Name: הערכת בדרכי השתן צומת פגמים חסימה על ידי הזרקת מתילן כחול צבע (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: למדו להעריך פגמי חסימה בצומת דרכי השתן באמצעות הזרקת צבע מתילן כחול לכליות עוברי עכברים. שיטה זו מאפשרת הדמיה ברורה של מבנה דרכי השתן וזיהוי הפרעות התפתחותיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

תודה ד ר אלן או Perantoni (CDBL NCI NIH) לתמיכה הגשת כתב היד הזה. אני גם מודה ד ר מייקל הול (CDBL NCI NIH) ו- Nirmala שארמה (CDBL NCI NIH) עבור עריכת כתב היד הזה. אני אסיר תודה עד לאי טהאנג (SAIC) על גידול עכבר מעולה שלו. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות, מכון הסרטן הלאומי ומרכז לחקר הסרטן.

עכברים (Wnt5a flox / flox עכברים (Wnt5a tm1.1Tpy) וקו Dll1Cre, דגם העכבר UVJO) 7 היו מנוהלים על פי הנחיות NIH טיפול ושימוש של חיות מעבדה למד תחת פרוטוקול שאושרו על ידי NCI-פרדריק חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה.
 1. הכנה של מתילן כחול צבע פתרון <ol><li>למדוד אבקה וורודה 0.1 g.</li>
	<li>לפזר את מתילן כחול 10 מ ל תמיסת מלח או 1 x buffered פוספט תמיסת מלח (PBS) לחלוטין על-ידי vortexing.</li>
	<li>סינון הפתרון מתילן כחול 10 מ"ג/מ"ל עם מסנן מזרק (גודל הנקבוביות ממברנה 0.45µm) כדי למנוע סתימת במהלך ההזרקה.</li>
	<li>להרכיב הקרקפת סטרילי הווריד סט (27GX3/4 &#8243;) עם מזרק חד פעמיות 3 מ"ל, למלא המזרק עם 3 מ ל מסונן פתרון מתילן כחול. 
	הערה: כדי למנוע לחץ הידרוסטטי, לצבוע לאחר מכן זרימה, מקם קצה המחט מעל המזרק מלא עם פתרון מתילן כחול.</li>
</ol> 2. דיסקציה של העוברים לפני הלידה <ol><li>נקי לנתח מספריים וחדים עם אתנול 70%-</li>
	<li>כדי לאסוף את העוברים הלידה E18.5 או E19.5, המתת חסד עכברים בהריון הראשון באמצעות אינהלציה 2 CO ולאחר מכן לבצע פריקה צוואר הרחם בהתאם להנחיות NIH. 
	הערה: העכבר נקבה בהריון בדרך כלל יולדת ההתחלתי הוא E18.5, לעומת זאת, הכליות גדולות הן טיפול קל יותר. לכן, הכליות-E19.5 קרוב יותר ללידה הן קל יותר לבצע ניתוח זה. עם זאת, כלבלבים עם חסימות בדרכי השתן הדו-צדדיים למות לאחר הלידה. בהתאם המאפיינים של עכברים ניסיוני, יום/שעה אוסף המתאים מדעית ייקבע.</li>
	<li>תרסיס אתנול 70% על פני הבטן הגחון ולאחר מכן פתח את חלל הבטן ventrally באמצעות מלקחיים ומספריים ויבתר.</li>
	<li>הרם הרחם כולו, להפריד אותו מן הגוף על-ידי חיתוך עם לנתח מספריים-העצות של הקרניים הרחם.</li>
	<li>לשטוף את הרחם כולו עם 1 x PBS בצלחת פטרי.</li>
	<li>לחתוך את הרחם segmentally עם מספריים לנתח ולהסיר את היפרדות רותמי עם לנתח מלקחיים לחשוף את העוברים בתוך שקי חלמון.</li>
