Name: הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים Neuron (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 2 s
Description: למדו הכנת תרביות נוירונים מקליפת מוח עכבר בגילאי עובר ולאחר לידה. שיטה זו מאפשרת חקר אלקטרופיזיולוגיה, הדמיית סידן ונתרן, ומנגנוני פיתוח עצבי תוך שימוש בחיות טרנסגניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין ניגודים להצהיר עליהם.

<table><tbody><tr><td>5-Fluoro-2&amp;rsquo;-deoxyuridine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלוריד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>Vibraslicer</td><td>Campden Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלוריד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דיבסי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונובסי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>D (+)-גלוקוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7280</td><td></td></tr><tr><td>תוסף B27</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>מצע Neurobasal (NBM)</td><td>Invitrogen</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>2-Amino-5-phosphonopentanoic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5282</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בקר</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>מעכב טריפסין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9253</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד, תמיסה 1N</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS266-1</td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7755</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Difco Laboratories</td><td>0140-01</td><td></td></tr><tr><td>פפאין</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS 03126</td><td></td></tr><tr><td>מסנן מזרק סטרילי 0.2 &amp;mu;m</td><td>Fisher Scientific</td><td>DDA02025S0</td><td></td></tr><tr><td>כיסויות זכוכית, No1, 12mm</td><td>Bellco Glass</td><td>1943-00012</td><td></td></tr><tr><td>מצע מינימלי חיוני (MEM)</td><td>Invitrogen</td><td>11090-081</td><td>עם מלחים של Earle&amp;rsquo;s וללא L-glutamine, נדרש לגידול תרביות שאינן נוירונליות</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td>עבור תרבית שאינה נוירונלית</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Invitrogen</td><td>16140-071</td><td>נדרש עבור תרביות שאינן נוירונליות</td></tr><tr><td>בקבוק לתרבית רקמה Nunclon &quot;Triple Flask&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-25</td><td>לשימוש עבור תרביות שאינן נוירונליות. בקבוקים אלה נוחים מאוד להפקת &quot;conditioned Neurobasal Media/B27&quot;, אך ניתן להשתמש בכל בקבוק או צלחית אחרים לתרבית רקמה במקומם.</td></tr><tr><td>צלחית &quot;Imaging dishes&quot; עם תחתית זכוכית</td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td>צלחית תרבית 35mm עם תחתית זכוכית, אידיאלית לדימות סידן או נתרן בעת שימוש במערכת דימות הפוכה. אך יקרה!</td></tr></tbody></table>

הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים neuron

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

וידאו זה ידריך אותך בתהליך של יצירת תרביות נוירונים בקליפת המוח של העובר מאוחר ועכבר מוקדם המוח לאחר הלידה. בתרבויות אלה יכולים לשמש עבור מגוון של יישומים, כולל immunocytochemistry, ביוכימיה, electrophysiology, הדמיה סידן, נתרן, חלבון / או RNA בבידוד. בתרבויות אלה גם לספק פלטפורמה ללימוד פיתוח העצבית של חיות טרנסגניות שנושאים מוטציה מאוחר עובריים או לאחר הלידה הגן הקטלני. ההליך הוא יחסית ישר קדימה, דורש קצת ניסיון טכניקה תרבות רקמות לא צריך לקחת יותר מ 2-3 שעות אם אתם מוכנים כראוי. הפרדה קפדנית של הקליפה קליפת המוח מתוך מערכת thalamo-קליפת המוח הסיבים יהיה להפחית את מספר הלא נוירונים תאים לא רצויים. כדי להגדיל את התשואות של תאים עצביים triturate את פיסות הרקמה קליפת המוח בעדינות אחרי שלב הדגירה האנזים. זה הכרחי שכן הוא מונע פגיעה מיותרת תאים מוקדמת מוות של תאים עצביים. מאחר תרבויות נשמרים בהעדר תאים מזין גליה, הם מציעים גם יתרון נוסף של תרבויות גדל מועשר בנוירונים.

וידאו זה מציג את הליך ליצירת תרביות נוירונים מעובר מאוחר ועכבר מוקדם קליפת המוח לאחר הלידה. תרבויות אלו יכולים לשמש immunocytochemistry, ביוכימיה, electrophysiology, סידן ונתרן הדמיה לספק פלטפורמה ללימוד פיתוח העצבית של חיות טרנסגניות שנושאים מוטציה לאחר הלידה הגן הקטלני.

הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים Neuron

סרטון זה ידריך אתכם בתהליך להפקת תרביתי קורטקסיים של נוירונים ממוח של עכבר בשלב עוברי מאוחר ובשלב פוסטנטלי מוקדם. תרביות אלו...

שלום, שמי Hilgenberg. אני עובד כאן באוניברסיטה של קליפורניה ב-Irvine במחלקה לאנטומיה ונוירוביולוגיה. היום אני אדבר איתכם על האופן שבו אנו מכינים תרביות קורטיקליות מעכברים.אלו הם עכברים בימים שלאחר הלידה מהם אנו מכינים את הנוירונים הללו. בדרך כלל אנו משתמשים בתרבויות הללו עבור אלקטרופיזיולוגיה, או להכנות חלבון או RNA. אנו משתמשים באותה הכנת תרבית עבור דימות סידן או דימות נתרן.היתרון בתרביות אלו הוא שהן למעשה התאמה של פרוטוקול בנקר (banker protocol), אך אנו מגדלים את התרביות הללו ללא תאי הזנה גליאליים, מה שהופך את התהליך לנוח הרבה יותר, והתרביות בדרך כלל עשירות יותר בנוירונים מאשר בתאים גליאליים. אז בואו נתחיל ואראה לכם כיצד אנו מכינים את הנוירונים הללו. ובכן, הגענו כעת לשלב שבו ניתן להוציא את המוח ולהתחיל בביצוע הדיסקציה בפועל.אך לפני כן, חשוב לציין כי יש לצפות את כיסיי הזריקה שבהם תרצו לזרוע את התאים. בדרך כלל ביצענו זאת למשך לילה בטמפרטורת החדר, בריכוז פולי-ליזין של 0.1 mg/ml. למחרת, אנו מסירים את הפולי-ליזין ושוטפים את כיסיי הזריקה שלוש פעמים ברצף.בהתאם ליישום, ניתן להשתמש בצלחות גדולות, צלחות קטנות או בזכוכיות כיסוי. אלו הן ההגדרות הטיפוסיות עבור מapay, והסברתי בקצרה אילו תמיסות עליכם להכין מראש, וכן אילו מכשירים יעזרו לכם בבידוד או בהפרידה של המוח, ולאחר מכן בחיתוך בפועל של המוח. מה שיש לנו כאן הוא תמיסת ההפרידה הקרה.בדרך כלל זה נמצא על קרח. יש לנו Vibratome לחיתוך של המוחות. יש לי כלי המכיל תמיסת דיסקציה שעליה מונח המוח ואז הוא נחתך.ויש לי כלים שונים הדרושים לי לצורך הוצאת המוח. יש לי לוחית קידוח. זוהי לוחית קידוח ב-4% שבה אני משתמש כדי להחזיק את המוח במקומו.אנו זקוקים למזרק, למספר מסננים סטריליים, לצלחות נייר של Rotman ולצלחות פטרי בגדלים שונים. וזהו כלי העזר שלי להחדרת חומרים למשקף של העכבר. יש לי כאן גם פיפטות זכוכית משוכות.אלו הן קפילרות זכוכית המשמשות אותי הן ככלי ניתוח והן לאיסוף חלקי המוח ולביצוע חזרות אלו. תמיסת האנזימים שלנו מכילה תמיסת ניתוח. היא כוללת L cysteine להפעלת ה-pepane, וכן 0.1 normal sodium hydroxide לאיזון ה-pH.לאחר הוספת הפפאין, התמיסה מעט עכורה ויש להמתין עד שתהפוך שקופה לפני שניתן יהיה להשתמש בה לעיכול אנזימטי של הרקמה. וכעת אנו מוכנים למעשה להתחיל בהליך. ה-fibro Slicer הוכנה.הכנסתי להב החותך את המוח, והצמדתי תחתיו את הכלי המכיל את הבופר ותומך במוח. אני מוכן כעת להרכיב את בלוק ה-AGA על לוח התמיכה שגם הוא יתמוך במוח. ה-aga הזה עבר פולימריזציה, מדובר ב-4%aga, ואני פשוט אגזור באזור כזה.ובצדדים פשוט יוצרים חיתוך מלבני של המקדח. כעת אני משתמש בשפכטול ופשוט מוציא את החלק הזה מבלוק המקדח. כעת אני אדביק את המקדח ללוח התמיכה שלי, כאשר הצד השטוח של המקדח פונה קדימה.זהו התמיכה שעליה מדביקים את המוח, ואז הוא מוחזק במקומו על ידי המקדח הזה. כך, כאשר אנו מבצעים את החיתוך באופן הזה, המוח אינו זז לאחור. כעת אנו מוכנים להוציא את המוח.בדרך כלל אנו משתמשים בעכבר ביום 0 או ביום 1 לאחר הלידה. טוב, זהו ראש העכבר לאחר עריפת הראש, ואני פשוט אסיר במהירות את הקרקפת. ראשית, אגזור את רצועת השריר שנמצאת כאן ובצד השני.לאחר מכן אני נכנס עם המספריים. אני נזהר מאוד שהצד הפנימי של המספריים לא יפגע במוח. אני גוזר מסביב לגולגולת משני הצדדים.כעת ניתן פשוט להרים את הסחוס, ואני אשתמש ב-ULA קטן שלי כדי להסיר את המוח באופן הזה. לאחר מכן, המוח עובר לצלחת פטרי שמילאתי בתמיסת חיתוך, שבתחתיתה מונח נייר סינון Watman. כעת אני מעוניין לחתוך את בסיס המוח כדי לקבל שטח שטוח ויציב להרכבת המוח על הכתף שלי.כעת אשים טיפה קטנה מאוד של דבק "crazy" על לוח התמיכה שלי. אני ארים כעת את המוח בעזרת השפכ'ל, ואשתמש בפינצטה העקולית כדי לסייע לי בכך. מה שאני רוצה לעשות הוא למעשה להסיר טיפה מהנוזל העודף שיש לי מתמיס הנתיחה, ואני אקבע את המוח על תמיכת המקדח שלי.כעת אנו מוכנים להעביר את המוח לאמבט הבופר. לכן, אני מוסיף תמיסת דיסקציה לכלי הקטן ואני עומד להוסיף את התמיכה המחזיקה את המוח. הוא מורכב כך שהמוח פונה אל הלהב.בשלב זה, המוח מקובע ואני עומד להשתמש ב-fibro slicer; אני מנסה למצוא את תחילת המוח על ידי הזזתו לכיוון הלהב. כעת חתכתי חלק קטן מהבצבע (olfactory). אני מזיז את הלהב כ-600 micrometers למטה ומבצע חתך נוסף, שאמור לעבור ישירות דרך קליפת המוח (cortex).כעת הקורטקס עולה על הלהב. אני מזיז את הלהב 600 micrometers נוספים למטה וחותך את הפרוסה השנייה. חשוב לבצע זאת באופן רציף, ללא הפסקה ובצורה חלקה.עם הוצאת הלהב, יש לעצור את חותך הסיבים. כעת אשתמש בפ pipette מזכוכית באופן שאינו רגיל; למעשה אשתמש בקצה האחורי כדי להזיז את חתך קליפת המוח למעלה ולהעבירו לפטריה נקייה.אני ממשיכה דרך המוח, תמיד במרווחים של 600 micrometers עד שאסוף כחמישה עד שישה פרוסות עבור עכבר P zero או P one. וכך עד שאגיע לסוף הקורטקס. כעת אנו מוכנים לבודד את הקורטקס משאר המוח.בסדר, אני משתמש בפיפטות זכוכית שהן פיפטות זכוכית משוכות, חדות כמו כלי ניתוח. בדרך כלל אני מתחיל עם המקטע הראשון שקיבלתי, שהוא הקטן ביותר, ואת בצל הריח עלינו להסיר. אני גם מנסה להסיר את קלפי המוח מההכנה הזו.שוב, מסירים את הבב השמירי מפיסה זו, קולפים, קולפים אותה מהקרומים. לעיתים ישנן פיסות שלא ניתן להפריד בקלות, לכן פשוט ממשיכים ומותירים אותן מאחור לטובת הפיסות הטובות. אני תמיד נע לכיוון קצה אחד ואעבוד דרך מקטע אחד אחרי השני.חשוב להסיר את הקרומים, וכשבוחנים את החתכים הללו, לעיתים כדאי להפוך אותם כדי לראות טוב יותר היכן נמצא מסלול הסיבים המכיל את מרבית התאים הבלתי-נוירונליים שאינם רצויים בהכנה זו. אוקיי,בחתך זה ניתן לראות בבירור את מסלול הסיבים הזה מתחת לשכבה הקורטיקלית. לכן אני דוקר בדיוק במקום שבו השכבה הקורטיקלית מסתיימת, ואני מצביע על מסלול הסיבים שבו נמצאים מרבית התאים הבלתי-נוירונליים שבהם אנו מנסים להימנע בהכנה זו.כעת אני חותך לאורך הקו הזה, בניסיון להשאיר את מסלולי הסיבים מאחור. זהו השלב שבו קוצצים את הרקמה לקוביות קטנות. טוב, אני מעקר כעת את תמיסת האנזים שלי באמצעות מסנן של 0.2 micron המחובר למזרק.ואני מוסיף זאת ישירות על מקטעי הקורטקס שלי בדיוק כך. ודאו שיש מספיק נוזל המקיף את כל מקטעי הקורטקס, ומקטעי קורטקס אלו נכנסים כעת למדגרה בטמפרטורה של 37 מעלות למשך 30 דקות, דבר שאמור לרכך את הרקמה באופן משמעותי. כך חלפו 30 דקות שבהן מקטעי הקורטקס דגרו במדגרה.בינתיים, חיממתי מעט מצע neuro basal עם תוספת B 27, שבו התאים הללו יסיימו בסופו של דבר. הכנתי כאן גם מספר תמיסות. הראשונה היא תמיסת הדיסקציה.אם כן, זהו תמיססת נתיחה פשוטה. לאחר מכן, הם מועברים לתמיסה עם ריכוז גבוה של מעכב טריפסין, המכילה BSA כסורח (scavenger) ו-APV לחסימת רכיב קולטן ה-NMDA. לאחר מכן, הם עוברים שלושה שלבי שטיפה של מעכב טריפסין בריכוז נמוך, BSA ו-APV. אני אסיר כעת את החלקים הללו מתמיססת הפרופאן ואעביר אותם למבחנה קונוית המכילה תמיססת נתיחה DS.גושים אלה יירדו למטה בעקבות כוח הכבידה, וייתכן שייקח דקה או שתיים עד שכולם ישקעו בחלק הקוני של המבחנה. לאחר מכן, אאסוף אותם שוב ואעביר אותם לתמיסה המכילה ריכוז גבוה של מעכב טריפסין. שוב, עלינו להמתין עד שגושים אלה ישקעו לתחתית המבחנה.ישנו שטיפה אחת נוספת באמצעות תמיסת מעכבי טריפסין בריכוז גבוה, ולאחר מכן שוטפים את הגושים הללו במעכבי טריפסין בריכוז נמוך. לאחר השטיפה האחרונה והשימוש במעכב האנזים בריכוז נמוך, אני אעביר את התאים למצע neuro basal שחומם מראש, ואתחיל בפירוק מכני של התאים על ידי העברתם למעלה ולמטה בתוך קפילרית זכוכית בעלת קוטר פנימי הולך וקטן. אני אעביר כעת את התאים ואת גושי הרקמה.