Name: מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: חקור את התפתחות ההיפרפלזיה המיאונטימלית לאחר פציעת בלון באבי העורקים בטן בעכברים. מודל זה מאפשר לזהות גורמים המשפיעים על המחלה ולהבין את מנגנוני המחלה לפיתוח טיפולים עתידיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann על סיוע טכני שלה.
D.W. נתמכה על ידי קרן kade ב Max. סמטת קיבלו מענקים מן Fondation Kröner אחר (2012_EKES.04) פתוח (DE2133/2-1_. ס ס קיבל מענקי מחקר פתוח (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

בעלי חיים קיבל טיפול אנושי בדרישות המדריך העקרונות של חיות מעבדה, שהוכנו על ידי המכון של מעבדה חיה המשאבים, שפורסם על ידי מכוני הבריאות הלאומיים. כל הפרוטוקולים בעלי חיים אושרו על ידי הרשות המקומית אחראית (' Amt לדנציג Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (משרד הבריאות, הגנת הצרכן) המבורג ').
1. קטטר הכנה
הערה: עיין טבלה של חומרי מידע לגבי הצנתר.
<ol><li>סעו צנתר בעל צנתר.</li>
	<li>משוך את guidewire של לומן דרך היציאה דיסטלי החוצה.</li>
	<li>לשים טיפה של דבק מגע דבק בקצה הדיסטלי של קטטר. התראה: ללבוש לטקס או nitrile כפפות.</li>
	<li>מניחים את guidewire בנמל RX של הקטטר, לקדם את זה דרך לומן לנמל דיסטלי. לאחר מכן, תחזיר את guidewire מעט להשאיר רווח של ~ 5 מ מ עד הסוף</li>
	<li>המתן 5 דקות כדי לאפשר את דבק יבש.</li>
	<li>להעביר את guidewire, זה יתוקן. אם זה עדיין ניידים, חזור על השלבים 1.3-1.6.</li>
	<li>ממלאים מזרק 3-mL עם סליין 0.9% 1.5 מ ל וחבר אותו ליציאת האינפלציה בלון.</li>
	<li>לחצו הבוכנה מזרק כדי לבדוק את הבלון האינפלציה. השאר 0.6 מ"ל מלוחים במזרק.</li>
</ol>2. העכבר הכנה
<ol><li>להשיג עכברים זכרים בגיל 14 שבועות במשקל של 30 גרם. הערה: השתמשנו חיות מתקבל מן המכון של חיות מעבדה. השתמשנו C57BL/6J כאן.</li>
	<li>השתמש תא אינדוקציה כדי להרדים את העכבר עם 2.0-2.5% isofurane (קצב הזרימה חמצן 500 mL/min).</li>
	<li>הנח את העכבר על גבו על כרית החימום ולתחזק הרדמה עם facemask לכסות את הפה והאף של העכבר. בדוק עומק מספיק של הרדמה על ידי צובט את הרגליים האחוריות וזנב כדי לוודא העדר רפלקסים.</li>
	<li>להסיר את השיער בבטן באמצעות מכונת תספורת לשיער.</li>
	<li>אפשק את הרגליים האחוריות ולתקן את עמדתם באמצעות הקלטת.</li>
	<li>לחטא את אזור הבטן באמצעות povidone-יוד, ואחריו 80% אתנול. חזור על שלב זה פעמיים נוספות.</li>
	<li>השתמש תלוי כירורגית כדי להבטיח באתר כירורגית לא ללקות. פתח את שכבות העור והשריר לאורך לינאה אלבה עם מספריים (או סכין) לחשוף את אברי הבטן.</li>
	<li>נעוץ המעיים כפפה saline 0.9% לחות, לעטוף כדי לשמור על לחות.</li>
	<li>להשתמש מלקחיים בסדר שני כדי להסיר את רקמת שומן מעל העורק הראשי.</li>
