Name: תא תלת-ממדי מערכת תרבות עבור הלומדים הפלישה והערכת הרפוי בסרטן שלפוחית השתן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-13T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: למדו שיטה תלת-ממדית לחקר פלישת סרטן שלפוחית השתן באמצעות ספירואידים של גידולים. השיטה מאפשרת מעקב בזמן אמת וניתוח אימונופלואורסצנטי לבחינת מנגנוני הפלישה והערכת תרופות פוטנציאליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להודות המעבדה של ד ר הווארד קרופורד (אוניברסיטת מישיגן) עבור תמיכה טכנית מתן וחומרים במחקר זה ציוד אלן קילר לקבלת תמיכה טכנית.
עבודה זו מומן על ידי מענקים מן האוניברסיטה של מישיגן רוגל סרטן מרכז הליבה גרנט CA046592-26S3, NIH K08 CA201335-01A1 (פיפ), ניתן YIA (פיפ), CA17483601A1 R01 NIH (DMS).

1. גידול סרטן Spheroids
<ol><li>
גידול מ שורות תאים
	<ol>
<li>התרבות האנושית שלפוחית השתן התאים הסרטניים תחת מחסידי קונבנציונאלי תא תרבות תנאים ולתחזק ב חממה 37 ° C שסופק עם 5% CO2. לשמור על תאים ב- < 90% confluency. הערה: תרבות מדיה המשמשת היא של Dulbecco ששינה המדיה מינימלי הכרחי (DMEM) המכילה 4.5 g/L D-גלוקוז-גלוטמין, 110 מ ג/ליטר נתרן פירובט, ויסופק עם 10% עוברית שור סרום (FBS) לאורך כל פרוטוקול זה.</li>
		<li>יום אחד לפני תחילת הניסוי, trypsinize (על-ידי שימוש 0.25% טריפסין-EDTA) תאים, לכמת תא ריכוז והפצה של תאים6 עונה 1 פרק 10 מ"ל 3 תרבות המדיה כל טוב של צלחת מצורף 6-ובכן נמוך במיוחד.</li>
		<li>דגירה בתאים תנאי ההחזקה נמוך ב 37 ° C ≥16 h. זה אמור לאפשר מספיק זמן עבור תאים להפעיל עליה פונקציית צבירה לתוך spheroids עבור רוב שורות תאים של סרטן שלפוחית השתן. הערה: היווצרות של spheroids יכול להיות שנצפו על ידי מיקרוסקופ שדה בהיר הפוכה. הגודל האופטימלי והמספר של spheroids תלויה ניסויים בודדים, אך נמצא כי spheroids עם קטרים מ- 50 מיקרומטר מיקרומטר 150 מתאימים בדרך כלל זמן לשגות הדמיה באמצעות עדשה המטרה X 20.</li>
		<li>כדי לשלב סוגי תאים נוספים, כגון fibroblasts או תאים חיסוניים לתוך spheroids, מערבבים את התאים הרצויים עם תאים סרטניים ביחס הרצוי (1:1, 1:10, וכו.) במצורף נמוך במיוחד צלחת, דגירה ב 37 ° C עבור ≥16 h לאפשר היווצרות מעורבות לתאים מסוג spheroids.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
גידול מ גידולים ראשי הערה: גידול spheroids יכול להיגזר גם גידול שלפוחית השתן העיקרי ממקורות כגון גידולים התפתח הנוצרות על-ידי גורם מסרטן שלפוחית השתן הגידול מודלים8. כך למשל, גידולים בשלפוחית השתן המופקים עכברים נמאס N-בוטיל - N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN), ניתן לקצור, כתוש לחתיכות קטנות (כ- 0.5 מ מ3) באמצעות כלי ניתוח סטרילי. מתעכל דגימות העיקרי של האדם שלפוחית השתן סרטן יכול להילמד גם במערכת זו.<ol>
<li>לאסוף ולשטוף 0.5 מ מ3 גידול חלקים בתוך 5 מ"ל כקרח באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS). צנטריפוגה ב x 200 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. חזור על שלב זה כביסה פעם אחת.</li>
		<li>לאסוף את השברים הגידול על ידי צנטריפוגה ב x 200 גר' 10 דקות ב 4 º C. הסר את תגובת שיקוע והוסף 5 מ של DMEM המכיל 10% FBS. העברה הגידול ספרואיד/מדיה תערובת צלחת מצורף 6-ובכן נמוך במיוחד. דגירה ב 37 ° C עבור ≥16 h לפני הטמעה לתוך מטריצת קולגן (ראה שלב 2.3).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. הכנת תא תרבות תלת-ממדי
<ol><li>
לדלל קולגן מסוג 1 (נגזר זנב החולדה) ב- DMEM המכיל 10% FBS להכין תערובת 2 מ"ג/מ"ל לפי הנחיות היצרן.
	<ol>
<li>בקיצור, לערבב קולגן עם הכמות המתאימה של פתרון 1 N NaOH, DMEM על ידי pipetting עדינה בהתאם להוראות היצרן כדי להשיג את ה-pH הפיזיולוגיות.</li>
		<li>לאחר ערבוב קולגן, DMEM, במהירות מעיל הבארות של השקופית קאמרית (עבור מרבית היישומים, הקאמרית שקופיות עם מספר 1.5 כיסוי-זכוכית הוא אופטימלי) עם התערובת קולגן-DMEM לפני התמצקות (200 µL טוב). לאפשר את השקופית קאמרית מצופה להיות נייח בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. הערה: הרכב מבוססי קולגן מטריקס יכול להיות שונה על-ידי הוספת מרכיבים אחרים של מטריצה חוץ-תאית, כגון fibronectin או laminin, בהתאם למטרות ניסוי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בעדינות pipet 500 µL של המדיה המכילה spheroids (או חתיכות הגידול, אם הגידול העיקרי מדגם משמש) מהצלחת מצורף 6-ובכן נמוך במיוחד לתוך צינור microcentrifuge mL 1.5 ריק. לחכות 2 דקות לאפשר את spheroids ליישב לתחתית הצינור.</li>
	<li>הסר בזהירות את תגובת שיקוע מהצינור. להכין עוד שפופרת של קולגן מסוג 1 (2 מ"ג/מ"ל) מעורבב עם DMEM המכיל 10% FBS ולהוסיף במהירות 500 µL של תערובת זו spheroids. מערבבים בעדינות את spheroids ואת קולגן מאת pipetting איטי.</li>
