Name: באמצעות העכבר Oocytes כדי להעריך תפקוד הגן האנושי במהלך המיוזה אני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: למדו להעריך תפקוד גנים אנושיים במיוזה נקבית באמצעות שימוש בעוברי עכבר. שיטה זו מאפשרת חקר גורמים גנטיים המשפיעים על אנאופלואידיה אימהית ומסייעת להבנת סיכונים ברפואה רבייתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר של האגודה האמריקנית לרפואת פוריות ו מן צ'ארלס בוש לקרן יוהנה לומד, המדינה באוניברסיטה של ג'אי כדי K.S. A.L.N. נתמך על ידי מענק של N.I.H. (F31 HD0989597).

<ol><li>Thoma, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+infertility+in+the+United+States+as+estimated+by+the+current+duration+approach+and+a+traditional+constructed+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Prevalence of infertility in the United States as estimated by the current duration approach and a traditional constructed approach.</a> Fertil Steril. 99 (5), 1324-1331 (2013).</li>
<li>Boivin, J., Bunting, L., Collins, J. A., Nygren, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+estimates+of+infertility+prevalence+and+treatment-seeking%3A+potential+need+and+demand+for+infertility+medical+care%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">International estimates of infertility prevalence and treatment-seeking: potential need and demand for infertility medical care.</a> Human Reproduction. 22 (6), 1506-1512 (2007).</li>
<li>Treff, N. R., Zimmerman, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Preimplantation+Genetic+Testing+for+Monogenic+Disease+and+Aneuploidy%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genomics+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Advances in Preimplantation Genetic Testing for Monogenic Disease and Aneuploidy.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. , (2017).</li>
<li>Franasiak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+of+aneuploidy+with+increasing+age+of+the+female+partner%3A+a+review+of+15%2C169+consecutive+trophectoderm+biopsies+evaluated+with+comprehensive+chromosomal+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">The nature of aneuploidy with increasing age of the female partner: a review of 15,169 consecutive trophectoderm biopsies evaluated with comprehensive chromosomal screening.</a> Fertil Steril. 101 (3), 656-663 (2014).</li>
<li>Hassold, T., Hunt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+err+%28meiotically%29+is+human%3A+the+genesis+of+human+aneuploidy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">To err (meiotically) is human: the genesis of human aneuploidy.</a> Nat Rev Genet. 2 (4), 280-291 (2001).</li>
<li>Scott, R. T. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blastocyst+biopsy+with+comprehensive+chromosome+screening+and+fresh+embryo+transfer+significantly+increases+in+vitro+fertilization+implantation+and+delivery+rates%3A+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Blastocyst biopsy with comprehensive chromosome screening and fresh embryo transfer significantly increases in vitro fertilization implantation and delivery rates: a randomized controlled trial.</a> Fertil Steril. 100 (3), 697-703 (2013).</li>
<li>Scott, R. T. Jr, Upham, K. M., Forman, E. J., Zhao, T., Treff, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage-stage+biopsy+significantly+impairs+human+embryonic+implantation+potential+while+blastocyst+biopsy+does+not%3A+a+randomized+and+paired+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Cleavage-stage biopsy significantly impairs human embryonic implantation potential while blastocyst biopsy does not: a randomized and paired clinical trial.</a> Fertil Steril. 100 (3), 624-630 (2013).</li>
<li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+single+blastocysts+for+fresh+transfer+via+standard+morphology+assessment+alone+and+with+array+CGH+for+good+prognosis+IVF+patients%3A+results+from+a+randomized+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cytogenet%22%5BJournal%5D)">Selection of single blastocysts for fresh transfer via standard morphology assessment alone and with array CGH for good prognosis IVF patients: results from a randomized pilot study.</a> Mol Cytogenet. 5 (1), 24(2012).</li>
<li>Rubio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fertilization+with+preimplantation+genetic+diagnosis+for+aneuploidies+in+advanced+maternal+age%3A+a+randomized%2C+controlled+study%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">In vitro fertilization with preimplantation genetic diagnosis for aneuploidies in advanced maternal age: a randomized, controlled study.</a> Fertil Steril. 107 (5), 1122-1129 (2017).</li>
<li>Nguyen, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+Aurora+Kinase+B+and+C+variants+associated+with+maternal+aneuploidy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of Aurora Kinase B and C variants associated with maternal aneuploidy.</a> Mol Hum Reprod. , (2017).</li>
<li>Igarashi, H., Knott, J. G., Schultz, R. M., Williams, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+PLCbeta1+in+mouse+eggs+change+calcium+oscillatory+behavior+following+fertilization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Alterations of PLCbeta1 in mouse eggs change calcium oscillatory behavior following fertilization.</a> Dev Biol. 312 (1), 321-330 (2007).</li>
<li>Database, J. S. E. <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education/5074/molecular-cloning">Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Molecular Cloning.</a> JoVE. , (2017).</li>
<li>Carey, M. F., Peterson, C. L., Smale, S. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23906918">PCR-mediated site-directed mutagenesis.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2013 (8), 738-742 (2013).</li>
<li>Armstrong, J. A., Schulz, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aArmstrong%2C+JA+%22Current+Protocols+Essential+Laboratory+Techniques%22">Current Protocols Essential Laboratory Techniques</a>. , John Wiley & Sons, Inc. (2008).</li>
<li>Stein, P., Schindler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocyte+microinjection%2C+maturation+and+ploidy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse oocyte microinjection, maturation and ploidy assessment.</a> J Vis Exp. (53), (2011).</li>
<li>Watanabe, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometry+and+force+behind+kinetochore+orientation%3A+lessons+from+meiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Geometry and force behind kinetochore orientation: lessons from meiosis.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 13 (6), 370-382 (2012).</li>
<li>Shuda, K., Schindler, K., Ma, J., Schultz, R. M., Donovan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aurora+kinase+B+modulates+chromosome+alignment+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Aurora kinase B modulates chromosome alignment in mouse oocytes.</a> Mol Reprod Dev. 76 (11), 1094-1105 (2009).</li>
<li>Lane, S. I., Yun, Y., Jones, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+anaphase-promoting+complex+activation+in+mouse+oocytes+is+predicted+by+microtubule-kinetochore+attachment+but+not+by+bivalent+alignment+or+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Timing of anaphase-promoting complex activation in mouse oocytes is predicted by microtubule-kinetochore attachment but not by bivalent alignment or tension.</a> Development. 139 (11), 1947-1955 (2012).</li>
<li>Nguyen, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation+of+threonine+3+on+histone+H3+by+haspin+kinase+is+required+for+meiosis+I+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation of threonine 3 on histone H3 by haspin kinase is required for meiosis I in mouse oocytes.</a> J Cell Sci. 127 (Pt 23), 5066-5078 (2014).</li>
<li>Tsafriri, A., Chun, S. Y., Zhang, R., Hsueh, A. J., Conti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+maturation+involves+compartmentalization+and+opposing+changes+of+cAMP+levels+in+follicular+somatic+and+germ+cells%3A+studies+using+selective+phosphodiesterase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocyte maturation involves compartmentalization and opposing changes of cAMP levels in follicular somatic and germ cells: studies using selective phosphodiesterase inhibitors.</a> Dev Biol. 178 (2), 393-402 (1996).</li>
<li>Kapoor, T. M., Mayer, T. U., Coughlin, M. L., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+spindle+assembly+mechanisms+with+monastrol%2C+a+small+molecule+inhibitor+of+the+mitotic+kinesin%2C+Eg5%5BTitle%5D)+AND+%22Eg5.+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Probing spindle assembly mechanisms with monastrol, a small molecule inhibitor of the mitotic kinesin, Eg5.</a> Eg5. J Cell Biol. 150 (5), 975-988 (2000).</li>
<li>Jones, K. T., Lane, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+causes+of+aneuploidy+in+mammalian+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Molecular causes of aneuploidy in mammalian eggs.</a> Development. 140 (18), 3719-3730 (2013).</li>
<li>Fellmeth, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+characterization+of+three+Aurora+kinase+C+splice+variants+found+in+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Expression and characterization of three Aurora kinase C splice variants found in human oocytes.</a> Mol Hum Reprod. 21 (8), 633-644 (2015).</li>
<li>Rieder, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+cold-stable+kinetochore+fiber+in+metaphase+PtK1+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">The structure of the cold-stable kinetochore fiber in metaphase PtK1 cells.</a> Chromosoma. 84 (1), 145-158 (1981).</li>
<li>Brunet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetochore+fibers+are+not+involved+in+the+formation+of+the+first+meiotic+spindle+in+mouse+oocytes%2C+but+control+the+exit+from+the+first+meiotic+M+phase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Kinetochore fibers are not involved in the formation of the first meiotic spindle in mouse oocytes, but control the exit from the first meiotic M phase.</a> J Cell Biol. 146 (1), 1-12 (1999).</li>
<li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nat Protoc. 12 (4), 828-863 (2017).</li>
<li>Cong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+genome+engineering+using+CRISPR%2FCas+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems.</a> Science. 339 (6121), 819-823 (2013).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בגלל הזיהוי הגובר וברכבות של האדם משתנים גנטיים הקשורים במחלה, זה חיוני כי מערכות נקבעו כדי להעריך את משמעותם ביולוגי. הבנת וחלבון לתפקד מיוזה האנושי מציבה אתגרים מסוים כי oocytes האדם יקרים ואינם זרע נדיר, האדם לבצע מניפולציות גנטיות. עכבר oocytes הם מערכת מודל בתרבית של ערך להערכת ג'ין meiotic האנושי פונקציה 10,23. מודל זה עוקף את impracticalities של שימוש ביצים האנושי תוך מתן זמינים ומקור oocytes נמוכים, manipulable עוברים מיוזה דומים לתאי נבט האדם בזמן להיות ...

פוריות היא מחלה המשפיעה על 10-15% מן האוכלוסייה האנושית של גיל הרבייה 1, שממנה כמעט למחצית מחפשים טיפול רפואי 2. למרות האטיולוגיה של בעיות פוריות היא מגוונת, ובמקרים רבים multifactorial, סטייה גנטית הנפוץ ביותר אצל בני אדם הוא אנאפלואידיה עובריים 3. אנאפלואידיה מוגדר הסטייה (רווח או הפסד) של המספר הנכון של הכרומוזומים בתא. התופעה של aneuploidy של עוברי אדם נפוצים, עולה עם גיל מתקדם 4,5. ארבעה מחקרים אקראיים מבוקרים הדגישו את היתרון של בחירת הנורמלי היחיד chromosomally (euploid) עוברי להעברה הרחם כי אסטרטגיה זו, גרמו המחירים השרשה מוגברת, נמוכים הפלה, זמן קצר יותר להשגת הריון 6,7,8,9. לכן, הבנת האטיולוגיה של aneuploidy האנושי יכול להיות השלכות חשובות ברבייה בסיוע.
למרות בדיקה גנטית טרום השרשה, עבור aneuploidies הוא מועיל בטיפולי פוריות, הבנה מעמיקה של מה aneuploidies מקורם עדיין לוקה בחסר. מקובל כי קיים מתאם חיובי של aneuploidies meiotic (מקורו בתהליך הייצור תא רבייה), גיל, עם זאת, כמה נשים אנאפלואידיה עובריים התעריפים הנוכחיים שסטו מהתעריף הממוצע שלהם נתון בגיל 4. במקרים אלה מראים כי גיל לבד אינה תמיד חזוי של הסיכון של יצירת העובר aneuploid. גורמים אחרים עשויים לשחק תפקיד בהגדלת הסיכון של aneuploidy עובריים, כגון גן משתנים.
היבט מרכזי של חוקרים פוטנציאל התרומה של variant ג'ין כדי אנאפלואידיה במהלך המיוזה oocyte היא לתכנן מערכת להעריך במהירות ג'ין meiotic הפונקציה. בשל אילוצים אתית גישה מוגבלת, זה לא מעשי לבצע ניסויים אלה באמצעות ביצים אנושי. נושאים אלה יכולים שיפרו באמצעות העכבר oocytes, ויש כאן סדרה של מבחני להעריך תפקוד הגן האנושי במהלך המיוזה אני המתואר. על ידי microinjecting קידוד RNA שליח (mRNA) את הווריאציה גנים של הריבית, הלוקליזציה של החלבון האנושי של הביצה העכבר יכול להיות דמיינו ועל משמש כדי לקבוע אם ביטוי חוץ רחמי של החלבון אדם פראי-סוג של מוטציה תוצאות בכל שינויים פנוטיפי העלולה להוביל אנאפלואידיה. פנוטיפים אלה כוללים עלייה ב- microtubules כי לצרף אחותי לא במקום קינטוכור וחוסר יכולת לתמוך יישור כרומוזום-מפה של מיוזה אני חשוב, פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לחקור גם להפסד ורווח של פונקציה וריאציות גנטיות על-ידי יצירת תנאים מסוימים ניסיוני לאתגר את אירועי מפתח oocyte מיוזה כגון ציר יישור ובניית כרומוזום 10.

