שיטה ערכי צבע מוחלטים למדידת תכולת ברזל צמחים

אנו מציגים פרוטוקול פשוטה ואמינה למדידת תוכן ברזל ברקמות הצמח באמצעות השיטה כחול פרוסי ערכי צבע מוחלטים.

רק מבחינה רפואית זה יכול לעזור לענות על שאלת מפתח בתחום הביולוגיה. כגון כיצד נוכל לכמת בקלות ברזל בדגימות ליבה של ביולוגיה. המיזם העיקרי של טכניקה זו הוא שמדובר בטכניקה קולורימטרית קלה להפקה, ומדויקת מאוד.

תוך העדפת טכניקה זו, עליך להימנע מזיהום ברזל. הדגמה חזותית של שיטה זו תעזור לך להבין את שלביה השונים. כדי להתחיל בהליך זה, הכינו סירים של חמישה סנטימטרים על חמישה סנטימטרים על ידי מילויים במדיום סיר סטנדרטי.

שתלו זרע טבק אחד בכל סיר. מעבירים את הצמחים לחדר גידול שנמצא בטמפרטורה קבועה, בתנאי יום ארוכים של 23 מעלות צלזיוס. להשקות במי ברז עד לניקוז המים מהעציץ, ולגדל את הצמחים במשך כ-50 יום.

לאחר זמן זה, התחל טיפולי ברזל בהשקיה בריכוזים המתאימים לניסוי. השקו את הצמחים בתמיסה זו כל יומיים למשך שישה עד שמונה ימים. לאחר מכן, נתק את העלים מהגבעול ביד, והקפד לא להשתמש בציוד מתכת כלשהו.

בעזרת בקבוק ריסוס מלא במים מזוקקים כפולים, נקו כל עלה. יבש את העלים על מגבת נייר ואז העביר אותם לשקית נייר. מכניסים את השקיות המלאות בעלים לתנור, מכוונים לטמפרטורה קבועה של 80 מעלות צלזיוס, למשך יומיים-שלושה.

נקו את המרגמה והעלי פעמיים, עם תמיסת חומצה הידרוכלורית של 4%. והשתמש בנייר פילטר לייבוש. בעזרת המרגמה והעלי מועכים את העלים היבשים לאבקה.

לאחר מכן, העבירו את האבקה לצינורות פלסטיק סטריליים של 15 מיליליטר. ראשית, שקלו בקבוקון נצנוץ חדש ואטום של 20 מיליליטר ללא מכסה. או לשים לב למשקל או לטרוף את המשקל.

לאחר מכן מוסיפים את העלים המרוסקים. שקלו את הדגימה בבקבוקון, ושימו לב למשקל. השתמש בצמר סלעים כדי לסגור את הבקבוקון.

שקלו שלושה בקבוקונים נוספים מבלי להוסיף דגימות, לשימוש כבקרה, תוך ציון כל משקל. לאחר מכן, העבירו את הדגימה ובקבוקוני הבקרה לתנור. שרפו את הדפים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

לאחר מכן, הניחו לדגימות להתקרר לכ-100 מעלות צלזיוס. בעזרת כפפות כבדות ופינצטה, הוציאו את הדגימות מהתנור, והקפידו להחזיק את הבקבוקון כלפי חוץ. הניחו את הבקבוקונים על משטח ישר.

הסר את צמר הסלעים וסגור את הבקבוקונים עם המכסים המקוריים שלהם. לאחר מכן, שקלו את שלושת בקבוקוני הביקורת, וחשבו את העלייה הממוצעת במשקל שלהם. אם העלייה במשקל שווה או מעל 1% ממשקל האפר, השתמש בערך זה כהערכה של שגיאת המדידה.

שקלו צינור פלסטיק של 15 מיליליטר. או לרשום את המשקל או לטרוף את המשקל. לאחר מכן העבירו את האפר לצינור.

רשום ערך זה, שהוא משקל האפר. לאחר מכן, הוסף לאפר חמישה מיליליטר מתמיסת חומצה הידרוכלורית טוחנת אחת. מסננים את האפר דרך פילטר של 22 מיקרומטר.

לאחר מכן הוסף חמישה מיליליטר נוספים של תמיסת החומצה ההידרוכלורית המולרית דרך אותו מסנן, מה שמוביל לנפח דגימה סופי של 10 מיליליטר. לאחר מכן, הסר ארבעה מיליליטר מכל דגימה למדידה על ידי ספקטרוסקופיה אטומית. ולקבוע את ריכוז הברזל לגרם אפר כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

כדי להתחיל, הוסף ארבעה גרם אשלגן פרוציאניד ל -100 מיליליטר מים מזוקקים כפולים, להכנת התמיסה הכחולה הפרוסית. מערבולת לערבב, ומאחסנים בחום של 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש. כשהוא מוכן לשימוש, מערבבים 50 מיליליטר תמיסה כחולה פרוסית עם 50 מיליליטר של חומצה הידרוכלורית טוחנת אחת כדי לשמש כתמיסה הריקה.

לאחר מכן, השתמש בפיפטה כדי לערבב 0.5 מיליליטר של דגימה שהושגה בעבר, עם 0.5 מיליליטר תמיסה כחולה פרוסית. תנו לתערובת הזו לנוח לפחות דקה אחת, אבל פחות מחמש דקות. העבירו את התערובת הזו לקובט, והשתמשו בספקטרופוטומטר כדי למדוד את הצפיפות האופטית ב-715 ננומטר.

לאחר מכן, קבע את הצפיפות האופטית לגרם אפר, ושרטט את הרגרסיה הליניארית בין ריכוזי הברזל, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. התוצאות המייצגות מ-21 דגימות עלי טבק מראות כי ריכוז הברזל במי ההשקיה השפיע מאוד על תכולת הברזל בעלה. הספקטרום של כל 21 הדגימות המייצגות נבדק לאחר מכן בשיטה הכחולה הפרוסית.

כפי שניתן לראות כאן, הספיגה ב-715 ננומטר היא אורך הגל האופטימלי בעת מדידת תמיסות המכילות ריכוזים שונים של ברזל שתיים וברזל שלוש. עקומת רגרסיה ליניארית, המתקבלת על ידי התוויית ערכי ריכוז ברזל המתקבלים על ידי ספקטרוסקופיה אטומית, לעומת ערכי הספיגה, המתקבלים בשיטה הכחולה הפרוסית, מאפשרת לנתח דגימות חדשות מאותו סוג צמח. אל תשכח שעבודה עם HCL יכולה להיות מסוכנת ביותר.

ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות, כגון הגנה על העיניים, בעת ביצוע הליך זה. ברגרסיה הליניארית, חשוב לוודא שהתוצאות נמצאות בטווח ריאלי. לאחר פיתוחה, טכניקה זו יכולה לעזור לחוקר ביולוגיה לחקור צמחים נוספים לייצור מזון או לטיפול ביולוגי.