	<li>להוסיף 250 µL תערובת spheroids/קולגן טוב של קולגן טרום-מצופים קאמרית שקופיות. לאפשר את מטריצת קולגן המכיל spheroids לגבש לחלוטין (בערך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס).</li>
	<li>לאחר קולגן המטריצה היא פני השטח למוצק, להוסיף 1 מ"ל של DMEM המכיל 10% FBS כדי מכל קידוח (איור 1B). דגירה השקופית קאמרית ב חממה 37 ° C שסופק עם 5% CO2 עד מוכן עבור הדמיה.</li>
</ol>3. חיים תא הדמיה בצילום מואץ
<ol><li>הפעלת מיקרוסקופ קונפוקלי ההוראות של היצרן ולהבטיח כי תא האקלים מגיע ל- 37 מעלות צלזיוס, מסופק עם 5% CO2. הערה: המיקרוסקופ ואת החדר שלנו בדרך כלל דורשים h 1 להגיע מערכת שיווי משקל.</li>
	<li>בזהירות העברה השקופית קאמרית מתאם שקופיות המצורפת המיקרוסקופ.</li>
	<li>לאתר של spheroids עניין באמצעות מטרה צריכת חשמל נמוכה (למשל, 5 X) ולהתחיל הדמיה עם המטרה כוח גבוה יותר (בפרוטוקול הנוכחי, המטרה X 20 משמש עבור רוב ההדמיה תא בשידור חי עבור איכות התמונה טובה יותר). הערה: עבור דגימות הגידול העיקרי שלפוחית השתן, 5 X ויעדים X 10 עשוי להיות נחוץ כדי לכסות שטח גדול יותר הדמיה. עבור הדמיה בצילום מואץ שלנו, מרווח הזמן דימות שוכן כ 30 דקות, ערימה Z משמש לשיקוף ספרואיד כל. בדרך כלל המרחק בין Z-פרוסות מוגדר 4 מיקרומטר עבור 20 X המטרה את המרחק הכולל של ציר Z הוא בסביבות 200 מיקרומטר. תמונות יכולה להיות מושגת באמצעות DIC, עם פלורסצנטיות אם תאים/רקמות הנמל סמני חלבון פלואורסצנטי.</li>
	<li>לבצע הדמיה בצילום מואץ של 24-72 שעות. הערה: המשך נקבע לפי סוג התא ולצרכים של הניסוי.</li>
</ol>4. הכנת המדגם בלוק המכיל Spheroids סרטן של רקמות קפוא חלוקתה
<ol><li>בזהירות הרימו את הבלוק של קולגן ג'ל spheroids מהשקופיות קאמרית באמצעות מלקחיים קטנים. מקם את הבלוק ג'ל קולגן תבנית היסטולוגיה פלסטיק.</li>
	<li>לשטוף את הג'ל קולגן עם 1 x PBS לזמן קצר ולאחר מכן לתקן אותו עם 4% paraformaldehyde (PFA) ב- PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. התראה: PFA הוא מסרטן אפשרי ויש לטפל בזהירות.</li>
	<li>לשטוף הג'ל קולגן עם 1.5 מ ל 1 x PBS ב מטרף במשך 15 דקות להחליף את PBS, חזור על השלב הקודם כביסה 3 x.</li>
	<li>למרוח שכבה דקה (כ 3 מ מ) לטמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר) מתחם לכסות בתחתית תבנית פלסטיק היסטולוגיה חדש. המקום הקבוע, שטף קולגן ג'ל על גבי OCT מורכבים, ואז בזהירות מטביע את כל הג'ל ממלא את התבנית OCT מורכבים תוך הימנעות היווצרות בועות אוויר ב- OCT.</li>
	<li>להשאיר את התבנית 4 ° C עבור 1 h.</li>
	<li>מניחים את התבנית המכילה את הדגימה ואת OCT המורכב על צלחת פטרי 100 מ מ צף על חנקן נוזלי. לאפשר את הדגימה כדי הקפאה לחלוטין.</li>
	<li>חנות הרחוב דגימה קפוא ב- 80 ° C לשימוש עתידי.</li>
</ol>5. immunofluorescence הדמיה עבור סרטן משרטוטי קפוא Spheroids
<ol><li>העברה הרחוב דגימה קפוא מהמקפיא-80 ° C לשכת-20 ° C cryostat.</li>
	<li>
לבצע חלוקתה קפוא המקובלת על-ידי הגדרת מרווח סעיף 7 מיקרומטר. תן דוגמאות משרטוטי לצרף השקופית זכוכית ללא קמטים או לכוד אוויר.
	<ol>
<li>אחסן את השקופיות ב-80 מעלות צלזיוס לפני ביצוע נוסף מכתים. הערה: ניתן להשתמש במרווחי זמן שונים כדי שיתאים לצרכים ניסיוני.</li>
	</ol>
</li>
	<li>האוויר יבש השקופיות לשעה בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>Permeabilize את הדגימות עם PBS המכילה 0.5% טריטון X-100 למשך 15 דקות.</li>
	<li>שטיפת דוגם x 3 עם PBS 10 דקות לכל לשטוף.</li>
	<li>להקיף את הדגימות בשקופית מחסומים הידרופובי באמצעות עט הידרופובי המכשול.</li>
	<li>פנקו את הדגימות עם חסימה פתרון (1 x PBS המכילה 5% אלבומין שור (BSA)), לשעה בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>µL 40 של ראשי המכיל נוגדנים פתרון (המכילה 5% BSA עם בטחונות דילול של נוגדן ראשוני PBS 1 x) חלות על כל מדגם בשקופית.</li>
	<li>דגירה השקופיות הראשית נוגדנים ב 37 ° C עבור 1 h או בטמפרטורת החדר למשך הלילה (זמן הדגירה והתנאים משתנים בהתאם נוגדן ראשוני).</li>
	<li>שטיפת דוגם x 3 עם PBS למשך 15 דקות (לכל לשטוף).</li>
	<li>µL 40 של פתרון המכיל נוגדנים משניים (המכילה 5% של BSA עם 1:300 נוגדנים משניים דילול PBS 1 x) חלות על כל מדגם בשקופית.</li>
	<li>שטיפת דוגם x 3 עם PBS למשך 15 דקות (לכל לשטוף).</li>
	<li>כתם הדגימות עם פתרון Hoechst 33342 (1 µg/mL, מדולל ב- PBS) בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לאחר מכן לשטוף דגימות עם PBS במשך 5 דקות.</li>
	<li>הר הדגימות הרכבה בינונית ולכסות עם שער גולשת בגודל מתאים. להשאיר את השקופיות בחושך בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות ולאחר מכן בצע מיקרוסקופיה קונפוקלית.</li>
</ol>

<ol><li>American Cancer Society. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+Society%22">The Society</a>. , Atlanta, GA. (2018).</li>
<li>Knowles, M. A., Hurst, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+bladder+cancer%3A+new+insights+into+pathogenesis+and+clinical+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of bladder cancer: new insights into pathogenesis and clinical diversity.</a> Nature Reviews Cancer. 15 (1), 25-41 (2015).</li>
<li>DeGeorge, K. C., Holt, H. R., Hodges, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+Cancer%3A+Diagnosis+and+Treatment.+American+Family+Physician%5BTitle%5D)+AND+%22American+Family+Physician%22%5BJournal%5D)">Bladder Cancer: Diagnosis and Treatment. American Family Physician.</a> American Family Physician. 96 (8), 507-514 (2017).</li>
<li>Repesh, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+in+vitro.+assay+for+quantitating+tumor+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Invasion+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A new in vitro. assay for quantitating tumor cell invasion.</a> Invasion Metastasis. 9 (3), 192-208 (1989).</li>
<li>Doillon, C. J., Gagnon, E., Paradis, R., Koutsilieris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culture+system+as+a+model+for+studying+cancer+cell+invasion+capacity+and+anticancer+drug+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culture system as a model for studying cancer cell invasion capacity and anticancer drug sensitivity.</a> Anticancer Research. 24 (4), 2169-2177 (2004).</li>
<li>Duong, H. S., Le, A. D., Zhang, Q., Messadi, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+3-dimensional+culture+system+as+an+in+vitro.+model+for+studying+oral+cancer+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Expermintal+Pathology%22%5BJournal%5D)">A novel 3-dimensional culture system as an in vitro. model for studying oral cancer cell invasion.</a> International Journal of Expermintal Pathology. 86 (6), 365-374 (2005).</li>
<li>Rebelo, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D-3-culture%3A+A+tool+to+unveil+macrophage+plasticity+in+the+tumour+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3D-3-culture: A tool to unveil macrophage plasticity in the tumour microenvironment.</a> Biomaterials. , 185-197 (2018).</li>
<li>Vasconcelos-Nobrega, C., Colaco, A., Lopes, C., Oliveira, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+BBN+as+an+urothelial+carcinogen%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Review: BBN as an urothelial carcinogen.</a> In Vivo. 26 (4), 727-739 (2012).</li>
<li>Palmbos, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATDC%2FTRIM29+Drives+Invasive+Bladder+Cancer+Formation+through+miRNA-Mediated+and+Epigenetic+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">ATDC/TRIM29 Drives Invasive Bladder Cancer Formation through miRNA-Mediated and Epigenetic Mechanisms.</a> Cancer Research. 75 (23), 5155-5166 (2015).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATDC+induces+an+invasive+switch+in+KRAS-induced+pancreatic+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">ATDC induces an invasive switch in KRAS-induced pancreatic tumorigenesis.</a> Genes & Development. 29 (2), 171-183 (2015).</li>
<li>Fife, C. M., McCarroll, J. A., Kavallaris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movers+and+shakers%3A+cell+cytoskeleton+in+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Movers and shakers: cell cytoskeleton in cancer metastasis.</a> British Journal of Pharmacology. 171 (24), 5507-5523 (2014).</li>
<li>Akhmanova, A., Steinmetz, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+microtubule+organization+and+dynamics%3A+two+ends+in+the+limelight%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Control of microtubule organization and dynamics: two ends in the limelight.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 16 (12), 711-726 (2015).</li>
<li>Cheung, K. J., Gabrielson, E., Werb, Z., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+invasion+in+breast+cancer+requires+a+conserved+basal+epithelial+program%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Collective invasion in breast cancer requires a conserved basal epithelial program.</a> Cell. 155 (7), 1639-1651 (2013).</li>
<li>Kidd, M. E., Shumaker, D. K., Ridge, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+vimentin+intermediate+filaments+in+the+progression+of+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The role of vimentin intermediate filaments in the progression of lung cancer.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (1), 1-6 (2014).</li>
<li>Lowery, J., Kuczmarski, E. R., Herrmann, H., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermediate+Filaments+Play+a+Pivotal+Role+in+Regulating+Cell+Architecture+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intermediate Filaments Play a Pivotal Role in Regulating Cell Architecture and Function.</a> Journal of Biological Chemistry. 290 (28), 17145-17153 (2015).</li>
<li>Papafotiou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KRT14+marks+a+subpopulation+of+bladder+basal+cells+with+pivotal+role+in+regeneration+and+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">KRT14 marks a subpopulation of bladder basal cells with pivotal role in regeneration and tumorigenesis.</a> Nature Communications. 7, 11914(2016).</li>
<li>Sun, W., Lim, C. T., Kurniawan, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+adaptability+of+cancer+cells+strongly+affects+anti-migratory+drug+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">Mechanistic adaptability of cancer cells strongly affects anti-migratory drug efficacy.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (99), (2014).</li>
<li>Goddette, D. W., Frieden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+polymerization.+The+mechanism+of+action+of+cytochalasin+D%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Actin polymerization. The mechanism of action of cytochalasin D.</a> Journal of Biological Chemistry. 261 (34), 15974-15980 (1986).</li>
<li>Berrier, A. L., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-matrix+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Cell-matrix adhesion.</a> Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 565-573 (2007).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+gel+three-dimensional+matrices+combined+with+adhesive+proteins+stimulate+neuronal+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">Collagen gel three-dimensional matrices combined with adhesive proteins stimulate neuronal differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Journal of the Royal Society Interface. 8 (60), 998-1010 (2011).</li>
<li>LeBleu, V. S., Macdonald, B., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+basement+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Structure and function of basement membranes.</a> Experimental Biology and Medicine. 232 (9), 1121-1129 (2007).</li>
<li>Rakha, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+in+breast+lesions%3A+the+role+of+the+epithelial-stroma+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Invasion in breast lesions: the role of the epithelial-stroma barrier.</a> Histopathology. , (2017).</li>
<li>Erler, J. T., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+context+regulation+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional context regulation of metastasis.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 26 (1), 35-49 (2009).</li>
</ol>

המחברים מצהירים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

כאן נתאר מודל תלת-ממדי הגידול ספרואיד המאפשר תצפית בזמן אמת של פלישה של סרטן שלפוחית השתן אשר הוא קריטי עבור התקדמות סרטן, גרורות. מערכת זו היא נוטה שילוב של רכיבים סטרומה וסלולריות שונים כדי לאפשר חוקרים כדי לסכם טוב יותר microenvironment את רקמת שם מתקיים הפלישה סרטן שלפוחית השתן. Spheroids סרטן שלפוחית השתן ניתן להפיק ממקורות שונים כגון שורות תאים (כולל שורות תאים מהונדסים שימושי עבור הבחינה של מסלולי להשפיע על תהליכים הפלישה איתות), ועכבר העיקרי גידולים (המתוארים כאן). זה יכול להיות גם להיות מותאם לניתוח הגידול העיקר...

הפלישה הוא שלב קריטי בהתקדמות סרטן, אשר נדרש עבור גרורות, והיא קשורה עם הישרדות נמוכה יותר, פרוגנוזה גרועה אצל חולים. ב סרטן שלפוחית השתן אנושי, הגידול הנפוץ ביותר בדרכי השתן הגורמת כ 165,000 מקרי מוות בשנה ברחבי העולם, שלב סרטן, הטיפול והפרוגנוזה אינם קשורים ישירות נוכחות או היעדרות של הפלישה1. כ- 75% מהמקרים של סרטן שלפוחית השתן מנוהלים שאינם שרירים פולשנית ואינם עם כריתה מקומית. לעומת זאת, סרטן פולשני שריר שלפוחית השתן (כ-25% מכלל המקרים) הם גידולים אגרסיביים עם שיעור גרורתי גבוה ומטופלים עם2,טיפול אגרסיבי multimodality3. לכן, הבנה מסלולים מולקולריים המפעילות הפלישה הוא חיוני כדי לאפיין טוב יותר את הסיכון של התקדמות פולשנית וכדי לפתח התערבויות טיפוליות אשר יכול למנוע התקדמות פולשני.
גידול פולשני התקדמות מתרחשת בסביבה מורכבת תלת-ממדיים (3-D), ושכוללת מגע תא הגידול עם תאים סרטניים אחרים, משתית, קרום המרתף של סוגים אחרים של תאים כולל תאים חיסוניים, fibroblasts, תאי שריר ואת כלי הדם תאי אנדותל. תמיכה חדיר (למשל, Transwell) מערכות assay מועסקים בדרך כלל quantitate סרטן התא הפלישה4, אבל מערכות אלה מוגבלים כי הם אינם מאפשרים פיקוח מיקרוסקופיים של תהליך הפלישה בזמן אמת, אחזור דוגמאות נוספות מכתים וניתוח המולקולרי של הוא מאתגר. התפתחות מערכת ספרואיד גידול שלפוחית השתן תלת-ממדי ללמוד הפלישה רצוי כי זה מאפשר שילוב של רכיבים המוגדרים microenvironmental עם הנוחות של מערכות במבחנה .
ב פרוטוקול זה, אנו מתארים מערכת לחקור את התהליכים פולשנית של תאים סרטניים אנושיים שלפוחית השתן באמצעות assay הפלישה ספרואיד תלת-ממדי הופכים ג'ל מבוססי קולגן מטריצות מיקרוסקופיה קונפוקלית כדי לאפשר חוקרים כדי לפקח על תנועתיות תא ו הפלישה ב בזמן אמת (איור 1א'). מערכת זו הוא תכליתי, יכול להיות שונה כדי לחקור את הגדרות סטרומה/גידול שונות. זה ניתן לשלב רוב שורות תאים של סרטן שלפוחית השתן או גידולים בשלפוחית השתן העיקרי, סטרומה תאים נוספים כגון סרטן הקשורים fibroblasts ותאים חיסוניים5,6,7. פרוטוקול זה מתאר מטריצה מורכבת של קולגן מסוג 1, אך יכול להיות שונה כדי לשלב את מולקולות אחרות כגון fibronectin, laminin או לחלבונים קולגן אחרים. יכול להיות מלווה תהליכים פולשניים במשך 72 h או יותר בהתאם היכולת של מיקרוסקופ, מערכת המשמשת. קיבעון, immunofluorescence מכתים של הגידול מוטבע בתוך המטריקס תלת-ממדי לפני, במהלך, ואחרי הפלישה מאפשר חקירת upregulated חלבונים בתאים פולשני, ובכך לספק מידע חיוני זה בדרך כלל נעדר או קשה לאסוף באמצעות דגמים תלת-ממדיים תרבות אחרים. גם יכול להיות מנוצל מערכת זו תרכובות מסך אשר לחסום את הפלישה, ניסחו איתות המסלולים מושפע תרכובות כאלה.