	<li>להסיר את שק החלמון תחילה ולאחר מכן להסיר את קרום מי השפיר עם לנתח מלקחיים כדי לשחרר את העוברים הלידה.</li>
	<li>לערוף העובר עם לנתח מספריים. . תנגב את עודף דם עם תחבושות גזה סטרילי. להפיל את העובר עם פני השטח הגחון שלו למעלה על מיקרוסקופ ויבתר מצויד with a מצלמה דיגיטלית עבור הדמיה. לאסוף את זנבו עבור genotyping במידת הצורך. 
	הערה: לבצע זריקות העובר אחת בכל פעם.</li>
	<li>פתח היטב את חלל הבטן של העובר עם מלקחיים על ידי קריעת העור. לאחר מכן, הסר בזהירות עודף איברים ורקמות כגון הכבד, הקיבה, המעי עם מלקחיים על-ידי גזירתם או מוציאה אותם לחשוף את הכליות, ureters את שלפוחית השתן הממוקמים dorsally ( איור 1 א'). לספוג עודפי הדם של העובר ביתור עם תחבושות גזה סטרילי, במידת הצורך. 
	הערה: עודף דם מפריע זיהוי אגן הכליה על הזרקת צבע.</li>
</ol> 3. הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה ואת ניטור לצבוע לזרום <ol><li>בועות הסר המחט, אבובים על ידי סילוק מתילן כחול פתרון מהקצה המחט על ידי לחץ הידרוסטטי. להרים את המזרק המכיל את הפתרון לצבוע מעל הרמה של קצה המחט כדי להתחיל זרימת ולאחר מכן להנמיך את המזרק כדי לעצור את זרימת.</li>
	<li>מכניס את המחט אגן הכליה ליד השופכן צינתור, דואגת שלא להפריע את זה מהרגע ששמים. לבצע הזרקת צבע לתוך כליה כדי לקבוע החסימה בדרכי השתן שלו. 
	הערה: בצע לצבוע הזרקה לתוך כל כליה חריג 7 הראשון על-ידי ביצוע באופן זהה כדי לקבוע החסימה בדרכי השתן שלו.</li>
	<li>הרם את המזרק עד כ-20 ס מ לספק לחץ הידרוסטטי. ולתת µL 15 - 60 µL של הזרם פתרון לצבוע. קצב הזרימה יהיה 3 µL/s אם המזרק הוא הרים את הגובה הזה מעל העובר.</li>
	<li>לנטר את הצבע הכחול של לצבוע מתחיל הראשון של אגן הכליה, אזי באורך של השופכן, ולבסוף ב לומן שלפוחית השתן- 
	הערה: זה לוקח בערך 5 s לראות צבע לצבוע חלש להגיח בתוך לומן שלפוחית השתן אם השופכן הוכנס כהלכה לתוך שלפוחית השתן. אפשר לצבוע לצבור חסומים באתר כ- 15 ש' אם אין צבע לצבוע מופיע לומן שלפוחית השתן.</li>
	<li>למקם את המזרק עד להפסיק לצבוע זרימה, הסר את המחט מן הכליה.</li>
	<li>לקחת תמונות של הכליה, השופכן לשלפוחית השתן לעקוב אחריו עם צבע פתרון באמצעות מצלמת ה והדמיה התוכנית מחוברים stereomicroscope.</li>
	<li>להפוך רשומה של hydronephrosis של הכליה, hydroureter את המיקום הסופי של הפתרון לצבוע במחברת המעבדה.</li>
	<li>לבצע הזרקה של הכליה contralateral כפי שמתואר סעיפים 3.1) ל 3.5) ולאפשר זרימה צבען בערך 20 s בסה כ. 
	הערה: לומן שלפוחית השתן יהיה מלא עם פתרון לצבוע, המצוין על-ידי צבע כחול חזק, אם השופכן הוכנס כהלכה לתוך לומן שלפוחית השתן. לאחר הערכה של חסימת צומת דרכי השתן, את ureters ואת שלפוחית השתן יכול להיות קבוע על חלוקתה.</li>
</ol>

<ol><li>Rasouly, H. M., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+urinary+tract+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Lower urinary tract development and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).</li>
<li>Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Box+Genes+in+the+Kidney+and+Urinary+Tract%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract.</a> Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).</li>
<li>Bohnenpoll, T., Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ureter+growth+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Ureter growth and differentiation.</a> Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).</li>
<li>Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic%2C+environmental%2C+and+epigenetic+factors+involved+in+CAKUT%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT.</a> Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).</li>
<li>Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+canonical+Smad+signaling+in+ureteral+and+bladder+mesenchyme+causes+ureteropelvic+junction+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction.</a> J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).</li>
<li>Aoki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Id2+haploinsufficiency+in+mice+leads+to+congenital+hydronephrosis+resembling+that+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans.</a> Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).</li>
<li>Yun, K., Perantoni, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydronephrosis+in+the+Wnt5a-ablated+kidney+is+caused+by+an+abnormal+ureter-bladder+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection.</a> Differentiation. 94, 1-7 (2017).</li>
<li>Uetani, N., Bouchard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumbing+in+the+embryo%3A+developmental+defects+of+the+urinary+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Genet%22%5BJournal%5D)">Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts.</a> Clin Genet. 75, 307-317 (2009).</li>
<li>Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+urinary+tract+defects+in+mice%3A+methods+to+detect+the+presence+of+vesicoureteric+reflux+and+urinary+tract+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction.</a> Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).</li>
<li>Weiss, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephric+duct+insertion+requires+EphA4%2FEphA7+signaling+from+the+pericloacal+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme.</a> Development. 141, 3420-3430 (2014).</li>
</ol>

המחבר אין לחשוף.

העכבר כליות פונקציונלי החל E16.5, מבחן הזרקת צבע אפשרי תיאורטית, מנקודת זמן זו. עם זאת, הכליה הוא קטן מדי כדי להיות מוזרק עם הפתרון לצבוע, פנוטיפים hydronephrosis ו hydroureter שאינם קיימים בבירור מאז פנוטיפים אלה הם השפעה משנית של שתן בנוי עקב שתן נורמלי תחבורה. פנוטיפים אלה, מן המכשולים כגון UPJO או UVJO, ניכרות בשעה E18.5 על-ידי הכליות נפוחה ureters. גדול יותר הכליות של העוברים E19.5 או הגורים neonatal קל יותר לתמרן יותר מאלה של עוברי-E18.5 או צעירים. עם זאת, כלבלבים עם חסימות בדרכי השתן הדו-צדדיים למות לאחר הלידה. לכ...

מערכת השתן מורכב זוג של הכליות ו ureters ו נפוץ שלפוחית השתן לשופכה. הפונקציה העיקרית של מערכת השתן היא לשמור על הומאוסטזיס בגוף על-ידי ניהול יתרת אלקטרוליט והמים של הדם. הכליות לסנן את הדם שליטה אלקטרוליט ריכוזים, מאזן חומצה בסיס, לייצר שתן כדי במעים עודף מים ופסולת כולל מומסים בגבול מטבוליטים. השתן מועבר מכן וגרגר מ אגן הכליה עד bladderin באופן חד כיווני איפה זה מאוחסן, בסופו של דבר מסולק דרך השופכה1.
Ureters הם צינורות ישרים שמקורו התעלה nephric. לאחר להנץ מן התעלה nephric ביום עובריים 10.5 (E10.5) העכבר, הקנה שופכן לתרמיל, מבדיל בין לתוך מבנה מרובה שכבות בשם urothelium אשר הוא אטום בין עכבר, E12.5 ו- E16.5. התאים mesenchymal סביב הקנה שופכן מובדלים גם לתוך שלוש שכבות המורכבת תאי סטרומה הפנימי, תאי השריר החלק העבה ביניים ו fibroblasts adventitial החיצוני. Ureteral גלי ממברנות ייזום באגן הכליה מופצים דרך השכבה שריר חלק של הקיר שופכן שלפוחית השתן להובלת שתן2,3, אשר מיוצר החל מ- E16.5 העכבר1.
מולדים של כליות ודרכי השתן (CAKUT) הם בין מחלות גנטיות בתדירות הגבוהה ביותר, נוכח סביב 1% של עוברים אנושיים1,4, המורכבת מגוון פנוטיפים כולל hydronephrosis ו- hydroureter. הצטברות חריגה של שתן בתוצאות שופכן וכליות במבנה כליה, hydroureter hydronephrotic. אחד סיבת היווצרות hydronephrosis ו/או hydroureter היא חסימה של דרכי השתן. חסימת צומת Ureteropelvic (UPJO) נגרמת על ידי זרימת השתן aberrant עקב סתימה בין השופכן הפרוקסימלית של אגן הכליה, וכתוצאה מכך hydronephrosis וצמצום hydroureter הפרוקסימלית אפוזיציה או מתקפלים מתמיד5, 6. בנוסף, חוץ רחמי ההוספה של השופכן דיסטלי לתוך הקיר בשלפוחית השתן או במערכת הרבייה נקרא חסימה בצומת ureterovesical (UVJO). UVJO יכול גם לגרום hydronephrosis ו hydromegaureter היווצרות7,8. פגם צומת (UVJ) ureterovesical נוסף הוא vesicoureteric ריפלוקס (VUR). VUR מאופיין על ידי זרימת השתן רטרוגרדית משלפוחית לכיוון הכליה-UVJ. בהשוואה ל- UVJO, העוברים הלידה עם VUR בפירוש מציג של כליות hydronephrotic נפוחה או hydroureter חמורה פנוטיפ9.
העכבר מעבדה, זרימת השתן יכול להיבדק על ידי הזרקה של צבע, כגון כחול מתילן, לתוך אגן הכליה9. הפתרון injectedmethylene הכחול יהיה להתחקות אחר מסלול שתן מן האגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן. Hydronephrosis ניתן לזהות על ידי הרחבה של לצבוע בתוך הכליה. UPJO ניתן יהיה מזוהה כמו סתימה של צבען זורם השופכן צינתור עם אגן הכליה נפוחה5. כל התרחבות של השופכן שצוין על-ידי קוטר המוגדלות מדגים דוגמה hydroureter. לבסוף, הצטברות צבע לקיר שלפוחית השתן או באתר של מערכת הרבייה מציינת UVJO עם כליה hydronephrotic נפוחה, מורחבים7,hydromegaureter10. כדי לזהות VUR, הפתרון לצבוע מוזרק לתוך שלפוחית השתן, זרימה רטרוגרדית עוקבות מנוטר ב כליות9.
כאן מוצג עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה העובר הלידה פרוטוקול. פרוטוקול זה מאפשר את העקיבה של זרימת השתן מ אגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן ומוודא פוטנציאליים חסימות צומת דרכי השתן כגון UPJO או UVJO.

<table><tbody><tr><td>מתילן כחול</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>איכות ביולוגית בע"מ תמיסת מלח רגילה - 500 מ"ל</td><td>Fisherscientific</td><td>50-983-204</td><td></td></tr><tr><td>מזרק חד פעמי 3 מ"ל עם קצה BD Luer-Lok</td><td></td><td></td> מסנני מזרק BD 309657 <td></td></tr><tr><td>Acrodisc עם Supor Membrane</td><td>Pall corporation</td><td>4614</td><td></td></tr><tr><td>ערכות ורידים (פרפר) Exel; 27 גרם x 3/4 אינץ' 12"&nbsp;</td><td>EXELINT</td><td>26709</td><td></td></tr><tr><td>מספריים להפעלה עדינה</td><td>Roboz מכשיר כירורגי ושות'</td><td>RS-6702</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו מלקחיים לניתוח</td><td>רובוז מכשיר כירורגי ושות'</td><td>פינצטה RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>דומונט; דפוס #5</td><td>רובוז מכשירים כירורגיים ושות'</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>BD מחטי PrecisionGlide 30 גרם x 1/2 אינץ'</td> <td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת בדרכי השתן צומת פגמים חסימה על ידי הזרקת מתילן כחול צבע

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

פגמים חסימה בדרכי השתן צומת הם מולדים גרימת hydronephrosis ו- hydroureter. פגמים חסימה בדרכי השתן מאתר צומת יכול להיות מוערך על ידי מעקב אחר זרימת לצבוע מתילן כחול בתוך מערכת השתן. צבע כחול מתילן מוזרק לתוך אגן הכליה הכליות עובריים הלידה ונשאר צבע זרימת להשגחה של אגן הכליה הכליה וגרגר ו לתוך לומן שלפוחית השתן לאחר הפעלת לחץ הידרוסטטי. צבע הצטברות יהיה ניכר לומן שלפוחית השתן בדרכי השתן הלידה הרגילה, אך מוגבל בין אגן הכליה את נקודת הסיום של שופכן נורמלי, אם התרחשה חסימות בדרכי השתן. שיטה זו מקלה על האישור של חסימות בדרכי השתן צומת והדמיה של hydronephrosis ו- hydroureter. כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה לאשר חסימות בדרכי השתן צומת.

הכליות, מערכת השתן התחתונה ממוקמים הגבי לאיברים הפנימיים ביותר אחרים כגון הכבד, המעי. לאחר הסרת האלו לאיברים פנימיים אחרים, הם זוג כליות ואת ureters לו שלפוחית שתן בודדת גלוי (איור 1 א'). על ניתוח מוצלח, לצבוע מוזרק את אגן הכליה יזרום מן הכליה לתוך שלפוחית השתן דרך השופכן. אגן הכליה הוא החלק מורחבים דמוי משפך הפרוקסימלית של השופכן בכליה. לכן הנקודה הזרקת צבע הוא ליד השופכן proximal גלוי מחובר עם הכליה כמצוין עם חצים שחורים (איור 1B</stron...

הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה מקלה את הערכת ליקויי חסימה בדרכי השתן צומת במהלך התפתחות דלקת בדרכי השתן עובריים בעכבר. . הנה, עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה פרוטוקול המתואר.

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לקבוע את קיומן של חסימות בצומתי דרכי השתן באמצעות הזרקת צבע מתילן לכליות. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום ההתפתחות של הכליות ודרכי השתן התחתונות, כגון החיבור של השופכן לשלפוחיות השתן. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מספקת שיטה פשוטה להדמיית מבנה דרכי השתן במקרים של התפתחות מסית (mass development), ובכך מאפשרת ניתוח של התפתחות דרכי השתן.כדי להתחיל בניסוי, שקלו 0.1 גרם של אבקת מethylene blue. המיסו את ה-methylene blue ב-10 מיליליטר של 1x phosphate buffered saline או PBS וערבבו את התערובת באמצעות וורטקס. לאחר מכן, סננו את תמיסת ה-methylene blue בריכוז 10 מיליגרם למילוilitר באמצעות מסנן מזרק כדי למנוע סתימות במהלך ההזרקה.לאחר מכן, הרכיבו סט וריד קרב (scalp vein set) סטרילי עם מזרק חד-פעמי של 3 ml ומלאו את המזרק ב-3 ml של תמיסת מethylene blue מסוננת. נקו מספרי ניתוח ופינצטות באמצעות 70% ethanol. כדי לאסוף עוברים פרינטליים ב-E18.5 או E19.5, ביצעו תחילה הרדמה וההמתה של עכברות הרמיות באמצעות שאיפת פחמן דו-חמצני.לאחר מכן בצעו פריקה של חוליית הצוואר (cervical dislocation) בהתאם להנחיות ה-NIH. לאחר מכן, רססו ethanol בריכוז 70% על המשטח הבטני של בטן בעל החיים. לאחר מכן, בעזרת מספרי ניתוח ופינצטה סטריליים, פתחו את חלל הבטן באופן בטני.הרים את הרחם כולו והפריד אותו מהגוף בקצות קרני הרחם. לאחר מכן, שטוף את הרחם כולו ב-1x PBS בתוך צלחת פטרי. גזור את הרחם במקטעים באמצעות מספרי ניתוח והסר את הדרקלואה השלייתית (placental decidua) בעזרת פינצטת ניתוח כדי לחשוף את העוברים ואת שקי החלמון.הסיר תחילה את שק החלמון ולאחר מכן הסר את קרומי השק השקי הפרי (amniotic membrane) באמצעות פינצטת דיסקציה כדי לשחרר את העוברים הפרינטליים. בצע דקפיטציה (ניתוק ראש) לעובר באמצעות מספרי דיסקציה. קבע את העובר בעזרת סיכות כאשר הצדו הגחוני פונה כלפי מעלה, תחת מיקרוסקופ דיסקציה המצויד במצלמה דיגיטלית לצורך הדמיה.אסוף את הזנב לצורך גנוטיפינג. בעזרת פינצטה, קרע בעדינות את העור כדי לפתוח את חלל הבטן של העובר. לאחר מכן, הסר בזהירות איברים ורקמות עודפות כגון כבד, קיבה ומעיים בעזרת פינצטה, על ידי חיתוך או שליפה שלהם, כדי לחשוף את הכליות, השופכנים ושלפוחית השתן הנמצאים בצד הגבי.ספגו דם עודף מהעובר המופרד באמצעות פדים של גזה סטרילית, ולאחר מכן המשיכו להזרקת הצבע. הסירו בועות מהמחט ומהצינור על ידי דחיפת תמיסת מethylene blue מקצה המחט באמצעות לחץ הידרוסטטי. הרימו את המזרק המכיל את תמיסת הצבע מעל גובה קצה המחט כדי להתחיל את הזרימה.לאחר מכן, הורידו את המזרק כדי להפסיק את הזרימה. בשלב הבא, הכניסו את המחט אל אגן הכליה (renal pelvis) בסמוך לשופכן הפרוקסימלי, תוך הקפדה לא להזיזו לאחר המיקום. בצעו הזרקת צבע לכליה כדי לקבוע אם קיים חסימה בדרכי השתן שלה.לאחר הכנסת מחט אחת לאגן הכליות להצלחת בדיקה זו, יש להחדיר מחט לאגן הכליות לכיוון השופכן, מבלי לעבור דרך הכליה או לכיוון כלי דם. הרם את המזרק לגובה של כ-20 סנטימטרים כדי ליצור לחץ הידרוסטטי והזרם 15 עד 16 µL של תמיסת הצבע. לאחר מכן, עקוב אחר הצבע הכחול של הצבע, שיתחיל תחילה באגן הכליות, לאחר מכן לאורך השופכן ולבסוף בחלל השלפוחית.הניחו את המזרק כדי להפסיק את זרימת הצבע והוציאו את המחט מהכליה. רשמו במחברת המעבדה אם קיימת הידרונפרוזיס (התרחבות כליה) של הכליה, הידרואורטר (התרחבות השופכן) ואת המיקום הסופי של תמיסת הצבע. לבסוף, בצעו הזרקה לכליה הנגדית ואפשרו לצבע לזרום למשך 20 שניות בסך הכל.צלם את הכליות, השופכנים ושלפוחית השתן שסומנו בתמיסת הצבע, באמצעות המצלמה ותוכנת הדימות המחוברת למיקרוסקופ סטריאוסקופי. לאחר ההזרקה לכליה אחת, צבע המתילין כחול זורם מאגן הכליה דרך השופכן ואל שלפוחית השתן, מה שיוצר צבע כחול נראה לעין בתוך חלל השופכן ושלפוחית השתן. צבע כחול חזק יותר מופיע בחלל שלפוחית השתן בשל זרימה ממושכת יותר, כ-20 שניות לאחר הזרקת צבע לשתי הכליות, מה שמעיד על היעדר חסימה בחיבורי דרכי השתן במערכת השתן השנייה.בעת הזרקה לשופכן מורחב (hydroureter) באופן חריג, מיקומה הסופי של תמיסת הצבע אינו ברור. ולא ניתן לאמת חסימה בצומת השופכן-שלפוחית (ureterovesical junction obstruction או UVJO) למרות היעדרו של הצבע בתוך חלל השלפוחית, מכיוון שהשופכן המורחב נפגע במרכזו. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לחשב את שקי הצבע של עוברים פרינטאלים כדי לקבל מערכת שתן שלמה.והסר בועות כדי שלא יחסמו את זרימת הצבע.

assessing-urinary-tract-junction-obstruction-defects-methylene-blue

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פגיעה בשלמות הצפק מספקת פרדיגמה חדשה להבנה ולטיפול בכאבי אגן כרוניים בנשים עם צורות קלות של אנדומטריוזיס וניתן לאתר בקלות באמצעות intraoperative החדרה של צבע בזמן לפרוסקופיה.

