Name: אינדוקציה של הפלאק טרשת עורקים באמצעות הפעלה של מינרלוקורטיקואידים הקולטנים בעכברים אפוליפופרוטאין E לקויה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: למד אינדוקציה של טרשת עורקים בעכברים ApoE -/- באמצעות שחרור רציף של אלדוסטרון. שיטה זו מאפשרת אפיון יעיל של הרכב הפלאק ומסייעת בחקר מנגנוני המחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים איטלקי משרד הבריאות (החיפוש אחר Corrente, GR-2009-1594563 ו- PE-2011-02347070 כדי קונליס)

<ol><li>Ross, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9887164">Atherosclerosis--an inflammatory disease.</a> New England Journal of Medicine. 340 (2), 115-126 (1999).</li>
<li>Lafont, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1767898/">Basic aspects of plaque vulnerability.</a> Heart. 89 (10), 1262-1267 (2003).</li>
<li>Getz, G. S., Reardon, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3331926/">Animal models of atherosclerosis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 32 (5), 1104-1115 (2012).</li>
<li>Bentzon, J. F., Falk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerotic+lesions+in+mouse+and+man%3A+is+it+the+same+disease%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Atherosclerotic lesions in mouse and man: is it the same disease?</a> Current Opinion in Lipidology. 21 (5), 434-440 (2010).</li>
<li>Getz, G. S., Reardon, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+the+Apoe-%2F-+and+Ldlr-%2F-+Mice+Yield+the+Same+Insight+on+Atherogenesis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Do the Apoe-/- and Ldlr-/- Mice Yield the Same Insight on Atherogenesis?</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (9), 1734-1741 (2016).</li>
<li>Emini Veseli, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28483459">Animal models of atherosclerosis.</a> European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).</li>
<li>Schwartz, S. M., Galis, Z. S., Rosenfeld, M. E., Falk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque+rupture+in+humans+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Plaque rupture in humans and mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27 (4), 705-713 (2007).</li>
<li>de Rita, O., Hackam, D. G., Spence, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+aldosterone+on+human+atherosclerosis%3A+plasma+aldosterone+and+progression+of+carotid+plaque%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Effects of aldosterone on human atherosclerosis: plasma aldosterone and progression of carotid plaque.</a> Canadian Journal of Cardiology. 28 (6), 706-711 (2012).</li>
<li>Ivanes, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldosterone%2C+mortality%2C+and+acute+ischaemic+events+in+coronary+artery+disease+patients+outside+the+setting+of+acute+myocardial+infarction+or+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Aldosterone, mortality, and acute ischaemic events in coronary artery disease patients outside the setting of acute myocardial infarction or heart failure.</a> European Heart Journal. 33 (2), 191-202 (2012).</li>
<li>McGraw, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldosterone+increases+early+atherosclerosis+and+promotes+plaque+inflammation+through+a+placental+growth+factor-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Aldosterone increases early atherosclerosis and promotes plaque inflammation through a placental growth factor-dependent mechanism.</a> Journal of the American Heart Association. 2 (1), e000018(2013).</li>
<li>Rittie, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+Picrosirius+Red-Polarization+Detection+of+Collagen+Fibers+in+Tissue+Sections%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Method for Picrosirius Red-Polarization Detection of Collagen Fibers in Tissue Sections.</a> Methods in Molecular Biology. 1627, 395-407 (2017).</li>
<li>Caprio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+mineralocorticoid+receptors+in+human+vascular+endothelial+cells+regulate+intercellular+adhesion+molecule-1+expression+and+promote+leukocyte+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Functional mineralocorticoid receptors in human vascular endothelial cells regulate intercellular adhesion molecule-1 expression and promote leukocyte adhesion.</a> Circulation Research. 102 (11), 1359-1367 (2008).</li>
<li>Marzolla, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+ICAM-1+in+aldosterone-induced+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Essential role of ICAM-1 in aldosterone-induced atherosclerosis.</a> International Journal of Cardiology. 232, 233-242 (2017).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

טרשת עורקים היא הפרעה דלקתית כרונית המשויך כלי שיט גדולים ובינוניים, מעורבים האינטראקציות בין סוגי תאים מרובים, כגון מקרופאגים, לימפוציטים, תאי אנדותל, תאי שריר חלק1. למרות המגבלות של מודלים atherogenic מאתר, גוף גדול של ראיות על תהליך טרשת עורקים הינה זמינה. מודלים אלה יש יתרון במהירות לייצר גדודים ניסיוני של גיל מסוים או מגדר. עכברים להראות גם רקע גנטי מוגדר ולא הומוגנית.
ההתפתחות של טרשת עורקים הפלאק, נצפתה במודלים של העכבר נוטה טרשת עורקים, חלקית דומה שתצפית של ניסו...

טרשת עורקים הוא אחד הגורמים העיקריים לתמותה ותחלואה ברחבי העולם1. הוא מאופיין על-ידי מצב דלקתי כרוני שבו כלי הדם הם הסתננו ליפידים, לויקוציטים הקובעות את היווצרות הפלאק טרשת עורקים. הרוב המכריע של אירועי לב חריפה משויכות אירועים קדחת עקב קרע פלאק. שלטי נוטה להיקרע מוגדרים "פגיע", מאופיינים על ידי חדירה מוגברת של לויקוציטים הפרו דלקתיים, גרעין נמק כיפה סיבית דק2. בעשרות השנים האחרונות, מחקרים קליניים וניסויים הבהירו הפתופיזיולוגיה המורכבת של המחלה. מספר מודלים בעלי חיים משמשים כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים המעורבים אינדוקציה של טרשת עורקים3. כיום, העכבר הוא המין הנפוצות ביותר לחקר טרשת עורקים למרות כמה הבדלים תלויי מין הקיים שלה פתופסיולוגיה לעומת בני אדם. בפרט, במחזור הכולסטרול מורכבת בעיקר על ידי ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה (עם מאפיינים antiatherogenic) במודלים של העכבר, ואילו אצל בני אדם במחזור כולסטרול בעיקר מועבר כמו ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (LDL), כנראה ייצוג הסיבה העיקרית למה עכברים פראי-סוג לא לפתח טרשת עורקים ספונטני4. יתר על כן, פראי סוג עכברים הם בדרך כלל עמידים בפני ספיגת כולסטרול מן הדיאטה, ואילו בני אדם לספוג בסביבות 50% כולסטרול תזונתיים4. כדי להתגבר על מגבלות אלה, נוצרו מספר מודלים מהונדס גנטית עכבר. עכבר אפוליפופרוטאין E – לקויה (ספקיות−/−) ועכבר לקויה – קולטן LDL (−/LDLr−) נמצאים בשימוש נרחב. דיאטה עתירת שומן כולסטרול גבוה, עכברים− −/ספקיות להתפתח פלאק יותר במהירות בהשוואה לעכברים−−/LDLr, וכי מסיבה זו, הוא השימוש של ספקיות עכברים− −/ נפוצה יותר מזו של LDLr−/−עכברים5,6. העכברים− −/ספקיות לפתח נגעים בכל שלב של טרשת עורקים, דומות לאלה שנמדדו בבני אדם, למרות הפלאק העכבר אינם מראים על פנוטיפ לא יציב7. באופן כללי, ספקיות עכברים− −/באופן ספונטני לפתח טרשת עורקים, תהליך זה מואץ עם הדיאטה המערבית3. ניתן להעריך את חומרת טרשת עורקים ברמה של בעורק, ריאות, הירך עורק brachiocephalic ואת שורש אבי העורקים6. בפרט, בסיס אב העורקים מייצג אתר אנטומי נוטה לפתח התרדמה בעכברים. מסיבה זו, זה מנהג נפוץ כדי להעריך את היווצרות הפלאק טרשת עורקים באזור זה.
מספר מחקרים הראו שכי אלדוסטרון הוא מעורב בפיתוח של טרשת עורקים8,9,10. אלדוסטרון אינפוזיה אצל ספקיות−/− עכברים שקיבלו תזונה atherogenic מאיצה את התפתחות שורש אבי העורקים התרדמה גרימת היווצרות הפלאק מודלק ועשיר השומנים10.
לסיכום, אנו מתארים פרוטוקול כולל אלדוסטרון אינפוזיה, דיאטה atherogenic האכלה, ההטמעה של רקמות הלב, כימות ואפיון של טרשת עורקים בעכברים- / - ספקיות. הליך זה מקדם מערך יעיל של הפלאק טרשת עורקים מודלק, השומנים-עשיר והוא מייצג את מודל ערך עבור המחקר של atherogenesis.

<table><tbody><tr><td>דיאטת קלוריות מותאמת (42% משומן)</td><td>Envigo</td><td>TD.88137</td><td>דיאטה אטרוגנית</td></tr><tr><td>מיני-משאבה אוסמוטית עם צינור מילוי</td><td>Alzet</td><td>דגם 1004</td><td>לריאלאז רציף</td></tr><tr><td>אלדוסטרון</td><td>SIGMA</td><td>A9477</td><td>הורמון</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>SIGMA</td><td>34852-M</td><td>ממס</td></tr><tr><td>Alchol Preps רווי ב-70% איזופרופיל אלכוהול</td><td>קנדל Webcol</td><td>6818</td> חוט ניתוח <td>חיטוי</td></tr><tr><td>(Vicryl 6.0)</td><td>ניתוח</td> <td>500004 דמאס</td><td></td></tr><tr><td>10% משחת פובידון/יוד</td><td>Aplicare-Meriden</td><td>52380-0026-1</td><td>חיטוי</td></tr><tr><td>פורמלין 10%</td> <td>SIGMA</td><td>HT5012</td><td>לקיבוע כלי דם</td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Bio-Optica</td><td>07-MP1515</td><td>להטמעת</td></tr><tr><td>תרכובת O.C.T.</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td>להטמעת</td></tr><tr><td>מכשיר Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM1900</td><td>לחיתוך</td></tr><tr><td>תמיסת חיץ פוספט חוצץ</td><td>Aurogene</td><td>AU-L0615-500</td><td></td>של Dulbecco</tr><tr><td>שקופיות הידבקות פוליסין</td><td>VWR</td><td>631-0107</td><td>משקפי מיקרוסקופ</td></tr><tr><td>כיסוי משקפיים</td><td>ביו-אופטיקה</td><td>72015</td><td>משקפי כיסוי</td></tr><tr><td>פורמלדהיד 37%</td><td>SIGMA</td><td>252549</td><td>ממס</td></tr><tr><td>שמן תמיסת Red O (0.5% באיזופרופנול)</td><td>תמיסת צביעה</td> <td>SIGMA</td><td>O1391</td></tr><tr><td>Mayer' s Hematoxylin</td><td>SIGMA</td><td>MHS32</td><td>תמיסת מכתים</td></tr><tr><td>ליתיום קרבונט</td><td>SIGMA</td><td>62470</td><td>מאגר כביסה</td></tr><tr><td>הרכבה בינוני</td><td>תרמו מדעי</td><td>TA-125-AM</td><td>פתרון הרכבה</td></tr><tr><td>אצטון</td><td>SIGMA</td><td>179124</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חומצה פוספומוליבדית</td><td>SIGMA</td><td>HT153</td><td>להיסטולוגיה</td></tr><tr><td>ישיר אדום 80 (פיקרוזיריוס אדום)</td><td>תמיסת צביעה</td> <td>SIGMA</td><td>365548</td></tr><tr><td>Bio Clear (חומר ניקוי ממקור טרפן)</td> <td>מוצר Bio-Optica</td><td>06-1782D</td><td>להכנת דגימות היסטולוגיות</td></tr><tr><td>Eukitt מדיום הרכבה מהיר מתקשה (פולי (בוטיל מתאקרילט-קו-מתיל מתקרילט)</td> <td>תמיסת הרכבה</td> <td>SIGMA</td><td>3989</td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט</td><td>אבקת</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>פלוקה 71725תמיסת מי חמצן (30%)</td><td>תמיסת SIGMA</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>ערכת Vectorstain ABC כוללת: IgG ABC נגד ארנב, סרום ארנב רגיל, IgG נגד חולדות ביוטיניליות,</td> <td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td><td>תמיסת צביעה</td></tr><tr><td>3-amino-9-ethylcarbazole</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4200</td><td>תמיסת צביעה</td></tr><tr><td>Mac3 נוגדן</td><td>BD Biosciences</td><td>553322</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>ImagePro Premier 9</td><td>Media Cybernetics</td><td>050910000-2534</td><td>תוכנה לניתוח תמונות</td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של הפלאק טרשת עורקים באמצעות הפעלה של מינרלוקורטיקואידים הקולטנים בעכברים אפוליפופרוטאין e לקויה