<table><tbody><tr><td>0.2 מ"ל צינור PCR Seal-Rite</td><td>ארה"ב Scientific</td><td>1602-4300</td><td></td></tr><tr><td>1 kb סולם DNA</td><td>Thermo Scientific</td><td>SM0313</td><td></td></tr><tr><td>100 bp סולם DNA</td><td>Thermo Scientific</td><td>SM0243</td><td></td></tr><tr><td>6X טעינת DNA צבע</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>צלחת ספוט זכוכית 9 בארות</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>7812G17</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>A9539</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין מסרום בקר&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A3294&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-fluor-568 מצומד נגד עכבר IgG</td><td>Thermo Scientific</td><td>A21050</td><td>1:200 דילול</td></tr><tr><td>Alexa-fluor-633 מצומד אנטי אנושי IgG</td><td>Thermo Scientific</td><td>A21091</td><td>1:200 דילול</td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>VWR</td><td>AA0356</td><td></td></tr><tr><td>שולחן נגד רעידות</td> Technical <td>Manufacturing Corp</td><td></td><td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>טובולין אנטי אצטילציה נוגדן</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>T7451</td><td>1:100 דיטוציה</td></tr><tr><td>נוגדנים אנטי צנטרומריים (CREST)</td><td>נוגדנים משולבים</td><td>15-234</td><td>1:30 דילול&nbsp;</td></tr><tr><td>קצות מחסום (מסנן) פיפטות</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM12635</td><td>ודא שהוא תואם למותג הפיפטורים שלך. אלה תואמים לפיפטורים של המותג אפנדורף.&nbsp;</td></tr><tr><td>מדיית תרבית מיובשת BD Difco: LB Agar, Miller (Luria Bertani)</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0445-07-6</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco מדיית תרבית מיובשת: מרק LB, מילר (Luria Bertani)</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0446-07-5</td><td></td></tr><tr><td>צינורות נימיים</td><td>Sutter</td><td>B100-75-10</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית איברים במרכז באר</td><td>VWR</td><td>25381-141</td><td></td></tr><tr><td>מיכל</td><td></td> CO2<td></td><td>לחממה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Zeiss</td><td></td><td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>צנטריפוגה (עם יכולת קירור)</td><td>תומס סיינטיפיק</td><td></td><td>כל דגם סטנדרטי&nbsp;</td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית 11 x 22 מ"מ</td><td>תומס סיינטיפיק</td><td>6663F10</td><td></td></tr><tr><td>כיסויים</td><td>תומס סיינטיפיק</td><td>6663-F10</td><td>עובי ישתנה עבור מיקרוסקופים מסוימים</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>DEPC H20</td><td>Life Technologies</td><td>AM9922</td><td></td></tr><tr><td>אמבטיה יבשה דיגיטלית</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>888700001</td><td></td></tr><tr><td>קל גבוה אנזים שיבוט נאמנות</td><td>Agilent</td><td>600400</td><td>לשיבוט DNA&nbsp;</td></tr><tr>ניתן <td>להשתמש באנזימים ליניאריזציה של pIVT</td><td>ניו אינגלנד Biolabs</td><td></td><td>NdeI או KasI</td></tr><tr><td>אתידיום ברומיד</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>155585011</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי&nbsp;</td><td></td><td></td><td>ניתן להשתמש בכל מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>פורמלדהיד (37%)</td><td>Thermo Fisher Scientifc</td><td>9311</td><td></td></tr><tr><td>צבע טעינת RNA פורמלדהיד</td><td>אמביון</td><td>8552</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ חלבי (לא טעונות) 25X75 מ"מ</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-3</td><td></td></tr><tr><td>שיבוטי</td><td></td><td></td> cDNA באורך מלא <td>ניתן להשיג מכל ספק המספק קריאה פתוחה שיבוטי מסגרת</td></tr><tr><td>מכשיר אלקטרופורזה ג'ל</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>זכוכית פסטר פיפטס</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-678-200</td><td></td></tr><tr><td>גלובין קדימה פריימר למבנה</td><td></td><td></td><td>pIVT 5'- GAA GCT CAG AAT AAA CGC -3'.&nbsp; ניתן לרכוש מכל חברה המייצרת אוליגונוצלוטידים מותאמים אישית</td></tr><tr><td>Globin Reverse Primer for pIVT Construct</td><td></td><td></td><td>5'- ATT CGG GTG TTC TTG AGG CTG G -3' ניתן לרכוש מכל חברה המייצרת אוליגונוצלוטידים מותאמים אישית</td></tr><tr><td>Holding pipettes</td><td>Eppendorf</td><td>930001015</td><td>Vacutip</td></tr><tr><td>ניתן</td> להשתמש <td>ב-Illustra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ready-To-Go חרוזי RT-PCR</td><td></td><td></td> חממת GE Life Sciences 27925901 <td></td></tr><tr><td>כל</td><td>דגם סטנדרטי עם טכנולוגיית CO2 ומעטפת מים</td>מיקרוסקופ הפוך מכשירי ניקון כל דגם סטנדרטי תוכנת תמונה J (NIH) NIH תוכנת ניתוח תמונה מכסה של צלחת 96 באר Nalgene