Name: הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים Neuron (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 2 s
Description: למדו הכנת תרביות נוירונים מקליפת מוח עכבר בגילאי עובר ולאחר לידה. שיטה זו מאפשרת חקר אלקטרופיזיולוגיה, הדמיית סידן ונתרן, ומנגנוני פיתוח עצבי תוך שימוש בחיות טרנסגניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין ניגודים להצהיר עליהם.

<table><tbody><tr><td>5-Fluoro-2&amp;rsquo;-deoxyuridine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלוריד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>Vibraslicer</td><td>Campden Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלוריד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דיבסי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונובסי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>D (+)-גלוקוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7280</td><td></td></tr><tr><td>תוסף B27</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>מצע Neurobasal (NBM)</td><td>Invitrogen</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>2-Amino-5-phosphonopentanoic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5282</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בקר</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>מעכב טריפסין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9253</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד, תמיסה 1N</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS266-1</td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7755</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Difco Laboratories</td><td>0140-01</td><td></td></tr><tr><td>פפאין</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS 03126</td><td></td></tr><tr><td>מסנן מזרק סטרילי 0.2 &amp;mu;m</td><td>Fisher Scientific</td><td>DDA02025S0</td><td></td></tr><tr><td>כיסויות זכוכית, No1, 12mm</td><td>Bellco Glass</td><td>1943-00012</td><td></td></tr><tr><td>מצע מינימלי חיוני (MEM)</td><td>Invitrogen</td><td>11090-081</td><td>עם מלחים של Earle&amp;rsquo;s וללא L-glutamine, נדרש לגידול תרביות שאינן נוירונליות</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td>עבור תרבית שאינה נוירונלית</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Invitrogen</td><td>16140-071</td><td>נדרש עבור תרביות שאינן נוירונליות</td></tr><tr><td>בקבוק לתרבית רקמה Nunclon &quot;Triple Flask&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-25</td><td>לשימוש עבור תרביות שאינן נוירונליות. בקבוקים אלה נוחים מאוד להפקת &quot;conditioned Neurobasal Media/B27&quot;, אך ניתן להשתמש בכל בקבוק או צלחית אחרים לתרבית רקמה במקומם.</td></tr><tr><td>צלחית &quot;Imaging dishes&quot; עם תחתית זכוכית</td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td>צלחית תרבית 35mm עם תחתית זכוכית, אידיאלית לדימות סידן או נתרן בעת שימוש במערכת דימות הפוכה. אך יקרה!</td></tr></tbody></table>

הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים neuron

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

וידאו זה ידריך אותך בתהליך של יצירת תרביות נוירונים בקליפת המוח של העובר מאוחר ועכבר מוקדם המוח לאחר הלידה. בתרבויות אלה יכולים לשמש עבור מגוון של יישומים, כולל immunocytochemistry, ביוכימיה, electrophysiology, הדמיה סידן, נתרן, חלבון / או RNA בבידוד. בתרבויות אלה גם לספק פלטפורמה ללימוד פיתוח העצבית של חיות טרנסגניות שנושאים מוטציה מאוחר עובריים או לאחר הלידה הגן הקטלני. ההליך הוא יחסית ישר קדימה, דורש קצת ניסיון טכניקה תרבות רקמות לא צריך לקחת יותר מ 2-3 שעות אם אתם מוכנים כראוי. הפרדה קפדנית של הקליפה קליפת המוח מתוך מערכת thalamo-קליפת המוח הסיבים יהיה להפחית את מספר הלא נוירונים תאים לא רצויים. כדי להגדיל את התשואות של תאים עצביים triturate את פיסות הרקמה קליפת המוח בעדינות אחרי שלב הדגירה האנזים. זה הכרחי שכן הוא מונע פגיעה מיותרת תאים מוקדמת מוות של תאים עצביים. מאחר תרבויות נשמרים בהעדר תאים מזין גליה, הם מציעים גם יתרון נוסף של תרבויות גדל מועשר בנוירונים.

וידאו זה מציג את הליך ליצירת תרביות נוירונים מעובר מאוחר ועכבר מוקדם קליפת המוח לאחר הלידה. תרבויות אלו יכולים לשמש immunocytochemistry, ביוכימיה, electrophysiology, סידן ונתרן הדמיה לספק פלטפורמה ללימוד פיתוח העצבית של חיות טרנסגניות שנושאים מוטציה לאחר הלידה הגן הקטלני.

הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים Neuron

סרטון זה ידריך אתכם בתהליך להפקת תרביתי קורטקסיים של נוירונים ממוח של עכבר בשלב עוברי מאוחר ובשלב פוסטנטלי מוקדם. תרביות אלו...

שלום, שמי Hilgenberg. אני עובד כאן באוניברסיטה של קליפורניה ב-Irvine במחלקה לאנטומיה ונוירוביולוגיה. היום אני אדבר איתכם על האופן שבו אנו מכינים תרביות קורטיקליות מעכברים.אלו הם עכברים בימים שלאחר הלידה מהם אנו מכינים את הנוירונים הללו. בדרך כלל אנו משתמשים בתרבויות הללו עבור אלקטרופיזיולוגיה, או להכנות חלבון או RNA. אנו משתמשים באותה הכנת תרבית עבור דימות סידן או דימות נתרן.היתרון בתרביות אלו הוא שהן למעשה התאמה של פרוטוקול בנקר (banker protocol), אך אנו מגדלים את התרביות הללו ללא תאי הזנה גליאליים, מה שהופך את התהליך לנוח הרבה יותר, והתרביות בדרך כלל עשירות יותר בנוירונים מאשר בתאים גליאליים. אז בואו נתחיל ואראה לכם כיצד אנו מכינים את הנוירונים הללו. ובכן, הגענו כעת לשלב שבו ניתן להוציא את המוח ולהתחיל בביצוע הדיסקציה בפועל.אך לפני כן, חשוב לציין כי יש לצפות את כיסיי הזריקה שבהם תרצו לזרוע את התאים. בדרך כלל ביצענו זאת למשך לילה בטמפרטורת החדר, בריכוז פולי-ליזין של 0.1 mg/ml. למחרת, אנו מסירים את הפולי-ליזין ושוטפים את כיסיי הזריקה שלוש פעמים ברצף.בהתאם ליישום, ניתן להשתמש בצלחות גדולות, צלחות קטנות או בזכוכיות כיסוי. אלו הן ההגדרות הטיפוסיות עבור מapay, והסברתי בקצרה אילו תמיסות עליכם להכין מראש, וכן אילו מכשירים יעזרו לכם בבידוד או בהפרידה של המוח, ולאחר מכן בחיתוך בפועל של המו

preparation-of-dissociated-mouse-cortical-neuron-cultures

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקולים עבור מערכת עובריים במוח חולדה המצרפי תרבות מתואר. אבות multipotent ב אגרגטים יכול לפתח להתמיין נוירונים, האסטרוציטים ו oligodendrocytes.

הכנת המוח עכברוש תרבויות מצטבר עבור Neuron ופיתוח מחקרים גליה

פרוטוקול זה מתאר את הצעדים הנדרשים כדי לנתח, transfect דרך electroporation ועכבר תרבות נוירונים בהיפוקמפוס ואת קליפת המוח. לטווח קצר תרבויות ניתן להשתמש ללימודי תולדה של האקסון והדרכה, ואילו לטווח ארוך תרבויות יכול לשמש מחקרים synaptogenesis ניתוח בעמוד השדרה הדנדריטים.

Nucleofection ותרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס עכבר עובריים קליפתיים

מאמר זה מתאר שיטות להפיק אוכלוסיות מועשר Murine של תאים מבשר oligodendrocyte (OPCs) בתרבות העיקרי, אשר להבדיל לייצר oligodendrocytes בוגרת (OLS). בנוסף, דו"ח זה מתאר את טכניקות כדי לייצר Murine myelinating שיתוף תרבויות על ידי זריעת OPCs העכבר על המיטה neurite של הגב עכבר שורש עצב הגנגליון (DRGNs).