Induction of Atherosclerotic Plaques Through Activation of Mineralocorticoid Receptors in Apolipoprotein E-deficient Mice

טרשת עורקים היא עקב תגובה דלקתית כרונית המשפיעים על אנדותל כלי הדם, הוא קידום על ידי מספר גורמים כגון יתר לחץ דם, dyslipidemia וסוכרת. נכון להיום, אין ראיות כדי לתמוך תפקיד עבור מחזור אלדוסטרון כגורם סיכון להתפתחות של מחלות לב וכלי דם. מודלים מהונדס העכבר נוצרו ללמוד תהליכים תאית ומולקולרית שמוביל טרשת עורקים. כתב יד זה, אנו מתארים פרוטוקול מנצל תקינות של אלדוסטרון בעכברים- / - ספקיות ומייצר הפלאק טרשת עורקים בספריית הבסיס של אבי העורקים לאחר 4 שבועות של טיפול. אנו, לכן, ממחישים שיטה כימות ואפיון של נגעים טרשת עורקים ברמת הבסיס של אבי העורקים. הערך המוסף של אלדוסטרון אינפוזיה מיוצג על ידי הדור של עתיר השומנים ותאים דלקתיים התרדמה לאחר 4 שבועות של טיפול. נתאר בפירוט ההליכים מכתימים לכמת השומנים ותוכן מקרופאג בתוך הפלאק. ראוי לציין, ב פרוטוקול זה, אנו מבצעים לב רקמות-הטבעה ב- OCT כדי לשמר את antigenicity של רקמת הלב וכדי להקל על detectability של אנטיגנים של עניין. ניתוח של פנוטיפ הפלקיו מייצג גישה חוקית ללמוד הפתופיזיולוגיה של התפתחות טרשת עורקים, וכן לזיהוי מטרות תרופתי חדשניים לפיתוח תרופות אנטי-atherogenic.

בעוד 8-10 שבועות Apo- / - עכברים, minipumps שהיו מושתלים כדי להשרות עם הרכב או אלדוסטרון (איור 1E-1I) והאכילה של דיאטה atherogenic (מנוכי עונתיות קלוריות דיאטה 42% שומן) למשך 4 שבועות. בסוף הטיפול, עכברים היו מורדמים, perfused עם PBS ו 10% פורמלין כמתואר לעיל. בסיס אב העורקים הופרד מן החלק הפסגה של הלב, הוטבע באוקטובר (איור 2). חתכי רוחב של שורש אבי העורקים הוכנו עבור צביעת שונים באמצעות מכונה cryostat...

אנו מתארים פרוטוקול לזירוז טרשת עורקים אצל שורש אבי העורקים ספקיות- / - עכברים שקיבלו עם דיאטה atherogenic, באמצעות שחרור רצוף של אלדוסטרון. שיטות לאפיון הרכב הפלאק מתוארים גם.

