Name: קביעת כשירות הרבייה על-ידי המאשר תחילת המתבגר וביצוע וזמינותו של פוריות ב עכברים וחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: למדו שיטה לא פולשנית לקביעת תחילת המתבגר בעכברים וחולדות באמצעות הפרדת העורלה ופתיחת הנרתיק. שיטה זו מאפשרת הערכת כשירות רבייה ומחקרי פוריות במודלים גנטיים שונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אני מודה המחברים לתרום העבודה ההתחלתית אשר הוא הבסיס של פרסום זה. תודה Aitor אגירה, ג'נביב א, ריאן ואריקה Schoeller ל' לעזרה בהכנת כתב היד. תודה לי סורה ג'סיקה, אוסטין הסנטר לקבלת סיוע טכני עם כתב היד. H.M.H. נתמכה על ידי יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות & פיתוח אנושי של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R00HD084759.

כל השיטות המתוארות כאן מאושר על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה של אוניברסיטת מישיגן, שנערכו לפי המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה.
1. לקבוע את תחילת המתבגר
<ol><li>פעל לפי ההנחיות מוסדי עבור בגדים, לכל הפחות, יש צורך ללבוש חלוק מעבדה נקייה והכפפות נקיות. תמיד להתמודד עם עכברים לבש כפפות נקיות.</li>
	<li>הכינו את משטח העבודה על-ידי הצבת משטח על השולחן.<ol>
<li>מניחים מלמעלה כלוב עכבר נקי עם רשת כלפי מעלה על משטח.</li>
		<li>הגדר בקנה מידה באזור העבודה. במקום גביע נקי 500-1000 מ"ל על הסולם ואת טרה.</li>
		<li>הנח גיליון ליד אזור העבודה משקל הגוף הרשומה ואת ההפרדה preputial, פתח הנרתיק או ייחום ראשון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לזהות עכברים לצורך המחקר. לבצע בדיקות מדי יום עבור המתבגר התחלתה עד גיל ההתבגרות. לבצע את הבדיקה באותו זמן של יום לאורך כל תקופת המחקר. תחילת המתבגר יכול להתרחש מוקדם ככל כמחנכת יום 11-12-19, עם זאת, ב setups האקספרימנטאלי ביותר, תחילת המתבגר ניטור מתחיל ~ 22 ימים.</li>
	<li>למקם את הכלוב העכבר באזור העבודה (שלב 1.2). לפתוח את הכלוב ולמקם את המכסה, בקבוק מים, מזון מחזיק על השולחן.</li>
	<li>קביעת הפרדה preputial בעכברים זכרים.<ol>
<li>בעוד אתה מחזיק את העכבר בזנבו, למקם אותו על גבי כלוב עכבר נקיים מ שלב 1.2.1. כשאני בעדינות מחזיק הזנב, תן את העכבר לחקור את הרשת של הכלוב העליון ~ 5 s.</li>
		<li>משוך בעדינות את הזנב לאחור; בדרך כלל התוצאה החיה לנוע קדימה בזמן שהחזיקו. הרשת עם הרגליים הקדמיות שלה. הגישה היד השנייה על העור מקרבת הצוואר והאוזניים.</li>
		<li>לתפוס את העור רופף בין הכתפיים לצוואר עם האגודל והאצבע. חשוב להשיג אחיזה טובה של העור, כמו זה ימנע את העכבר מסתובב הראש שלו לנשוך.</li>
		<li>. תפוס את העור על הגב עם האצבעות הנותרות והחזק אותו על ידי לחיצה על היד. תחזיק ביציבות ללא הפרעה הנשימה, הדם זרימה או מזיק העצמות, השרירים או העור. הפעל את היד כדי לחשוף את הבטן של העכבר, תוך תמיכה האחורי של העכבר בתוך כף היד.</li>
		<li>עם יד חופשית, דחף בעדינות בחזרה את העור סביב הפין מבלי לכפות. -הפרדת preputial, העור preputial שקופיות אחורה לחשוף את העטרה הפין (איור 2 א, חץ מציג ההפרדה preputial). רישום נוכחות או היעדרות של הפרדה preputial.</li>
		<li>שוקל את העכבר בעדינות זה, להניח הספל 500-1000 מ ל מ שלב 1.2.2 ולהקליט את המשקל.</li>
		<li>להציג מחדש את העכבר בתוך הכלוב לדיור על-ידי החזקת את הספל 0-2 ס"מ על רצפת הכלוב, לאט להתהפך כשהספל ומאפשר את העכבר כדי לצאת בכוחות עצמו. לנקות את. הספל עם סבון עדין ומים, תייבש את זה לפני להחזירו הסולם ואת taring את קנה המידה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>קביעת פתח הנרתיק בעכברים הנשי.<ol>
<li>מניחים כדור צמר גפן, גביע, בקבוק מים סטרילי באזור העבודה (שלב 1.2). שופכים את המים לתוך הספל. ללחלוח על כדור צמר גפן עם מים סטריליים והצב אותה ליד הכלוב העליון מ שלב 1.2.1.</li>
		<li>למקם את הכלוב העכבר באזור העבודה (שלב 1.2), להעביר את העכבר מכלובה הביתה לפסגה הכלוב (שלב 1.2.1) על ידי החזקתה בבסיס הזנב. משוך בעדינות בחזרה את הזנב לעודד תנועה קדימה של העכבר.</li>
		<li>הרם את הזנב תוך תמיכה המותניים עם האצבעות חינם. אפשר את hindlimbs לשמור על קשר עם החלק העליון של הכלוב. אם העכבר זז יותר מדי, החזק אותה ביד כפי שמתואר שלבים 1.5.1-1.5.4.</li>
		<li>בעדינות לנקות הפות עם הכדור כותנה humidified מים מ שלב 1.6.1. השתמש כדור צמר גפן נקי humidified עבור כל עכבר. כדי לקבוע את פתח הנרתיק, לבחון את הפות, לקבוע אם הנרתיק היא פתוחה לחלוטין (איור 2 א, פתח הנרתיק הנשי).</li>
		<li>להקליט אם אירעה פתח הנרתיק. שוקל את העכבר ולהחזיר אותה לכלוב הביתה כפי שמתואר שלבים 1.5.6-1.5.7.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ייחום ראשון מחוון הביוץ הראשון.<ol>
<li>מניחים גביע במים סטריליים, זכוכית עם תוויות על פיפטה 200 µL עם טיפ נקי באזור העבודה (שלב 1.2).</li>
		<li>החזק את הנקבה כפי שמתואר בשלב 1.6.2-1.6.3. מניחים את קצה פיפטה המכיל ~ 50 µL של מים סטריליים על פתח הנרתיק.</li>
		<li>בעדינות לרוקן את התאים של קיר הנרתיק ע י החדרת reabsorbing ~ 50 µL של מים 2 - 4 פעמים. כתם בתוכן מהקצה פיפטה לשקופית מיקרוסקופ זכוכית עם תוויות.</li>
		<li>בזהירות לצפות המורפולוגיה הסלולר על מיקרוסקופ brightfield באמצעות 10 X או 20 X המטרה או לתת את airdry השמצות על ~ 1 h, ואז counterstain עם פתרון מתילן כחול 0.1% (מומס ddH2O) (איור 2B). כדי counterstain, לטבול את השקופית מיובשים בתוך תמיסת מתילן כחול 0.1% עבור ~ 30 s. תנו לאוויר שקופית יבש לשעה.</li>
		<li>לבחון את השקופיות מהשלב 1.7.4 על מיקרוסקופ שדה בהיר 10 X או 20 X. להקים את השלב של ייחום (איור 2B)20 על ידי התבוננות המורפולוגיה תא המאפשר להבחין את ארבעת השלבים ברורים ייחום (איור 2B). הערה: Metestrus מאופיין על ידי תערובת של cornified לתאי האפיתל הקשקש, לויקוציטים, diestrus על ידי לויקוציטים, proestrus על ידי עירוב של לויקוציטים nucleated בתאי אפיתל, ואת ייחום על ידי תאים אפיתל cornified (איור 2B) 20.</li>
		<li>להקליט את משקל הגוף ולחזור העכבר לכלוב שלו הביתה, כפי שמתואר צעדים 1.5.6-1.5.7. . מריחות הנרתיק הסתיימו ביום כאשר העכבר יש שלה ייחום ראשון (איור 2B).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. רצוי גידול בתנאי החדר
<ol><li>להבטיח החדר הרבייה לטמפרטורה של ~ 20-24 ° C, עם 55 ± 10% לחות, ואחידה חדר האור של עוצמות של ~ 300-400 לאקס כ- 1 מ' מעל קומה21. עוצמת האור הזה מאפשר עוצמת האור רצוי כלוב בינוני של 25-80 lux. כדי לבדוק את עוצמת האור, השתמש מד האור.</li>
	<li>השתמש במערכת אוטומטית כדי לקבוע את התאורה בחדר הרבייה כדי להבטיח העיתוי המתאים של תאורה לאורך כל הניסוי. תנאים אופטימליים אורך היום כדי להעריך את פוריות בטווח מכרסמים מיום 12 שעות (12 שעות אור וחושך 12 שעות, LD12:12), בתנאי "קיץ כמו" עם 14 h של החושך (LD14:10) של אור ו- 10 h-21.</li>
	<li>להכין את כלובי רבייה.<ol>
<li>להכין כלוב עכבר נקי עם מכסה, מים, אוכל, מצעים וקינון לכל רבייה זוג.</li>
		<li>למלא את הקלפים כלוב עם כל המידע הנדרש, כולל מין, תאריך לידה, המתח העכבר ואת תאריך בעת הזדווגות מוגדר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. פוריות המחקר
<ol><li>לזהות את החיות כדי לשמש לחקר הפוריות. ודא כי כל בעלי החיים הם בגרו (שלב 1). טווח הגיל בדרך כלל משמש כדי להגדיר מחקר פוריות בעכברים הוא 10-16 שבועות של גיל, עידן שבו התבגרות מינית הושלמה בתנאים הכי ניסיוני.</li>
	<li>על שולחן נקי, למקם את הכלוב הרבייה המבושלות 2.3 שלב.</li>
	<li>לתפוס והחזק את העכבר.<ol>
<li>לאט לאט להציג יד בכפפה לתוך הכלוב העכבר. תשאיר את היד לכלוב לתקופה קצרה של זמן (s ~ 5-30), המאפשר העכברים להתאים ריח הכפפה והיד. הימנע תנועות קופצניות קדחתני.</li>
		<li>תוריד את היד היו כפות קרוב בתחתית הכלוב, לאט התקרבו אליו כדי העכברים. הם אני אברח הם עלו על היד, השמנה זנב עכבר אחד בין האגודל לאצבע.</li>
		<li>הרם את העכבר בזנב עבור s 2-3. אם העכבר צריך להיערך זמן רב יותר, להחזיק הזנב, הנח את העכבר ביד היו כפות שמירה על החסימה על הזנב.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להעביר 1 זכר, לאחר מכן 1 נקבה לתוך הכלוב רבייה על-ידי החזקת אותם בזנב (שלב 3.3). ודא כי הנקבות הן בשלב estrous אותו בעת הגדרת וזמינותו פוריות. לקבוע את שלב estrous של הנקבות על-ידי ביצוע כתם הנרתיק כפי שמתואר בשלב 1.7.</li>
	<li>לסגור את הכלוב ולהבטיח כי העכברים יש חומר מזון, מים ומחסה. לצרף בעל הכרטיס כלוב עם הכרטיס כלוב לכלוב.</li>
	<li>למקם את הכלוב רבייה על המדף דיור. להשאיר הכלוב רבייה גם ללא הפרעה ככל האפשר משך המחקר פוריות מלא. לנהל את המחקר פוריות למשך 30 יום. עבור כל זוג הרבייה, שומרים פרטים, הערה 1) תאריך שההזדווגות הוא להגדיר, 2) התאריך המלטות נולדים או 3) את מספר הגורים נולד, כולל הגורים מתים וחיים. לבצע בדיקות המלטה מדי יום לאורך כל תקופת המחקר.</li>
	<li>להאריך את הפוריות מחקר עבור ימים 30-60 נוספים אם אין או השפעה חלשה על פוריות נוסדה ב- 3.6 צעד.</li>
</ol>