	<li>באמצעות על מזרק אינסולין (30 גרם), להזריק µL 250 של הפארין פתרון (50 U/mL) לתוך נחות הנבוב (IVC) ולא לחכות 3 דקות על תפוצתו מערכתית. הפארין לדכא את hemostasis ומניעת קרישת רצויה במהלך הניתוח.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים שני, לנתח העורקים מתחת לכליות לרדת שלו נגע הסתעפות ואת הקערות ענף היוצא.</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את כלי הדם צד, אשר צפויים להיות ממוקם באזור בחוזקה, עם cauterizer טמפרטורה גבוהה.</li>
	<li>לעצור את זרימת הדם על ידי מחבר חובק למעקה העורקים מתחת לכליות ישירות מתחת העורקים כליות.</li>
	<li>המקום השני מלחציים במיקום דיסטלי מעל ההסתעפות של אבי העורקים.</li>
	<li>לבצע חתך אופקי קטן באמצעות מספריים אל נקודת האמצע בין התפסים לאורך הספינה. הערה: גודל החתך צריך להיות שקול ל- 1/3 של ההיקף של כלי השיט.</li>
	<li>הכנס מזרק עם מחט (30 גרם) לתוך החתך ותורידי את העורקים עם µL 250 הפארין פתרון (50 U/mL).</li>
	<li>בעזרת תפרים 10-0, מקם קשר יחיד אחד בכל צד של החתך.</li>
	<li>מתרחבים העורקים על-ידי הוספת מרחיב את כלי החיתוך ולהפיץ את הכלי מעט. חזור על התרחבות פי 2 עד פי 3.</li>
	<li>לחות הבלון-הקטטר עם סליין 0.9%.</li>
	<li>להכניס הבלון-הצנתר שעברו שיטוח העורקים ולקדם אותו לעבר המלחציים proximal על העורקים.</li>
	<li>כשמגיעים את המלחציים צינתור, בזהירות פתח את המלחציים צינתור, לנפח את הבלון כדי למנוע דליפת דם, על ידי הזרקת ~0.6 מ"ל של תמיסת מלח. הערה: היחס של הבלון המנופח לכלי הוא 1.5:1.</li>
	<li>לקדם הקטטר רטרוגרדית עבור 2 ס מ.</li>
	<li>למשוך את הצנתר מורחבת, תוך מרוקן את הבלון במעט על ידי שחרור את המזרק.</li>
	<li>לחבר מחדש את המלחציים proximal כאשר הקטטר מגיע החתך של אבי העורקים. השטחת קצה הבלון לחלוטין ולהסיר אותו.</li>
	<li>לשטוף את העורקים עם µL 250 הפארין פתרון (50 U/mL) בעזרת מזרק 30 גרם.</li>
	<li>סגירת החתך אבי העורקים בעזרת תפרים 10-0. המקום התפרץ תפרים בכל צד לרוחב, ואחריו תפרים אחד או שניים על הצד הבטני.</li>
	<li>פתח את המלחציים דיסטלי. במקרה של דימום, לסגור את המלחציים שוב ולמקם על תפרים נוספים.</li>
	<li>פתח את המלחציים proximal בקפידה.</li>
	<li>במקום שתי דגימות על התפר לתמוך בה ולעצור את מדממת.</li>
	<li>במקום ועוצרי דימום שנספג על התפר כדי לקיים אותו. הערה: את הדופק של אבי העורקים צריך להיות גלוי רחוק מן החתך.</li>
	<li>מקם את המעיים בחזרה לתוך הבטן.</li>
	<li>יש לשטוף את חלל הבטן עם סליין 0.9% סטרילי, אשר כבר מראש ומחוממת ל- 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>סגור את השכבה שריר הבטן בעזרת תפרים פועל 6-0.</li>
	<li>סגור את העור עם התפרים פועל 5-0.</li>
	<li>להזריק 4-5 מ"ג/ק"ג Carprofen subcutaneously מתנים את העכבר כדי להתעורר. לנטר את החיה עד זכה להכרה, לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. לשמור את החיה לבד בכלוב עד החלמה מלאה.</li>
	<li>הוסף דיפירון למים (50 מ"ג/100 מ"ל) משכחי כאבים במשך 3 ימים ולעקוב אחר בעל החיים מדי יום. בדרך כלל עכברים כמו סוויט הטעם של דיפירון, להתחיל לשתות מיד אחרי הניתוח. אם מועדף, סוכנים להזרקה שחרור-מתמשכת יכול לשמש במקום דיפירון. הערה: תקופת התצפית של מודל זה הוא 28 יום.</li>
</ol>3. histopathology