Nunc International 263339 <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>הידבקות נמוכה 0.5 מ"ל צינור מיקרוצנטריפג</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1405-2600</td><td></td></tr><tr><td>מקוקטור&nbsp;</td><td>תוכנת ניתוח רצף</td> <td>MacVector</td><td></td></tr><tr><td>MG132</td><td>Selleckchem</td><td>S2619</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-544-3&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>סמני רנ"א מילניום-פורמלדהיד&nbsp;</td><td>אמביון</td><td>AM7151</td><td></td></tr><tr><td>Milrinone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4659</td><td>השעיה ב-DMSO ב-2.5 מ"מ</td></tr><tr><td>שמן מינרלי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5310</td> השתמש רק ב-Monastrol Sigma-Aldrich M8515 <td>שנבדק בעובר, מסונן</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>סטרילי השעיה ב-DMSO ב-100 מ"מ</td></tr><tr><td>מיכל</td><td></td><td></td> Biodiseno MP-001-Y <td></td></tr><tr><td>N2</td><td></td><td></td><td>ללק שולחן נגד רטט</td></tr><tr><td>; נקה</td><td></td><td></td><td>ניתן להשתמש בכל לק שקוף</td></tr><tr><td>NanoDrop Microvolume UV-Vis ספקטרופוטומטר</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>NorthernMax 10X Denaturing Gel Buffer</td><td>Life Technologies</td><td>AM8676</td><td></td></tr><tr><td>NorthernMax 10X Running</td><td>buffer Life Technologies</td><td>AM8671</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE MOPS SDS מאגר ריצה</td><td>Thermo Scnentific</td><td>NP0001</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית איברים 60x15 מ"מ</td><td>Life Technologies</td><td>08-772-12</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Polysciences, Inc.&nbsp;</td><td></td><td></td>577773</tr><tr><td>PCR תרמי Cycler</td><td>תרמו פישר 4484075</td><td></td><td></td>מדעי</tr><tr><td>צלחת פטרי 139 מ"מ</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>501V</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 35 מ"מ</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>121V</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 60 מ"מ</td><td>Falcon BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Picoinjector</td><td>XenoWorks מיקרו-מזרק</td><td></td> דיגיטלי <td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>מושך פיפטה</td><td>חולץ מיקרופיפטה חום בוער</td><td>דגם P-1000</td><td></td></tr><tr><td>pIVT פלסמיד</td><td>AddGene</td><td>32374</td><td>וקטור ריק המתאים לביטוי ביציות.</td></tr><tr><td>סרום סוסה בהריון גונדוטרופין</td><td>Lee BioSolutions</td><td>493-10</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin Miniprep Kit</td><td>Qiagen</td><td>27104</td><td>טיהור של עד 20 uL של DNA פלסמיד</td></tr><tr><td>QIAquick PCR ערכת טיהור Qiagen</td><td></td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>Quikchange II ערכת מוטגנזה מכוונת אתר</td><td>Agilent&nbsp;</td><td>200523</td><td>ערכת מוטגנזה להוספות ומחיקות</td></tr><tr><td>Quikchange ברק רב אתרים מכוון ערכת מוטגנזה</td><td>Agilent&nbsp;</td><td></td><td>ערכת מוטגנזה 210512 לשינויים באתר יחיד</td></tr><tr><td>מספריים (נקודה עדינה)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>מספריים (נקודה בינונית)</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>WP114225</td><td></td></tr><tr><td>Seal-Rite 1.5 מ"ל צינור מיקרוצנטריפוגה</td><td>ארה"ב Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>מחמם</td><td></td><td></td> שקופיות <td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר (Nanodrop)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td></td><td></td><td>כל דגם סטנדרטי</td></tr><tr><td>יעילות תת-שיבוט DH5a תאים מוכשרים</td><td>Thermo Fisher Scientifc</td><td>18265017</td><td></td></tr><tr><td>מזרק</td><td>BD Bioscienes</td><td>309623</td><td>1 מ"ל, 27G(1/2)</td></tr> <tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>ניו אינגלנד Biolabs</td><td>M0202L</td><td></td></tr><tr><td>T7 mMessage Machine תפוקה גבוהה ערכת שעתוק RNA מכוסה</td><td>Life Technologies</td><td>AM1340</td><td></td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>274348</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה (נקודה עדינה - גודל 5)</td> <td>כלים מדעיים עדינים</td><td>SN.743.12.1</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Dnase/Rnase-Free מים מזוקקים</td><td>תרמו פישר Scientifc</td><td>10977015</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure אתידיום ברומיד 10 מ"ג / מ"ל</td><td>תרמו פישר Scientifc</td><td>15585011</td><td></td></tr><tr><td>UVP UV / לבן לייט transilluminator</td><td>פישר</td><td>UV95041501</td><td></td></tr><tr><td>מדעי Vectashield הרכבה מעבדות וקטור בינוני</td><td></td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