<ol><li>Schneider, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+balance+and+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Energy balance and reproduction.</a> Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).</li>
<li>Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+photoperiod+on+hormones%2C+behavior%2C+and+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function.</a> Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2012).</li>
<li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility%3A+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+communications%22%5BJournal%5D)">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, (2016).</li>
<li>Kauffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differentiation+and+the+Kiss1+system%3A+Hormonal+and+developmental+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Sexual differentiation and the Kiss1 system: Hormonal and developmental considerations.</a> Peptides. , (2009).</li>
<li>Bronson, F. H., Dagg, C. P., Snell, G. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBronson%2C+FH+%22Reproduction%22">Reproduction</a>. , Dover Publications, Inc. New York. (1966).</li>
<li>Chehab, F. F., Mounzih, K., Lu, R., Lim, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+onset+of+reproductive+function+in+normal+female+mice+treated+with+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Early onset of reproductive function in normal female mice treated with leptin.</a> Science. , (1997).</li>
<li>Yoshimura, S., Yamaguchi, H., Konno, K., Ohsawa, N., Noguchi, S., Chisaka, A. <a target="_blank" href="https://www.jstage.jst.go.jp/article/tox/18/3/18_3_141/_article/-char/ja/">Observation of Preputial Separation is a Useful Tool for Evaluating Endocrine Active Chemicals.</a> J Toxicologic Pathology. 18, 141-157 (2005).</li>
<li>Ahima, R. S., Dushay, J., Flier, S. N., Prabakaran, D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptin+accelerates+the+onset+of+puberty+in+normal+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Leptin accelerates the onset of puberty in normal female mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 99 (3), 391-395 (1997).</li>
<li>Bohlen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+short-day+photoperiod+delays+the+timing+of+puberty+in+female+mice+via+changes+in+the+kisspeptin+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">A short-day photoperiod delays the timing of puberty in female mice via changes in the kisspeptin system.</a> Frontiers in Endocrinology. 9 (FEB), 1-9 (2018).</li>
<li>Shahab, M., Mastronardi, C., Seminara, S. B., Crowley, W. F., Ojeda, S. R., Plant, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+hypothalamic+GPR54+signaling%3A+A+potential+mechanism+for+initiation+of+puberty+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Increased hypothalamic GPR54 signaling: A potential mechanism for initiation of puberty in primates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2005).</li>
<li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility%3A+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+communications%22%5BJournal%5D)">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, 5-9 (2016).</li>
<li>Navarro, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Neurokinin+B+in+the+Control+of+Female+Puberty+and+Its+Modulation+by+Metabolic+Status%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Role of Neurokinin B in the Control of Female Puberty and Its Modulation by Metabolic Status.</a> Journal of Neuroscience. 32 (7), 2388-2397 (2012).</li>
<li>Hoffmann, H. M., Tamrazian, A., Xie, H., Pérez-Millán, M. I., Kauffman, A. S., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterozygous+deletion+of+ventral+anterior+homeobox+%28Vax1%29+causes+subfertility+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Heterozygous deletion of ventral anterior homeobox (Vax1) causes subfertility in mice.</a> Endocrinology. 155 (10), 4043-4053 (2014).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kisspeptin+Receptor+GPR54+Is+Required+for+Sexual+Differentiation+of+the+Brain+and+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The Kisspeptin Receptor GPR54 Is Required for Sexual Differentiation of the Brain and Behavior.</a> Journal of Neuroscience. 27 (33), 8826-8835 (2007).</li>
<li>Teles, M. G., et al. <a target="_blank" href="https://miami.pure.elsevier.com/en/publications/brief-report-a-gpr54-activating-mutation-in-a-patient-with-centra">Brief report: A GPR54-activating mutation in a patient with central precocious puberty.</a> New England Journal of Medicine. , (2008).</li>
<li>Korenbrot, C. C., Huhtaniemi, I. T., Weiner, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preputial+separation+as+an+external+sign+of+pubertal+development+in+the+male+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+reproduction%22%5BJournal%5D)">Preputial separation as an external sign of pubertal development in the male rat.</a> Biology of reproduction. , (1977).</li>
<li>Gaytan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+method+for+precise+dating+of+female+puberty+in+laboratory+rodents%3A+The+puberty+ovarian+maturation+score+%28Pub-Score%29%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: The puberty ovarian maturation score (Pub-Score).</a> Scientific Reports. 7 (March), 1-11 (2017).</li>
<li>Caligioni, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19575469">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 1-11 (2010).</li>