גזירת תרבויות Oligodendrocyte מועשר Neuron Oligodendrocyte / Myelinating משותף תרבויות מן שלאחר הלידה רקמות Murine

בסרטון זה אנו מתארים את השיטה להשגת הכנה טהורה של אסטרוציטים מעכברים שזה עתה נולדו.

בידוד אסטרוציטים: שיטה להשגת הכנה טהורה של אסטרוציטים קורטיקליים של עכבר

סרטון זה מדגים שיטה לביסוס תרבית משותפת עקיפה של נוירון-אסטרוציטים באמצעות גישה ממודרת. במערך זה, נוירונים ואסטרוציטים מופרדים מרחבית אך חולקים תווך מותנה. גורמים נוירוטרופיים המשוחררים על ידי אסטרוציטים מקדמים התמיינות נוירונים ויצירת קשרים סינפטיים, דבר המצביע על אינטראקציות נוירון-גליה.

טכניקה עקיפה של תרבית נוירון-אסטרוציטים לחקר אינטראקציות נוירון-גליה

האסטרוציטים הוכרו כתאים צדדיים המשתתפים בתהליכים ביולוגיים בסיסיים שחיוניים להתפתחות המוח ותפקודו תקין, ותיקון מערכת עצבים מרכזי. כאן אנו מציגים הליך מהיר לקבלת תרבויות astrocyte עכבר טהורות ללמוד ביולוגיה בכיתה זו גדולה של תאים במערכת עצבים מרכזיים.

בידוד ותרבות של האסטרוציטים עכבר קליפתיים

מתואר פרוטוקול ליצירת מערכת תרבית משותפת המורכבת מתאי עצב שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs), נוירונים ראשוניים בקליפת המוח ואסטרוציטים. מערכת קו-תרבית זו מאפשרת לזהות היווצרות של מגעים ומעגלים סינפטיים בין נוירונים חדשים שמקורם ב-iPSC לבין נוירונים קיימים בקליפת המוח המבטאים channelrhodopsin-2.

גישת optogenetic להערכת יצירת קשרים עצביים במערכת Co-תרבות

פרוטוקול זה מתאר את coculture נוירון astrocyte עקיפות ניתוח מידור של נוירון, גליה אינטראקציות.

את assay Coculture Neuron-astrocyte העקיפה: An<em&gt; במבחנה</em&gt; הגדרה לחקירה המפורטת של נוירון, גליה אינטראקציות

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור Ca2 + הדמיה של נוירונים ותאי גלייה, המאפשרת את הקרע של Ca2 + אותות ברזולוציה subcellular. תהליך זה הוא החלים על כל סוגי תאים לאפשר הביטוי של Ca מקודדים גנטית2 + מחוונים.

דיסקציה של Ca מקומי2 + אותות בתאים בתרבית על ידי קרום, ממוקדות Ca2 + אינדיקטורים

כאן, תיארנו פרוטוקול כדי לחקור כמותית את ההרכבה והמבנה של קטעים ראשוניים אקסון (AIS) של נוירונים היפוקמפוס חסר AIS מורכב מראש בשל היעדר ankyrin-G ענק.

שימוש בנוירונים ראשוניים בהיפוקמפוס כדי לחקור את ההרכבה של מקטעים ראשוניים של אקסון

למדו הכנת תרביות נוירונים מקליפת מוח עכבר בגילאי עובר ולאחר לידה. שיטה זו מאפשרת חקר אלקטרופיזיולוגיה, הדמיית סידן ונתרן, ומנגנוני פיתוח עצבי תוך שימוש בחיות טרנסגניות.

הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים Neuron

גלה סרטונים נוספים