Name: הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה In Vivo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: למד הערכת קרישת פלסמה ברקמת כבד במודל חזיר גדול in vivo. השיטה משתמשת בטרמוגרפיית אינפרא-אדום ודופלר לייזר לניטור מיקרו-זרימה וטמפרטורה. זהו כלי יעיל לניתוחי כבד קליניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים לא תודות לך

כללים נשלטת על ידי החקיקה הגרמנית מחקרים שנעשו בבעלי חיים, כמו גם עקרונות של מעבדה חיה טיפול (מכוני הבריאות הלאומיים הפרסום עורך 8, 2011) עקבו אחריך ניתנה ההרשאה רשמי ממשרד ממשלתי טיפול בבעלי חיים (Landesamt לדנציג נאטור, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, אסן, גרמניה).
1. בעלי חיים
<ol><li>משתמשים בחזירים נשי צמחי תרבות מסורתיים גרמני (במשקל של 25-30 ק"ג) שוכן בתוך כלובים פתוח.</li>
	<li>השתמש חיות 5 לכל קבוצה (ארגון והליום).</li>
	<li>לאפשר את החיות להתאקלם בסביבה למשך לפחות שבוע לפני הניסויים. חיות מהירות עבור 24 שעות לפני הניתוח עם גישה חופשית למים.</li>
</ol>2. הרדמה
<ol><li>Premedicate החיות עם זריקה תוך שרירית של קטאמין (15 מ"ג/ק"ג משקל גוף [BW]), חריגות השירותים הווטרינריים (10 mg/kg BW) אטרופין (0.1 mg/kg BW) 10 דקות לפני אינדוקציה של הרדמה.</li>
	<li>גישה ורידית היקפיים היא הוקמה על ידי הצבת בצינורית 22-מד לתוך הווריד האוזן.</li>
	<li>לגרום הרדמה כללית על ידי הזרקת עירוי propofol 2 מ"ג/ק"ג משקל גוף.</li>
	<li>למקם את החיה במצב פרקדן, לבצע חתך אורכי העור ב- groove צוואר מעל באורך של 2 ס מ. וריד אתר דרך ההכנה בוטה של רקמת השומן התת עורית. הכנס בצינורית, ואז Seldinger תיל.</li>
	<li>. משכי בצינורית והכנס קטטר בצרפתית 14 מעבר לגדר מדריך. תמשוך את החוט. להתחבר קטטר הסיומת, שמלמדות את הצנתר על ידי רצועה או התפר.</li>
	<li>. תוציא את הלשון והכנס laryngoscope ישר. השתמש את קצה laryngoscope כדי להוריד את הגרון. הכנס את הצינורית בתוך מיתרי. למקם את השרוול תחת glottis ונפח.</li>
	<li>לאוורר עם 40% חמצן ב 20-26 נשימות לדקה, נפח ענק של 10 מ"ל/ק"ג כדי לשמור על המתח דו תחמוצת פחמן חלקי קצה-גאות בין 36 ל 42 מ מ כספית.</li>
	<li>לשמור על הרדמה עם איזופלוריין-ריכוז של 1-1.5%, פנטניל-ריכוז של 3-4 µg/ק ג/שעה.</li>
	<li>לספק תמיסת רינגר לקטט בשיעור התחלתי של 4 מ"ל/ק"ג/h, ולהגדיל לאחר פתיחת בטן כדי שיעור קבוע אינפוזיה של 8 מ"ל/ק"ג/שעה.</li>
</ol>3. ניתוח ו קרישה בפלסמה
<ol><li>מקם את החיה במצב פרקדן על שולחן כירורגי סטנדרטי.</li>
	<li>לחטא את העור על-ידי החלת מחטא כירורגי רגיל (2-פרופנול 45 גרם/100 גרם, 1-פרופנול 10 גרם/100 גרם, Biphenyl-2-ol 0.2 גרם/100 גרם) עם מקלון כירורגי עבור 3 פעמים.</li>
	<li>לבצע פתיחה של קו האמצע רחב הבטן מן הסרעפת כדי לחיקו עם איזמל ולהתקין רטרקטורים כירורגיים.</li>
	<li>לעבור על המכשיר קרישה פלזמה, לפתוח בקבוק גז ארגון או הליום, בהתאם הגז המוביל בשימוש. להתאים את זרימת הגז לשלטון 3 L לדקה קרישה בחר התקן פלט כרצונכם. הערה: שני הגזים האצילים, ארגון או הליום, יכול לשמש עבור קרישה בפלסמה. קרישה תופעות דומות. ראה התייחסות7 לקבלת פרטים.</li>
	<li>מבצע קרישה בפלסמה הכבד האונה השמאלית כפי שתואר לעיל7. השתמש תבנית טיטניום (1 x 1 ס מ מרובע צמצם2) כדי לתקנן את אזור קרישת הדם. מצב של קרישת חסר עבור 5 s עם מרחק בדיקה של 1 ס מ. ניתן לבצע את coagulations עם הגדרות צריכת חשמל שונה לצד מרחק קצר בין coagulations של 5 מ מ (איור 1).</li>
	<li>עבור קציר של הכבד, לחלק כל החיבורים ligamentous אל הכבד. לבודד ולחלק pedicle הכבד מעל flexure תריסריון מעולה להשאיר חלקים ארוכים של וריד שער הכבד, צינור המרה המשותף. לחלק את הווריד בכליות מעל ומתחת הכבד ולאחזר את האיבר.</li>
	<li>לאחר המסיק הכבד, החזירים היו מורדמים על ידי עירוי מינהל 0.16 g/kg BW פנטוברביטל.</li>
	<li>על הניסויים לחץ פרץ, נכרות חצי של האונה השמאלית של הכבד המדיאלי עם מספריים חדות. פלזמה-מצב של קרישת חסר החתך על פני השטח (הספק 100W) או לאטום את המשטח לחתוך עם דבק פיברין (איור 2).</li>
</ol>4. פיפטות מדידה
הערה: לייזר ספקטרוסקופיה דופלר ניתן לקבוע את זרימת הדם בתוך הרקמה באמצעות מדידה של דופלר הנגרמת על ידי התנועה של אריתרוציטים. האות לייזר עולה בקנה אחד עם המספר של אריתרוציטים נע. ספקטרוסקופית לייזר דופלר נמצא בשימוש קליני (למשל השתלת ברפואה) ומאז לאמת מספר פעמים15.
<ol><li>. הפעילי את לייזר דופלר זרימה ואת ספקטרופוטומטרים השתמש בדיקה שטוח.</li>
	<li>קח למדידות בסיסית עבור זרימת והמהירות. לשמור או הערה הערכים.</li>
	<li>לבצע קרישת הדם כמתואר תחת 3.5.</li>
	<li>במקום המכשיר שטוח על אתרי קרישת הדם, מדד תזרים והמהירות. שוב, לשמור או הערה ערכים.</li>
	<li>חזור על כל הגדרות צריכת החשמל של ההתקן coagulator.</li>
</ol>5. הטמפרטורה מדידה
<ol><li>להחליף את המערכת (המצלמה תרמוגרפיים המחברת, מד חום אינפרא אדום) ולתת לו לרוץ במשך לפחות שעה לפני ביצוע מדידות.</li>
	<li>כוונון פוקוס ולהציג מסגרת על המצלמה תרמוגרפיים באתר קרישת הדם. רצפים אינפרא-אדום יכול להתגלות עם הרזולוציה המרחבית של 1024 x 768 פיקסלים עם טמפרטורה רזולוציה גדולה יותר 20 ח"כ. לקחת בחשבון, זה האזור של קרישת הדם ואת הרקמה הסובבת — מושפעים על-ידי העברת החום – ממוקם באמצע הנוף. הערה: זה צריך לכלול פיקסלים רבים של המסגרת ככל האפשר עבור המרחבי של פתרון אופטימלי.</li>
	<li>תהליך קרישת הדם רשומה עם coagulator פלזמה על פני הכבד עם המצלמה תרמוגרפיים על פני תקופה 2-מין.</li>
	<li>לנתח את רצפי תמונות עם התוכנה ניתוח הדמאה תרמית: להגדיר אזורים מעניינים. הערה: תוכנות מחשב הקורס לטמפרטורה המתאימה רשע לאורך זמן.</li>
</ol>6. מדידת העומק קרישה
<ol><li>הקציר האונה השמאלית של הכבד המדיאלי עם מספריים חדות.</li>
	<li>לסלק את האתרים קרישה עם עובי 1 ס מ. חותכים למקטעים האורך בעובי 3 מ מ עיבוד נוסף.</li>
	<li>תיקון דגימות רקמה ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה עם נייטרלי 10% buffered פורמלין. חום שעוות פרפין 2 ° C מעל נקודת ההיתוך ולהטביע פרוסות. תהליך בן לילה.</li>
	<li>לבצע צביעת Hematoxylin/אאוזין.<ol>
<li>Deparaffinize ומעניק הרקמה בטבילת לאחר מכן 2 x קסילן, 100% אתנול (EtOH), 95% EtOH, 70% EtOH, יונים H2O למשך 2 דקות.</li>
		<li>כתם דגימת הרקמות של מאייר פתרון Hematoxylin למשך 3 דקות.</li>
		<li>עכשיו לשטוף במי ברז למשך 5 דקות.</li>
		<li>כתם הרקמה אאוזין פתרון במשך 3 דקות.</li>
		<li>לשטוף ב 2 x EtOH 95% ולאחר מכן קסילן למשך 3 דקות. הר עם המדיום הרכבה סטנדרטי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>. הפעילי את המערכת (מיקרוסקופים המחוברים מצלמה, תוכנות ליצירת תמונות) הצג את כל המקטעים עם 40 X הגדלה.</li>
	<li>קח תמונה של מיקרומטר אובייקט בהגדלה גדולה של 40 X. לחץ לחצן כיול מחדש החלון מטרות. בחר כיול ידני. צייר קו על התמונה מיקרומטר של 100 מיקרומטר. הזן 0, 1 מ מ, בתיבת הדו-שיח ' ולחץ על ' אישור '.</li>
	<li>בחר אורך בתצוגה > ניתוח פקדים > חלון מדידות וביאורים. למדוד מהמשטח הכבד לשוליים קרישה עם העכבר. ייצוא או הערה התוצאה. חזור על המדידה על מיקום אחר לאותה השקופית. הערה: עומק קרישה יכול בקלות להיות מבודלים מהקבצים רקמת הכבד נורמלי על ידי השוליים חדים בין חבלים hepatocyte נורמלי באזור של נמק עם ציטופלזמה הגמדי, גרעינים pyknotic אזורי דימום.</li>
	<li>חישוב ממוצע מתוך שתי מדידות.</li>
</ol>7. מדידת לחץ פרץ
<ol><li>. הפעילי את המערכת (משאבות אוטומטיים, נפיצות) הכינו את הדגימות כבד על פי השלב 3.7. הערה: השתמש שתי משאבות מקבילי מחובר דרך 3-דרך-צימוד. אין אפשרות לקבל את הלחץ המקסימלי של 1500 מ"מ כספית עם משאבה בודדת.</li>
	<li>לבודד וריד שער הכבד, עורק הכבד נפוץ, צינור המרה עם מספריים ב pedicle המספקת. תהדק את וריד שער הכבד עם מלקחיים אוברהולט, מאתרים ומפסיקים בתפר monofil 4-0. תהדק את עורק הכבד נפוץ מלקחיים אוברהולט, מאתרים ומפסיקים בתפר monofil 4-0.</li>
	<li>להכניס קטטר Ch-16 צינור המרה, מאתרים ומפסיקים בתפר משי 2-0. להתחבר הקטטר המשאבות אוטומטיים, להתקין 3-דרך צימוד עם מד לחץ (איור 3).</li>
	<li>למלא את המזרק זלוף עם תמיסת מלח.</li>
	<li>להתחיל משאבות אוטומטית עם קצב העברה של 99 mL/h.</li>
	<li>לפקח על הכבד לחתוך משטח ובלחץ מטר ללחץ פרץ זליגת ולהקליט. הערה: זיהוי קל של דליפה, פטנט כחול יכול להתווסף תמיסת מלח (2 מ"ל פטנט כחול + 18 מ ל תמיסת מלח). קל יותר להתבונן פרץ לחץ על ידי לב של אובדן הלחץ על מד לחץ.</li>
</ol>

<ol><li>Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+plasma+scalpel%3A+comparison+of+tissue+damage+and+wound+healing+with+electrosurgical+and+steel+scalpels%5BTitle%5D)+AND+%22ArchSurg%22%5BJournal%5D)">A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels.</a> ArchSurg. 111, 392-397 (1976).</li>
<li>Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+laparoscopic+haemostasis+using+an+argon+beam+coagulator+for+blunt+traumatic+splenic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22EurJSurg%22%5BJournal%5D)">Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury.</a> EurJSurg. 167, 316-318 (2001).</li>
<li>Frilling, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+a+new+carrier-bound+fibrin+sealant+versus+argon+beamer+as+haemostatic+agent+during+liver+resection%3A+a+randomised+prospective+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+ArchSurg%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial.</a> Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).</li>
<li>Raiser, J., Zenker, M. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0022-3727/39/16/S10/pdf">Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art.</a> J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).</li>
<li>Farin, G., Grund, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technology+of+argon+plasma+coagulation+with+particular+regard+to+endoscopic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22EndoscSurgAllied+Technol%22%5BJournal%5D)">Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications.</a> EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).</li>
<li>Grund, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+plasma+coagulation+%28APC%29%3A+ballyhoo+or+breakthrough%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough?</a> Endoscopy. 29, 196-198 (1997).</li>
<li>Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+and+helium+plasma+coagulation+of+porcine+liver+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Int+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue.</a> J Int Med Res. , (2017).</li>
<li>Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+beam+coagulation+is+superior+to+conventional+techniques+in+repair+of+experimental+splenic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JTrauma%22%5BJournal%5D)">Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury.</a> JTrauma. 31, 717-720 (1991).</li>
<li>Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+argon+beam+coagulator+provides+rapid+hemostasis+of+experimental+hepatic+and+splenic+hemorrhage+in+anticoagulated+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22JTrauma%22%5BJournal%5D)">The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs.</a> JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).</li>
<li>Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+argon+plasma+coagulation+in+skin+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology%22%5BJournal%5D)">Application of argon plasma coagulation in skin surgery.</a> Dermatology. 197, 152-157 (1998).</li>
<li>Carus, T., Rackebrandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+tissue+damage+by+several+types+of+coagulation+%28monopolar%2C+bipolar%2C+cold+plasma+and+ultrasonic%29+in+a+minimally+invasive%2C+perfused+liver+model%5BTitle%5D)+AND+%22ISRNSurg%22%5BJournal%5D)">Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model.</a> ISRNSurg. , 518924(2011).</li>
<li>Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurement+of+gastric+mucosal+microcirculation+using+a+combined+laser+Doppler+flowmeter+and+spectrophotometer%5BTitle%5D)+AND+%22DisEsophagus%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer.</a> DisEsophagus. , (2008).</li>
<li>Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+the+Micro-Lightguide+O2C+for+the+quantification+of+tissue+ischemia+in+diabetic+foot+ulcers%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers.</a> Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).</li>
<li>Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesive+strength+of+fibrinogen-coated+collagen+patch+or+liquid+fibrin+sealant+in+an+experimental+liver+resection+model+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res+Eur+Chir+Forsch+Rech+Chir+Eur%22%5BJournal%5D)">Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs.</a> Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).</li>
<li>Knobloch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcirculation+of+the+sternum+following+harvesting+of+the+left+internal+mammary+artery%5BTitle%5D)+AND+%22ThoracCardiovascSurg%22%5BJournal%5D)">Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery.</a> ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).</li>
<li>Kanzler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendation+for+severity+assessment+following+liver+resection+and+liver+transplantation+in+rats%3A+Part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I.</a> Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).</li>
<li>Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+in+swine+optimizing+a+laboratory+model+to+optimize+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesist%22%5BJournal%5D)">Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research.</a> Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).</li>
<li>Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+Peculiarities+of+Pig+and+Human+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant+Off+J+Middle+East+Soc+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver.</a> Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).</li>
<li>Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+spectrometry+%28O2C+device%29+of+intraoperative+microperfusion+predicts+organ+function+after+kidney+transplantation%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study.</a> Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).</li>
<li>Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+ablation+of+porcine+liver+in+vivo%3A+effects+of+blood+flow+and+treatment+time+on+lesion+size%5BTitle%5D)+AND+%22AnnSurg%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size.</a> AnnSurg. 227, 559-565 (1998).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

מכרסמים מודלים לניתוח בכבד נוצרים עבור זמן16. עם זאת, מודלים בעלי חיים גדולים מציעות יתרונות מסוימים: אין ציוד המיקרוכירורגית נדרש ציוד פעיל סטנדרטי עבור בני אדם יכול להיות מיושם, טכניקות ניתוחיות דומות לשימוש קליני, שיטות הערכה קלינית רגיל יכול להיות להעביר הניסויים. לדוגמה, תקן בדיקות דם קליני יכול להתבצע ללא צורך שיטות בדיקת מעבדה מיוחדים (איור 10).
החזירים הן חיות מעבדה המתאימה למחקר כך את הפיזיולוגיה שלהם דומה ה-17</s...

ארגון קרישה בפלסמה (APC) הוא כלי נפוץ בניתוח בטן במשך יותר משלושה עשורים1,2. זה טכניקה סטנדרטית עבור ההישג של hemostasis המשני אחרי hepatectomy מז'ור מאת איטום הכבד לחתוך משטח למניעת שטפי דם מאוחר יותר3. קרישה בפלסמה היא צורה מיוחדת של גלי רדיו electrocautery, אשר מספק את האנרגיה החשמלית באמצעות קשת של גז מיונן. מתן hemostasis אלקטרותרמי monopolar, אסטמה של טכניקה זו יש את היתרון של מניעת האלקטרודה לדבוק רקמות4. קרן גז מיונן מכוונת באופן אוטומטי לאזור של ההתנגדות החשמלית הנמוכה, היא מפנה את מבטה כאשר ההתנגדות עולה עקב לייבוש לאזורים אחרים עדיין לא desiccated. זה מייצר לעומק מוגבל אחיד של קרישה5,6. גורמים המשפיעים על האפקט קרישת הדם הם ההפעלה זמן, את הגדרת צריכת חשמל של המכשיר קרישת הדם ואת המרחק בין החללית אל הרקמה. הליום הוא גז מנשא אחר, אשר יכול לשמש עבור פלזמה קרישה7. מחקרים אחרונים שהיו בשימוש קליני מרוכז על התוצאות הקליניות מאשר ממצאים היסטולוגית ופונקציונליים3,8,9, בעוד מחקרים ניסיוניים התמקדו במבחנה חקירות10 או ניסויים מבודד איברים perfused11.
פרוטוקול המשמש כבסיס מאפשר חקר ההשפעות של קרישה בפלסמה במודל בעלי חיים גדולים קרוב היישום הקליני באמצעות ציוד סטנדרטי אנושי על חזירים: Microcirculation מוערך noninvasively על ידי זרימה דופלר לייזר ו ספקטרופוטומטרים, אשר הוא כלי קליני סטנדרטי עבור12,זו אינדיקציה13. שינויי טמפרטורה במהלך קרישה מנוטרים של מד חום אינפרא אדום, מצלמה תרמוגרפיים. העומק של קרישת הדם נמדד על היסטולוגית hematoxylin/אאוזין צבעונית מקטעים לאחר קציר של דגימות רקמה. עבור ההשוואה עם אמצעים אחרים עבור hemostasis המשני, מתבצעים ניסויים לחץ פרץ. בניגוד טכניקות שתואר לעיל14, אלה נערכות על האיברים explanted כדי לא לכלול את לחץ הדם הקשורים אפקטים. בנוסף החקירות שתואר השפעות מקומיות של קרישה בפלסמה, בדיקות דם רגיל גם ניתן לבצעם במודל חזירי.

<table><tbody><tr><td>קסילזין 20 מ"ג/מ"ל</td><td>Vetoquinol GmbH</td><td>Xylapan</td><td></td></tr><tr><td>קטמין 100 מ"ג/מ"ל</td><td>Ceva GmbH</td><td>Ceva הזרקת</td><td></td>קטמין</tr><tr><td>אטרופין 100 מ"ג / 10 מ"ל</td><td>ד"ר פרנץ K&ouml; hler Chemie GmbH</td><td>Atropinsulfat K&ouml; הלר 100 מ"ג אמפר.</td><td></td></tr><tr><td>פרופופול</td><td>Fresenius Kabi GmbH</td><td>פרופופול 1% MCT Fresenius</td><td></td></tr><tr><td>פנטניל</td><td>KG Rotexmedica GmbH</td><td>פנטניל 0.5 מ"ג Rotexmedica</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbot GmbH</td><td>Forene 100% (V/V) 250 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת לקטט של רינגר</td><td>בקסטר דויטשלנד GmbH</td><td></td><td>נתרן 131 ממול/ליטר, אשלגן 5 ממול/ליטר, סידן 2 ממול/ליטר, קלוריד 111 ממול/ליטר, לקטט 29 ממול/ליטר</td></tr><tr><td>דיסאינפטנט כירורגי</td><td>Sch&uuml; לקה & Mayr GmbH</td><td>Kodan Tinktur forte gef&auml; rbt 1l 104804</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ממונע</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Eclipse TE2000-E</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת מיקרוסקופ</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Digitalsight DS-Qi1Mc</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת הדמיה</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>NIS אלמנטים Vers. 4.40</td><td></td></tr><tr><td>קרישת פלזמה</td><td>S&ouml; טבעת GmbH</td><td>CPC-1000</td><td></td></tr><tr><td>גז ארגון</td><td>Linde AG</td><td>ארגון 4.8&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>גז הליום</td><td>Linde AG</td><td>הליום 4.8</td><td></td></tr><tr><td>O2C</td><td>LEA Medizintechnik GmbH</td><td>O2C גרסה 1212</td><td>עם בדיקה LF-2 או LF-3</td></tr><tr><td>מדחום אינפרא אדום</td><td>וולטקראפט</td><td>VOLTCRAFT IR 260-8S</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה תרמוגרפית</td><td>InfraTec GmbH</td><td>VarioCAM HD ראש 820</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת ניתוח תרמוגרפי</td><td>InfraTec GmbH</td><td>IRBIS 3</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת המטוקסילין של מאייר</td><td>Merck 1.09249</td><td></td>תמיסת Eosin VWR International GmbH Merck 1.09844 Rollerpump Masterflex L/S Easy Load Cole-Parmer Instrument Company דגם 7518-10 Perfusorpump B. Braun Melsungen AG Perfusor secura FT מד לחץ דיגיטלי Greisinger <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> </td><td>אלקטרוני GMH 3161</td><td></td></tr><tr><td>Perfusorsyringe, 50 מ"ל</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8728810 F</td><td></td></tr><tr><td>קו Perfusor, תקן סוג IV, מנעול PVC</td><td>Luer B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8722960</td><td></td></tr><tr><td>תא עצירה תלת כיווני, Dicofix C35C</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 16494 C</td><td></td></tr><tr><td>משי 2-0. 3</td><td>מטרי Resorba</td><td>REF H5F</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 Sutupak</td><td>Ethicon</td><td>V1224H</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9</td>% <td>B. בראון מלסונגן AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה in vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

קרישה בפלסמה כסוג של electrocautery משמש בניתוח כבד במשך עשרות שנים כדי לאטום את השטח גדול לחתוך הכבד לאחר hepatectomy העיקרי למניעת שטפי דם בשלב מאוחר יותר. ההשפעות המדויק של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד נבדקים רק לקוי. במודל שלנו חזירי, אפשר לבחון את ההשפעות קרישה קרוב היישום הקליני. לייזר משולב דופלר זרימה, ספקטרופוטומטרים מסמכים microcirculation משתנה במהלך קרישה בעומק הרקמה 8 מ"מ noninvasively, מתן מידע הניתנת לכימות על hemostasis מעבר הרושם הקליני סובייקטיבית. הטמפרטורה באתר קרישת דם בבדיקות קרישה פריור, פוסט של מד חום אינפרא אדום, עם מצלמה תרמוגרפיים קרישת הדם, מידת הטמפרטורה קרן גז אינו אפשרי עקב הסף העליון של המכשירים. העומק של קרישת הדם נמדד ברמה המיקרוסקופית ב hematoxylin/אאוזין מוכתמים מקטעים לאחר כיול מיקרומטר אובייקט ונותן מידע מדויק על כוח הגדרה-קרישה העומק-הזיקה. האפקט איטום נבדק על צינורות המרה כמו זה לא אפשרי coagulator פלזמה לחסום כלי דם גדולים יותר. פרץ לחץ ניסויים מתבצעות בחוץ אברים explanted כדי לשלול את לחץ הדם הקשורים אפקטים.

מנתחי מיקרו: ניצול בהתקן אבחון עבור hemostasis בעקבות קרישה בפלסמה ניתן להדגים על ידי מנתחי מיקרו שינויים. נימי דם זרימה (מוצג בתור יחידות שרירותי (AU)) תקטן מערך הבסיס של 142.7 ± 76.08 AU כדי 57.78 ± 49.57 AU-25 W התקן פלט כוח, כדי 48.5 ± 7.26 AU 50 W וכדי 5.04 ± 1.31 AU ב-100 W (איור 4).
טמפרטורה: טמפרטורה באתרים קרישת דם נמדדה באמצעות מצלמה תרמוגרפיים (<strong cl...

כאן אנו מציגים פרוטוקול להעריך השפעול קרישה בפלסמה רקמת הכבד ויוו. במודל חזירי, מנתחי מיקרו נבדק ע י לייזר דופלר, קרישה עומק נמדד בהיסטולוגיה, טמפרטורה באתר קרישת הדם על ידי מד חום אינפרא אדום, מצלמה תרמוגרפיים צינור איטום אפקט מתועדת על ידי לחץ פרץ ניסויים.

הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה In Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום ניתוחי כבד קליניים לגבי יחס עומק הגדרת האנרגיה של קרישת ארגון והליום פלזמה ותהליך קרישת הפלזמה עצמו. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שמודל החיה הגדולה דומה ליישום הקליני ושאין צורך בציוד מיוחד. ניתן להשתמש בתרמוגרפיה אינפרא אדום לניטור התפלגות הטמפרטורה ודעיכת הטמפרטורה אך גם לניטור קצב הנשימה והעוגות.יתר על כן, ניתן לנטר תהליכי דלקת על ידי תרמוגרפיה אינפרא אדום. מי שידגים את ההליך יהיה פסקל פאשנדה, טכנאי מהקבוצה שלנו. לפחות שעה לפני תחילת ההליך, הפעל את מחברת המצלמה התרמוגרפית ואת מדחום האינפרא אדום.כאשר הציוד מוכן, הניחו חזירה גרמנית מורדמת במשקל 25 עד 30 קילוגרם בשכיבה על שולחן כירורגי רגיל והשתמשו במקלון כירורגי רגיל כדי לחטא את אזור הניתוח שלוש פעמים עם חומר חיטוי כירורגי סטנדרטי. לאחר מכן השתמש באזמל כדי לבצע לפרוטומיה רחבה של קו האמצע מתהליך ה-xiphoid לערווה והתקן מחזירים כירורגיים כדי לחשוף את רקמת הכבד. כדי לקבל מדידות מיקרו-סירקולציה בסיסיות, הפעל את מד הזרימה של דופלר הלייזר ואת הספקטרופוטומטר והשתמש בבדיקה שטוחה כדי למדוד את הזרימה והמהירות.לאחר מכן, הפעל את מכשיר קרישת הפלזמה, פתח את בקבוק הגז המתאים והתאם את זרימת הגז לשלושה ליטר לדקה. בחר את הספק הפלט המתאים של מכשיר הקרישה והשתמש בתבנית טיטניום עם צמצם מרובע של סנטימטר מרובע אחד כדי לתקן את אזור הקרישה. לאחר מכן השתמש במרחק בדיקה של סנטימטר אחד כדי לקרוש את האזור למשך חמש שניות.כדי למדוד את המיקרו-סירקולציה שלאחר הקרישה, הנח את הגשושית השטוחה על כל אתר קרישה כדי למדוד את הזרימה והמהירות של כל אתר. כדי למדוד את הטמפרטורה בכל אתר, כוונן את המיקוד של המצלמה התרמוגרפית וקבע את המסגרת מעל אתר הקרישה הראשון כך שאזור הקרישה והרקמה שמסביב המושפעת מהעברת החום ממוקמים באמצע שדה הראייה. הקלט את תהליך הקרישה עם קרישת הפלזמה על פני הכבד עם מצלמה תרמוגרפית במשך תקופה של שתי דקות.לאחר מכן נתח את רצפי התמונות עם תוכנת ניתוח התרמוגרפיה המתאימה. כדי למדוד את לחץ הפרץ, הפעל תחילה את המשאבות האוטומטיות ואת מד הלחץ. לאחר מכן, חלקו את כל חיבורי הרצועה לכבד וחלקו את פדיקל הכבד מעל כיפוף התריסריון העליון, והשאירו חלקים ארוכים של וריד הפורטל וצינור המרה המשותף שלמים.לאחר מכן חלקו את וריד ה-caval מעל ומתחת לכבד כדי לאפשר שליפת האיבר. בעזרת מספריים חדים, כרתו מחצית מאונה הכבד המדיאלית השמאלית ופלזמה קרשו את המשטח החתוך. בודד את וריד הפורטל, עורק הכבד המשותף וצינור המרה ברגלי הכבד.בעזרת מלקחיים מחזיקים, מהדקים את וריד הפורטל. לאחר מכן השתמש בתפר מונופיל 4.0 כדי לקשור את הכלי. מהדקים את עורק הכבד המשותף עם זוג שני של מלקחיים וקושרים את העורק עם תפר מונופיל נוסף 4.0.הכנס קטטר צרפתי 16 לצינור המרה המשותף, וקשר את הצינור בתפר משי 2.0. ולחבר את הקטטר למשאבות האוטומטיות. התקן תא עצירה תלת כיווני עם מד לחץ ומלא מזרק שופע במי מלח.הפעל את המשאבות האוטומטיות בקצב אספקה של 99 מיליליטר לשעה. לאחר מכן עקוב אחר משטח חיתוך הכבד ומד הלחץ לאיתור דליפה ורשום את לחץ ההתפרצות. בניסוי מייצג זה, זרימת הדם הנימים ירדה בכ-60% מנקודת ההתחלה ב-25 וואט של הספק פלט של המכשיר, 66% ב-50 וואט וכמעט 100% ב-100 וואט.לא נצפה שינוי בטמפרטורה במהלך או אחרי קרישת הפלזמה. קרישת פלזמה יוצרת אזור שטחי של נמק שניתן להבחין בקלות מפרנכימת הכבד הרגילה. בעקבות קרישת פלזמה של הליום, עומק הקרישה גדל משמעותית בקורלציה ישירה להספק הפלט של מכשיר הפלזמה המיושם.שימו לב שמדידות לחץ פרץ שבוצעו על המשטח החתוך של אונת הכבד המדיאלית השמאלית המושתלת מראות שאין הבדל לאחר קרישת פלזמה של הליום או ארגון. באמצעות טכניקות אלה, האחרונה לכמת את אפקט הקרישה המקומי ולהעריך את השפעת איטום צינור המרה של קרישת פלזמה. ניתן להשתמש בטכניקות אלה גם כדי להשוות אמצעים שונים של ביליו והמוסטזיס בסביבה כירורגית הדומה לזו של חולים אנושיים.יתר על כן, ניתן ליישם את ההשפעות ההמוסטטיות והביליוסטטיות של קרישת פלזמה לאחר כריתת כבד גדולה באותו מודל. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להעריך את ההשפעות העיקריות של קרישת ארגון והליום פלזמה במודל של בעלי חיים גדולים.

assessment-plasma-coagulation-on-liver-tissue-large-animal-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מתאר הליך של זילוח כבד עכברי דרך הווריד הפורטלי באמצעות תמיסת collagenase לפני בידוד תאי כבד.