<li>Mayer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+and+completion+of+puberty+in+female+mice+depend+on+estrogen+receptor+-signaling+in+kisspeptin+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Timing and completion of puberty in female mice depend on estrogen receptor -signaling in kisspeptin neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (52), 22693-22698 (2010).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+Vaginal+Lavage%2C+Crystal+Violet+Staining%2C+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), 4-9 (2012).</li>
<li>Hedrich, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHedrich%2C+H+%22The+Laboratory+Mouse%22">The Laboratory Mouse</a>. , Academic Press. (2012).</li>
<li>Hoffmann, H. M., Trang, C., Gong, P., Kimura, I., Pandolfi, E. C., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Vax1+from+Gonadotropin-Releasing+Hormone+%28GnRH%29+Neurons+Abolishes+GnRH+Expression+and+Leads+to+Hypogonadism+and+Infertility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Deletion of Vax1 from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Abolishes GnRH Expression and Leads to Hypogonadism and Infertility.</a> Journal of Neuroscience. 36 (12), 3506-3518 (2016).</li>
<li>Sloboda, D. M., Howie, G. J., Pleasants, A., Gluckman, P. D., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-+and+postnatal+nutritional+histories+influence+reproductive+maturation+and+ovarian+function+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Pre- and postnatal nutritional histories influence reproductive maturation and ovarian function in the rat.</a> PLoS ONE. , (2009).</li>
<li>Manual, R. <a target="_blank" href="https://scholar.google.com/scholar?hl=en&as_sdt=0%2C22&q=Breeding+Strategies+for+Maintaining+Colonies+of+Laboratory+Mice&btnG=">Breeding Strategies for Maintaining Colonies of Laboratory Mice.</a> Management. , (2007).</li>
<li>Kennedy, G. C., Mitra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+weight+and+food+intake+as+initiating+factors+for+puberty+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat.</a> The Journal of Physiology. , (1963).</li>
<li>Sisk, C. L., Foster, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neural+basis+of+puberty+and+adolescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neural basis of puberty and adolescence.</a> Nature Neuroscience. 7 (10), 1040-1047 (2004).</li>
<li>Nelson, J. F., Karelus, K., Felicio, L. S., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+influences+on+the+timing+of+puberty+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+reproduction%22%5BJournal%5D)">Genetic influences on the timing of puberty in mice.</a> Biology of reproduction. , (1990).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+reproduction%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. , (1982).</li>
<li>Falconer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+and+age+at+puberty+in+female+and+male+mice+of+strains+selected+for+large+and+small+body+size%5BTitle%5D)+AND+%22Genetical+Research%22%5BJournal%5D)">Weight and age at puberty in female and male mice of strains selected for large and small body size.</a> Genetical Research. , (1984).</li>
<li>Rodriguez, I., Araki, K., Khatib, K., Martinou, J. C., Vassalli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+vaginal+opening+is+an+apoptosis-dependent+process+which+can+be+prevented+by+the+overexpression+of+Bcl2%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse vaginal opening is an apoptosis-dependent process which can be prevented by the overexpression of Bcl2.</a> Developmental Biology. , (1997).</li>
<li>Lomniczi, A., Wright, H., Ojeda, S. R. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0091302214000752">Epigenetic regulation of female puberty.</a> Frontiers in Neuroendocrinology. 36, 90-107 (2015).</li>
<li>Selmanoff, M. K., Goldman, B. D., Ginsburg, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+serum+luteinizing+hormone%2C+follicle+stimulating+hormone+and+androgen+levels+in+males+of+two+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in serum luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and androgen levels in males of two inbred mouse strains.</a> Endocrinology. 100 (1), 122-127 (1977).</li>
<li>Larder, R., Clark, D. D., Miller, N. L. G., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothalamic+Dysregulation+and+Infertility+in+Mice+Lacking+the+Homeodomain+Protein+Six6%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypothalamic Dysregulation and Infertility in Mice Lacking the Homeodomain Protein Six6.</a> Journal of Neuroscience. 31 (2), 426-438 (2011).</li>
<li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+yield+and+composition+in+mice%3A+Effects+of+litter+size+and+lactation+number%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+--+Part+A%3A+Physiology%22%5BJournal%5D)">Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number.</a> Comparative Biochemistry and Physiology -- Part A: Physiology. 84 (1), 127-133 (1986).</li>
<li>Chahoud, I., Paumgartten, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+litter+size+on+the+postnatal+growth+of+rat+pups%3A+is+there+a+rationale+for+litter-size+standardization+in+toxicity+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+research%22%5BJournal%5D)">Influence of litter size on the postnatal growth of rat pups: is there a rationale for litter-size standardization in toxicity studies.</a> Environmental research. 109 (8), 1021-1027 (2009).</li>
<li>Pandolfi, E. C., Hoffmann, H. M., Schoeller, E. L., Gorman, M. R., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+SIX3+Abolishes+Male+Reproductive+Behavior+Through+Disrupted+Olfactory+Development%2C+and+Impairs+Female+Fertility+Through+Disrupted+GnRH+Neuron+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of SIX3 Abolishes Male Reproductive Behavior Through Disrupted Olfactory Development, and Impairs Female Fertility Through Disrupted GnRH Neuron Migration.</a> Molecular Neurobiology. , (2018).</li>
</ol>