<ol><li>הקציר העורקים נפגע בלון לאחר 28 יום על-ידי הכנת העכברים כמתואר בצעדים 2.2 ל 2.9.</li>
	<li>להשתמש במספריים כדי להסיר את העורקים נפגע בלון (בין נגע הסתעפות 0.3 מ מ מעל כלי כליות), המתת חסד העכבר על ידי גזירה החוצה את הלב שלה.</li>
	<li>ריקון לומן של כלי השיט עם 0.9% NaCl.</li>
	<li>את הספינה שנקטפו ב 4% paraformaldehyde (PFA) בן לילה, מייבשים אותו להגדיל את ריכוזי אתנול, החל אתנול 70% עבור 2 שעות, 80% אתנול למשך שעה, אתנול 95% עבור שעתיים, אתנול 100% עבור 5 שעות. לאחר מכן, דגירה הדגימות של קסילן 2 שעות 3 פעמים, לפני שחדר הדגימות עם פרפין. הערה: במקום שטיפה הספינה שנקטפו עם 0.9% NaCl, ניתן לרוקן את זה עם 4% מחברים. התראה: PFA קסילן רעילים, צריך להיות מטופל עם טיפול מיוחד.</li>
	<li>להטביע את הדגימה פרפין וחותכים לפרוסות של עובי 5 מיקרומטר, שימוש של מיקרוטום.</li>
	<li>Deparaffinize השקופיות עם קסילן 3 פעמים במשך 5 דקות.</li>
	<li>נוזלים ברקמות שקופיות באמצעות סדרה יורדת של אתנול. להתחיל עם 100% אתנול 2 פעמים במשך 5 דקות, ואחריו 3 דקות של אתנול 95%, 80% ו- 70%.</li>
	<li>כתם על השקופיות עם צביעת trichrome מאסון, כפי שמתואר18.</li>
	<li>מייבשים שקופיות מוכתם אתנול 100% 2 פעמים למשך 10 דקות לכל. נקה עם קסילן 2 פעמים למשך 10 דקות כל והר במדיום הרכבה.</li>
	<li>הצגת השקופיות עם מיקרוסקופ שדה בהיר. להשתמש עדשה עם 5 x הגדלה של מספרי הצמצם של 0.12 תמונה סקירה או עדשה עם 20 x הגדלה עם צוהר המספרי של 0.35 להשגחה מפורט.</li>
</ol>4. immunofluorescence מיקרוסקופ
<ol><li>נוזלים ברקמות שקופיות באמצעות סדרה יורדת של אתנול. להתחיל עם 100% אתנול 2 פעמים במשך 5 דקות, ואחריו 3 דקות של אתנול 95%, 80% ו- 70%.</li>
	<li>לבצע אחזור אנטיגן על ידי חימום השקופיות בפתרון אנטיגן-אחזור בבאניה כעשרים דקות.</li>
	<li>ומצננים את השקופיות עד לטמפרטורת החדר.</li>
	<li>לאחר כביסה השקופיות עבור שלוש פעמים בתמיסת פוספט buffered (PBS), להחיל פתרון חסימה אנטיגן על חלקים למשך 30 דקות.</li>
	<li>רחץ שקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות עם PBS.</li>
	<li>דגירה מקטעים עם נוגדן ראשוני מעורבבת עם diluent הראשית נוגדן. הערה: ריכוז, דגירה המתאים צריכה להיבחר בנפרד עבור כל נוגדן.</li>
	<li>רחץ שקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות עם PBS להסיר נוגדן לא מאוגד.</li>
	<li>דגירה מקטעים עם נוגדנים משניים מראש מצומדת מעורבבת עם diluent משני נוגדן. הערה: ריכוז, דגירה המתאים צריכה להיבחר בנפרד עבור כל נוגדן.</li>
	<li>הסר נוגדנים לא מאוגד ע י שטיפת השקופיות עבור 5 דקות שלוש פעמים.</li>
	<li>Counterstain את גרעין התא באמצעות 4', 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי) למשך 15 דקות; ריכוז דאפי הסופי צריך להיות 350 ננומטר.</li>
	<li>הר שקופיות ב immunofluorescence תואם הרכבה פתרון. הערה: באמצעות הפתרון הלא הרכבה מאפילה את האות זריחה.</li>
	<li>הצגת שקופיות עם מיקרוסקופ זריחה. השתמש עדשת הגדלה 40 x עם הפתח המספרי של 1.3.</li>
</ol>

