוי סמים.

בסיס בסיס צלחת למדידת שחרור מונואמין אנדוגני בפרוסות מוח חריפות

למדו להעריך הומאוסטזיס של דופאמין בעכברים באמצעות שיטות HPLC וספיגה סינפטוזומלית. הפרוטוקול מאפשר מדידת תכולת דופאמין ברקמת הסטריאטום ופונקציונליות של נשא הדופאמין לאחר מניפולציות in-vivo.

הערכה של דופאמין הומאוסטזיס בעכברים באמצעות ניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית, דופמין Synaptosomal ספיגת

גלה סרטונים נוספים