אינדוקציה של הפלאק טרשת עורקים באמצעות הפעלה של מינרלוקורטיקואידים הקולטנים בעכברים אפוליפופרוטאין E לקויה

Atherosclerosis is due to a chronic inflammatory response affecting vascular endothelium and is promoted by several factors such as hypertension, ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בפתופיזיולוגיה של טרשת עורקים מוקדמת בעכברים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היעילות, המהירות שבה אלדוסטרון גורם להתפתחות של לוחות טרשת עורקים בצמיחה הבוגרת. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שקשה ללמוד כמה שלבים טכניים באמצעות הוראת טקסט בלבד.הפגנת ההליך תהיה קתרינה מאמי, מדענית צוות מהמעבדה שלי. לובש כפפות כירורגיות, לחבר את צינור מילוי משאבת מיני מזרק מיליליטר אחד לטעון את הצינור עם 125 microliters של אלדוסטרון או פתרון הרכב. הכנס את צינור המילוי דרך החור בחלק העליון של משאבת המיני עד שהוא לא יכול להתקדם ולאט לאט למלא את המשאבה עם פתרון אלדוסטרון.להפסיק למלא את המשאבה כאשר חרוז של נוזל עולה מתוך גוף המשאבה בזהירות להסיר את צינור המילוי. הכנס את ווסת הזרימה לגוף של משאבת המיני, דואג כי הרגולטור הוא זרע בחוזקה נגד גוף המשאבה וראש המשאבה המלאה במזימה המכילה תמיסת מלח סטרילית ב 37 מעלות צלזיוס, עד 24 שעות לפני ההשתלה. כדי להשתיל את המשאבות, השתמש בתער כדי להסיר את השיער מהאתר הכירורגי ולחטא את העור החשוף עם 70% אלכוהול isopropyl ספוג, חומר כרית לא ארוגים.לאחר מכן, לעשות חתך 0.8 כדי סנטימטר אחד דרך העור, אבל לא את הרקמות הבסיסיות ולהשתמש מדפים כדי לפתוח את החתך. באמצעות trocar ביד השנייה, להפיץ את העור כדי ליצור כיס עבור המשאבה מן החתך לכיוון השכם ולהכניס את המשאבה לתוך החתך, עם הראש של הרגולטור מכוון לכיוון החלק הקדמי של העכבר, בעדינות דוחף את המשאבה לחלוטין לתוך הכיס, כך שיש מספיק עור כדי לסגור את הפצע ללא מתח או מתיחה. לאחר הכנסת המשאבה, תפרו את החתך בחוט ניתוח ולהשתמש במצלה נקייה כדי למרוח משחת יוד אקטואלית של 10%.לאחר מכן לאפשר לעכבר להתאושש על שלב התחממות עם ניטור עד חקירה מלאה. בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, לבלבל את העכבר דרך החדר השמאלי באמצעות זלוף הכבידה עם 10 עד 15 מיליליטר של DPBS קר קרח, ואחריו 40 עד 50 מיליליטר של 10% של גיבוש חיץ ניטרלי. לאחר 10 עד 20 דקות, מניחים את העכבר תחת סטריאו-מיקרוסקופ ולהשתמש מלקחיים ומספריים כדי להסיר את רקמת שומן periaortic ו pericardial עודף.החזק את הלב הקבוע במלקבעים וגזור בניצב לגישה לקשת בית ההיתוך, קרוב ככל האפשר ללב, מבלי לגרום נזק. לאחר שהלב הופרד מאולם האבות, השתמש באזמל כדי לחתוך רוחבי לאורך קו ישר, להצטרף לנקודות התחתונות של אטריום ימין ושמאל ולמלא את החלק העליון של הלב הפתוח עם תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית. מניחים את הרקמה המותקפת בתבנית פלסטיק בצורת קריו עם ציר העורקים המוצב בניצב לבסיס התבנית המלבנית ומכסים את הרקמה ב- OCT טרי.