באמצעות העכבר oocytes כדי להעריך תפקוד הגן האנושי במהלך המיוזה אני

Using Mouse Oocytes to Assess Human Gene Function During Meiosis I

אנאפלואידיה עובריים הוא הגורם הגנטי פוריות אצל בני אדם. רוב האירועים האלה מקורם במהלך המיוזה הנשי, אמנם בקורלציה חיובית עם גיל, גיל לבד לא תמיד חזוי של הסיכון של יצירת העובר aneuploid. לכן, ג'ין גרסאות אולי חשבון סגרגציה כרומוזום שגוי במהלך oogenesis. בהתחשב בכך גישה oocytes האנושי מוגבל למטרות מחקר, סדרה של מבחני פותחו כדי לחקור פונקציה גנים אנושיים במהלך המיוזה אני משתמש בעכבר oocytes. ראשית, RNA שליח (mRNA) של ג'ין, ג'ין וריאנט של עניין הם microinjected לתוך prophase העכבר עצרתי oocytes. לאחר המאפשר זמן הביטוי, oocytes משתחררים באופן סינכרוני אל ההבשלה meiotic להשלמת מיוזה אני. על-ידי תיוג של mRNA עם רצף של עיתונאי פלורסנט, כגון חלבון פלואורסצנטי ירוק (Gfp), הלוקליזציה של החלבון האנושי יכול להיות מוערך בנוסף התיקונים פנוטיפי. לדוגמה, רווח או הפסד של הפונקציה יכול ייחקרו על-ידי יצירת תנאים ניסיוני זה אתגר המוצר ג'ין כדי לתקן שגיאות meiotic. המערכת הזו אמנם יתרון בחקירת פונקציה חלבון אנושי במהלך oogenesis, פרשנות נאותה של תוצאות צריך להתבצע בהתחשב בכך ביטוי חלבון אינה ברמות אנדוגני, ו, אלא אם כן מבוקר על (קרי הפיל . או למטה), מאתר homologs נמצאים גם במערכת.

לאחר במבחנה שעתוק RNA באיכות גבוהה יהיה יחס A260/A280 של (1.8-2.2) ≥1.7 יחס של A260/A230 כאשר נמדד באמצעות ספקטרופוטומטרים. התמונה באיור 1 מציגה את ההעברה של במבחנה-ייצרו RNA על ג'ל agarose denaturing לאחר אלקטרופורזה. להקה הוא מרוח תבנית או מדגם בעל מספר להקות בגודל ניתן לציין זיהום או השפלה של המדגם. לחלופין, מספר להקות עשוי להצביע על זה ה-mRNA הוא לא לגמרי שפגע בסימני או פלסמיד ההתחלתי היה לא לגמרי לליניארית. ה-mRNA יפעל גדולים יותר חזה ב...

גרסאות גנטי המשויכים מחלות אנושיות מתחילים להיות חשפו, זה הופך יותר ויותר חשוב לפתח מערכות אשר במהירות והערכת החשיבות הביולוגית של משתנים אלה שזוהו. פרוטוקול זה מתאר שיטות להערכת תפקוד הגן האנושי במהלך המיוזה הנשי אני משתמש בעכבר oocytes.