<table><tbody><tr><td>קווי תאים של סרטן שלפוחית השתן האנושית UM-UC9, UM-UC13, UM-UC14, UM-UC18, 253J</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מדיום תרבית תאי DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11995065</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה-אנטי-פטרייקטית (100x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA (0.25%), פנול אדום</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בסרום בקר (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3803</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), pH 7.4&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Costar Ultral-low attachment 6-well cluster&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך קונבנציונלי&nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td>491206-0001-000</td><td>שימוש כללי לתרבית תאים ובדיקת ספרואידים</td></tr><tr><td>קולגן מסוג 1 מזנב חולדה, ריכוז גבוה&nbsp;</td><td>Corning</td><td>354249</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek II Chambered Coverglass</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>155382</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי&nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td>LSM800</td><td>מיסקוסקופ קונפוקלי עם תא אקלים, הדמיה מרובת מיקומים ופונקציית סריקה Z-stack&nbsp;</td></tr><tr><td>Cryostat micromtome</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM3050 S</td><td></td></tr><tr><td>Zen 2 תוכנה לעיבוד תמונה&nbsp;</td><td>תמיסת קרל זייס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge מחסום הידרופובי PAP</td><td>מעבדות וקטור עט&nbsp;</td><td>תרכובת H4000</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>23730571</td><td></td></tr><tr><td>פתרון Hoechst 33342&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד ATDC (Trim29)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>HPA020053</td><td></td></tr><tr><td>אנטי ציטוקרטין 14 נוגדן</td><td>Abcam</td><td>ab7800</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד וימנטין</td><td>Abcam</td><td>ab24525</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond&nbsp;</td><td></td><td></td><td>מדיום הרכבה</td></tr></tbody></table>

תא תלת-ממדי מערכת תרבות עבור הלומדים הפלישה והערכת הרפוי בסרטן שלפוחית השתן

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

סרטן שלפוחית השתן היא בעיה בריאותית משמעותית. ההערכה היא כי יותר מ 16,000 אנשים ימותו השנה בארצות הברית מסרטן שלפוחית השתן. בעוד 75% ממקרי סרטן שלפוחית השתן הם לא פולשנית, לא סביר גרורות, כ-25% ההתקדמות דוגמת גידול פולשני. עד חצי של החולים עם סרטן פולשני יפתחו relapse גרורתי קטלני. לפיכך, הבנת המנגנון של התקדמות פולשני בסרטן שלפוחית השתן היא קריטית לחזות תוצאות המטופל וכדי למנוע גרורות קטלניות. במאמר זה, נציג מודל הפלישה סרטן תלת מימדי המאפשר שילוב של תאים סרטניים ורכיבים סטרומה לחקות ויוו מצבים המתרחשים microenvironment הגידול שלפוחית השתן. מודל זה מספק הזדמנות לבחון את תהליך פולשני בזמן אמת באמצעות הדמיה בצילום מואץ, תחקור מסלולים מולקולריים המעורבים באמצעות קונאפוקלית immunofluorescent תרכובות הדמיה ומסך עם פוטנציאל הפלישה בלוק. בעוד פרוטוקול זה מתמקד סרטן שלפוחית השתן, סביר להניח כי ניתן להשתמש בשיטות אחרות כדי לבחון את הפלישה, תנועתיות בסוגי סרטן אחרים גם.

יצירה מוצלחת של ספרואיד גידול סרטן שלפוחית השתן פולשנית דורש את היווצרות גידול בגודל מתאים spheroids של שורות תאים או גידולים העיקרי. איור 2 א מראה בגודל מתאים spheroids התפתח ארבע האנושי שלפוחית השתן סרטן שורות תאים (אום-UC9, אום-UC13, אום-UC14, 253J ו- UM-UC18). איור 2 B מראה על גידול ספרואיד בגלל גידול שלפוחית השתן שנוצר על-ידי BBN העכבר בתוך מטריצת קולגן. Spheroids אלו הוטבעו כמתואר לעיל, להח...

התהליכים השולטים הפלישה סרטן שלפוחית השתן מייצגים הזדמנויות סמן ופיתוח טיפולית. כאן אנו מציגים מודל הפלישה סרטן שלפוחית השתן אשר משלבת תרבות תלת-ממדי של גידול spheroids, הדמיה בצילום מואץ, מיקרוסקופיה קונפוקלית. טכניקה זו שימושית עבור הגדרת התכונות של תהליך פולשני, הקרנת סוכני טיפולית.

Bladder cancer is a significant health problem. It is estimated that more than 16,000 people will die this year in the United States from bladder cancer. ...

התקדמות פולשנית היא גורם מכריע בתוצאות הקליניות בחולים עם סרטן שלפוחית השתן. כאן נתאר שיטה פשוטה במבחנה, המשתמשת בספרואידים של גידול שנוצרו באמצעות קווי תאים או גידולים ראשוניים כדי לחקור פלישה. היתרון העיקרי של השיטה הזו הוא שאנו מסוגלים לעקוב אחר תהליך פלישת הסרטן בזמן אמת, וגם להשתמש בצביעה אימונו-פלואורסצנטית כדי לחקור את הדגימות בסוף הניסוי.ניתן להתאים טכניקה זו לשילוב סוגי תאים אחרים, כגון פיברובלסט או תאים חיסוניים. זה יכול לשמש גם לבדיקת תרכובות שעשויות להיות שימושיות לחסימת פלישה. גורמים קריטיים להצלחה כוללים אופטימיזציה של היווצרות ספרואיד הגידול והטמעה בקולגן, שימוש במיקרוסקופיה מתאימה עם מרחק עבודה נכון והליכי צביעה חיסונית מתאימים.כדי להתחיל לייצר ספרואידים מקווי תאים, יש לתרבית תאי סרטן שלפוחית השתן האנושיים בתנאי תרבית תאים קונבנציונליים. יום אחד לפני הניסוי, נסו את התאים והפיצו 1,000,000 תאים בשלושה מיליליטר של מצע תרבית תאים לכל באר של צלחת של שש בארות. לאחר מכן, דגרו על התאים בתנאי התקשרות נמוכים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16 שעות לפחות.כדי ליצור ספרואידים מגידולים ראשוניים, אספו ושטפו חתיכות גידול קוביות של 0.5 מילימטר בחמישה מיליליטר PBS קר כקרח. צנטריפוגה את חלקי הגידול ב-200 פעמים G למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, אסוף את חלקי הגידול באמצעות צנטריפוגה ב-200 פעמים G למשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס.לאחר מכן הסר את הסופרנטנט והוסף חמישה מיליליטר DMEM בתוספת 10% FBS. העבר את תערובת המדיה הספרואידית של הגידול לצלחת חיבור נמוכה במיוחד של שש בארות. לאחר מכן דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16 שעות לפחות.ראשית, יש לדלל קולגן מסוג 1 ב-DMEM בתוספת 10% FBS כדי ליצור תערובת של שני מיליגרם למיליליטר. לאחר מכן מצפים במהירות את הבארות של מגלשה קאמרית בתערובת. שמור את מגלשת החדר נייחת בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות.לאחר מכן, פיפטה בעדינות 500 מיקרוליטר של מדיה ספרואידית מלוח החיבור הנמוך במיוחד לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר. לאחר מכן הניחו לספרואידים להתיישב בתחתית הצינור למשך שתי דקות. הסר בזהירות את הסופרנטנט מהצינור.לאחר מכן הוסיפו במהירות 500 מיליליטר תערובת קולגן DMEM טרייה לספרואידים. פיפטה למעלה ולמטה כדי לערבב בעדינות את הספרואידים והקולגן. לאחר מכן, הוסף 250 מיקרוליטר מתערובת הקולגן הספרואידית לבארות של מגלשת החדר המצופה קולגן.אפשר למטריצת הקולגן המכילה את הספרואיד להתמצק לחלוטין. לאחר שמטריצת הקולגן מתמצקת, הוסף מיליליטר אחד של DMEM בתוספת FBS לכל באר של מגלשות החדר. לאחר מכן דגרו את מגלשת התא ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2.הכן את המיקרוסקופ הקונפוקלי על פי הוראות היצרן וודא שתא האקלים מגיע ל -37 מעלות צלזיוס ומסופק עם 5% CO2. לאחר מכן, העבר את שקופית החדר למתאם השקופיות של המיקרוסקופ. באמצעות מטרה בהספק נמוך, אתר את הספרואידים המעניינים ואז התחל לצלם עם מטרה בעוצמה גבוהה ובצע הדמיית זמן-lapse למשך 24 עד 72 שעות.ראשית, השתמש במלקחיים קטנים כדי להרים את גוש ג'ל הקולגן והספרואידים מהחלקה החדרית. לאחר מכן הניחו את גוש ג'ל הקולגן בתבנית היסטולוגיה מפלסטיק. שטפו את בלוק ג'ל הקולגן עם PBS 1x לזמן קצר.ותקן את זה עם 4% PFA ו-PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו את גוש ג'ל הקולגן עם 1.5 מיליליטר של 1x PBS על שייקר למשך 15 דקות. מרחו שכבה דקה של תרכובת OTC על תחתית תבנית היסטולוגיה פלסטית חדשה.לאחר מכן הניחו את גוש ג'ל הקולגן הקבוע והשטוף על גבי תרכובת ה-OTC לפני שממלאים בזהירות את שאר התבנית בתרכובת OTC. שומרים את התבנית על ארבע מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר מכן, הקפיא את התבנית על צלחת פטרי בגודל 100 מילימטר שצפה על חנקן נוזלי ואחסן את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס.העבירו את גוש הדגימה הקפוא לתא מינוס 20 מעלות צלזיוס של קריוסטט. לאחר מכן בצע חתך קפוא קונבנציונאלי עם מרווח חתך של שבעה מיקרומטר. לאחר מכן, יבש את המגלשות באוויר למשך שעה בטמפרטורת החדר.לאחר מכן חלחל את הדגימות למשך 15 דקות עם PBS המכיל 0.5% טריטון X-100. לאחר מכן, שטפו את הדגימות עם PBS שלוש פעמים למשך 10 דקות כל אחת. לאחר מכן הקיפו את הדגימות בעט מחסום הידרופובי.טפל בדגימות בתמיסת חסימה למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר מכן יש למרוח 40 מיקרוליטר של נוגדן ראשוני המכיל תמיסה על כל דגימה. דגרו על המגלשות למשך שעה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, שטפו את הדגימה שלוש פעמים עם PBS למשך 15 דקות לכל כביסה. לאחר מכן יש למרוח 40 מיקרוליטר של נוגדנים משניים המכילים תמיסה על כל דגימה. לאחר מכן שטפו את הדגימות שלוש פעמים עם PBS למשך 15 דקות לכל כביסה.מכתים את הדגימה בתמיסת Hoechst 33342 בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר מכן שטפו את הדגימות עם PBS למשך חמש דקות. הרכיב את הדגימות במדיום הרכבה וכסה אותן בהחלקות כיסוי.לבסוף, השאירו את השקופיות בחושך בטמפרטורת החדר למשך 24 שעות לפני ביצוע מיקרוסקופיה קונפוקלית. בפרוטוקול זה, ספרואידים פולשניים של סרטן שלפוחית השתן נוצרו מקווי תאים וגידולים ראשוניים. סרטון מייצג של טיים לאפס מדגים את פלישת הגידול של סרטן שלפוחית השתן למטריצת הקולגן.סרטון מייצג של זמן lapse מדגים התנהגות פולשנית של ספרואידים של סרטן שלפוחית השתן המסומנים ב-GFP לבד או בתרבית משותפת עם פיברובלסטים המסומנים ב-RFP. כדי להדגים את ההיתכנות של שימוש בצביעה אימונו-פלואורסצנטית של סמני חלבון, הספרואידים תוקנו, נחתכו ונצבעו תוך 24 או 72 שעות. תצוגת ההגדלה הגבוהה יותר של הספרואידים UM-UC-14, מראה צביעה חוטית לחלבון הקשור לאטקסיה טלנגיאקטזיה מקבוצה D.התאים הפולשניים ביותר המופצים מספרואידים UM-UC-18 לאחר 24 שעות של פלישה, מבטאים רמה גבוהה של וימנטין, סמן למעבר אפיתל למזנכימלי. בדיקה זו שימושית למסכים מוגבלים של מעכבים פרמקולוגיים של פלישת סרטן שלפוחית השתן. ציטוכלזין D משמש כאן לייצוג עיכוב פרמקולוגי של פלישה.כאן אנו מתארים מודל המאפשר תצפית בזמן אמת על פלישת סרטן שלפוחית השתן. מערכת זו ניתנת לשילוב של רכיבים סטרומליים ותאיים שונים, מה שמאפשר לחוקרים לסכם טוב יותר את המיקרו-סביבה של הרקמה שבה מתרחשת פלישת סרטן שלפוחית השתן. מערכת זו לא רק מספקת כלי שימושי לחקר הפלישה בסביבה תלת מימדית, אלא גם מתאימה להקרנה מוגבלת של תרכובות פרמלוגיות בעלות פוטנציאל לחסום פלישת תאים סרטניים.

3-d-cell-culture-system-for-studying-invasion-evaluating-therapeutics

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

זרימת הנוזל ביניים הוא גבוה בגידולים מוצקים והוא יכול לווסת את הפלישה תאים סרטניים. כאן נתאר את הטכניקה ליישם זרימת הנוזל ביניים לתאים משוקע בתוך ולאחר מכן למדוד את השפעותיו על הפלישה התא. טכניקה זו ניתן להתאים בקלות ללמוד מערכות אחרות.

תלת מימדי תרבית תאים מודל למדידת השפעת זרימת הנוזל ביניים על הפלישה תאים סרטניים

סרטון זה מספק מתודולוגיה מפורטת לגידול תאי סרטן השד במטריצת חלבון תלת-ממדית במרתף, המדגימה את הפוטנציאל של תרבית תלת-ממדית בהערכת פלישת תאים לסביבה.

3D תרבית מרתף ממברנה Assay: גידול תאים סרטניים על 3D מרתף ממברנה חלבון מטריקס לחקר פלישה תאים

מאמר זה מספק מתודולוגיות מפורטות לשימוש במבחנים תלת ממדי (3D) לכמת פלישת תאי סרטן השד. באופן ספציפי, אנו דנים בהליכים הנדרשים להקמת מבחני כאלה, כימות, וניתוח נתונים, וכן שיטות לבדיקת ההפסד של שלמות קרום המתרחש כאשר תאים לפלוש.

כימות של הפולשנות תאי סרטן השד תוך שימוש במודל תלת ממדים (3D)

פלישה לרקמות נורמליות שמסביב היא מאפיין מגדיר של גידולים ממאירים. אנו מספקים כאן מבחן מיקרו-צלחת פשוט ואוטומטי למחצה של פלישה לביומטריצה תלת מימדית טבעית שהודגמה במספר מודלים של סרטן אנושי מתקדם.

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

שיטה זו מעריכה פלישת תאי סרטן מספרואידים למטריצה תלת מימדית מסביב.  ספרואידים נוצרים בשיטת תרבית טיפה תלויה ולאחר מכן מוטמעים במטריצה המורכבת מחומרי ממברנת הבסיס וקולגן מסוג I.  פלישת הספרואידים מנוטרת לאחר מכן.

תאי סרטן ספרואיד Assay להערכת פלישה בסביבת 3D

תאי סרטן מוטבעים בג'ל קולגן ולאחר מכן נדחקים בג'ל פיברין תאי כדי ליצור מערכת תרבית תלת מימדית שבה ניתן לנטר את הפולשניות והיווצרות גידולי לווין.

תלת ממדי Assay תרבות לחקור הפולשנות תאים סרטניים היווצרות גידולים בלוויין

פרוטוקול זה מספק צעדים ניסיוני מפורט כדי ליצור תלת מימדי תרבות מבחנה של אורגנואידים גידול שלפוחית השתן נגזר מסרטן שלפוחית השתן מורטין ממורדית. שיטות תרבות כולל פאסאייג ', הנדסה גנטית, והשתלת אורתוטופית של אורגנואידים הגידול מתוארים.

תרבות, מניפולציה, והשתלת אורתוגרטופית של שלפוחית השתן של העכבר הגידול אורגנואידים

הגישה המוצגת בו זמנית מעריך פלישה לתאים סרטניים באסה 3D spheroid ו cytotoxicity T-cell. ספרואידים נוצרים בהצללת אגרוז מרובת מיקרווול ללא פיגומים. תרבות וטביעה בסוג אני מטריצת קולגן מבוצעים בתוך אותו מכשיר המאפשר לפקח על פלישת תאים סרטניים וcytotoxicity בתיווך T-cell.

ניטור פלישת תאים סרטניים וcytotoxicity T-Cell בתרבות 3D

אורגנואידים שמקורם בחולה (PDOs) הם כלי רב עוצמה בחקר הסרטן התרגומי, המשקף הן את ההטרוגניות הגנטית והן את ההטרוגניות הפנוטיפית של המחלה ואת התגובה לטיפולים אנטי-סרטניים מותאמים אישית. כאן מפורט פרוטוקול מאוחד ליצירת PDOs ראשוניים של סרטן שלפוחית השתן האנושית כהכנה להערכת ניתוחים פנוטיפיים ותגובות לתרופות.

תרבית של אורגנואידים של סרטן שלפוחית השתן ככלי רפואה מדויקת

אנו מתארים גישה לאיתור ולכידת תת-אוכלוסיות של תאים פולשניים בזמן אמת. התכנון הניסויי משתמש באנליזה תאית בזמן אמת על ידי ניטור שינויים בעכבה החשמלית של תאים. סרטן פולשני, תאי חיסון, אנדותל או סטרומל ברקמות מורכבות יכולים להיתפס, וניתן להעריך את ההשפעה של תרביות משותפות.

זיהוי ולכידה בזמן אמת של תת-אוכלוסיות תאים פולשניות מתרביות משותפות

פלישה היא תופעה ביולוגית מרכזית בהתפתחות והתקדמות סרטן. תהליך זה מושפע מתאים שאינם ניאופלסטיים ומרכיבי המיקרו-סביבה של הגידול. מטרת מחקר זה היא לתאר שיטה חלופית לניתוח פלישת תאי גידול במבחנה באמצעות תרביות תלת ממדיות (3D).

אסטרטגיה חלופית לניתוח פלישת תאי מבחנה לתרביות תלת ממדיות

למדו שיטה תלת-ממדית לחקר פלישת סרטן שלפוחית השתן באמצעות ספירואידים של גידולים. השיטה מאפשרת מעקב בזמן אמת וניתוח אימונופלואורסצנטי לבחינת מנגנוני הפלישה והערכת תרופות פוטנציאליות.

תא תלת-ממדי מערכת תרבות עבור הלומדים הפלישה והערכת הרפוי בסרטן שלפוחית השתן

גלה סרטונים נוספים