Name: שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: למדו כיצד לגדל יתושי Aedes aegypti נגועי Wolbachia לשליטה במחלות. פרוטוקול זה מספק הנחיות לחוקרים בתחום הבקרה על וקטורים ומניעת מחלות כגון דנגה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו להכיר הנג לין לחלומות כריס פטון, פטרינה ג'ונסון, קלייר Doig על תרומתם לפיתוח שיטות התחזוקה שלנו המושבה, שלושה אנונימיים בודקים עבור שלהם הצעות אשר עזר לשפר את כתב היד. המחקר שלנו נתמך על-ידי תוכנית גרנט מלגת אל תסמכו עלי הבריאות הלאומי, מועצת המחקר הרפואי ותרגום מענק של טרסט. סעיף זה נמען של הכשרה מחקר הממשלה האוסטרלית תוכנית מלגה.

דם האכלה של יתושים בנושאים האנושית אושרה על ידי אוניברסיטת מלבורן ועדת האתיקה האנושית (אישור #: 0723847). כולם מתנדבים בתנאי הודיע הסכמה בכתב.
1. זחל לגידול
הערה: יתושים נערכים 26 ± 0.5 ° C ו- 50-70% לחות יחסית, עם photoperiod h (בהירה: כהה) 12:12 עבור פרוטוקול תחזוקה זה המושבה. תנאים אלה דומים הממוצע לתנאי האקלים באוסטרליה, קיירנס, בטווח תרמי מיטבי עבור Ae. aegypti הישרדות, פיתוח44,45,46. טמפרטורות גבוהות יכול לגרום לאובדן של זיהומים Wolbachia מן המושבות נגד יתושים, נמנעה47. אנו מקפידים על יחידים לפחות 500 לכל האוכלוסייה כדי למזער את נישואי קרובים; שמירה על מושבות של גודל קטן יותר יכולות להיות השלכות כושר [רוס. et al. לא פורסם]. תחת תנאים אלו בהנחה תזונה נאותה, הזמן הדור הממוצע הוא 28 ימים (ראה טבלה 1).
<ol><li>להטביע את הביצים על המצע במגשים (איור 1 א') המכיל 3 לליטר מים (מים אוסמוזה הפוכה או מי ברז בגילאי, שנוצר על ידי השארת ברז במגשים עבור 24 שעות לפני השימוש), ~ 300 מ"ג מזון דגים (אחד כתוש לוח, ראה טבלה של חומרים) ו- a כמה גרגרי שמרים יבשים פעילים לזירוז הבקיעה48.</li>
	<li>יום אחד לאחר הבקיעה, להשתמש פיפטה מזכוכית כדי להעביר כ 500 הזחלים המגשים המכילים 4 ליטרים של מים (איור 1B), נחשב באמצעות מונה השלט. להוסיף שתי טבליות מזון דגים כתוש בכל מגש. אם יש צורך, להשתמש מיכלים בגדלים שונים לגידול הזחלים (איור 1 א'), אך לשמור על צפיפות זחל מתחת הזחלים 0.5/mL כדי למנוע צפיפות יתר.</li>
	<li>בדוק את המגשים מדי יום כדי לוודא הזחלים אין די מזון; להוסיף כ שתי טבליות מזון המגשים בכל יומיים. לספק מזון ad libitum אך להבטיח 0.5 מ"ג ליום/זחל הינו זמין במהלך תקופה זו כדי להבטיח פיתוח באופן סינכרוני ועל גוף בגודל מתאים, אחרת עלול להיות מבולבל את התוצאות של הניסויים (ראה תוצאות נציג).</li>
	<li>לטפל כדי למנוע את overfeeding של הזחלים, במיוחד בתוך מכולות גידול קטן יותר עם פחות מים פני השטח והנפח. אם המים נראה מעונן או אם יש תמותה זחל משמעותית, להחליף אותו עם מים מתוקים; התמותה צריך להיות זניחה אם הזחלים ניזונים בצורה אופטימלית.</li>
</ol>2. הבוגרים
הערה: הזחלים יתחיל pupate של חמישה ימים לאחר הבקיעה אם שתאכל היטב, הרוב צריך pupate על ידי שבעה ימים לאחר הבקיעה. מבוגרים יתחיל המתעוררים כ יומיים לאחר להתגלמות אם מתוחזק בצורה אופטימלית בטמפרטורה 26 ° C (ראה תוצאות נציג). התפתחות הזחל אינו מושפע בדרך כלל על ידי זיהומים Wolbachia כאשר מזון מסופק39,23,49.
<ol><li>שבעה ימים לאחר הבקיעה שופכים את כל התוכן של המגש דרך רשת קנס (נקבוביות בגודל 0.4 מ מ). לשמור את הזחל מים מסוננים לשימוש מאוחר יותר ovicups (ראו סעיף "דם האכלה, הטלה"). להפוך את רשת השינוי וטובל לתוך מיכל פלסטיק עם 200 מ של מים כדי להעביר את הגלמים. לספק מזון נוסף אם יישארו כל הזחלים.</li>
	<li>הכינו את הכלובים הבוגרים (איור 1C) על ידי מתן שתי כוסות 10% סוכרוז הפתרון (איור 1F) שתי כוסות צמר גפן לחה כדי למנוע לייבוש (איור 1E).</li>
	<li>אם הגלמים אין צורך למיין לפי מין, למקם את המכולות מכסה של הגלמים לתוך הכלוב ולא להשאיר את המכסה במקצת כדי לאפשר המבוגרים להסתמן לתוך הכלוב. לחלופין, הצב של משפך מהופך מעל המיכל כדי למזער את טובעת. ודא שכולנו מבוגרים הופיעו לפני הסרת הגורם המכיל מן הכלוב כדי למנוע בחירה נגד המפתחים איטי.</li>
</ol>3. הגולמי סקסיייי עבור Outcrossing
<ol><li>אם הגלמים צריך להיות ממוין לפי מין (למשל, עבור outcrossing), pipette הגלמים מ מגשים זחל ולהפריד בין המינים (איור 2) לתוך מיכלי פלסטיק (איור 1 א') עם 200 מ של מים בכל 24 שעות עד המספר הרצוי מכל מין הגיעה. במקום המכסים על המכולות ולהשאיר אותן סגורות.</li>
	<li>מבוגרים יתעוררו לתוך המכולות; לאשר את מינם לפני שחרור לתוך הכלובים (איור 2C). הסר מבוגרים למינים באופן שגוי עם העצמות בתוך 24 שעות של הופעתה לפני שהם מגיעים לבגרות מינית. ברגע המינים אושרו, שחרור המבוגרים לתוך הכלובים כל 24 שעות.</li>
	<li>
להשיג Wolbachia-נגועים מושבות רקע גנטי דומה לאוכלוסייה הטבעית, outcross על-ידי הוספת Wolbachia-נגוע הנקבות מן המושבות מעבדה לכלובים של הזכרים נגוע נגזר מן הביצים שנאספו על ידי ovitraps ב שדה39, שמירה על הצפיפות שנקבעה של יחידים 500 לכל האוכלוסייה.
	<ol>
<li>חזור על outcrossing לפחות שלושה דורות רצופים לייצר מושבות דומה גנטית האוכלוסייה שדה39לפחות 87.5%. קריטית: להבטיח כי המינים נכונים בשלב זה (ראה שלב 3.1).</li>
	</ol>
</li>
	<li>נקבה aegypti Ae. הם בדרך כלל דברים מעוותים הזרעה נוספת בטווח של הזדווגות50שעות. כאשר outcrossing מושבות, מאפשרים את נקבות וזכרים בוגרים בכלובים נפרדים במשך יומיים, ואז האחות הנקבות לתוך הכלוב זכר לספק הזדמנות שווה כל הזכרים.</li>
</ol>4. דם האכלה, ההטלה
<ol><li>
המתן לפחות שלושה ימים לאחר שהנקבה האחרונה התפתחה לפני דם האכלה כדי לאפשר מספיק זמן להבשיל. דם להאכיל הנקבות תוך שבועיים של הופעתה כדי למנוע תמותת יתר, במיוחד עבור יתושים עם זיהומים Wolbachia המשפיעים לרעה על אריכות ימים22,24,49. הסר את כוסות סוכר ביום שלפני האכלה כדי לשפר את שיעורי האכלה.
	<ol>
<li>בקש מתנדבים כדי להוסיף את האמה שלהם לתוך הכלוב כדי לאפשר את היתושים הנשי להאכיל. רוב הנקבות צריך להאכיל כסיגנל בתוך 5 דקות, אבל כדי לצמצם את הבחירה נגד מזיני איטי, להשאיר האמה בכלוב במשך 15 דקות, או עד כל הנשים מתפקעים בעליל; כפפת לייטקס על היד מפני עקיצות הוא אופציונלי אך מומלץ.</li>
		<li>יומיים לאחר דם האכלה, מניחים שתי כוסות פלסטיק המכיל הזחל מים לגידול והעמידו עם רצועת נייר זכוכית (איור 1 ג'י) (או נייר סינון (איור 1 H)) לתוך הכלוב לנקבות להטיל ביצים. חלקית להטביע את רצועת נייר זכוכית במים כדי לשמור על לחות. הסר את מקורות אחרים של מים כדי למנוע הנקבות הנחת את ביציהן בחוץ בגביע ההטלה. הערה: ניתן להשתמש במי ברז בגביע, אבל חינוך הזחל מים מעודדת ההטלה51,52 , הנקבות להטיל את ביציהם יותר באופן סינכרוני.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. ביצה אוסף, מיזוג
<ol><li>הנקבות להטיל ביצים על מה בדיוק מעל קו המים; לאסוף ולהחליף את הרצועות של נייר זכוכית מדי יום עד אין יותר הביצים מוטלות. הערה שהטלה הזה עשוי להמשך עד שבוע.</li>
	<li>סביר להניח שאני חלקית יבש רצועות על ידי בעדינות סופג אותן על מגבת נייר ל 30 s, מטפל לא להוציא את הביצים. לאחר מכן, לעטוף את הרצועות בסדין של מגבת נייר יבש ומניחים אותו לתוך שקית ניילון sealable (איור 1I).</li>
	<li>בדוק את המצב של הביצים במיקרוסקופ ויבתר (איור 3). אם רצועות נייר זכוכית הם רטובים מדי, ייתכן בוקעות לפני להיות שקוע בתוך המים (איור 3B), אבל אם מיובש בקשיחות, ביצים עשויה לקרוס (איור 3C).</li>
	<li>הביצים ניתן לתכנון בכל עת מעבר אוסף שלאחר שלושה ימים; יבקעו כל הביצים מהמושבה לכל, שנאספו לרוחב כל הימים, באותה אריזה של מים על מנת להבטיח כי הדור הבא נדגמים מתוך מאגר גדול, אקראית של אנשים.</li>
	<li>לאחסון לטווח ארוך, לשמור את הביצים בתוך מיכל חתום על לחות גבוהה (> 80 אחוז) בסביבות 20 מעלות צלזיוס. בתנאים אלה, ניתן לאחסן ביצים ללא Wolbachia במשך מספר חודשים תוך שמירה על הפתח גבוהה המחירים53,54.</li>
	<li>כמו כמה זיהומים Wolbachia לצמצם במידה ניכרת את הכדאיות של ביצים עם גיל49,55, לדגור על הביצים מפני Wolbachia-נגוע קווים בתוך שבוע אחד של אוסף כדי למנוע תמותה מופרז עבור הרלוונטי זנים. דם להאכיל הנקבות שוב אחרי שבוע אם ביצים יותר יש צורך.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>היום</td>
			<td colspan="3">שלב</td>
		</tr>
<tr>
<td>0</td>
			<td colspan="3">הפתח ביצים</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td colspan="3">ספירת הזחלים במגשים</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td colspan="3">להעביר את הזחלים, גלמי המושבה בכלובים</td>
		</tr>
<tr>
<td>17</td>
			<td colspan="3">דם להאכיל בוגרות</td>
		</tr>
<tr>
<td>21</td>
			<td colspan="3">בגין איסוף ביצים</td>
		</tr>
<tr>
<td>25</td>
			<td colspan="3">סיום איסוף ביצים</td>
		</tr>
<tr>
<td>28</td>
			<td colspan="3">הפתח ביצים</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: סקירה של לוח הזמנים תחזוקה של המושבה Ae. aegypti בגיל 26 מעלות צלזיוס העיתוי של הדם-ההזנה הנשי, את הבקיעה ביצים הוא גמיש, אבל המשכים ארוכים בשלבים אלה יש להימנע, במיוחד עבור יתושים נגועים Wolbachia, על מנת לצמצם את התמותה. בעקבות לוח זמנים זה ממזער את הבחירה נגד יתושים המהווים מהירה או איטית לפתח או בוגר בכל שלבי החיים, ובלבד הזחלים ניזונים בצורה אופטימלית.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig1.jpg"> איור 1: ציוד המשמש לגידול Ae. aegypti במעבדה. מיכלי פלסטיק (א), המשמש עבור ביצים או לגידול הזחלים עם אמצעי אחסון של 500, 750 ו- 5,000 mL (משמאל לימין). מגשים (B) המשמש לגידול הזחלים על צפיפות מבוקרת, בדרך כלל 500 הזחלים ב- 4 ליטרים של מים. (ג) 19.7 L ו- (D) 3 L כלובים המשמש עבור דיור למבוגרים. צפיפות של מבוגרים 25 או פחות לליטר צריך להישמר לספק מספיק שטח פנוי. (E) 35 מ ל כוס עם צמר גפן לח סיפק כמקור מים למבוגרים. (F) 35 מ ל גביע עם סוכרוז פתרון מסופקים באמצעות כבל או הפתיל שיניים כמקור של סוכר. (HG–) כוסות מלאות מים לגידול זחל, הרצוף המצע ההטלה של נייר זכוכית או נייר סינון (G ו- H, בהתאמה). (אני) Zip-lock תיק לאחסון של רצועות נייר זכוכית או נייר סינון כתמים שחורים על נייר זכוכית הם יתושים ביצים. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig2.jpg"> איור 2: לרוחב (א) ו הגבי (ב) נופים של הגלמים למבוגרים Ae. aegypti (ג) הממחיש את דו-צורתיות. זכרים ממוקמות בצד ימין וגם נקבות מצד ימין של כל לוח. כאשר מוזן באופן מיטבי, גלמי זכרים ונקבות נבדלים על ידי גודל; הנקבות גדולות מן הזכרים (A) ויש cephalothorax בולבוסי יחסית לעומת גברים אשר יש צדדים להחמיא (B). גברים מבוגרים הם בקלות להבחין בין הנקבות בתנאים rearing כל, בעיקר על ידי שלהם אנטנה plumose, קאלאמרי ארוך. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig3.jpg"> איור 3. בן יום ארבע ביצים Ae. aegypti בתנאים שונים. (א) Intact משפיעה על רצועות נייר זכוכית לשמור על לחות גבוהה (> 80 אחוז) אך ללא לחות לעין. המחירים הפתח צריך להיות מעל 90% עבור פראי-סוג Ae. aegypti אם יתוחזק כראוי. ביצים (B) שבוקעים לפני להיות שקוע במים (הבקיעה מפותחת) נבדלים על ידי קאפ מנותקת ביצה זחל גלוי. אפשרות זו מציינת כי רצועת נייר זכוכית נשמר לח מדי. ביצים (C) עוברות ייבוש תלגמי עלול לקרוס, הם נראים בבירור על ידי מראה קעורה שלהם. אם סביר להניח שאני הופכת נוקשה זה גם מציין כי הביצים עשוי להיות יבש מדי. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

בעקבות פרוטוקול המובאת כאן לשם קיום Wolbachia-נגועים aegypti Ae. עליך לוודא כי יתושים בריא איכות עקבית מיוצרים לניסויים, פתח שדה לעיתונות. בניגוד פרוטוקולים אחרים זה סדר עדיפויות בייצור המוני כמויות היתושים (ראה התייחסות57), השיטות הם התמקדו למקסם את הכושר שלהם, הן בתוך דורות על-ידי יישום התנאים לגידול רגועה, ועל -פני דורות על-ידי מזעור הסתגלות נישואי קרובים, בחירה, מעבדה. פרוטוקול זה גם מיועד במיוחד עבור Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia , אבל צריך להיות מתאימים...

Aedes aegypti יתושים אחראים להעברת חלק arboviruses החשוב ביותר בעולם, לרבות קדחת דנגה, Zika ו- chikungunya1. וירוסים אלה הופכים איום גובר על הבריאות העולמי ההתפלגות הנפוצה של Ae. aegypti באזורים הטרופיים ממשיך להרחיב את2,3,4. נקבה Ae. aegypti מעדיפים ניזונים דם אנושי5 , ולכן נוטים בקרבה לבני אדם, במיוחד באזורים עירוניים איפה אוכלוסיות הצפופים ביותר. באמצעות הקשר הזה קרוב עם בני אדם הם הסתגלו גם להתרבות בבתי גידול מלאכותיים, כולל צמיגים, סירים, מרזבים מים טנקים6,7. Aegypti Ae. גם ברצון להתאים לסביבות מעבדה שבה הם יכול להישמר ללא כל דרישות מיוחדות לאחר איסוף ישירות מהשדה, בניגוד כמה מינים אחרים סוג אאדס 8, 9,10. שלהם קלות התחזוקה ראה אותם למד נרחב במעבדה במגוון רחב של תחומים, בסופו של דבר במטרה לשלוט היתושים מחלות יכולה לשדר.
באופן מסורתי, arboviral שליטה מתבסס בעיקר על שימוש חומרי הדברה כדי להפחית אוכלוסיות יתוש. עם זאת, יש עניין גובר על גישות בהם יתושים ששונה גדלו במעבדה, ואז שוחרר לאוכלוסיות טבעי. היתושים שפורסמו עשוי להיות שונה גנטית11,12,13, ביולוגית14,15, דרך הקרנה16, טיפול כימי17,18, או עם בשילוב טכניקות19 לדכא אוכלוסיות של יתושים או להחליף אותם עם יתושים כי הם דברים מעוותים שידור arboviral20.
Wolbachia הם חיידקים כיום בשימוש כסוכן הדברה ביולוגית של arboviruses. זנים שונים של Wolbachia שהוכנסו לאחרונה Ae. aegypti השפעול באמצעות עובריים microinjection21,22,23,24. זנים אלו להפחית את היכולת של arboviruses להפיץ, לשכפל, היתוש, הולכת ופוחתת שלהם שידור פוטנציאליים23,25,26,27,28 . זיהומים Wolbachia מועברים מאמא לצאצאים, אולם זנים מסוימים לגרום עקרות כאשר נגוע זכרים להזדווג עם נקבות נגוע22. Wolbachia-זכרים הנגוע ולכן יכול להיות משוחרר בכמויות גדולות כדי לדכא אוכלוסיות יתושים טבעי, הפגין לאחרונה15,מינים אחרים אאדס 29. עם זאת, מאז Wolbachia לעכב גם שידור arboviral ב Ae. aegypti, יתושים יכולים גם להשתחרר כדי להחליף את אוכלוסיות מקומיות וקטורים עניים. Ae. aegypti השפעול נגוע Wolbachia עכשיו שוחררו בתוך השדה במספר מדינות באמצעות זה הצגנו14,30,31.
Wolbachia-גישות מבוססות עבור פקד arboviral להסתמך על הבנה צליל של האינטראקציות בין Wolbachia, היתוש ואיכות הסביבה. Wolbachia להתרחש באופן טבעי במגוון רחב של חרקים, זנים מוחדרים יתושים מגוונים ב שלהם אפקטים32. כמו סוגים חדשים של זיהום Wolbachia הם מוחדרים Ae. aegypti24, זה הכרחי לאפיין כל אסנן והשפעותיהם על כושר יתושים, רבייה, הפרעה arboviral תחת מגוון תנאים. ניסויים קפדניות במעבדה ולכן נדרש להעריך את פוטנציאל Wolbachia זנים להצליח בתחום.
שדה פתוח מהדורות של Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia יכול לעיתים קרובות דורשים אלפי עד עשרות אלפי יתושים לפי אזור שחרור להיות גדלו כל שבוע14,30,31. ניתן לשפר את ההצלחה של מהדורות הראשונית על ידי שחרור יתושים בגודל גדול להגדיל את פוריות33 ,34,הצלחה35ההזדווגות שלהם. היתושים צריך גם להתאים את התנאים שהם יחוו בשטח, אולם לטווח ארוך מעבדה לגידול עלולה לגרום לשינויים בהתנהגות, פיזיולוגיה אשר יכול להשפיע על שדה ביצועים36,37, 38.
אנו מתארים פרוטוקול פשוט לגידול Ae. aegypti במעבדה בעזרת ציוד בסיסי. פרוטוקול זה מתאים הן פראי-סוג של Wolbachia-נגוע היתושים, שהאחרון שבהם תוכל לדרוש תשומת לב מיוחדת כמו כמה זנים Wolbachia יש השפעות משמעותי על יתושים חיים-היסטוריה תכונות39, 40. התנאים rearing למנוע צפיפות יתר ותחרות לאוכל לייצר יתושים בגודל אחיד, אשר הוא קריטי עבור וקטור כשירות וניסויים כושר, והוא מבטיח היתושים יהיו בריאים לשחרור שדה41 . אנחנו גם לוקחים אמצעי הזהירות האפשריים כדי למזער את עיבוד מעבדה ואת נישואי קרובים על-ידי הפחתת לחצים בררניים, להבטיח כי הדור הבא נדגמים מתוך מאגר גדול, אקראי. עם זאת, סביבות מעבדה הן שונה במובהק מתנאי שדה, תחזוקה לטווח הארוך בתנאים רגועים יכול להפחית את הכושר של יתושים עם שחרורם לתוך שדה37,42,43 . לכן נחצה נקבות משורות מעבדה זכרים שנאספו שדה מעת לעת, וכתוצאה מכך המושבות אשר דומים גנטי להשוואות ניסיוני, שהם להתאים יעד אוכלוסייה של שדה39. השיטות אינן דורשות שום ציוד מיוחד, וניתן לשנותם האחורי עשרות אלפים של אנשים בכל שבוע עבור שדה לעיתונות. הפרוטוקול קובע סדר עדיפויות של גם בחדר הכושר של יתושים בתוך ועל -פני דורות, שיקול חשוב עבור חרקים המיועדים הממסד באוכלוסיות טבעיות. הפרוטוקול מתאים ברוב מעבדות הדורשים תחזוקה של Ae. aegypti, במיוחד להשוואות ניסיוני איפה חשובים איכות עקבית של יתושים, relatability לשדה.

<table><tbody><tr><td>סוג בר Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>נאסף מאתרי שדה בקווינסלנד, אוסטרליה, ראה Yeap ואחרים39 לפרטים</td></tr><tr><td>w Mel-infected Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>סופק על ידי אוניברסיטת מונאש. עיין ב-Walker ואחרים23 למידע על הזן</td></tr><tr><td>w נגוע ב-AlbB Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>מסופק על ידי אוניברסיטת מונאש. עיין ב-Xi ואחרים21 למידע על הזן</td></tr><tr><td>w נגוע ב-MelPop Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>מסופק על ידי אוניברסיטת מונאש. עיין במקמנימן ואחרים22 למידע על הזן</td></tr><tr><td>שמרים מיובשים מיידיים</td><td>Lowan</td><td></td><td>ממריץ בקיעת ביצים. נמצא בחנויות מכולת כלליות. ניתן להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>אמבט פלסטיק 5 ליטר</td><td>רבעון</td><td>Q110950</td><td>משמש לבקיעה וגידול זחלים. ניתן להשתמש במוצרים אחרים</td></tr><tr><td>מזון דגים (טבליות טרופיות טטרמין)</td><td>Tetra</td><td>16152</td><td>מסופק לזחלים כמקור מזון. כתובת אינטרנט: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td></tr><tr><td>מיכלי</td><td></td><td></td> פלסטיק <td>המשמשים לגידול זחלים. כל מיכל פלסטיק מעל 500 מ"ל צריך להיות מתאים</td></tr><tr><td>פיפטת</td><td></td><td></td> זכוכית <td>משמשת להעברת זחלים וגלמים בין מיכלים. כתובת אינטרנט: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td></tr><tr><td>Clicker counter</td><td>RS Pro</td><td>710-5212</td><td>משמש לסיוע בספירת זחלים, גלמים וביצים. כתובת אינטרנט: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td></tr><tr><td>מגשי גידול</td><td>גרטנלים</td> המשמשים לגידול זחלים<td></td><td>. כתובת אינטרנט: http://www.gratnells.com</td></tr><tr>רשת <td></td><td></td><td>ניילון</td><td>המשמשת להעברת זחלים וגלמים למכלי מים מתוקים. ניתן להשתמש במותגים אחרים. כתובת אינטרנט: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td></tr><tr><td>Cages</td><td>BugDorm</td><td>DP1000</td><td>מאכלס יתושים בוגרים. ניתן להשתמש במוצרים חלופיים. כתובת אינטרנט: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td></tr><tr><td>פלסטיק 35 מ"ל</td><td>Huhtamaki</td><td>AA272225</td><td>משמש לאספקת מים או סוכרוז ליתושים בוגרים. ניתן להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>מכסה פלסטיק 35 מ"ל</td><td>Huhtamaki</td><td>GB030005</td><td>משמש לספק סוכרוז ליתושים בוגרים. ניתן להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>צמר גפן</td><td>Cutisoft</td><td>71841-13</td><td>צמר גפן לח מסופק כמקור מים למבוגרים. ניתן להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>סוכר</td><td></td><td></td> לבן <td>המסופק כמקור סוכר ליתושים בוגרים. נמצא בחנויות מכולת כלליות</td></tr><tr><td>חבל</td><td>M Recht אביזרים</td><td>C323C/W</td><td>משמש לספק פתרון סוכרוז למבוגרים. ניתן להשתמש במותגים אחרים. כתובת אינטרנט: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td></tr> <tr><td>פלסטיק (גדולה)</td><td></td><td></td><td>משמש כמיכל ביוץ. כל פלסטיק המכילה 100 מ"ל מים צריכה להיות מתאימה</td></tr><tr><td>לנייר זכוכית</td><td>נורטון מאסטר פיינטרס</td><td>CE015962</td><td>מסופק כמצע ביוץ. ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים, אך אנו משתמשים במותג זה מכיוון שהוא חסר ריח יחסית. צבעים בהירים יותר משמשים לניגוד לביצים. כתובת אינטרנט: נייר סינון https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td></tr><tr><td></td><td>Whatman</td><td>1001-150</td><td>משמש כמצע ביוץ חלופי. ניתן להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>כפפות לטקס</td><td>SemperGuard</td><td>Z560979</td><td>מונע עקיצות יתושים על הידיים בעת האכלת דם. ניתן להשתמש במותגים אחרים. כתובת אינטרנט: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td></tr></tbody></table>

שמירה על aedes aegypti יתושים נגועים wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti יתושים נגועים השפעול Wolbachia מנוצל ב תוכניות כדי לשלוט על התפשטות arboviruses כגון קדחת דנגה, chikungunya Zika. Wolbachia-יתושים נגועים יכול להשתחרר לתוך השדה גם להפחית את אוכלוסיית גדלים באמצעות matings לא תואמת או להפוך אוכלוסיות עם יתושים המהווים עקשן וירוס שידור. אסטרטגיות אלו להצליח, היתושים שוחרר לתוך השדה מהמעבדה חייב להיות תחרותי עם יתושים מקורית. עם זאת, שמירה על יתושים במעבדה יכול לגרום נישואי קרובים, סחף גנטי, עיבוד מעבדה אשר יכול להפחית את הכושר שלהם בתחום עשויים לבלבל את התוצאות של ניסויים. כדי לבדוק את התאמתו של זיהומים שונים Wolbachia לפריסה בשטח, זה הכרחי לשמור על יתושים בסביבה מעבדתית מבוקרת על פני דורות רבים. אנו מתארים פרוטוקול פשוטים לשמירה על יתושים Ae. aegypti במעבדה, אשר מתאים הן Wolbachia-יתושים נגועים ופראי-סוג. השיטות למזער מעבדה הסתגלות וליישם outcrossing כדי להגביר את הרלוונטיות של ניסויים כדי שדה יתושים. בנוסף, מושבות נשמרים בתנאים אופטימליים כדי למקסם את הכושר שלהם עבור מהדורות בשטח פתוח.

איור 4 ממחישה את ההשפעות של תזונה שיוצרת על הפיתוח של Ae. aegypti הזחלים. מתי מכולות מסופקים עם 0.25 מ ג של מזון לכל זחל ליום או פחות, מגביר את קצב ההתפתחות עבור זכרים ונקבות, סינכרונית פחות מאשר במיכלים מסופק עם 0.5 מ ג של מזון. אם במזון הולם זה אינו מסופק בכל משך זמן של התפתחות הזחל, זה יכול להשפיע לרעה על לוח הזמנים תחזוקה. סלואו-פיתוח אנשים נמצאים בסיכון של נבחרים נגד דם האכלה עשוי להתעכב, יש סיכון גבוה יותר של תמותה למבוגרים לפני רבייה מתרחשת.</...

Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia שוחררו לאוכלוסיות טבעי לדכא את השידור של arboviruses. אנו מתארים שיטות האחורי Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia במעבדה ניסויים ולשחרר שדה, נקיטת אמצעי זהירות כדי למזער את עיבוד מעבדה ובחירה.

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא לתאר את התחזוקה של יתוש ה-Aedes aegypti המודבק ב-Wolbachia. יתושים אלו משוחררים ברחבי העולם כדי לדכא את ההעברה של דנגי ווירוסים אחרים. הפרוטוקול שלנו לגידול יתושי Aedes aegypti יכול לשמש כל חוקר המעוניין להשתמש ביתושים לניסויים או לתוכניות לבקרת מחלות.ניתן להשתמש בשיטה זו גם לגידול יתושים שעברו שינוי גנטי עבור תוכניות לבקרת אוכלוסיות יתושים, כולל כאלה הכוללות שחרור חרקים עקרים. את העקרונות הכרוכים בגישה זו ניתן ליישם גם על גידולם של מיני וקטורים אחרים של מחלות. עבור פרוטוקול זה, יש להחזיק את היתושים בטמפרטורה של כ-26 °C ובלחות יחסית של 50% עד 70%, עם פוטו-פריודה (מחזור תאורה) קו-קוואטורית.אם הם גדלים בטמפרטורות גבוהות יותר, עלולות ללכת לאיבוד זיהומי ה-Wolbachia, לכן אין לחמם את המושבות יתר על המידה. שמרו על כ-500 יתושים לכל אוכלוסייה כדי למזער רביית פנימה. שימוש בפרוטוקול זה עם תזונה נאותה יניב דורות בני 28 ימים.התחילו עם ביצים על תשתית. טבלו אותן במגשים המכילים שלושה ליטרים של מים עם כ-300 מיליגרם של מזון לדגים ומספר גרגירי שמרים יבשים פעילים כדי לעודד בקיעה. יום אחד לאחר הבקיעה, השתמשו בפיפט זכוכית כדי להעביר כ-500 לרבות למגשים המכילים ארבעה ליטרים של מים ומזון דגים טרי.בדקו את המגשים מדי יום כדי לוודא שלזחליים יש מספיק מזון. הוסיפו כ-600 milligram

maintaining-aedes-aegypti-mosquitoes-infected-with-wolbachia

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מתאר שיטה לטיהור Wolbachia pipientis מקו תא אנופלס gambiae ואז culturing endosymbiont במדיום הסלולרי חינם. Assay עבור הכדאיות של החיידק הוא הוכיח.

שמירה ב Wolbachia בינוני סלולרי חינם

כדי להשיג דיכוי האוכלוסייה של Aedes aegypti באמצעות® RIDL (שחרור של חרקים הנושאים קטלני דומיננטי) מערכת, מספר גדול של יתושים זכר צריך להשתחרר. זה דורש שימוש בטכניקות גידול המוני וטכנולוגיה כדי לספק מערכות אמינות כדי להשיג את המספר המרבי של יתושים זכר באיכות גבוהה.

ייצור המוני של Aedes aegypti מהונדסים גנטית עבור מהדורות שדה בברזיל

הפרוטוקול המוצג יכול לקבוע את היכולת הווקטורית של אוכלוסיות יתושים Aedes aegypti עבור וירוס נתון, כגון זיקה, במסגרת בלימה.

וקטור יכולת ניתוחים על יתושים Aedes aegypti באמצעות וירוס זיקה

המתואר הוא זמן ושיטת חיסכון במקום לספור ביצים ולקבוע את שיעורי הצוהר של יתושים בודדים באמצעות 24 גם צלחות תרבית רקמה, אשר יכול להגדיל באופן משמעותי את קנה המידה ואת המהירות של פוריות ופוריות מבחני.

מבחני פוריות ופוריות משופרים עבור Aedes aegypti באמצעות 24 צלחות תרבית רקמה באר (צלחות EAgaL)

פרוטוקול זה מתאר הליכי מיקרו-אינצ'ק עבור עוברים Culex quinquefasciatus הממוטבים לעבודה עם כלי עריכת גנים CRISPR/Cas9. טכניקה זו יכולה ליצור ביעילות מוטציות ספציפיות לאתר, תורשתיות, נבטים שניתן להשתמש בהן לבניית טכנולוגיות גנטיות בווקטור המחלה המאופק הזה.

אמבריו מיקרו-סינתזה טכניקות עבור מוטגנזה יעילה ספציפית לאתר בקולקס quinquefasciatus

פרוטוקול לתרבות הטפיל המיקרו-ספיורידיאן אדהאזרדיה אדיס. הטפיל הוא מעבר מדור אחד של יתושי Aedes aegypti למשנהו באמצעות העברה אופקית בשלב הזחל ואחריו שידור אנכי בשלב המבוגר. נבגים חיים שורדים לטווח ארוך בביצים נגועות.

התפשטות הטפיל המיקרו-ספורידיאן אדהאזרדיה אדיס ב-Aedes aegypti יתושים

טכניקת החרקים הסטריליים (SIT) משמשת להדברת אוכלוסיות יתושים ספציפיות וחשובות מבחינה רפואית שעשויות להיות עמידות בפני הדברות כימיות. כאן אנו מתארים שיטה לגידול המוני והכנה של יתושים זכרים סטריליים לשחרור בתוכנית SIT מבצעית המכוונת ליתוש Aedes aegypti .

הכנת יתושי Aedes aegypti זכרים מוקרנים ומסומנים לשחרור בתוכנית טכניקת חרקים סטרילית מבצעית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקר התחרותיות הזדווגות של Aedes aegypti זכר באמצעות צבע פלואורסצנטי כסמן. נקבות היתושים חשופות הן לזכרים מסומנים והן לזכרים לא מסומנים להזדווגות. לאחר ההזדווגות, הזרע שלהם נבדקים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לקבוע את בן זוגם להזדווגות.

באמצעות צבע פלואורסצנטי, רודמין B, כדי ללמוד תחרותיות הזדווגות יתושים Aedes aegypti זכר

ארבע שיטות שימשו לאיתור וולבצ'יה תוך-תאית, אשר השלימו זו את זו ושיפרו את דיוק הזיהוי של זיהום וולבצ'יה של Aa23 שמקורו ב-Aedes albopictus ו-Aa23-T שנרפאו מזיהום וולבצ'יה מקומי באמצעות אנטיביוטיקה.

זיהוי זן וולבצ'יה wAlbB ב Aedes albopictus קווי תאים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד למדוד נתוני פרמטרי חיים נפוצים אצל יתושי Aedes aegypti , כולל פריון, גודל כנפיים, פוריות, יחס מין, כדאיות, זמני התפתחות, תרומת גברים ואריכות ימים של מבוגרים. מדידות אלה יכולות לשמש להערכת כשירותם של יתושים טרנסגניים.

כימות עלויות כושר ביתושים מהונדסים, Aedes aegypti

קווי תאים שימושיים במחקרים על אורגניזמים תוך-תאיים שלא ניתן לגדל מחוץ לתאים המארחים שלהם. למרות שקווים נגועים בוולבכיה אפשרו תגליות רבות, ההטרוגניות בתוך קווים אלה יכולה להוביל לתוצאות ניסוי משתנות. אנו מציגים פרוטוקול ליצירת שיבוטים של תאים בודדים ותרביות רציפות מתאי JW18 נגועים בוולבכיה.

יצירת תרביות חד-שבטיות מקו התאים של Drosophila melanogaster JW18 נגוע בוולבכיה

למדו כיצד לגדל יתושי Aedes aegypti נגועי Wolbachia לשליטה במחלות. פרוטוקול זה מספק הנחיות לחוקרים בתחום הבקרה על וקטורים ומניעת מחלות כגון דנגה.

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

גלה סרטונים נוספים