איתור intraoperative של אנדומטריוזיס העדין: פרדיגמה חדשה לאיתור וטיפול בכאב באגן הקשורים לפגיעה בשלמות פריטונאלית

endomicroscopy הליזר confocal בדיקה מבוססת מאפשר מיקרוסקופיה בזמן האמת של מערכת השתן האנושית במהלך ציסטוסקופיה, ומספק הדמיה דינמית, intravital של מצבים פתולוגיים כגון סרטן שלפוחית ​​שתן עם רזולוציה סלולרית. Endomicroscopy עשוי להגדיל את הדיוק האבחנתי של האור הלבן אנדוסקופיה סטנדרטית ומספק הנחיות לשיפור תדמית במהלך ניתוח כריתה כירורגית.

Endomicroscopy בדיקה מבוסס Confocal ליזר בדרכי השתן: הטכניקה

בסרטון זה, אנו נותנים הזרקת מתילן צבע כחול לדרכי השתן של עכבר עוברי פרינטלי כדי להעריך אנומליות מולדות הקשורות לחסימת דרכי השתן.

הזרקת צבע כחול מתילן בדרכי השתן העוברית של עכבר: שיטה להערכת החסימה המולדת בדרכי השתן

cystography photoacoustic (PAC) יש פוטנציאל גדול כדי למפות שלפוחיות השתן, איברים פנימיים רגישים קרינה במטופלי ילדים, ללא כל שימוש בקרינה מייננת או חומר ניגוד רעיל. כאן אנו מדגימים את השימוש בPAC למיפוי שלפוחיות השתן עם הזרקה של קליעים נותבים אופטיים אטומים...

Cystography photoacoustic

החדרה-transurethral תהליך מאתגר, לא טוב תואר בספרות. מטרתו של כתב יד זה הוא לתיאור טכניקה עבור החדרת צנתר למסירה intravesical של נוזלים עם חומרים פעילים אל תוך שלפוחית השתן ו/או הערמונית בעכברים זכרים בוגרים של-transurethral.

הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

אנו מתארים את השימוש באולטרסאונד בתדר גבוה עם הדמיה בניגוד כשיטה למדוד את עוצמת השלפוחית, עובי הקיר שלפוחית השתן, שמני מהירות, נפח ריק, משך הריק, וקוטר השופכה. אסטרטגיה זו ניתן להשתמש כדי להעריך את תפקוד המעיים ויעילות הטיפול בדגמי העכבר השונים של תפקוד בדרכי השתן התחתון (LUTD).

Ultrasonography של בוגרים זכר בדרכי השתן עבור בדיקות פונקציונליות השתן

פרוטוקול זה מתאר את ההליך למדידת ריכוזי ATP בלומן של שלפוחית השתן במכרסם מורדם.

ב Vivo מדידה לומינלית של שחרור ATP אורותלי מעורר התנפחות במכרסמים

פרוטוקול זה מספק מדריך לאיטום העור עם ציאנואקרילט למניעת ספיגת שתן על ידי פרווה ועור. הוא כולל הוראות למריחת הדבק על העור, השתלת קטטר שלפוחית השתן ואלקטרודות לציסטומטריה ורישום אלקטרומיוגרפיה של סוגר שופכה חיצוני בעכברים ערים.

אופטימיזציה של טכניקות אורודינמיות בעכבר לשיפור הדיוק 

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל צעד אחר צעד וניתן לשחזור של חסימת שופכן חד צדדית.

מודל עכברי לא בוגר של חסימת שופכה חד צדדית הפיכה

יישום electrophysiology כדי סינפסות נגיש מספק מדד לכימות הפעילות הסינפטית, שימושי בניתוח מוטנטים הסינפטי. מאמר זה מתאר שיטה לנתיחה נהג לחשוף את בצמתים neuromuscular (NMJ)...

הביתור, הקלטה מ צומת C. elegans Neuromuscular

למדו להעריך פגמי חסימה בצומת דרכי השתן באמצעות הזרקת צבע מתילן כחול לכליות עוברי עכברים. שיטה זו מאפשרת הדמיה ברורה של מבנה דרכי השתן וזיהוי הפרעות התפתחותיות.

הערכת בדרכי השתן צומת פגמים חסימה על ידי הזרקת מתילן כחול צבע

גלה סרטונים נוספים