Real Time <em>In Vivo</em> Tracking of Thymocytes in the Anterior Chamber of the Eye by Laser Scanning Microscopy

Elisa Oltra; Alejandro Caicedo

doi:10.3791/58236

בזמן אמת In Vivo המעקב של Thymocytes בתא הקדמי של העין על ידי סריקת מיקרוסקופ לייזר

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Real Time In Vivo Tracking of Thymocytes in the Anterior Chamber of the Eye by Laser Scanning Microscopy

בזמן אמת In Vivo המעקב של Thymocytes בתא הקדמי של העין על ידי סריקת מיקרוסקופ לייזר

Full Text

7,204 Views

08:21 min

October 2, 2018

DOI: 10.3791/58236-v

Elisa Oltra^1,2, Alejandro Caicedo³

¹School of Medicine and Dentistry,Universidad Católica de Valencia San Vicente Mártir, ²Unidad Mixta CIPF-UCV,Centro de Investigación Príncipe Felipe, ³Department of Medicine,University of Miami

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study demonstrates a protocol for longitudinal intravital real-time tracking of thymocytes using laser scanning microscopy in thymic implants within the anterior chamber of the mouse eye. This innovative approach allows for continuous monitoring of progenitor cell recruitment and the egress of mature T-cells, providing insights into the mechanisms of autoimmunity and immunodeficiency.

Key Study Components

Research Area

Immunology
Thymocyte behavior
In vivo microscopy techniques

Background

Importance of studying thymus function
Role of thymocytes in immune response
Mechanisms of autoimmunity and immunodeficiency

Methods Used

Longitudinal intravital imaging
Mouse models with thymic implants
Laser scanning microscopy

Main Results

Real-time visualization of thymocyte dynamics
Tracking of cell recruitment and egress
Insights into thymus physiology and its dependence on vascularization

Conclusions

This study highlights a novel method for observing thymus activity in a living organism.
It opens avenues for further research into immunological disorders and cell behavior in grafted tissues.

Frequently Asked Questions

What is the purpose of the thymic implant in this study?

The thymic implant allows researchers to observe the behavior of thymocytes in a living system, providing insights into their roles in immune responses.

How does laser scanning microscopy contribute to this research?

Laser scanning microscopy enables real-time visualization of cellular dynamics and interactions within the thymic graft, allowing for detailed analysis of immunological processes.

What are the implications of tracking T-cell egress?

Tracking T-cell egress is crucial for understanding the development of the immune system and the potential dysregulation in autoimmune diseases.

Can this technique be applied to other tissues?

Yes, the method can also be adapted for studying other tissues such as pancreatic islets and kidney glomeruli.

What is the significance of vascularization in this context?

Vascularization is important as it influences thymus physiology and is critical for the delivery of nutrients and immune factors necessary for thymocyte development.

What challenges are associated with thymus transplantation?

Challenges include ensuring proper engraftment, avoiding immune rejection, and maintaining tissue integrity during surgical procedures.

What advancements does this protocol represent in immunology research?

This protocol represents a significant advancement by enabling longitudinal studies of thymocyte behavior in a living organism, thereby providing unprecedented insights into immune system functioning.

המטרה של הפרוטוקול היא להציג האורך intravital מעקב בזמן אמת אחר thymocytes על-ידי סריקת מיקרוסקופ ב שתלים הרתי בתא הקדמי של העין עכבר לייזר. את השקיפות של הקרנית, אמוניה השתל מאפשר הקלטה ברציפות קדמון תא גיוס ויציאה T-cell בוגרת.

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האימונולוגיה על מנגנוני חסינות אישית, כשל חיסוני, סובלנות מרכזית, ו involution התימוס. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא שהיא מאפשרת הקלטה אורך vivo של גיוס אב ואגרסיה בוגרת של תאי T בתוך מקטעי התימוס של העכבר כלי דם מושתלים. למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה על ההתפתחות והתפקוד של התימוס, ניתן להחיל גם על רקמות אחרות כגון איים בלבלב או גלומרולי כליות.

כדי לבודד את התימוס, מניחים את העכבר על מגבות נייר סטריליות סופגות בתמונת הגב זקוף במכסה המנוע לזרימה למינארית ומרססים ומנגבים את בטן העכבר עם 70% אתנול. בצע חתך שטחי בצורת V בבטן התחתונה כדי לחשוף את חלל בית החזה ולהשתמש בזוג מספריים ישרים של 10 ס"מ כדי לבצע חתך של 0.5 עד סנטימטר בחזה לאורך קו האמצע הגחוני. מקפלים את העור על כל צד של החזה כדי לחשוף את חלל בית החזה ולעשות שני חתכים נוספים עמוקים יותר 0.5 עד סנטימטר צדדי דרך הסרעפת וכלוב הצלעות כדי לגשת mediastinum מעולה בחלל בית החזה לפני.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos