Determination of Plasma Membrane Partitioning for Peripherally-associated Proteins

Stanislav Vosolsob&#283;; Kate&#345;ina Schwarzerov&#225;; Jan Petr&#225;&#353;ek

doi:10.3791/57837

קביעת חלוקה למחיצות של קרום פלזמה חלבונים הקשורים באופן עקיף

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Determination of Plasma Membrane Partitioning for Peripherally-associated Proteins

קביעת חלוקה למחיצות של קרום פלזמה חלבונים הקשורים באופן עקיף

Full Text

8,817 Views

11:11 min

June 15, 2018

DOI: 10.3791/57837-v

Stanislav Vosolsobě¹, Kateřina Schwarzerová¹, Jan Petrášek¹

¹Department of Experimental Plant Biology,Faculty of Science, Charles University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבצע ניתוח כמותי של הרמה של התאחדות קרום פלזמה מתויג fluorescently חלבונים הקשורים באופן עקיף. השיטה מבוססת על פירוק חישובית של קרום ומרכיב cytoplasmic של האות נצפו תאים עם תוויות עם סמן פלורסנט קרום פלזמה.

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בביולוגיה של התא, כולל פענוח מסלולי איתות תאים. אז היתרון העיקרי של הטכניקה הזו הוא שהיא למעשה לא דורשת גישות מיקרוסקופיות מתוחכמות. הוא גם מהיר מאוד ולכן שמיש לתצפית בזמן אמת על התפלגות החלבון בתאים.

ההערכה והכימות של חלוקת הממברנה של חלבון הקשור היקפי מסובכת עקב עקיפה של אור הגורמת לערבוב של קרום פלזמה ופלואורסצנטיות ציטופלזמית תחת המיקרוסקופ. התחל הליך זה בהכנת חומר ביולוגי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. מכתים את החומר המוכן בצבע FM 4-64 על ידי מריחת פרוטוקול צביעה המתאים לחומר הנחקר.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos