Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an <em>in Situ </em>Proximity Ligation Assay

Sofiia Karchugina; Jonathan Chernoff

doi:10.3791/57755

זיהוי של Heterodimerization של חלבון איזופורמים שימוש בחיי עיר הקרבה מצדו Assay

JoVE Journal
Biochemistry
Author Produced

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

זיהוי של Heterodimerization של חלבון איזופורמים שימוש בחיי עיר הקרבה מצדו Assay

Full Text

7,952 Views

09:18 min

October 20, 2018

DOI: 10.3791/57755-v

Sofiia Karchugina¹, Jonathan Chernoff¹

¹Fox Chase Cancer Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

כאן, אנו מראים כיצד להשתמש Assay מצדו קרבה (PLA) כדי להמחיש את MST1/MST2 heterodimerization בתאים קבוע עם רגישות גבוהה.

Assay רצועות קרבה במקום או PLA, היא טכנולוגיה המסוגלת לזהות אינטראקציות בין חלבונים, רקמות מודבקות, ותאים. הקשרים בין חלבונים ניתן לזהות ולכומת ללא צורך בביטוי מהופנט או טכנאים נוספים. הדרישה היחידה היא הזמינות של נוגדנים ספציפיים ביעילות גבוהה שניתן לשנות עם אוליגונוקלאוטידים DNA.

ברקמות MST1 ו MST2 קיימים בעיקר כמו homodimers פעיל, אבל גירויים אונקוגניים יכולים להגדיל את הרמה של MST1 MST2 הטרודימרים הטרודימרים כאלה אינם פעילים. לאחר הדגירה עם נוגדני פריימר ספציפיים נגד חלבוני העניין, נוגדנים משניים ספציפיים מיוחדים, שכל אחד מהם מקושר לגדיל DNA ייחודי, קצר ומחמיל המחובר אליו, מתווספים לחריץ כדי להיקשר לנוגדנים העיקריים. אם החלבונים בשאלות הם הטרודימרים, הן הנוגדנים העיקריים והן הנוגדנים המשניים הקשורים אליהם יהיו בסמיכות.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos