Name: מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל עכברים לקוליטיס סחה לחקר האינטראקציה בין מערכת החיסון למיקרוביום במעי הגס. השיטה אינה דורשת עכברים מגנטיים או חומרים מגרים כימיים, ומאפשרת חקירה אמינה של תגובות חיסוניות בקוליטיס לימפוציטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הרשות וטרינרי ממשלתי (לדנציג Landesamt Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei מקלנבורג-מערב פומרניה, (LALLF M-V)).
1. לפני הניתוח טיפול והכנה של החיה
<ol><li>עם ההגעה במתקן של בעלי חיים, חלק חיות (C57Bl/6) לקבוצות גודל דומה, לכלוא כל קבוצה ביחד ולשמור קבוצות קבועה לאורך כל הניסויים. הערה: השתמש חיות מאותו המין. הממצאים המתוארים התקבלו עם עכברים זכרים. הערה: אם זכר בעלי חיים משמשים, קבוצות כלוב יחד מתחיל כאשר הם בגיל 7 שבועות, כך ניתן ליצור היררכיה, ובכך למזער את הסיכון של התנהגות אגרסיבית במהלך הניסויים.</li>
	<li>לפחות שבוע לפני הניתוח, לעבור אנרגיה גבוהה (> 14 MJ/kg) וחלבון גבוהה (> 20%) להאכיל המכיל את כל יסודות קורט חיוניים וויטמינים (לפרטים, ראה רשימת חומרים). הערה: מבטיח כל העכברים שוקלים לפחות 25 g כאשר הניתוח מבוצע.</li>
	<li>זירוז אלחוש, שיכוך כאבים באמצעות הזרקת בקרום הבטן של קטאמין (i.p. 87 מ"ג/ק"ג), חריגות השירותים הווטרינריים הידרוכלוריד (i.p. 13 מ"ג/ק"ג). המתן עד העכבר סובלנית גירוי מכני, למשל הבוהן זפת, ללא תגובה מוטורית.</li>
	<li>אבטח את העכבר narcotized עם קלטות במצב פרקדן על אנדרליי חום מוצב השולחן מבצע, המבטיח של אובדן חום גוף מהמם מיצוב במהלך מבצע והימנעות יציב. הערה: אנדרליי חום צריך טמפרטורת פני שטח של 36 ° C עד 40 מעלות צלזיוס; טמפרטורת הפעלה החדר צריך להיות 21 ° C.</li>
</ol>2. מבצע דיסטלי למעי הגס
<ol><li>לגלח את השיער בבטן. לפני תחילת הניתוח, לחטא את השדה מבצע שלוש פעמים באמצעות אלכוהול 70% של iodophor. לעטוף את שדה הפעולה כדי להבטיח תנאים אספטי.</li>
	<li>לבצע פתיחת בטן החציוני של 15 מ מ על-ידי אם את שרירי הבטן ואת של הצפק לאורך לינאה אלבה, ובכך למזער את אובדן דם.</li>
	<li>להשתמש מלקחיים atraumatic דה-בייקי שני, משוך בזהירות את המעי האטום, ileum מסוף, עולה ואת המעי הגס של חלל הצפק. הערה: הקפד להגביל באופן מכני מניפולציה של המעי כדי למנוע פגיעה במבנים מצע המעי העליון.</li>
	<li>לזהות את הקוטב cecal, עולה המעי הגס ו המעי הדק (דמויות 1a ו 1b). הערה: זיהוי נכון של הגס עולה הוא מהותי עבור מיקום נכון של למעי הגס. במקרים בהם האנטומיה של האזור ileocecal רב-משמעי, הנוכחות של טלאים של פייה מזהה המעי הדק, הנוכחות של צואה בנוי המאפיינת את המעי הגס.</li>
	<li>להשתמש בסרגל כדי לקבוע את המיקום של למעי הגס בעתיד. זה צריך להיות ממוקם 20 מ מ דיסטלי לשסתום ileocecal עבור למעי הגס דיסטלי.</li>
	<li>עושים חתך 3 מ מ השני בקיר הבטן ברבע העליון נכון. משוך על קטע המעי הגס שזוהה קודם לכן דרך החתך כדי ליצור לולאה, נזהר שלא לעוות את הלולאה.</li>
	<li>להעביר בזהירות קליבר 22 גמיש הזרקה דרך לפדר האחורי. . שמור על עצמך שלא יגרמו נזק למבנים וסקולרית מצע המעי העליון.</li>
	<li>לחזור המעי חלל הצפק.</li>
	<li>לתקן את שני הקצוות של הצינור הגמיש על העור באמצעות תפרים פשוטים, בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>לפני סגירת את פתיחת בטן, לבצע החייאה נוזלים באמצעות זריקה בקרום הבטן של 0.5 מ ל 0.9% תמיסת מלח.</li>
	<li>סגור של הצפק, השכבה שריר בתפר רצוף באמצעות בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1/2 c). סגור את העור בתפר רצוף באמצעות בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>פתח את לולאת המעי הגס יהיו exteriorized על ידי ביצוע של חיתוך של סכומי ביניים באמצעות מספריים משובחים. למנוע כל פגיעה מצע המעי. לא transect המעי הגס לחלוטין.</li>
	<li>לתקן כל הפתיחה למעי הגס באמצעות שלושה תפרים מלא-עובי יחיד הצפק, העור באמצעות a monofil, תפר שנספג (למשל, polydioxanone או monofil, 6-0 3/שמיניות). הלולאה מביא, שהוא הקצה פונקציונלי-למעי הגס, ואת הלולאה efferent, אשר פיסטולה ריריות, מופרדים באופן ברור בנקודה זו (איור 1 c). הערה: זמן הפעולה צריכה להיות פחות מ-20 דקות כדי להגביל הפסדים תרמיים של נוזלים.</li>
	<li>לאחר סיום הניתוח, לחיטוי מכשירים באמצעות פתרון נטולת אלדהיד לחיטוי באמבט אולטראסוני לפי ההוראות של היצרן.</li>
</ol>3. המזויפים מבצע (Colotomy)
<ol><li>בצע שלבים 1.1. דרך 2.4.</li>
	<li>להשתמש בסרגל כדי לקבוע את מיקום colotomy בעתיד. Colotomy שנמצאת באותו המרחק מן השסתום ileocecal כמו למעי הגס ב קבוצת הניסוי.</li>
	<li>פתח את המעי הגס לפחות שני שלישים והיקפו באמצעות מספריים משובחים.</li>
	<li>סגור colotomy עם שכבה אחת, מלא-עובי קטע התפר באמצעות a monofil, שנספג תפר (למשל, polydioxanone, monofil, 6-0 3/שמיניות). הערה: זמן הפעולה צריך להיות פחות מ-20 דקות בשביל מנתח experimented, הגבלת הפסדים תרמיים של נוזלים.</li>
	<li>בצע שלבים 2.10. , 2.11. 2.14.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>לחזור חיות הכלובים. מספקים אווירה היטב מחוסמת של 37 ° C (למשל, עם מנורת אינפרא-אדום) עד עכברים ער לגמרי. לאחר מכן, לשמור על עכברים בסביבת טמפרטורה, לחות-מוסדר (21 ° C; 30% ± 10% לחות יחסית). לאפשר גישה חופשית מזון ומים לשתיה. כדי להקל על ספיגת נוזלים, לספק הזנה בבעלי חיים ספוגי מים נוספים.</li>
	<li>מתחילים כאבים לאחר הניתוח על ידי הזרקת 0.1 מ"ג/ק"ג גוף במשקל הבופרנורפין ספורטינג כאשר בעלי חיים מראים תגובת גירוי מכני. להיות זהירים כדי למנוע דיכאון בדרכי הנשימה.</li>
	<li>תוספת שתייה עם 1 מ"ג/מ"ל טרמדול עבור המשך כאבים במהלך השבוע לאחר הניתוח הראשון.</li>
	<li>כדי לפצות על צריכת הנוזלים ירד עקב צמצום הניידות, לספק משטח מוצק לשתות בכלוב בשבוע הראשון לאחר הניתוח.</li>
	<li>שוקל החיות והתנהגות בעלי חיים ציון מדי יום במהלך השבוע הראשון, בכל יום שני במהלך שארית החודש הראשון, בכל יום שלישי במהלך החודש השני באמצעות התוצאה חומרת המחלה המתוארים Kleinwort. et al. 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

כל המחברים מצהירים כי יש להם אין אינטרסים מתחרים.

המודל מאתר של DC הוצג פרוטוקול זה אמין מתרבה התכונות histopathological של האדם DC (למשל, פיתוח דה נובו של זקיקי הלימפה submucosa של מקטעי מעי מודלק, קריפטה קיצור הפחתות מספרי הטלפון הנייד גביע). מלבד יתרון זה, מודל זה הנגרמת על ידי גורם מפעילה דומה מאוד, מציג עם קורס קליני של בינוני עד סיכון מתון כמו במקרה של בני אדם המושפע ביותר.
כדי להשיג תוצאות לשחזור, מקובל perioperative קטלני, הכרחי להתאמן בטכניקות מיקרוכירורגיות בא לידי ביטוי. עם זאת, ניתן לבצע הפעולה למעי הגס והן דמה (...

בשנים האחרונות, מספר ניכר של קוליטיס שאינן זיהומיות ישויות שונות ממחלות מעי דלקתיות קלאסית (IBDs; כלומר-, או קוליטיס ulcerosa קרוהן) יש כבר קליניות, histopathologically מאופיין אצל בני אדם. המנגנונים הקשורים pathophysiological המובילים להתפתחות של צורות אלה קוליטיס אינם לגמרי מובנים חלקית כי המתאים מודלים בעלי חיים נדירים. קוליטיס הסחה הוא אחד הישויות הללו תיאר לאחרונה. למרות שהמונח הוטבע בשנת 1980 על ידי Glotzer1, התיאור הראשוני של הפנוטיפ דומה ניתנה בשנת 1972 על-ידי Morson2. המחלה מתפתחת ב 50 91% מהחולים עם הטיית enterostomy, בעוצמתה קליני משתנה3,4. לאור השכיחות שנתי של 120,000 חולי למעי הגס ב ארצות הברית של אמריקה, ישות מחלה זו מהווה בעיה בריאות חשובה.
המטרה הכוללת של פיתוח פרוטוקול זה היה לספק מודל DC מאתר זה מסתמכת על גורם קוליטיס דומה כי ראיתי בוושינגטון האנושית ואת זה מתרבה התכונות histopathological של המחלה האנושית. לעומת דגמים אחרים מאתר קוליטיס, קוליטיס אינדוקציה במודל שלנו אינה דורשת מהונדסים בעלי חיים (למשל, העכברים הטרנסגניים IL-7, N-קדהרין עכברים שלילי דומיננטי או עכברים TGFβ- / - ), היישום של כימית מעצבן חומרים (למשל, לתוספי סולפט נתרן (DSS) - קוליטיס המושרה, או חומצה sulfonic trinitrobenzene (TNBS) - induced קוליטיס) או ההעברה של אוכלוסיות תאים מסוים בעכברים לקוי מערכת החיסון (כמו העברתגבוהה CD45RB מודל של קוליטיס) (לסקירה, ראה5). לעומת דגמים אחרים, המערכת החיסונית שלם של מודל DC שלנו מאפשרת הערכה של מנגנון אימונולוגי מעורב בפיתוח DC. המגבלה של דלקת הרירית את פלח המעי נשלל מאפשר הערכה של השלכה שלה על חסינות הרירית בחלקים אחרים מערכת העיכול, על הומאוסטזיס החיסון בתאים חיסוניים אחרים של מערכת העיכול (למשל , Mesenteriale הלימפה ותיקונים של פייה), וביום של הומאוסטזיס המערכת החיסונית של האורגניזם כולו. בסופו של דבר, המודל שלנו מהווה כלי המתאים עבור חוקרים את מנגנוני שליטה גירויים דלקתיות מקומיים שמקורם שינויים בסביבת המקומי הרגיל הן microbiome המקומי כמו גם אנטיגנים מסולקים.