המחבר אין לחשוף.

רווחתם הכללית של העכברים הוא קריטי עבור assay פוריות מוצלחת21. בעת ביצוע וזמינותו של פוריות, חשוב לבדוק לא פיזית העכברים כל יום כמו זה יכול לגרום ללחץ. דרך נוספת להימנע שינויים תכופים בכלוב, כמו אלה גם מלחיץ. אידיאלי שינויים כלוב ייעשה יותר מ 1 - 2 פעמים בשבוע. לאור החשיפה במהלך שלב כהה משפיע באופן שלילי הרבייה בחולדות ליליים. לא להדליק אורות בחדר הרבייה במהלך השעות כהה. אם הכניסה לחדר נדרש במהלך השעות כהה, השתמש האור האדום העמום תאורה. עוד גורם הלחץ היא הנוכחות של ריחות מופרז, תנודות או רעש ביבר ...

המעבר לבגרות נדרש להשיג בגרות מינית וכשירותם הרבייה. המעבר המתבגר ותחזוקה של פוריות בבגרות מוסדר על ידי הציר הרבייה, גם כינה את הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-האשכים (איור 1). העיתוי של תחילת המתבגר ותחזוקה של פוריות מוסדר בחוזקה על ידי גורמים פנימיים, כמו גם הסביבה כדי להגדיל את סיכויי ההישרדות של הצאצאים וההורים1,2. פרוטוקול זה מספקת גישה פולשנית לקבוע המתבגר התחלתה של עכברים וחולדות לאשר בגרות מינית לפני הגדרת מחקר פוריות כדי להעריך את יכולת הרבייה.
מחקר פוריות מבוצעת בבעלי חיים בגרו, ניתן לאתחל לאחר החיות עברו גיל ההתבגרות. לפני תחילת המתבגר, הציר הרבייה היא השבתה הדרגתית, הנהג מפתח של התבגרות מינית, גונדוטרופין – releasing הורמון (GnRH), הוא שוחרר לתוך בלוטת יותרת המוח בכמויות לא מספיקות כדי ליזום גיל ההתבגרות (איור 1). תחילת המתבגר היא תהליך מורכב שתוצאתו שחרור מוגבר GnRH קדושתו החציוני. GnRH מעודד הורמון מחלמן (LH) ואת זקיק מגרה הפרשת הורמון (FSH) של בלוטת יותרת המוח, שני הורמונים חיוניים עבור ההבשלה האשכים ותפקוד הרבייה (איור 1)3,4,5 .
עלבונות לציר הרבייה לגרום הפריון, ויכול גם מראש או עיכוב התפתחות המתבגר. תנאים ידוע להשפיע על התזמון של תחילת המתבגר וכשירותם הרבייה כוללים את החשיפה משבשי כימיקלים6,7, הגוף עלה/ירד במשקל1,8, שינויים היום אורך2,9 , מוטציות גנטיות10,11,12,13,14,15.
תחילת הבגרות המינית היא צעד קריטי זה צריך להסתיים לפני הגדרת וזמינותו של פוריות. היתרונות של קביעת תחילת המתבגר דרך ההפרדה preputial, פתח הנרתיק, ייחום ראשון, הם המאפיינים לא פולשנית של נהלים אלה, כפי שהם אינם מצריכים איסוף דם או הקרבת בעלי חיים16, 17.
לאחר תחילת המתבגר נקבע, הגדרת כראוי מחקר פוריות יספק מידע חשוב אודות השלמות של הציר הרבייה, בדרך כלל יש היתרון השני של יצירת חיות ניסוי ללימודי (עידון) 18. הגדרת המחקר פוריות שמתואר פרוטוקול זה יכול לזהות חסרונות קטנים וגם גדולים ביכולת הרבייה של זכרים ונקבות. מפתח הערכה שפרמטרים 1) זמן ההמלטה הראשונה, 2) מספר המלטות המופקים גודל מסגרת הזמן וחול 3) נתון. לבסוף, המלצות עבור הסוג של מעקב מחקרים אשר יכול להתבצע כדי לזהות את הגורם ליקוי פוריות הינם כלולים.
הפרוטוקול המתואר מתייחס עכברים ומשקפים הנתונים נציג העבודה העכברים הטרנסגניים. עם זאת, כל הפרוטוקולים כלולים תקפות באותה מידה בחולדות.

<table><tbody><tr><td>כדורי כותנה סטריליים</td><td>פישר</td><td>22456885</td><td></td></tr><tr><td>מגן משטח</td><td>פישר</td><td>1420637</td><td></td></tr><tr><td>מד אור</td><td>VWR</td><td>21800-014</td><td></td></tr><tr><td>מתילן כחול&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שקופיות</td><td>Genesee Scientific</td><td>29-101</td><td></td></tr><tr><td>מתלה Optimouse עם כלובים</td><td>מערכות AnimalCare</td><td>C89100</td><td></td></tr><tr><td>סל בקבוק מים&nbsp;</td><td>מערכות AnimalCare</td><td>C61011</td><td></td></tr><tr><td>צמרות כלובים מסוננים</td><td>מערכות AnimalCare</td><td>C78210</td><td></td></tr><tr><td>אופטימיות מזין סטנדרטי</td><td>מערכות AnimalCare C40100SG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלוב מחזיק כרטיסים</td><td>מערכות AnimalCare</td><td>C43251</td><td></td></tr><tr><td>כרטיסי כלוב</td><td>מערכות AnimalCare</td><td>M52010</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק Assambley</td><td>מערכות</td> <td>AnimalCare</td><td></td></tr><tr><td>C79122P Bed R'Nest Nesting</td><td>The Andersons</td><td>BRN4WSR</td><td></td></tr><tr><td>1/8 אינץ' מצעי קלחי תירס&nbsp;</td>צ'או העכבר <td>הסטנדרטי של אנדרסון</td><td>8B</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Teklad</td><td>7904 (7004)</td><td></td></tr> <tr><td>בקנה מידה</td><td>VWR</td><td>10205-004</td><td></td></tr><tr><td>פוליפרופילן</td><td>פישר</td><td>14-955-111F</td><td></td></tr></tbody></table>

קביעת כשירות הרבייה על-ידי המאשר תחילת המתבגר וביצוע וזמינותו של פוריות ב עכברים וחולדות

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

הערכה של יכולת הרבייה היא קריטית להבנת ההשפעה של הטיפול או מניפולציה גנטית על ציר הרבייה, גם כינה את הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-האשכים. הציר הרבייה היא אינטגרטור מפתח של קלט סביבתי ופנימיים בהתאמת לפוריות תנאים נוחים עבור רבייה. לפני היציאה על מחקר פוריות עכברים וחולדות, בגרות מינית מוערך לשלול את האפשרות כי הפנוטיפים הרבייה שנצפה נגרמות על ידי עיכוב או נעדר תחילת המתבגר. פרוטוקול זה מתאר בגישה פולשנית כדי להעריך את התפתחות המתבגר אצל זכרים באמצעות הקביעה של ההפרדה preputial, אצל נקבות דרך פתח הנרתיק, ייחום ראשון. לאחר האישור של סיום ההתבגרות, ההישג של בגרות מינית, יכול להיות יזם מחקר פוריות. ההליך מתאר את תנאי גידול אופטימליים עבור עכברים, חולדות, כיצד להגדיר מחקר פוריות אילו פרמטרים כדי להעריך ולקבוע אם הטיפול או מחיקה ג'ין יש השפעה על פוריות.

התוצאות שהוצגו מגיעים בשני דגמים שונים בעכבר הטרנסגניים איפה שעתוק מקדם הגחון הקדמי גנים homeobox 1 (Vax1) נמחקה הגוף כולו על אחד אלל, המכונים כאן heterozygote עכברים (HET)13, או Vax1 נמחקה מותנית בתוך GnRH נוירונים22, כאן כינה מותנה KO (cKO). לפני הגדרת המחקר פוריות, חשוב לאשר תחילת המתבגר כל בעכברים.
ראשית, היום, משקל פתח הנרתיק והפרדה preputial הוקמו. בעכברים ה...

טיפולים רבים, מוטציות גנטיות להשפיע על התזמון של בגרות מינית ופוריות. פרוטוקול זה מתאר שיטה לא פולשנית כדי להעריך את התפתחות המתבגר ב עכברים וחולדות לפני הגדרת מחקר פוריות בחיות בגרו.