תאורה אחורית את התבנית כדי להבטיח כי הרקמה מכוונת כראוי, ולאחר מכן בזהירות למקם את התבנית על צלחת מתכת על קרח יבש, עוטף את התבנית כולה עם רדיד כסף עבור אחסון מינוס 80 מעלות צלזיוס כאשר OCT הופך לבן. כאשר ההקפאה מגיעה למינוס 20 מעלות צלזיוס, הר את בלוק הלב הקפוא על מחזיק הדגימה כאשר חדר החדר פונה כלפי חוץ והכנס את מחזיק הדגימה לראש הכיוון של הדגימה. התאימו את הכיוון של מחזיק הדגימה כדי לחתוך את הבלוק עם שורש האאורטיק הניצב ללהב וחותכים את הבלוק עד להגעת שורש האאורטיק.לאסוף קטעים טוריים על שקופיות זכוכית, ניטור פרופיל שורש אבי העורקים האנטומי, עד כל שלושת שסתומי אבי העורקים מופיעים. ואז לאסוף שישה עד שמונה, 10 חלקים עבים מיקרומטר או עד אחד משלושת השסתומים נעלם או כבר לא שלם. עבור כתמי שומן O ניטרליים בצבע אדום שמן, תקן את החלקים ב-70 מיליליטר של 37% פורמלדהיד למשך חמש דקות, ולאחר מכן שטיפה יסודית במי ברז.לאחר שתיים עד שלוש דקות, למחוק את מי גישה ולהכתים את החלקים ב 70 מיליליטר של 0.3% שמן אדום O במשך 10 דקות. בסוף הדגירה, לשטוף את המגלשות במי ברז במשך 10 דקות ולהכתים את התאים במשך דקה אחת ב 70 מיליליטר של hematoxylin של מאייר, ואחריו לשטוף מים דקה אחת ברקת דקה אחת ב 70 מיליליטר של 0.5% ליתיום קרבונט. לאחר מכן לשטוף את התאים במים במשך דקה אחת אחרונה ולהרים את החלקים עם מדיום הרכבה מים להדמיה על ידי מיקרוסקופיה אור.לאחר ארבעה שבועות של טיפול, עכברי נוקאאוט אפוליפופרוטאין-E הציגו עלייה משמעותית בתומרת השומנים, בהשוואה לבעלי חיים מסוג בקרה-בר. יתר על כן, טיפול אלדוסטרון מגביר את התוכן המקרופאג בבעלי חיים נוקאאוט כפי שמעידים על ידי מכתים mack-3 ומצביע על רובד טרשת עורקים מודלק יותר בבעלי חיים אלה בהשוואה לעכברים מטופלים ברכב. עם זאת, טיפול אלדוסטרון אינו משנה את תוכן הקולגן של לוחות טרשת עורקים.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי שיטה זו מאומתת רק עבור עכברים אפוליפופרוטאין אשר נוטים באופן טבעי לפתח טרשת עורקים כאשר מוזן צבע טרשת עורקים. לכן, זה לא יכול להיות מיושם על מודלים שונים של בעלי חיים. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו אינפרא-מכתים כדי לאפיין טרשת עורקים באזורים אחרים של עורקים ולכומת את סך הנטל טרשת עורקים.לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום טרשת עורקים לחקור מנגנון מוקדם של טרשת עורקים, כגון דלקת וחוסר מתפקד אנדותל. אל תשכח כי עבודה עם תרכובות נדיפות כגון isophane ופורמלין יכול להיות מסוכן מאוד, כי אמצעי זהירות, כגון לבישת מסכת פנים מעבדת בטיחות תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.

induction-atherosclerotic-plaques-through-activation

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השרוול הצרת המוצגים במאמר זה נועד לגרום לטרשת עורקים בעורק התרדמה Murine משותף. בשל בצורת חרוט של לומן הפנימי שלה את האזיק מושתל יוצרת אזורים מוגדרים היטב של מתח נמוך, גזירה גבוהה oscillatory מפעילה את התפתחות טרשת עורקים של פנוטיפים דלקתיות שונות.

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

אנו מתארים הליכים לכימות ואפיון נגעים טרשת עורקים במודלים של עכברים באמצעות חתך מדויק של סינוס אבי העורקים ואבי העורקים העולה בשילוב עם ניתוח היסטוכימי ואימונוהיסטוכימי.

ניתוח כמותי ואפיון של נגעים טרשת עורקים בסינוס אבי העורקים של העכברים

וידאו זה מראה שני מודלים של פיתוח פלאק בעורקי intimal עכבריים ומדגיש את ההבדלים בהיפרפלזיה myointimal וטרשת עורקת.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

הסתיידות כלי הדם היא מנבא חשוב ותורם למחלות לב וכלי דם בבני אדם. פרוטוקול זה מתאר שיטות להשראת הסתיידות של תאי שריר חלק בכלי הדם הראשוניים המתורבתים ולכימות הסתיידות ועומס מקרופאגים באבי העורקים של בעלי חיים באמצעות הדמיה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום.

הסתיידות של לתאי השריר החלק בכלי הדם והדמיה של אבי העורקים הסתיידות ודלקת

מחקר זה מתאר הליך פולשני עבור אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים. בהשוואה לשיטות אחרות באמצעות פגיעה חשמלית או הקפאה, פציעה כתוצאה מכני מחקה את המצב האנושי של restenosis לאחר טיפולים revascularization והוא אידיאלי לחקר המנגנונים המולקולריים המעורבים.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

אנו מציעים פרוטוקול מתוקננים כדי לאפיין את ההרכב הסלולר של נגעים טרשת עורקים מאתר בשלב מאוחר, כולל שיטות שיטתית של דיסקציה בעלי חיים, רקמות הטבעה, חלוקתה, מכתים, וניתוח של העורקים brachiocephalic מ atheroprone שריר חלק תא שושלת היוחסין עקיבה עכברים.

ניתוח כמותי של הרכב הסלולר בנגעים טרשת עורקים מתקדמת של שריר חלק תא שושלת היוחסין-עקיבה עכברים

מודלים murine של טרשת עורקים הם כלים שימושיים כדי לחקור מסלולים פתוגניים ברמה מולקולרית, אבל דורשים קוונפיקציה סטנדרטית של פיתוח נגעים. פרוטוקול זה מתאר שיטה ממוטבת כדי לקבוע את גודל הנגעים בכלי העורקים העיקריים, כולל שורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, ועורק ברככתית.

קוונפיקציה של טרשת עורקים בעכברים

פרוטוקול זה מספק מתודולוגיה מקיפה לניתוח כמותי של פלאק טרשת עורקים כדי להקל על מחקר מעמיק יותר על המנגנונים וההתקדמות של טרשת עורקים.

בידוד וניתוח של נגעי קשת אבי העורקים ושורש במודל עכבר טרשת עורקים

מאמר זה מדגים שתי שיטות שונות של הזרקת מאוד: 1) לתוך המוח (intracerebroventricular) ו 2) מערכתית (תוך ורידי) כדי להציג את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הילוד.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

ההתפתחות אחרונות בכלי מיקוד גן הופכת את הייצור של נוקאאוט ארנבים (KO) אפשרי. בעבודה הנוכחית, יצרו חמש ארנבות אפוליפופרוטאין (Apo) C-III KO באמצעות nucleases אבץ אצבע (ZFN). עבודה זו הראתה כי ZFN הוא שיטה יעילה ביותר כדי לייצר ארנבות KO.

ייצור של ארנבים נוק אפוליפופרוטאין C-III באמצעות nucleases אצבע האבץ

למד אינדוקציה של טרשת עורקים בעכברים ApoE -/- באמצעות שחרור רציף של אלדוסטרון. שיטה זו מאפשרת אפיון יעיל של הרכב הפלאק ומסייעת בחקר מנגנוני המחלה.

אינדוקציה של הפלאק טרשת עורקים באמצעות הפעלה של מינרלוקורטיקואידים הקולטנים בעכברים אפוליפופרוטאין E לקויה

גלה סרטונים נוספים