<table><tbody><tr><td>חומר פעולה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תחתית חום, 6 וואט</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 70% (עם methylethylketon)</td><td>בית המרקחת של בית החולים האוניברסיטאי Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים מעץ, ראש כותנה קטן חד צדדי, מקל עץ, אורך 150 מ"מ</td><td>Centramed GmbH, גרמניה</td><td>8308370</td><td>לחיטוי שדה הניתוח</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים אטראומטיים DeBakey</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. צינורית 22G</td><td>Braun Melsungen AG, גרמניה</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 סגול קלוע; V-5 17 מ' 1/2c; 70 ס"מ</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 מונופיל; V-18 13 מ"מ 3/8c; 70 ס"מ</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 מ"ל (מזרקים עם מחט עם פנים סטרילי)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, גרמניה</td><td>18824-01</td><td>חיטוי מכשירים כירורגיים באמבט אולטרסאונד</td></tr><tr><td>Medicines</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamine 10%, 100 מ"ג/מ"ל (קטמין הידרוכלוריד)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 מ"ג/ק"ג i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 מ"ג/מ"ל (קסילזין הידרוכלוריד)</td><td>selectavet, ד"ר אוטו פישר GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 מ"ג/ק"ג i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td> <td>בראון Melsungen AG, גרמניה</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>בופרנובט 0.3 מ"ג/מ"ל (בופרנורפין)</td><td>באייר, גרמניה</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 מ"ג/ק"ג s.c.</td></tr><tr><td>טיפות טרמאליות, 100 מ"ג/מ"ל (טרמדול הידרוכלוריד)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, גרמניה</td><td>10116838</td><td>1 מ"ג/מ"ל מי שתייה</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 גרם (ceftriaxone) &nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, גרמניה</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 מ"ג/ק"ג משקל גוף i.p.</td></tr><tr><td>metronidazole 5 מ"ג/מ"ל</td><td>Braun Melsungen AG, גרמניה</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 מ"ג/ק"ג משקל גוף i.p.</td></tr><tr><td>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, גרמניה</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>משקה מוצק Dehyprev Vit BIO, שקיות</td><td>TripleATrading, הולנד</td><td>ציוד SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, גרמניה</td><td></td><td>מיקרוסקופיה קלה</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, ארה"ב</td><td>770-9000</td><td>מנתח המטולוגיה וטרינרית של 50 ומיקרו; l ורידי EDTA-דם</td></tr><tr><td>בנדלין SONOREX (אמבטיה אולטרסאונד)</td><td>אלקטרוניקה של בנדלין, גרמניה</td><td>RK 100 H</td><td>חיטוי של מכשירים כירורגיים</td></tr><tr><td>תוכנה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 תוכנה</td><td>Nikon Instruments Europe BV, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism גרסה 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים c57bl/6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

הסחה קוליטיס (DC) הוא מצב קליני תכופים המתרחשים אצל חולים עם קטעי המעי נכללו הנחל צואה כתוצאה enterostomy להסיט. האטיולוגיה של המחלה נשאר מעורפל אבל נראה שונים של מחלות מעי דלקתיות קלאסית כמו קוליטיס ומחלת קרוהן. במחקרי לפענח את המנגנונים הקשורים pathophysiological המובילים להתפתחות של מחלה זו יש כבר את מימושן היעדרה של מודל מאתר המתאים. פרוטוקול זה יוצר מודל מאתר של DC המקל על הלימוד התפקיד של מערכת החיסון ביחסיו עם microbiome בפיתוח של DC. במודל זה באמצעות בעלי חיים C57BL/6, דיסטלי חלקי המעי הגס אינם נכללים הנחל צואה על-ידי יצירת למעי הגס הדיסטלי, מפעילה את התפתחות קל עד בינוני דלקת מקטעי מעי שלא נכללו מתרבה נגעים סימן ההיכר של האדם DC עם תגובה דלקתית מערכתית מתונה. בניגוד לדגם עכברוש, מספר רב של מודלים מאתר מהונדס גנטית על רקע C57BL/6 הינם זמינים. השילוב של בעלי חיים אלה עם המודל שלנו מאפשר את התפקידים פוטנציאלי של ציטוקינים בודדים, נוגדנים או קולטנים של מולקולות ביו (למשל, אינטרלויקין (IL)-17; IL-10, כימוקין CXCL13, כימוקין רצפטורים CXCR5, CCR7 ו sphingosine-1-פוספט הקולטן 4) לפנות לבדיקה בפתוגנזה של DC. הזמינות של זנים העכבר congenic על רקע C57BL/6 במידה רבה מקלה על העברת הניסויים להקים את התפקידים של סוגי תאים נפרדים מעורב האטיולוגיה של DC. בסופו של דבר, המודל מציע את ההזדמנות כדי להעריך את ההשפעות של התערבויות מקומיים (למשל, שינוי של microbiome המקומי או טיפול אנטי דלקתי מקומי) על חסינות הרירית בקטעים המעי הנגוע, שאינן מושפעות ו- הומאוסטזיס המערכת החיסונית מערכתית.

הניתוח הוא נסבל היטב הן את ניסיוני (למעי הגס) והקבוצות דמה (colotomy). התמותה Perioperative לא יעלה על 10% בעת ניתוח וניהול perioperative מבוצע כהלכה. בשבוע שלאחר הניתוח הראשון, הרזיה משמעותית נתפסת בשתי הקבוצות ניסיוני, שאם. חיות של קבוצת המזויפים להשיג שלהם נאדיר משקל בדרך כלל לקראת היום הרביעי לאחר הניתוח, אך היא מתרחשת יום אחד מאוחר יותר קבוצת הניסוי. ירידה במשקל מודגש יותר בקבוצה ניסיוני, להגיע 21.7% ממשקל הגוף הראשונית. לעומת זאת, בעלי החיים המזויפים לאבד 10.8% של הגוף הראשונית שלהם...

מאתר למעי הגס דיסטלי מספק מודל מאתר הסחה האנושי קוליטיס, קוליטיס בעיקר לימפוציטית קטע המעי הגס נכללו הנחל צואה.

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להקל על חקר תפקידה של מערכת החיסון והאינטראקציה שלה עם המיקרוביום בהתפתחות קוליטיס הסחה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בנוגע לקוליטיס הסחה המתרחשת בשני המקטעים שאינם נכללים בזרם הצואה ומשפיעה על עד 90% מהחולים עם Vertting Enterostomy. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא אינה דורשת בעלי חיים מהונדסים גנטית, שימוש בחומרים מגרים כימית או העברת אוכלוסיות תאים ספציפיות לעכברים חסרי חיסון כדי לגרום לקוליטיס.עם ההגעה למתקן החיות, חלקו עכברים לקבוצות בגודל דומה. כלאו כל קבוצה יחד ושמרו על הקבוצות קבועות לאורך כל הניסויים. לפחות שבוע לפני הניתוח, עברו למזון עתיר אנרגיה וחלבון המכיל את כל יסודות הקורט והוויטמינים החיוניים.כדי להתכונן לניתוח לאחר הרדמת החיה על פי פרוטוקול הטקסט, השתמש בנייר דבק כדי לייצב את החיה במצב שכיבה על כרית חימום כדי למנוע אובדן חום הגוף. לאחר מכן, בדוק שהעכבר סובל גירוי מכני, למשל צביטה בבוהן ללא תגובה מוטורית.לפני תחילת הניתוח יש לחטא את שדה הניתוח שלוש פעמים באמצעות אלכוהול 70% ו-4 יוטה. עטוף את שדה הניתוח כדי להבטיח תנאים אספטיים. בצע לפרוטומיה בינונית של 15 מ"מ על ידי חיתוך שרירי הבטן והצפק לאורך הלינאה אלבה ובכך למזער את איבוד הדם.לאחר מכן, בעזרת שני מלקחיים אטראומטיים debakey, משוך בזהירות את הצקום, האילאום הסופי והמעי הגס היורד והרוחבי מחלל הצפק. הקפד להגביל את המניפולציה המכנית של המעי על מנת למנוע פגיעה במבנים מזנטריים ולשמור על השפע האופטימלי של המעי. לאחר מכן, זהה את הקוטב הצקאלי, המעי הגס העולה והמעי הדק.אם האנטומיה של האזור האילאוצקלי אינה חד משמעית, נוכחותם של כתמי פייר מזהה את המעי הדק ונוכחות צורות אטורות מאפיינת את המעי הגס. השתמש בסרגל כדי לקבוע את מיקום המעי הגס העתידי. יש למקם אותו 20 מ"מ דיסטלי לשסתום האילאוצקלי לצורך קולוסטומיה דיסטלית.בצע חתך שני של 3 מ"מ בדופן הבטן ברבע הימני העליון. לאחר מכן, משוך את קטע המעי הגס שזוהה קודם לכן דרך חתך זה כדי ליצור לולאה, תוך הקפדה לא לעוות את הלולאה. העבירו בזהירות צינורית IV גמישה בגודל 22 דרך המזוקולון, והקפידו לא לפגוע במבני כלי הדם המזנטריים.לאחר מכן, החזירו את המעי לחלל הצפק. בעזרת תפרים פשוטים ותפר נספג, קבע את שני קצוות הצינור הגמיש לעור. לפני סגירת הלפרוטומיה, בצע החייאת נוזלים באמצעות הזרקה תוך פריטונאלית של 0.5 מ"ל של 0.9% מי מלח.סגור את הצפק ואת שכבת השריר בתפר נספג רציף. לאחר מכן, סגור את העור בצורה דומה. בעזרת מספריים עדינים פתח את לולאת המעי הגס החיצונית על ידי ביצוע חתך תת-כולל.הימנע מכל פגיעה במזנטריה ואל תחצה לחלוטין את המעי הגס. בעזרת תפר נספג מונופיל, קבע כל פתח קולוסטומיה באמצעות שלושה תפרים בודדים בעובי מלא לצפק ולעור. הלולאה הנכנסת, שהיא קולוסטומיה סופית פונקציונלית והלולאה היוצאת, שהיא פיסטולה רירית, מופרדות בבירור בשלב זה.כדי לבצע קולוטומיה, לאחר זיהוי הקוטב הצקאלי, המעי הגס העולה והמעי הדק כפי שהודגם עבור הקולוסטומיה הדיסטלית, השתמש בסרגל כדי לקבוע את מיקום הקולוטומיה העתידית שיש למקם באותו מרחק מהשסתום האילאוצקלי כמו הקולוסטומיה. בעזרת מספריים עדינים, פתח את המעי הגס לפחות שני שליש מהיקפו. בעזרת תפר נספג מונופיל, סגור את הקולוטומיה בתפר קטוע בעובי מלא לפני ביצוע החייאה נוזלית וסגירת הצפק והעור כמו קודם.לאחר ההליך, החזירו בעלי חיים לכלובים שלהם והניחו אותם מתחת למנורת אינפרא אדום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עד שהם ערים לחלוטין לפני החזרתם לסביבה מבוקרת טמפרטורה ולחות. כאשר בעלי חיים מראים תגובה לגירוי מכני, התחל בשיכוך כאבים לאחר הניתוח, על ידי הזרקת 0.1 מ"ג לק"ג משקל גוף, בופרנורפין SC. בדוק היטב אם יש סימנים לדיכוי נשימתי. תוסף מי שתייה עם 1 מ"ג למ"ל טרמדול להמשך שיכוך כאבים במהלך השבוע הראשון שלאחר הניתוח.כדי לפצות על ירידה בצריכת הנוזלים עקב ניידות מופחתת, ספק כרית שתייה מוצקה בכלוב במהלך השבוע הראשון שלאחר הניתוח. לבסוף, שקלו את החיות וציינו את התנהגות בעלי החיים מדי יום במהלך השבוע הראשון, כל יומיים במהלך שארית החודש הראשון, וכל יום שלישי במהלך החודש השני. ניתוח נסבל היטב הן בקבוצת הניסוי והן בקבוצת הדמה.הירידה במשקל בולטת יותר בקבוצת הניסוי ומגיעה ל-21.7% ממשקל הגוף ההתחלתי. לעומת זאת, חיות דמה מאבדות 10.8% ממשקל גופן ההתחלתי. התמותה הכוללת במהלך 60 הימים הראשונים לאחר הניתוח היא בסביבות 40% בקבוצת הקולוסטומיה וכ-10% בקבוצת הדמה.רוב מקרי המוות התרחשו במהלך השבוע הראשון שלאחר הניתוח, כאשר סיבות המוות מוצגות באיור זה. קולוסטומיה דיסטלית בעכברים מביאה להתפתחות קוליטיס לימפוציטית בעיקר, המשחזרת את המאפיינים ההיסטולוגיים הבולטים של DC אנושי. אורך הקריפטה הנושאת תא גביע מצטמצם לאחר 30 יום בקטעי מעיים לא נכללים.מספרי תאי הגביעים המוחלטים מופחתים באופן משמעותי גם בקריפטה במקטע המעי הלא נכלל לאחר 14 ימים לאחר הניתוח. הנגע הבולט של DC, התפתחות זקיקי הלימפה ברירית דורש משך זמן ארוך יותר של סטיית צואה. למרות שניתן להבחין במספר מוגבר של זקיקי הלימפה כבר בשבועיים, ההבדלים הופכים משמעותיים לאחר חודשיים.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע קולוסטומיה דיסטלית של עכברים. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך פחות מ-20 דקות אם היא מבוצעת כראוי. ניתן לשלב מודל זה עם מודלים מהונדסים גנטית אחרים או ניסויי העברה בזני עכברים קונגניים, על מנת לטפל בתפקידם של מתווכים דלקתיים של אוכלוסיות תאים ספציפיות, והפתוגנזה של קוליטיס הסחה.