<ol><li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Natl+Vital+Stat+Rep%22%5BJournal%5D)">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).</li>
<li>Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+proliferation+of+smooth+muscle+cells+as+an+explanation+for+recurrent+coronary+artery+stenosis+after+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).</li>
<li>Greenwald, S. E., Berry, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+vascular+grafts%3A+the+importance+of+mechanical+and+haemodynamic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties.</a> J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).</li>
<li>Majesky, M. W., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+diversity+in+arterial+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle diversity in arterial wound repair.</a> Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).</li>
<li>Owens, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+differentiation+of+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells.</a> Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).</li>
<li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li>
<li>Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+atherosclerosis%3A+a+comprehensive+review+of+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice.</a> Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).</li>
<li>Karas, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+intimal+proliferation+after+balloon+injury+and+stenting+in+swine%3A+an+animal+model+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis.</a> J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).</li>
<li>Ip, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelets%2C+thrombin+and+hyperplasia+in+restenosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).</li>
<li>Mason, R. G., Read, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+species+differences+in+fibrinolysis+and+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res%22%5BJournal%5D)">Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation.</a> J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).</li>
<li>Lafont, A., Faxon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+animal+models+of+post-angioplasty+restenosis+sometimes+poorly+predict+the+outcome+of+clinical+trials%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).</li>
<li>Matter, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+balloon-induced+inflammation%2C+proliferation%2C+and+neointima+formation+in+apolipoprotein+E+%28ApoE%29+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice.</a> Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).</li>
<li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Simon, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+neointimal+formation+in+Mac-1%28-%2F-%29+mice+reveals+a+role+for+inflammation+in+vascular+repair+after+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty.</a> J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).</li>
<li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li>
<li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide%2C+gender%2C+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li>
<li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myointimal+hyperplasia%3A+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).</li>
<li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice%3A+an+introduction+of+two+valid+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> J Vis Exp. (87), e51459(2014).</li>
<li>Deuse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichloroacetate+prevents+restenosis+in+preclinical+animal+models+of+vessel+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury.</a> Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal ומאפשרת חקר התהליכים הפתולוגיים כבסיס ובדיקות של תרופות חדשות או אפשרויות טיפוליות.
השלב הקריטי ביותר ב פרוטוקול זה הוא חסיפה של אבי העורקים. טיפול מיוחד צריך להיות משולם במהלך שלב זה, כפי חסיפה מופרז יוביל היווצרות מפרצת וכישלון מודל. מצד שני, אם חסיפה מבוצע דיו, יפתחו myointima קטן מדי. לכן, האינטנסיביות של השלב חסיפה חיונית התוצאה ואת ההצלחה של מודל זה בעל חיים.
לגבי הליך כירורגי, חיוני שתי החומות של כ...

היצרות עורקים בתוך העורקים הכליליים והיקפי יש השפעה גדולה על התחלואה ואת התמותה של חולים1. אחד כבסיס מנגנון פתולוגי הוא myointima היפרפלזיה (MH), אשר מאופיין על ידי התפשטות מוגברת, הגירה, סינתזה של חלבונים מטריצה חוץ-תאית השריר החלק בכלי הדם תאים (SMC)2. התקן SMC ממוקמים בשכבת המדיה של כלי השיט ולהעביר על גירוי על פני השטח של לומן. אותות מופחתים כוללים גורמי גדילה, ציטוקינים, תא-תא מגע, ליפידים, מטריצה חוץ-תאית רכיבים ו הטיה מכני ולמתוח כוחות3,4,5,6. פציעות של הקיר כלי, פתולוגי או iatrogenic, תאי אנדותל לגרום נזק תאי שריר חלק, לעורר תגובות דלקתיות, ובכך להוביל MH7.
מודלים בבעלי חיים שונים זמינים כעת ללמוד פגיעה עורקית ו היפרפלזיה myointima. חיות גדולות כמו חזירים או כלבים יש את היתרון של שיתוף, עורק דומה ו אנטומיה כלילית עם בני אדם, מתאימות במיוחד עבור מחקרים חוקרת אנגיופלסטיה טכניקות, הליך והתקני8. עם זאת, חזיר הדגמים יש החיסרון של9,גבוהה יותר thrombogenicity10, בעוד כלבים יש רק בתגובה כלי פציעה11מתון. בנוסף, כל הדגמים בעלי חיים גדולים דורשים דיור מיוחדים, ציוד ו צוות, אשר מחוברים עם עלויות גבוהות, אינם זמינים ב מוסד. הדגמים בעלי חיים קטנים כוללים חולדות ועכברים. בהשוואה לחולדות, עכברים יש את היתרונות של עלות נמוכה יותר את קיומו של מגוון רחב של דגמים מדהימה. המודל המתואר בסרטון הזה יכול להיות משולב עם ספקיות-/-עכברים שקיבלו עם דיאטה מערבית לחקות מקרוב את ההגדרה הקלינית של אנגיופלסטיה כלי טרשת עורקים12. דגמים קודמים המושרה פגיעה בכלי הדם דרך תיל פציעה13, לייבוש הנוזלים14, האביב15או פציעה השרוול16. מאז מהות הפגיעה ישפיע במידה רבה את הפיתוח ואת חוקת MH, באמצעות צנתר בלון כדי לגרום לפציעה כלי היא הדרך הטובה ביותר כדי לחקות את ההגדרה הקלינית.
במאמר זה אנו מתארים שיטה לזירוז MH עם קטטר בלון בעכברים. השימוש של קטטר בלון (1.2 מ"מ x 6 מ"מ) עם יציאת RX (איור 1 א') מאפשר גירוד השכבה intimal, במקביל, תנאי הגיוס של overdistension של כלי השיט. שני הגורמים הללו הם גורמים חשובים עבור התפתחות MH. הזמן תצפית עבור דגם זה הוא 28 יום17.

<table><tbody><tr><td>10-0 תפר אתילון</td><td>Ethicon</td><td>2814G</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל מזרק</td><td>BD רפואי</td><td></td> 309658 <td></td></tr><tr><td>37% HCl</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>5-0 תפר פרולן</td><td>Ethicon</td><td></td> EH7229H <td></td></tr><tr><td>6-0 תפר פרולן</td><td>Ethicon</td><td>8706H</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוקסין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>F8129-25G</td><td>תמיסת אחזור אנטיגן מכתים טריכרום</td></tr><tr><td></td><td>Dako</td><td>S1699</td><td></td></tr><tr><td>Azophloxin</td><td>Waldeck</td><td>1B-103</td><td>מכתים טריכרום</td></tr><tr><td>משחת עיניים ואף</td><td>Bayer</td><td>1578675</td><td>משחת עיניים</td></tr><tr><td>תמיסת בטדין</td><td>Betadine Purdue Pharma</td><td>NDC:67618-152</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>צ'ארלס ריבר</td><td>מספר מלאי 000664</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטור מהדק</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td>JAW DIMS: 4 x 0.75 מ"מ
אורך: 13 מ"מ</td></tr><tr><td>קולגן 3</td><td>abcam</td><td>ab7778</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>תרמו פישר</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>חמור נגד עיזים IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A21432</td><td>נוגדן משני</td></tr><tr><td>חמור נגד ארנב IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>נוגדן משני</td></tr><tr><td>חמור נגד ארנב IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A11055</td><td>משני נוגדן</td></tr><tr><td>חמור נגד ארנב IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A31572</td><td>נוגדן משני</td></tr><tr><td>אתנול 70%</td> <td>Th. Geyer</td><td>2270</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 96%</td><td>Th. Geyer</td><td>2295</td><td></td></tr><tr><td>אתנול מוחלט</td><td>Th. Geyer</td><td>2246</td><td></td></tr><tr><td>FAP</td><td>abcam</td><td>ab28246</td><td>נוגדנים</td></tr><tr><td>מלקחיים משובחים</td><td>כלים מדעיים</td> <td>עדינים11251-20</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>סטנדרטיים כלי מדע עדין</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית קרחונית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>537020</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ שיער</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Rotexmedica</td><td>PZN 3862340</td><td>25.000 I.E./mL</td></tr><tr><td>ערכת צריבה בטמפרטורה גבוהה</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Image-iT FX משפר אותות</td><td>Invitrogen</td><td>I36933</td><td>פתרון חסימה</td></tr><tr><td>ירוק בהיר SF</td><td>Waldeck</td><td>1B-211</td><td>מכתים טריכרום</td></tr><tr><td>מהדק מיקרוכירורגי</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>מיקרו-סרפין - 4 מ"מ</td></tr><tr><td>MINI TREK קטטר הרחבה כלילית 1.20 מ"מ x 6 מ"מ / החלפה מהירה</td><td>Abbott</td><td>1012268-06U</td><td></td></tr><tr><td>הידרט חומצה מוליבדטופוספורית</td><td>Merck</td><td>1.00532.0100</td><td>צביעת טריכרום</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td> <td>B.Braun</td><td>PZN 06063042 Art. Nr.: מחזיק</td> מחט 3570160 <td></td></tr><tr><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-14</td><td></td></tr><tr><td>Novaminsulfon</td><td>Ratiopharm</td><td>PZN 03530402</td><td>Metamizole</td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Waldeck</td><td>1B-221</td><td>Trichrome צביעת</td></tr><tr><td>פרפין</td><td>Leica ביו-מערכות</td><td>REF 39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>PFA 4%</td> <td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>#157135S</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת Ponceau S</td><td>Serva Electrophoresis</td><td>33427</td><td>צביעת טריכרום</td></tr><tr><td>מדלל נוגדנים ראשוני</td><td>Dako</td><td>S3022</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold</td><td>Mounting Solution Thermo Fischer</td><td>P36930</td><td>פתרון הרכבה לשקופיות מוכתמות אימונופלואורסצנטיות</td></tr> קצה <tr><td>עדין להחלפה</td><td>Bovie</td><td>H101</td><td></td></tr><tr><td>Resorcin-Fuchsin Weigert</td><td>Waldeck</td><td>2E-30</td><td>Trichrome מכתים</td></tr><tr><td>רימאדיל</td><td>פייזר</td><td>400684.00.00</td> מספריים <td>קרפרופן</td></tr><tr><td></td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כלים</td><td>מדעיים</td> <td>עדינים בסגנון Vannas15000-03</td><td></td></tr><tr><td>מדלל נוגדנים משני</td><td>Dako</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>דבק מהיר פעולה MINIS 3x1g</td><td>UHU</td><td>45370</td><td>Cyanoacrylate</td></tr><tr><td>מתלה שקופיות</td><td>טד פלה</td><td>21057</td><td></td></tr><tr><td>SM22</td><td>abcam</td><td>ab10135</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>SMA</td><td>abcam</td><td>ab21027</td><td>צלחת</td></tr><tr><td>מכתים</td><td>נוגדנים טד פלה</td><td>21075</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Leica</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Tabotamp fibrillar</td><td>Ethicon</td><td>431962</td><td>סרט</td></tr><tr><td>כירורגי נספג hemostat Transpore 3M</td><td></td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>U-100 מזרק אינסולין</td><td>BD</td><td></td> מרחיב כלי 324825 <td></td>רפואי</tr><tr><td></td><td>כלי מדע עדין כלים</td><td>18603-14</td><td></td></tr><tr><td>Vitro-Clud</td><td>Langenbrinck</td><td>04-0001</td><td></td></tr><tr><td>ערכת המטוקסילין ברזל Weigerts</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td>טריכרום מכתים</td></tr><tr><td>קסילן</td><td>Th. גייר</td><td>3410</td><td></td></tr></tbody></table>

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה myointimal באבי העורקים בטן העכבר

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

השימוש במודלים חיוני לצורך הבנה טובה יותר של MH, אחד הגורמים העיקריים עבור היצרות העורקים. במאמר זה נדגים מודל חסיפה מאתר בלון, אשר ניתן להשוות עם כלי ויצר מודלים פגיעה בבעלי חיים גדולים. דגם חסיפה העורקים עם אחרים-קטטרים מחקה את ההגדרה הקלינית ומוביל שינויים דומים pathobiological, פיזיולוגיים. בקצרה, לאחר ביצוע חתך אופקי ב אבי העורקים abdominalis, קטטר בלון להיות מוכנס לתוך הכלי, מנופח, הציג retrogradely. האינפלציה של הבלון יוביל אינטימה פציעה, overdistension של כלי השיט. לאחר הסרת הקטטר, החתך אבי העורקים תהיה סגורה עם אוקיי יחיד. המודל המוצג במאמר זה הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הוא מתאים במיוחד להערכת יקר סוכני טיפולית ניסיוני, אשר יכול להיות מיושם באופן חסכוני. באמצעות זנים נוקאאוט-עכבר, וצריך להעריך את ההשפעה של גנים שונים על פיתוח MH.

חסיפה בלון הוא מודל מתאים ללמוד את התפתחות MH בעכברים. חיות להתאושש טוב הניתוח והצג פוסט-פעולה מצב גופני מעולה. הקמנו מודל זה בעכברים 50 עם פחות משיעור המוות 3% עקב הליך כירורגי. דמויות 1B -C הצג את השלבים החשובים כירורגי. לאחר חתך בעור לאורך לינאה אלבה, לזהות את אבי העורקים abdominalis. במקום מלחציים השתלה (איור 1B). עושים חתך קטן באמצע אב העורקים, לקבוע צנתר בלון לתוך כלי הקיבול שקופיות הוא יי...

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

המטרה הכוללת של מערכת מודל מבוססת עכבר זו היא לחקור את התפתחות ההיפרפלזיה המיואינטימית לאחר פגיעה בבלון אבי העורקים. מערכת מודל זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח לגבי היפרפלזיה מיואינטימית כגון אילו גורמים תורמים להתפתחותה. על ידי חקר ההתפתחות של היפרפלזיה מיואינטימלית בעכברים טרנסגניים אנו מקווים להשיג הבנה טובה יותר של הפתו-מנגנון של המחלה.יתרון נוסף של מודל בעלי חיים זה, הוא שהמחלה מתקדמת במהירות. תוך שבועות ספורים אנחנו נחקרים בעכברים. ראשית, הכינו את הצנתר הנדרש.הסר אותו מהמחזיק ומשוך את חוט ההנחיה החוצה דרך הלומן דרך היציאה הדיסטלית. לאחר מכן הכניסו טיפה של ציאנואקרילט על הקצה הדיסטלי של הקטטר והזינו את חוט ההנחיה דרך יציאת ה-RX, ואז דרך הלומן והחוצה מהיציאה הדיסטלית. לאחר מכן, משוך מעט את חוט ההנחיה לאחור כדי להשאיר כחמישה מילימטר בולטים החוצה ולתת לדבק להתייבש.מאוחר יותר מלאו מזרק של שלושה מיליליטר ב-1.5 מיליליטר של 0.9% מלח וחברו אותו ליציאת ניפוח הבלון של הצנתר. לאחר מכן לחץ על הבוכנה כדי לבדוק את ניפוח הבלון. השאירו כ- 0.6 מיליליטר מלח במזרק.לאחר מכן, הכינו את העכבר לניתוח. להרדים אותו בתא איזופלורן ומאוחר יותר, במהלך הניתוח, להעביר איזופלורן דרך חרוט אף. לפני שתמשיך, אשר עומק מספיק של הרדמה על ידי צביטה של כפות הרגליים האחוריות והזנב כדי לוודא היעדר רפלקסים.לאחר מכן הס

balloon-based-injury-to-induce-myointimal-hyperplasia-mouse-abdominal

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מראה שני מודלים של פיתוח פלאק בעורקי intimal עכבריים ומדגיש את ההבדלים בהיפרפלזיה myointimal וטרשת עורקת.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

פרוטוקול זה משתמש קטטר בלון כדי לגרום לפציעה intraluminal על העורק הראשי חולדה ולהלן לעורר hyperplasia neointimal. זהו מודל מבוסס היטב לחקר המנגנונים של שיפוץ של כלי דם בתגובה לפציעה. כמו כן הוא משמש באופן נרחב כדי לקבוע את תוקפו של גישות טיפוליות פוטנציאליות.

כלי דם בלון פגיעה וIntraluminal מנהל בעורקי תרדמת העכברוש

אנו מתארים טכניקה כירורגית המייצרת פגיעה בחוט בעורק הירך של עכברים כדי לגרום להיפרפלזיה ניאו-אינטימית לשמש כמערכת בדיקה מודל לאספקה פרי-וסקולרית של תרכובות טיפוליות לעיכוב רסטנוזיס.

דגם Murine של עורק הירך חוט פגיעה בהשרשה של perivascular החדרת תרופות תיקון

השתלה תת עורית של משאבות האוסמוטי מספקת גישה נוחה למסירה ממושכת ועקבית של תרכובות. גישה זו נעשתה שימוש נרחב כדי ללמוד שני פרצות אב העורקים בבטן ובית חזה בעכברים.

תת עורית אנגיוטנסין II עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים

Restenosis לאחר הליכים Cardiovascular (ניתוח מעקף, אנגיופלסטיקה, או stenting) היא בעיה משמעותית להפחית את עמידות של נהלים אלה. טיפול אידיאלי יהיה לעכב תפוצת שריר חלקה (VSMC) תוך קידום התחדשות האנדותל. אנו מתארים מודל להערכה סימולטנית של התפשטות VSMC ותפקוד האנדותל in vivo.

Murine אבי העורקים למחוץ פגיעה: יעיל<em&gt; בויבו</em&gt; מודל של תאים שרירים חלקה תפוצת ו אנדותל פונקציה

מודלים חייתיים של טרשת עורקים חיוניים כדי להבין את המנגנון וכדי לחקור גישות חדשות כדי למנוע התפתחות פלאק או קרע, סיבת המוות המובילה בעולם המתועש. פרוטוקול זה משתמשת בשילוב של בלון פציעות ותזונה עשירה כולסטרול לזירוז טרשת עורקים הפלאק בעורק iliac ארנב.

הדגם הארנב של טרשת עורקים מואצת: מבט מתודולוגי הפגיעה בעורק Iliac בלון

הפציעה בבלון עורק התרדמה של החולדה מחקה את הליך האנגיופלסטיקה הקליני המבוצע כדי לשחזר את זרימת הדם בכלי טרשת עורקים. מודל זה גורם לתגובת פגיעה עורקית על ידי התנפצות דופן העורקים, ו denuding את השכבה האינטימית של תאי אנדותל, בסופו של דבר גורם שיפוץ ותגובה היפרפלסטית מולדת.

עכברוש עורק הראש מבוקר לחץ על פגיעה בבלון מגזרי עם יישום טיפולי Periadventitial

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית מתוקננת עבור מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של אלסטאז להרפתקנטיה של אבי העורקים הבטן האינפרא-יותרת בעכברים.

עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז

כתב יד זה מציג פרוטוקול לביסוס מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר באמצעות סידן כלורי ואלסטאז, המשלב את היתרונות של שיטות מידול קודמות. מודל זה יכול לשמש לחקר המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס מפרצת אבי העורקים הבטני.

מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר על ידי Periadventitial סידן כלורי והסננת אלסטאז

פרוטוקול זה מספק שיטה ניתנת לחזרה ואמינה להשראת מפרצות אאורטה בטנית (AAAs) בעכברים C57BL/6 באמצעות רגישות לאלסטין ויישום אלסטאז פריוסקולרי, כמודל AAA הכולל רכיב רגישות חיסונית.

יצירת מודל אמין של אנוריזמה באאורטה בטנית בעכבר באמצעות רגישות לאלסטין ואלסטאז פריוסקולרי

חקור את התפתחות ההיפרפלזיה המיאונטימלית לאחר פציעת בלון באבי העורקים בטן בעכברים. מודל זה מאפשר לזהות גורמים המשפיעים על המחלה ולהבין את מנגנוני המחלה לפיתוח טיפולים עתידיים.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

גלה סרטונים נוספים