הקמתה של תרבות העיקרי של סרקומה של רקמות רכות, נגזר החולה

המטרה הכוללת של מודל פרה-קליני אנושי זה הנגזר מרקמת גידול שנכרתה בניתוח היא להשיג הקמת תרבית ראשונית של סרקומה של רקמות רכות שמקורן בחולה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח לגבי הפתופיזיולוגיה של סרקומה של רקמות רכות והיא מייצגת כלי פרה-קליני חשוב לחיזוי תגובה לטיפול. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שמדובר במודל פרה-קליני אנושי לחלוטין.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול בסרקומה של רקמות רכות מכיוון שניתן לבדוק את המודל הפרה-קליני הזה עם תרופות חדשניות קונבנציונליות כדי לחקור את פעילותן ומנגנון הפעולה שלהן. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי סרקומה של רקמות רכות, ניתן ליישם אותה גם לחקר האינטראקציה בין תאי רקמה רכה של תאים סרטניים. אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו בגלל ההטרוגניות של רקמות הגידול ובבידוד תאי הגידול

הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שהבחירה הראשונית של תאי סרקומה של רקמות רכות ושלבי CD דורשים כמות של ניסיון לפני שניתן להשיג מיומנות. יש לקבל דגימות גידול במיכל שתן סטרילי של 100 מיליליטר עם 50 מיליליטר של מדיום גלוקוז נמוך DMEM אטום בסרט פרפין. ניתן לשמור את הדגימות בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך שלוש שעות לכל היותר לאחר כריתת הגידול.

עקר את מכסה המנוע של תרבית הרקמה עם 70% אתנול ועיקר פינצטה INOX מפלדה עם 70% אתנול. הסר את סרט הפרפין ממיכל השתן והשליך. נקה את החלק החיצוני של מיכל השתן עם אתנול 70%.

פתחו צלחת פטרי מרובעת, ואז פתחו את מיכל השתן והשתמשו בפינצטה הפלדה המעוקרת של INOX כדי להעביר את דגימות הגידול לתוך הצלחת. הוסף PBS ושטוף את דגימת הגידול פעמיים. לאחר הכביסה, גרוס דק את דגימת הגידול לחתיכות בגודל של מילימטר עד שניים.

העבירו רבע מהדגימה הכוללת לצינור של שני מיליליטר. לאחר מכן הוסף מיליליטר אחד של מגיב TRIzol לצינור והקפיא מיד במינוס 80 מעלות צלזיוס. אוספים את שאר חומר הגידול הגרוס דק בשפופרת של 15 מיליליטר ומוסיפים ארבעה מיליליטר של תמיסת קולגנאז מסוג 1.

לאחר מכן יש לדלל את תמיסת הקולגנאז מסוג אחד עם ארבעה מיליליטר של מדיום תרבית, לסגור את הצינור ולאטום בניילון פרפין. דגירה בחום של 37 מעלות צלזיוס על שייקר מתגלגל למשך 15 דקות להפעלת העיכול. לאחר 15 דקות, הניחו את הצינור עם השייקר המתגלגל בטמפרטורת החדר והשאירו אותו למשך הלילה.

למחרת, סנן בעדינות את מתלה התאים דרך מסנן סטרילי של 100 מיקרון לתוך צינור של 50 מיליליטר. לאחר מכן שטפו את המסנן במדיום תרבית וצנטריפוגה את המסנן ב -225 פעמים גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. השליכו את הסופרנטנט על ידי היפוך הצינור והשעו מחדש את התאים עם מיליליטר אחד עד שניים של מדיום תרבית.

לאחר ביצוע ספירת תאים וחישוב מספר התא, צלחת התאים בתרבית חד-שכבתית סטנדרטית בצפיפות של 80,000 תאים לסנטימטר מרובע. להכנת דגימה ציטולוגית, התחל באיסוף 100,000 תאים ב-200 מיקרוליטר של מדיום תרבית. הכניסו את התמיסה למשפך חד פעמי המצויד בפילטר ומותקן במגלשת זכוכית.

פתח את הציטוצנטריפוגה והכנס את הדגימות. לאחר ציטוצנטריפוגה, השליכו את המשפך המצויד במסנן. לאחר מכן תקן את השקופית באצטון למשך 10 דקות, ואחריה כלורופורם למשך חמש דקות.

מעבר תאי STS כאשר המפגש הוא בסביבות 90% לאחר שטיפת יריעת התא עם PBS, הוסף שניים עד שלושה מיליליטר של 1X טריפסין ב-PBS ודגירה במשך שלוש עד חמש דקות ב-37 מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, השתמש בפיפטה של 200 עד 1,000 מיקרוליטר כדי לאסוף את התאים המנותקים ולהעביר לצינור של 15 מיליליטר. הוסף ארבעה מיליליטר מדיום כדי לעצור את התגובה האנזימטית.

ואז צנטריפוגה ב 225 פעמים גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר השלכת הסופרנטנט, השעו מחדש את כדור התא על ידי הוספת מיליליטר אחד של מדיום וזרעו את התאים לתוך צלחת תרבית חדשה או בקבוקון. תאי גידול בודדו מליפוסרקומה שהוסרה בניתוח מחולה בן 54.

הכלאה פלואורסצנטית באתרה בוצעה כדי לזהות הגברה של MDM2 בדגימת רקמת המטופל. ניתוח ציטולוגי של הגברת MDM2 בתאי גידול מבודדים מאשר הקמת תרבית ראשונית שמקורה בחולה. שינויים מורפולוגיים מהבסיס נגרמו כאשר תרביות טופלו באיפוספמיד, אפירוביצין, איפוספמיד ואפירוביצין, טרבקטדין ואריבולין.

שלושה שכפולים עצמאיים בוצעו עבור כל ניסוי כדאיות. התוצאות אישרו את רגישות התרביות לכימותרפיה. הטיפול הפעיל ביותר היה שילוב של Ifosfamide ו-Epirubicin, טיפול קו ראשון המשמש ב-ALT-DDLPS מתקדם או גרורתי.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 15-16 שעות אם היא מבוצעת כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לגרוס דק את דגימת הגידול. לאחר הליך זה, ניתן לבצע מגוון ניתוחים במורד הזרם, כולל פרופיל ביטוי גנים, ניתוח אימונוהיסטוכימי או בדיקת ציטוטוקסיות על מנת לענות על שאלות נוספות על ביולוגיה של סרקומה של רקמות רכות.

לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום סרקומה של רקמות רכות לחקור את ההיסטוריה הטבעית של ממאירויות אלה שנחקרו בצורה גרועה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להקים תרבית ראשונית של סרקומה של רקמות רכות שמקורן במטופל. אל תשכח שעבודה עם דגימות ביולוגיות ותרופות עלולה להיות מסוכנת ביותר ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות כמו לבישת כפפות ועבודה עם מכסה אדים בעת ביצוע הליך זה.