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Dextran נתרן סולפט (DSS) מנוהל במי השתייה הוא מודל הוקמה Murine פגיעה דלקתית חריפה של קוליטיס. פרוטוקול זה מתאר את שיטת הטיפול DSS והכנת רקמות.

קוליטיס דוגמנות Murine באמצעות נתרן dextran סולפט (DSS)

אנחנו מדגימים את פרוטוקול שבו ממשל של azoxymethane הסוכן genotoxic (AOM) ואחרי שלושה מחזורים של נתרן פרו דלקתי סוכן dextran סולפט (DSS) במהירות ובעקביות יוצר גידולים במעי גס בעכברים עם דמיון מורפולוגיים ומולקולרי לאלו שנראו בקוליטיס האנושי -קשור לסרטן.

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי ליצירת לולאת מעי גס פרוקסימלית של עכבר או קטע pcLoop ואחריו הזרקה intraluminal של סמנים פלואורסצנטיים לתוך קטע כדי לחקור את חדירות אפיתל המעי.

יצירת מודל לולאת מעי גס פרוקסימלי של עכבר: הליך כירורגי ליצירת לולאת מעי גס פרוקסימלית ומדידת חדירות המעי על ידי זיהוי סמנים פלואורסצנטיים בסרום לאחר הזרקה תוך לומינלית

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת מודל מורין המושרה על ידי כימיקלים של קוליטיס - מחלת מעי דלקתית. העכבר רשאי לצרוך תמיסת דקסטרן נתרן סולפט (DSS) למשך זמן הולם. עם הצריכה, DSS פוגע במחסום הריר ושכבת האפיתל במעי הגס, ומאפשר לחיידקי המעי להיכנס לרקמה הבסיסית - שם הם חשים על ידי תאי החיסון המקומיים כדי לתווך תגובה חיסונית מוגזמת, וכתוצאה מכך דלקת.

טכניקה ליצירת מודל מורין של קוליטיס הנגרמת על ידי דקסטרן סולפט נתרן

זיהום rodentium Citrobacter מספק מודל יקר ללמוד זיהומים חיידקיים enteric כמו גם לארח תגובות וקוליטיס חיסוניים בעכברים. פרוטוקול זה מתאר מדידה של יושרת מכשול, עומס הפתוגן ופגיעת היסטולוגית מאפשרת אפיון היסודי של תרומות פתוגן ומארח לקוליטיס המדבק העכברי.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

במהלך השנים האחרונות, אנדוסקופים דור חדשים צמחו כעזרי מחקר אבחונים חשובים להערכת קוליטיס העכברי וגידולי מעי גס. אנו מציגים במסמך פרוטוקול מפורט לשיטת ניקוד חדשה שמשתמשת במזהים עשרוניים לתעד את החומרה אנדוסקופית של קוליטיס וגידולי מעי גס הערכה אנדוסקופית של דלקת וגידולי מעי גס בעכברים, כמו גם.

קולונוסקופיה גמישה בעכברים כדי להעריך את חומרת קוליטיס ומעי הגס גידולים באמצעות מערכת Validated אנדוסקופי ניקוד

פרוטוקול להקמת מודל עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס על ידי זיהום adeno-cre קטע ו מעקב שלה באמצעות קולונוסקופיה ברזולוציה גבוהה מוצג.

דגם עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס ספוראדי

חסימות מעיים הם סתימה חלקית או מלאה של המעי העלולה לגרום כאבי בטן, בחילות, הקאות, מניעת המעבר של צואה. ההליך ליצירת obsructions חלקי המעי בעכברים זה אמין בלימוד המנגנונים צמיחת תאים פתולוגיים ומוות במעי.

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

דליפה anastomotic או התמוטטות לאחר הניתוח היא הגורם העיקרי לזיהום לאחר הניתוח. הניתוח ליצירת השקה של המעי הגס הוא שיטה לשחזור ואמין ללמוד את מנגנוני הריפוי של חיבור.

יצירה של השקה שטיפת המעי הגס בעכברים

הפרוטוקול המוצג מתאר הסרה כירורגית נתיישב של התוספתן (טלאי caecal) בעכבר ואחריו אינדוקציה של מחלת המעי הגס מחלות הקיבה הקשורים סרטן. המודל להסרת התוספתן של murine מאפשר חקירה של התפקיד הביולוגי של התוספתן בפתוגנזה של מחלת העיכול האנושית.

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

אנו מתארים מודל מורין של אילאוס לאחר הניתוח שנוצר באמצעות מניפולציה במעיים. תפקוד המעבר במערכת העיכול, שינויים פתולוגיים והפעלת תאי מערכת החיסון הוערכו 24 שעות לאחר הניתוח.

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

למדו כיצד ליצור מודל עכברים לקוליטיס סחה לחקר האינטראקציה בין מערכת החיסון למיקרוביום במעי הגס. השיטה אינה דורשת עכברים מגנטיים או חומרים מגרים כימיים, ומאפשרת חקירה אמינה של תגובות חיסוניות בקוליטיס לימפוציטי.

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

גלה סרטונים נוספים