באמצעות העכבר Oocytes כדי להעריך תפקוד הגן האנושי במהלך המיוזה אני

Embryonic aneuploidy is the major genetic cause of infertility in humans. Most of these events originate during female meiosis, and albeit positively ...

המטרה הכוללת של סדרת בדיקות זו היא לחקור את תפקוד הגנים האנושיים במהלך מיוזה I באמצעות ביציות עכברים. שיטות אלו יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרבייה האנושית, כגון האם יש נטייה גנטית לאנופלואידיה אימהית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא משתמשת בביציות עכברים כמודל למיוזה של יונקים, דבר שימושי בהתחשב בחוסר הנגישות של ביציות אנושיות למחקרי תפקוד גנים.הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר רצפנו את האקסומים של נשים שעברו טיפולי הפריה חוץ גופית וששיעורי האנופלואידיה העוברית שלהן לא היו מוסברים על ידי גיל האם שלהן. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שקשה ללמוד את שלבי ניתוח התמונה והגדרת פרמטרי ניתוח קפדניים היא המפתח לקפדנות ולשחזור. באמצעות אסטרטגיית שיבוט מאומתת, הכנס את רצף הקידוד באורך מלא של הגן המעניין לאזור השיבוט המרובה של וקטור השעתוק במבחנה.מוטגניזמים של ה-DNA אם יוצרים פולימורפיזמים של נוקלאוטידים בודדים או הוספות ומחיקות, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, הפכו את הדנ"א המוטגנאי למארח חיידקים. השתמש בערכה כדי לבודד ולטהר את הפלסמיד, בהתאם להוראות היצרן.לאחר מכן, ליניאריזציה של התוצרים הסופיים באמצעות עיכול אנזים הגבלה יחיד של ה- DNA המטוהר. טהר את המוצר המעוכל באמצעות פרוטוקול ניקוי DNA מאומת או ערכה. ולשטוף 30 מיקרוליטר מים ללא RNase/DNase.במבחנה, תמלל DNA באמצעות T7 פולימראז בהתאם לפרוטוקול היצרן. לבסוף, יש לטהר ולסלק RNA ב-30 מיקרוליטר של מים נטולי RNase/DNase באמצעות ערכת טיהור חומצות גרעין מבוססת עמודת ספין של מטריצת סיליקה בהתאם לפרוטוקול היצרן. חלקו את הביציות לקבוצות שוות להזרקת מיקרו.מיקרו-הזרקה לקבוצה אחת עם mRNA ניסיוני ולקבוצה השנייה עם NPBs בקרה מסוג פרא או GFP mRNA. באמצעות מכשיר פיפטינג המופעל ביד או בפה, כאשר פתח פיפטת הזכוכית גדול מעט מקוטר הביצית, העבירו ביציות לטיפה של 100 מיקרוליטר של מדיום תרבית נטול מילרינון בצלחת פטרי מכוסה בשמן מינרלי באיכות עוברית. לאחר מכן, דגרו את הביציות במשך שבע שעות ב-37 מעלות צלזיוס ב-5% CO2 כדי לאפשר התבגרות מספקת למטפאזה של מיוזה I.לאחר הדגירה, השתמש באותו מנגנון פיפטה כדי להעביר את הביציות לצלחת תרבית איברים במרכז הבאר המכילה 700 מיקרוליטר של מדיום איסוף MEM מקורר מראש בבאר המרכזית ו-500 מיקרוליטר מים בטבעת החיצונית.מניחים את המנה על קרח למשך שבע דקות. תקן את הביציות על ידי העברתן לבאר של צלחת ספוט זכוכית שקופה המכילה 400 מיקרוליטר של 2% פרפורמלדהיד ב-1x PBS. דוגרים 20 דקות בטמפרטורת החדר.לאחר צביעה חיסונית, כמתואר בפרוטוקול הטקסט, דמו את הביציות באמצעות מטרה של 40 עד 63x במיקרוסקופ קונפוקלי. צלם צעדים קטנים במישור Z המותאם למטרת העבודה, ודמיין את כל האזור של ציר המטאפאזה. כדי לזהות את מצב החיבור של מיקרו-צינורית קינטוכור, פתח תחילה את התמונה על ידי גרירת הקובץ לסרגל הכלים ImageJ.בסדרת Z שנפתחה, נווט אל התפריט הנפתח של התמונה, ותחת הכרטיסייה משנה צבע, לחץ על מיזוג ערוצים כדי להפוך את כל הערוצים לגלויים. זה קריטי שהאנליסט יכיר איזה סוג של התקשרות לקינטוכורות אפשריות בביציות עכברים. איכות התמונה תשפיע מאוד על היכולת שלך לנתח כראוי נתונים אלה.באמצעות המתג בתחתית התמונה, עברו דרך כל פרוסת Z וקבעו את חיבור המיקרו-צינוריות של קינטוכור. בעזרת אותו מנגנון פיפטה, העבירו את הביציות לטיפה של 100 מיקרוליטר של מדיום תרבית נטול מילרינון מתחת לשמן. דגרו על הביציות במשך שבע שעות כדי לאפשר התבגרות מספקת למטפאזה של מיוזה I כמו קודם.לאחר מכן, העבירו את הביציות לצלחת תרבית איברים במרכז הבאר המכילה 700 מיקרוליטר של מדיום תרבית המכיל מונסטרול בבאר המרכזית ו-400 מיקרוליטר מים בטבעת שמסביב. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. שטפו את המונסטרול על ידי העברת ביציות דרך שלוש טיפות של 100 מיקרוליטר של מדיום תרבית CZB.לאחר מכן העבירו את הביציות לצלחת תרבית איברים חדשה במרכז הבאר המכילה 700 מיקרוליטר של מדיום תרבית בתוספת מעכב פרוטאזום בטבעת המרכזית. מוסיפים 400 מיקרוליטר מים לטבעת החיצונית ודוגרים במשך שלוש שעות. לאחר מכן, תקן את הביציות על ידי העברתן לבאר של צלחת ספוט זכוכית שקופה המכילה 400 מיקרוליטר של 2% פרפורמלדהיד ב-PBS למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.דמיינו את הביציות באמצעות מטרה של פי 40 עד 63 במיקרוסקופ קונפוקלי, לוכדים פחות ממיקרון אחד במישור ה-Z ומקפידים לצלם את כל האזור של ציר המטאפאזה. כדי לזהות את מצב יישור הכרומוזומים, פתח את קבצי התמונה באמצעות תוכנת הדמיה. לאחר מכן גרור את התמונה ללוח הבקרה של ImageJ.בסדרת Z הפתוחה, השתמש בכלי הנקודה כדי לסמן נקודות בקצה כל עמוד ציר בפרוסת Z המתאימה לו על ידי הנחת הכלי מעל מוט הציר בתמונה ולחיצה על התמונה. הוסף את הנקודות הללו למנהל ה-ROI על ידי לחיצה בו-זמנית על כפתור הפקודה ועל כפתור T במקלדת. קבע את הקואורדינטות הספציפיות עבור כל אחד מהמיקומים שנקבעו על ידי הדגשת הנקודה הספציפית במנהל החזר ההשקעה ולחיצה על כפתור המדידה.זה יספק טבלת תוצאות המכילה קואורדינטות X ו-Y עבור כל נקודה, שהן נקודות X1, Y1 ו-X1, Y2, בהתאמה. לאחר מכן, קבע את קואורדינטת Z האמיתית. זה נעשה על ידי הכפלת מספר הפרוסה של פרוסת Z הספציפית בערימת Z שבה זוהה מוט הציר בעובי הערימה.אלה יהיו נקודות Z1 ו-Z2, בהתאמה. קבע את אורך הציר באמצעות משוואת משפט פיתגורס עם הקואורדינטות X, Y ו- Z שהוגדרו קודם לכן. לאחר מכן, קבע את אזור האמצע של הציר.זה מחושב כ-1/2 אורך הציר. לחץ על סמל הקו בסרגל הכלים ImageJ וצייר קו שנמצא מעמוד ציר אחד לאזור האמצע של הציר. האורך יוצג בסרגל הכלים ImageJ.הגדרת פרמטרים קפדניים של יישור כרומוזומים מאפשרת ניתוח כמותי חזק, חשוב לשחזור נתונים. קבע את מצב יישור הכרומוזומים על ידי הערכת מרחק הכרומוזום מאזור האמצע של הציר באמצעות כלי מדידת הקו. לחץ על סמל הקו בסרגל הכלים ImageJ, וצייר קו מאזור האמצע של הציר לכרומוזום.האורך יוצג בסרגל הכלים ImageJ. כרומוזומים הגדולים מארבעה מיקרון מאזור האמצע של הציר נחשבים לא מיושרים. לאחר שהביציות עברו צביעה חיסונית והדמיה, ניתן להעריך חיבורים נכונים של קינטוכור מיקרו-צינוריות.בהתקשרות רגילה, כל זוג קינטוכור אחות של הדו-ערכי מחובר למיקרו-צינורות ציר מקטבים מנוגדים. ניתן להבחין בעד שלושה סוגים שונים של קבצים מצורפים חריגים. דוגמה אחת מתרחשת כאשר אין מיקרו-צינורות שבאים במגע עם הקינטוכור.לחלופין, מיקרו-צינורות יכולים להיקשר בצורה לא נכונה, ולייצר חיבורים סינטליים או מרוטליים. חיבורים סינטליים נוצרים כאשר שני זוגות של קינטוכורות אחיות מחוברות למיקרו-צינורות הנובעים מקוטב יחיד. התקשרויות מרוטליות מתרחשות כאשר הקינטוכורות האחיות בזוג מחוברות לקטבים מנוגדים.לאחר שהביציות מתאוששות מחוסר היישור המושרה, יכולתם של הכרומוזומים להתיישר מחדש מוערכת על ידי הדמיה. בדוגמה זו, כרומוזום דו-ערכי אחד נחשב לא מיושר מכיוון שהוא ממוקם במרחק של יותר מארבעה מיקרון מאזור האמצע של הציר. כאשר בוחרים איזו בדיקה מתאימה להערכת תפקוד וריאנט הגנים, חשוב לזכור כי וריאנטים של הגנים האנושיים הנחקרים מתבטאים יתר על המידה וכי ייתכן שיהיה צורך לדלל את ההומולוגים האנדוגניים של העכברים בו זמנית.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו CRISPR-Cas9 ליצירת זני עכברים אנושיים כדי לענות על שאלות נוספות, כגון הבנה כיצד וריאנט הגן משפיע על איכות הביציות והעוברים והאם הוא משפיע על בריאות הרבייה של הפרט. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הגנטיקה של הרבייה לחקור גורמים סיבתיים אחרים לאנופלואידיה אימהית בבני אדם. זיהוי גנים יכול לספק אבחון רב עוצמה ובסיס למחקרים בתיקון אנופלואידים.תודה שצפית. בהצלחה בניסויים שלך.

using-mouse-oocytes-to-assess-human-gene-function-during-meiosis-i

Research

JoVE Journal

Genetics

גנטיקה

פרוטוקול זה ממחיש את הטכניקה עבור ביציות לחילוץ או בשלב מוקדם, עוברים מן oviduct מופרית של עכברים. היכולת לזהות את infindibulum והכנס מחט סוף בוטה לתוך זה הכרחי נכון לבצע את ההליך.

איחזור של ביציות עכבר

ביציות נוטים aneuploidy בשל טעויות הפרדה כרומוזום במהלך ההבשלה meiotic. ביצים Aneuploid יכול לגרום לבעיות פוריות הפלות או הפרעות התפתחותיות כמו תסמונת דאון. כאן אנו מתארים שיטות להציג חומרים הבחירה לתוך ביציות ושיטות מחקר התבגרות meiotic ולהעריך ploidy.

הביצית Microinjection עכבר, הבשלה ו Ploidy הערכה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדלדול mRNA ספציפי בתיווך siRNA אחרי ניתוח immunofluorescence להעריך הרכבה ציר meiotic וארגון בביציות עכבר. פרוטוקול זה מתאים לדלדול במבחנה של תמלילים והערכה תפקודית של ציר שונה ו / או גורמים הקשורים MTOC בביציות.

Meiotic ציר ההערכה בעכבר ביציות על ידי השתקה בתיווך siRNA

אנו מציגים פרוטוקולים לאיסוף, הכנה והדמיה של ביציות דרוזופילה בוגרות. שיטות אלו מאפשרות הדמיה של התנהגות הכרומוזומים והרכבת הציר ותפקודו במהלך מיוזה.

טכניקות הדמיה prometaphase ו Metaphase של המיוזה ואני קבוע<em&gt; תסיסנית</em&gt; ביציות

Oogenesis ביונקים ידוע להיות מועדת לטעויות, במיוחד עקב כרומוזום missegregation. כתב יד זה מתאר שיטות הכנה כרומטין להפיץ prophase העכבר, מפה של אני, oocytes ביים השני. טכניקות יסוד אלה מאפשרים לימוד חלבוני כרומטין מכורך כרומוזום מורפולוגיה ברחבי oogenesis יונקים.

כרומטין להפיץ את ההכנות לניתוח של העכבר Oocyte התקדמות מן Prophase כדי מפה של השני

מוצג פרוטוקול אופטימלי המאפשר דלדול של מרכזי ארגון מיקרוטובולים ציטופלסמיים בביציות עכבר במהלך מטאפאזה I באמצעות לייזר פמטו-שניות כמעט אינפרה-אדום.

אבלציה בלייזר רב-פוטונים של מרכזי ארגון מיקרוטובולים ציטופלסמיים בביציות עכבר

שגיאה בהפרדת כרומוזומים היא תכונה נפוצה בביציות. לכן, חקר מחסום הרכבת הציר נותן רמזים חשובים על המנגנונים הדרושים לייצור ביצים בריאות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שלוש בדיקות משלימות להערכת שלמות מחסום הרכבת ציר בביציות עכבר.

הערכת שלמות מחסום הרכבת הציר בביציות עכבר

שמירה על שלמות גנום הביצית נחוצה כדי להבטיח את הנאמנות הגנטית בעובר המתקבל. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מדויק לאיתור שברים דו-גדיליים בדנ"א בתאי נבט נקביים של יונקים.

איתור שברים דו-גדיליים בדנ"א בביציות עכבר

פרוטוקול זה מספק מסגרת ניסויית לתיעוד ההשפעה הפיזית של השלד הציטו-שלד על הצורה הגרעינית ועל האברונים חסרי הקרום הפנימי במערכת הביציות של העכבר. ניתן להתאים את המסגרת לשימוש בסוגי תאים ובהקשרים אחרים.

לכידת תסיסה מבוססת שלד של גרעין ביצית העכבר על פני קני מידה מרחביים

שגיאות מיוטיות בסינפסות ורקומבינציה נפוצות בביציות של יונקים. ניתוח קפדני של חלבונים המעורבים בתהליכים אלה חיוני להבנה כיצד ומדוע ביציות משתבשות לעתים קרובות. הטכניקות המוצגות כאן מאפשרות ניטור מקיף של רקומבינציה וסינפסות כדי להעריך את איכות הביציות בעכברים.

הכנת התפשטות כרומוזומים מיוטיים מביציות עכבר להערכת סינפסה ורקומבינציה

למדו להעריך תפקוד גנים אנושיים במיוזה נקבית באמצעות שימוש בעוברי עכבר. שיטה זו מאפשרת חקר גורמים גנטיים המשפיעים על אנאופלואידיה אימהית ומסייעת להבנת סיכונים ברפואה רבייתית.

באמצעות העכבר Oocytes כדי להעריך תפקוד הגן האנושי במהלך המיוזה אני

גלה סרטונים נוספים