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרבייה, כגון כיצד לקבוע התפרצות גיל ההתבגרות בעכברים וחולדות באמצעות הפרדה טרום נרתיקית, פתיחת הנרתיק, והקמת estrus הראשון לפני ביצוע מחקר פוריות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי על ידי הקמת תחילת גיל ההתבגרות באמצעות הגישה הלא פולשנית הפגינו, ניתן לעקוב ולבצע מחקר פוריות בבעלי חיים כי הם בוגרים מינית. ההשלכות של טכניקה זו להרחיב לקראת אבחון של ליקויים רבייה, הנגרמת על ידי מוטציות גנטיות או טיפולים רגישים לפגיעה ביכולת הרבייה, כגון כימיקלים משבשים האנדוקרינית.למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה על יכולת הרבייה בעכברים, זה יכול להיות מיושם גם על מערכות מודל אחרות, כגון חולדות אוגרים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שהיא דורשת כישורי טיפול טובים ועדינים בבעלי חיים. חשוב במיוחד להחזיק את העכברים כראוי לזיהוי החזותי הבא של הפרדה טרום-גולגולתית ופתיחת הנרתיק.כדי להכין את אזור העבודה, מניחים משטח על השולחן. לאחר מכן מניחים חלק עליון של כלוב עכבר נקי כאשר הרשת פונה כלפי מעלה, על הפנקס. לאחר מכן, הגדר קנה מידה באזור העבודה.מניחים מקור נקי 500 עד 1000 מיליליטר על הסולם ו tare אותו. לאחר מכן מקם גיליון לצד אזור העבודה כדי לתעד את הנתונים. לאחר מכן, מקם את כלוב העכברים באזור העבודה.פתח את הכלוב והסר את המכסה, בקבוק המים ומחזיק המזון לשולחן. תוך החזקת העכבר בזנב, מניחים אותו על החלק העליון של כלוב העכבר הנקי. תוך שמירה על אחיזה של הזנב, לאפשר לעכבר לחקור את הרשת של החלק העליון של הכלוב.מושכים בעדינות את הזנב לאחור ומתקרבים ליד השנייה אל העור הקרוב לצוואר ולאוזניים. אחוז בעור הרופף שבין הכתפיים והצוואר עם האגודל והאגודל. ואז לתפוס את העור על הגב עם האצבעות הנותרות ולהחזיק את העכבר על ידי בעדינות לחיצה עליו על היד.עם היד החופשית, בעדינות לדחוף את העור סביב הפין בחזרה. בהפרדה פוטית, העור הפוטנציאלי מחליק לאחור, חושף את הפין העטרה. לאחר הבדיקה, יש לתעד את נוכחותה או היעדרה של הפרדה בין-מוניטין.לאחר מכן, לשקול את העכבר ולתקליט את משקלו. לאחר מכן להחזיר את העכבר לכלוב הדיור על ידי החזקת המק מעל רצפת הכלוב ומאפשר לעכבר לצאת בכוחות עצמו. מניחים כדור צמר גפן, מקור גדול ובקבוק מים סטריליים באזור העבודה.יוצקים מים סטריליים לתוך הבקבוק. לאחר מכן, לחות את כדור הכותנה עם המים הסטריליים בבקבוק, והמקם אותו ליד החלק העליון של הכלוב הנקי. מניחים את כלוב העכברים באזור העבודה.ואז להעביר את העכבר לראש הכלוב על ידי החזקת אותו על ידי הבסיס של הזנב שלה. בעדינות למשוך על הזנב של העכבר כדי לעודד תנועה קדימה על ידי העכבר. לאחר מכן, הרם את הזנב תוך תמיכה בירכיים בשלוש אצבעות.לנקות בעדינות את הפות עם כדור צמר גפן לח, ולאחר מכן לבחון את הפות כדי לקבוע אם הנרתיק פתוח לחלוטין. רשום אם התרחשה פתיחה וגינלית. ואז לשקול את העכבר ולהחזיר אותו לכלוב הבית.הכינו כלוב עכברים נקי עם מכסה, מים, מזון, מצעים וחומר קינון לכל זוג עכברים רבייה. ואז למלא את כרטיסי הכלוב עם המידע הנדרש. מניחים את כלוב המצעים המוכן על שולחן נקי, ואז לאט לאט להציג יד כפפה לתוך כלוב העכבר ולהשאיר אותו בכלוב לתקופה קצרה של זמן.לאט לאט מתקרבים לעכברים עם היד הכפפות. כאשר העכברים לדרוס את היד, לתפוס את הזנב של עכבר אחד בין האגודל והאצבע המורה, ולאחר מכן להרים את העכבר על ידי הזנב. העכבר יכול להיות מוחזק על ידי הזנב ללא תמיכה של הגוף עד שתיים עד שלוש שניות.מניחים את העכבר בכלוב הרבייה המוכן, ואז סוגרים את הכלוב לאחר שהבטיחו שלעכברים הזכריים והנקבות יהיה מזון, מים וחומר קינון. בשיטה שהוצגה נחקרו שני מודלים שונים של עכברים מהו מהודרים. פתיחה וגינאלית והפרדה טרום-לידתית התרחשו באותו גיל ומשקל הן בעכברים ההטרוזיגים והן בעכברי הבקרה.לעומת זאת, פתיחה וגינאלית והפרדה פרפוטית התעכבו באופן משמעותי בנוקאאוט מותנה נקבות וזכרים, וקושרו למשקל גוף מוגבר. בגיל 4.5 שבועות, לפקדים הנשיים ולעכברי הנוקאאוט המותנים היה משקל גוף דומה, בעוד שהזכרים המותנים היו מעט כבדים יותר מהפקדים. הדבר מצביע על כך שהעיכוב בפתיחת הנרתיק וההפרדה הקדמה של עכברי הנוקאאוט המותנים לא היו קשורים לעיכוב בעלייה במשקל.לאחר סיום תחילת גיל ההתבגרות, מחקר הפוריות החל בגיל 10 עד 16 שבועות. עכברי הטרוזיגוט זכר ונקבה היו תת-פוריים. נקבות הטרוזיגוטה יצרו פחות פסולת במחקר בן שלושת החודשים, ועכברי הטרוזיגוט זכר ונקבה יצרו מלטה קטנה יותר.כדי להמחיש את החשיבות של אישור התפרצות גיל ההתבגרות לפני הקמת בדיקת פוריות, יכולת הרבייה הוערכה בעכברי נוקאאוט מותנים. במהלך מחקר הפוריות בן 70 הימים, לא זכרי נוקאאוט מותנים ולא נקבות יצרו פסולת. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לטפל בעכברים בזהירות ולהישאר רגועים תוך התקרבות וטיפול בבעלי החיים.בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו מדידת רמות הורמון המין במחזור יכול להתבצע כדי לענות על שאלות נוספות, כמו אם פוריות או תת פוריות אחרת נגרמה על ידי טסטוסטרון חריג, אסטרוגן, הורמון מגרה זקיק, ורמות הורמון מזערי. אל תשכח כי עבודה עם עכברים יכול להיות מסוכן בשל הסיכון של ננשך ופיתוח של אלרגיות. כדי להפחית את החשיפה, אמצעי זהירות כגון לבישת כפפות ומעיל מעבדה, וטיפול זהיר בעכברים, תמיד יש לנקוט בעת ביצוע הליך זה.

determination-reproductive-competence-confirming-pubertal-onset

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן, אנו מתארים כיצד לזהות את השלב של הרבייה העכברית (proestrus, ייחום, metestrus, או diestrus) על ידי אוסף פשוט, לא פולשנית והערכת ציטולוגיה של דגימות למרוח בנרתיק. בנוסף, אנו מתארים כיצד ציטולוגית נרתיק משקפת רמות הורמונים במחזור שעשו את המעבר דרך מחזור הרבייה העכברי.

ביצוע שטיפת נרתיק, כתמים ויולטו קריסטל, והערכת ציטולוגית נרתיק לאחסון זמני מחזור הייחום חולל זיהוי עכבר

ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

אוסף של שלאחר ההזדווגות זרע באיברי הרבייה הנקביים, מדידה של זרע ניזול בעכברים

אנו מתארים את התפתחות מודל העכבר PCOS דמוי רזה עם גלולה דיהידרוטסטוסטרון ללמוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

התכווצויות הרחם חשובים לרווחתם של הנקבות. עם זאת, באופן פתולוגי הגדילה הפתולוגית עלולה לגרום לדיסנוריאה, במיוחד לנשים צעירות. כאן, אנו מתארים הכנה vivo ex פשוטה המאפשרת הערכה מהירה של היעילות של מרפה שרירים חלקה שניתן להשתמש בהם לטיפול בדינוריאה.

שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

מאמר זה מתאר כיצד לבצע בדיקות התנהגות מינית בעכברים זכרים.

הערכה של התנהגות מינית של עכברים זכרים

בפרוטוקול זה, אנו מתארים הליכים באיכות ובכמת לנתח פנוטיפים התפתחותיים בעכברים הקשורים למומים מולדים לב.

ניתוח של פגמים לב מולדים בעוברי עכבר באמצעות שיטות היסטולוגית איכותית וכמותית

מחקר זה מפרט את הגורמים המכריעים שיש לקחת בחשבון בתכנון ניסיוני המערב חולדות נקבות. במובן רחב יותר, נתונים אלה משמשים להפחתת הסטיגמה ומסייעים בפיתוח כלי אבחון והתערבות כוללניים יותר.

ניטור מחזור אסטרוס מכרסמים תוך שימוש בשטיפה נרתיקית: אין דבר כזה מחזור רגיל

שיטת מניפולציית צוואר הרחם המוצגת יכולה לגרום לפסאודו-הריון בעכברים ללא צורך בגידול נקבות עם זכרים שעברו כריתת כלי דם. השראת פסאודו-הריון נדרשת להצלחת החזרת עוברים לא כירורגית והזרעה מלאכותית לא ניתוחית, שניהם מוצגים גם.

גרימת פסאודו-הריון בעכברות נקבות ללא צורך בזכרים שעברו כריתת כלי דם לפני החזרת עוברים לא ניתוחיים או הזרעה מלאכותית

כאן, אנו מציגים שיטה לביצוע הזרקת זרע עגולה (ROSI) בעכברים, טכניקה עם יישומים קליניים מבטיחים ותועלת לחקר המנגנונים העומדים בבסיס התפתחות עוברית.

הזרקת זרע עגולה לעכבר

עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.

איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות

למדו שיטה לא פולשנית לקביעת תחילת המתבגר בעכברים וחולדות באמצעות הפרדת העורלה ופתיחת הנרתיק. שיטה זו מאפשרת הערכת כשירות רבייה ומחקרי פוריות במודלים גנטיים שונים.

קביעת כשירות הרבייה על-ידי המאשר תחילת המתבגר וביצוע וזמינותו של פוריות ב עכברים וחולדות

גלה סרטונים נוספים