In Vivo Murine זילוח כבד: שיטה להחדיר לכבד המכרסם תמיסה דרך וריד הפורטל

הדמיה תוך-חיונית יציבה ברזולוציה גבוהה של תאי חיסון בכבד היא מאתגרת. כאן אנו מספקים שיטה רגישה ואמינה ביותר לחקר נדידה ואינטראקציות תאים-תאים של תאים חיסוניים בכבד עכבר לאורך תקופות ארוכות (כ-6 שעות) על ידי מיקרוסקופ סריקת לייזר רב-פוטוני תוך-חיוני בשילוב עם ניטור טיפול נמרץ.

לטווח ארוך Intravital multiphoton מיקרוסקופית הדמיה של תאים חיסוני בבריאים וחולה כבד באמצעות עכברים CXCR6.Gfp Reporter

דימום בלתי מבוקר, גורם חשוב לתמותה בקרב חולי טראומה, יכול להיות מעוצב באמצעות חתך כבד רגיל במודל Murine. מודל זה גורם איבוד דם עקבית, הישרדות, ומאפשר בדיקות סוכני המוסטטי. מאמר זה מספק את שלב אחר שלב תהליך לבצע מודל זה יקר.

הלם Hemorrhagic בלתי מבוקר מעוצב באמצעות laceration הכבד בעכברים עם ניטור ההודינמי בזמן אמת

כאן נתאר פרוטוקול מפורט למדידות פולשנית של פרמטרים והמודינמיקה כולל הפורטל לחץ, זרימת הדם splanchnic ספיקת הדם מערכתית על מנת לאפיין את התסמונת הפורטל עם יתר לחץ דם אצל חולדות.

אפיון והמודינמיקה פולשנית של התסמונת פורטל-יתר לחץ דם אצל חולדות זה קשה וחיוור.

שיש מחסור משמעותי לתורם כבד, הקריטריונים עבור התורמים הכבד שהורחבו. Normothermic ex-vivo הכבד זלוף (NEVLP) פותחה כדי להעריך ולשנות את תפקוד האיבר. מחקר זה מדגים מודל עכברוש של NEVLP, בדיקות היכולת של pegylated-קטלאז, להקל על פגיעה בכבד שימור.

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

אנו להקים טכניקה כירורגית חדשניים עבור מודל זלוף יחיד בכבד באונה ויוו בשנת החולדה כתנאי נוספת ללמוד ויוו הכבד חלקית הנדסה בעתיד.

טכניקה כירורגית הרומן כבסיס In Vivo חלקי הכבד הנדסה בעכברוש

פרוטוקול זה מספק שיטה פשוטה ואמינה לייצור פרוסות כבד בר קיימא לחתוך מפני עכברים. Vivo דגימות רקמות לשעבר יכול להישמר תחת רקמת המעבדה התנאים התרבות במשך ימים מרובים, מתן מודל גמיש לבחון פתוביולוגיה בכבד.

מורנה דיוק-גזור פרוסות הכבד כמודל Vivo Ex של ביולוגיה של הכבד

מודל הדימום של זנב זנב מעודן (TVT) בעכברים מורדמים הוא שיטת in vivo רגישה להערכת דימום המופילי. מודל דימום TVT ממוטב זה משתמש באובדן דם ובזמן דימום כנקודות קצה, תוך זיקוק מודלים אחרים והימנעות ממוות כנקודת קצה.

מודל דימום טרנסקציה של וריד זנב בהמופיליה מורדמת לחלוטין עכברים

מתוארת מתודולוגיה מפורטת להקמת מודל חולדה זעיר פולשני של תסחיף ריאתי באמצעות קרישי דם אוטולוגיים. ניתנות גם שיטות נוספות לכימות האזור האוטם ולהמחשת עץ העורקים הריאתי.

הקמת מודל חולדה זעיר פולשני של תסחיף ריאתי באמצעות קרישי דם אוטולוגיים

רוב המחקרים הכוללים את מנגנון לנגנדורף משתמשים במודלים של בעלי חיים קטנים בשל המורכבות המוגברת של מערכות עבור יונקים גדולים יותר. אנו מתארים מערכת לנגנדורף למודלים של בעלי חיים גדולים המאפשרת שימוש במגוון מינים, כולל בני אדם, ורכישת נתונים קלה יחסית.

מערכת העבודה לב מבודדת למודלים בבעלי חיים גדולים

למד הערכת קרישת פלסמה ברקמת כבד במודל חזיר גדול in vivo. השיטה משתמשת בטרמוגרפיית אינפרא-אדום ודופלר לייזר לניטור מיקרו-זרימה וטמפרטורה. זהו כלי יעיל לניתוחי כבד קליניים.

הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה In Vivo

גלה סרטונים נוספים