אך לפני כן, אסיר את כל השאריות הנראות כאן. ישנם, למשל, חלבונים ו-DNA הדולפים מהתאים ויוצרים חומר דמוי גומי שנדבק לגושי הרקמה. יש להסיר זאת תחילה, כיוון שזה סותם את קצה הפ pipette ומאלץ את הרקמה לעבור דרך קוטר קטן יותר.כעת אשבור חלק מהנימים מזכוכית הללו כדי להגיע לגודל הפתח המתאים להכנסה והוצאה של התאים מהפתח. זוהי פיפט טובה; ניתן לראות שהיא עגולה ויפה ואין לה קצוות חדים.אני עומד להכניס את זה למכשיר השאיבה שלי. יש מסנן של 0.2 מיקרון ביניהם, וכעת אני אהניח את הרקמות פנימה והחוצה מהנימי הזכוכית שלי. התהליך הראשון אמור לעבור בצורה חלקה למדי, מכיוון שגושי הרקמה אינם גדולים בהרבה מפתח הפ pipette.כל מה שנדרש הוא לרכך את הרקמה. לאחר מכן, אשתמש בטיפ פפיטה מעט קטן יותר. אני מעוניין שיהיה לי טיפ פפיטה עגול, נקי ומסודר.זה נראה טוב. ושוב, כל הגושים מועברים פנימה והחוצה מהפיפיט בבת אחת. כעת הרקמה רכה מאוד ומשוחררת, כך שאם תסביסו שוב את הגושים הללו במצע גידול, התאים למעשה ינשרו החוצה.כעת אעביר את כל התאים המופרדים למבחנה קונית נקייה של 15 ml, ואערבב אותם בעדינות למעלה ולמטה פעמיים או שלוש פעמים נוספות כדי לפרק תאים שעדיין נמצאים בגושים גדולים יותר. לאחר מכן, נמתין דקה או שתיים כדי שהחלקים הגדולים שעדיין נמצאים שם ישקיעו. כמו כן, ייתכן שיהיו רסיסי זכוכית מהקפילרות שהישברו, אשר צריכים לשקוע לתחתית.לאחר מכן, ניתן להשתמש במנות (aliquots) מהתמיסה כדי לזרוע אותן על זחלניות כיסוי או צלחות מצופות באופן מלא. אני זורע 80 µL על זחלנית כיסוי מזכוכית שצופתה מראש ב-polylysine, וזה יוצר בועית יפה. התאים ישקעו בסופו של דבר ויידבקו לזחלנית הכיסוי מזכוכית.לאחר כשעה, התאים שקעו ואני אוסיף בעדינות מצע גידול נוסף לכל הצלחת. ניתן לסובב אותה בעדינות כפי שניתן לראות. לאחר מכן, התאים יוכנסו לאינקובטור בטמפרטורה של 37 °C, ומחר אני אזין אותם במצע מותנה (conditioned media).ובכן, אלו הם תאי קליפה (cortical cells). הם בני פחות מיום אחד. הם נזרעו אתמול, וניתן לראות שישנם נוירונים רבים, כולם נוירוני ריאה רבים, וישנם שם גם שאריות תאים.אלו הם התאים שלא שרדו. ואלו יישטפו במהלך מספר ההאכלות הבאות. התאים המתים הם התאים העגולים והקטנים מאוד עם הממברנות המקומטות.הרגע הדגמתי בפניכם כיצד להכין תרביות קליפות מוחיות (cortical cultures) מפוהקות אלו. חשוב לזכור שבזמן הסרת קליפת המוח מפרוסות המוח, עליכם להפריד אותן מסיבי הקליפה העוברים דרך ה-thumb sala, מכיוון שהם מכילים תאים רבים שאינם נוירונליים. כמו כן, בעת טיפול בתאים, היזהרו לא להפעיל כוח רב מדי, שכן פעולה זו עלולה להרוג את מרבית התאים המבודדים שהפקתם עד כה.לכן, היו עדינים עם פרוסות הרקמה ותקבלו תרבית יפה. בהצלחה בניסויים שלכם.

preparation-of-dissociated-mouse-cortical-neuron-cultures

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקולים עבור מערכת עובריים במוח חולדה המצרפי תרבות מתואר. אבות multipotent ב אגרגטים יכול לפתח להתמיין נוירונים, האסטרוציטים ו oligodendrocytes.

הכנת המוח עכברוש תרבויות מצטבר עבור Neuron ופיתוח מחקרים גליה

פרוטוקול זה מתאר את הצעדים הנדרשים כדי לנתח, transfect דרך electroporation ועכבר תרבות נוירונים בהיפוקמפוס ואת קליפת המוח. לטווח קצר תרבויות ניתן להשתמש ללימודי תולדה של האקסון והדרכה, ואילו לטווח ארוך תרבויות יכול לשמש מחקרים synaptogenesis ניתוח בעמוד השדרה הדנדריטים.

Nucleofection ותרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס עכבר עובריים קליפתיים

מאמר זה מתאר שיטות להפיק אוכלוסיות מועשר Murine של תאים מבשר oligodendrocyte (OPCs) בתרבות העיקרי, אשר להבדיל לייצר oligodendrocytes בוגרת (OLS). בנוסף, דו"ח זה מתאר את טכניקות כדי לייצר Murine myelinating שיתוף תרבויות על ידי זריעת OPCs העכבר על המיטה neurite של הגב עכבר שורש עצב הגנגליון (DRGNs).

גזירת תרבויות Oligodendrocyte מועשר Neuron Oligodendrocyte / Myelinating משותף תרבויות מן שלאחר הלידה רקמות Murine

בסרטון זה אנו מתארים את השיטה להשגת הכנה טהורה של אסטרוציטים מעכברים שזה עתה נולדו.

בידוד אסטרוציטים: שיטה להשגת הכנה טהורה של אסטרוציטים קורטיקליים של עכבר

סרטון זה מדגים שיטה לביסוס תרבית משותפת עקיפה של נוירון-אסטרוציטים באמצעות גישה ממודרת. במערך זה, נוירונים ואסטרוציטים מופרדים מרחבית אך חולקים תווך מותנה. גורמים נוירוטרופיים המשוחררים על ידי אסטרוציטים מקדמים התמיינות נוירונים ויצירת קשרים סינפטיים, דבר המצביע על אינטראקציות נוירון-גליה.

טכניקה עקיפה של תרבית נוירון-אסטרוציטים לחקר אינטראקציות נוירון-גליה

האסטרוציטים הוכרו כתאים צדדיים המשתתפים בתהליכים ביולוגיים בסיסיים שחיוניים להתפתחות המוח ותפקודו תקין, ותיקון מערכת עצבים מרכזי. כאן אנו מציגים הליך מהיר לקבלת תרבויות astrocyte עכבר טהורות ללמוד ביולוגיה בכיתה זו גדולה של תאים במערכת עצבים מרכזיים.

בידוד ותרבות של האסטרוציטים עכבר קליפתיים

מתואר פרוטוקול ליצירת מערכת תרבית משותפת המורכבת מתאי עצב שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs), נוירונים ראשוניים בקליפת המוח ואסטרוציטים. מערכת קו-תרבית זו מאפשרת לזהות היווצרות של מגעים ומעגלים סינפטיים בין נוירונים חדשים שמקורם ב-iPSC לבין נוירונים קיימים בקליפת המוח המבטאים channelrhodopsin-2.

גישת optogenetic להערכת יצירת קשרים עצביים במערכת Co-תרבות

פרוטוקול זה מתאר את coculture נוירון astrocyte עקיפות ניתוח מידור של נוירון, גליה אינטראקציות.

את assay Coculture Neuron-astrocyte העקיפה: An<em&gt; במבחנה</em&gt; הגדרה לחקירה המפורטת של נוירון, גליה אינטראקציות

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור Ca2 + הדמיה של נוירונים ותאי גלייה, המאפשרת את הקרע של Ca2 + אותות ברזולוציה subcellular. תהליך זה הוא החלים על כל סוגי תאים לאפשר הביטוי של Ca מקודדים גנטית2 + מחוונים.

דיסקציה של Ca מקומי2 + אותות בתאים בתרבית על ידי קרום, ממוקדות Ca2 + אינדיקטורים

כאן, תיארנו פרוטוקול כדי לחקור כמותית את ההרכבה והמבנה של קטעים ראשוניים אקסון (AIS) של נוירונים היפוקמפוס חסר AIS מורכב מראש בשל היעדר ankyrin-G ענק.

שימוש בנוירונים ראשוניים בהיפוקמפוס כדי לחקור את ההרכבה של מקטעים ראשוניים של אקסון

למדו הכנת תרביות נוירונים מקליפת מוח עכבר בגילאי עובר ולאחר לידה. שיטה זו מאפשרת חקר אלקטרופיזיולוגיה, הדמיית סידן ונתרן, ומנגנוני פיתוח עצבי תוך שימוש בחיות טרנסגניות.

הכנת ניתק תרבויות עכבר קליפתיים Neuron

גלה סרטונים נוספים