Name: פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 49 s
Description: חקור פרוטוקול קליני לייצור שבר סטרומלי וסקולרי מרקמת שומן לטיפול בדלקת מפרקים ניוונית בברך. שיטה זו מאפשרת התחדשות רקמת סחוס ושיפור תפקודי הברך בחולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחבר מודה תמיכה מן הצוות של מרפאה Mipro, עיצוב איור מאת Lee Jaepil/דוד. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי מחקר מ ביו & תוכנית פיתוח טכנולוגיה רפואית של ה-NRF במימון של MSIT (מספר ה-NRF-2017M3A9E4078014); את נבחרת מחקר קרן של קוריאה (NRF) ממומן על ידי משרד המדע ICT (במדבר ה-NRF-2017R1A2B4002315 של ה-NRF-2016R1C1B2010308).

אישור והסכמה לדווח בעקבות הדו חות היו ויצטרף ועדת דירקטוריון סקירה מוסדיים האוניברסיטה Myongji (MJUIRB). יתר על כן, פרוטוקול קליני זה היה בהתאם להנחיות הצהרת הלסינקי ורגולציה KFDA. לקבלת מידע אודות הליכי, מידיעה ההסכמות התקבלו מן המטופלים.
1. שאיבת שומן
הערה: בצע עם סטרילי טכניקה.
<ol><li>השתמש לקריטריוני ההכללה הבאה: MRI (1), עדות שלב 3 OA; (2) זכר או נקבה; (3) מעל גיל 18; (4) מספיק רקמת שומן (100-110 גר') עבור שאיבת שומן; (5) נכונות להמשיך עם התערבות כירורגית; (6) כשל של ניהול שמרנית; (7) כאב השבתת מתמשך.</li>
	<li>השתמש הקריטריונים הדרה הבאים: (1) מחלות דלקתיות או רקמת חיבור פעיל חשב להשפיע על מצב הכאב (קרי,זאבת, דלקת מפרקים שגרונית, פיברומיאלגיה); (2) פעיל ההפרעה האנדוקרינית העלולים להשפיע מצב הכאב (קרי, בלוטת התריס, סוכרת); (3) פעיל הפרעה נוירולוגית העלולים להשפיע מצב הכאב (קרי, נוירופתיה, טרשת נפוצה); (4) מחלת ריאות פעיל המחייב שימוש תרופות; (5) אין היסטוריה של זריקות סטרואידים משותף כבר 3 חודשים.</li>
	<li>להכניס את החולה לחדר הניתוח עם ברדס A class הביולוגי ומניחים לו (או לה) במצב פרקדן.</li>
	<li>לנקות את אזור הבטן של המטופל עם betadine 5% (povidone-יוד), לעטוף את החולה בטכניקה סטרילי, לחשוף את האזור נקי של הבטן עבור שאיבת שומן.</li>
	<li>כ 5 ס infero-רוחבית מ הטבור, עזים ומתנגד שני אתרים (אחד בצד השמאל ואת השני מצד ימין הטבור) של החתך to-להיות-עשה שימוש 2 מ של לידוקאין 2% ללא אפינפרין עם מחט מזרק 5-mL (מד 25, 1½ אינץ) על ידי הזרקת כל אתר ברמה באפידרמיס.</li>
	<li>עזים ומתנגד האתר של חתך to-להיות-שנעשה באמצעות 5 מ של פתרון בפוליצר (500 מ ל מ ל נורמלי מלוחים, 40, של לידוקאין 2%, 20 מ של 0.5% נמשך, 0.5 מ של אפינפרין 1:1000) במזרק 10-mL עם מחט (25 מד, 1½ אינץ ').</li>
	<li>לעשות 2 חתכים של 0.5 ס מ כ 5 ס מ מתחת הטבור רוחבית על ידי התכווצות העור כדי להעלות את העומק של רמת תת עורית.</li>
	<li>באמצעות להב מס 11, לתקוע את העור מוגבה לחדור דרך לשלב תת עורית אך לא לחדור דרך דופן הבטן.</li>
	<li>באמצעות 20 ס מ 16-מד בצינורית, עזים ומתנגד רמת תת עורית של כל החלק התחתון של הבטן, אשר to-להיות-liposuctioned, עם 700 עד 800 מ של הפתרון בפוליצר.</li>
	<li>לאחר גימור חדירה של הבטן התחתונה כל עם הפתרון בפוליצר, להכין מנגנון שאיבת שומן על-ידי חיבור של בצינורית 3.0 מ מ מחובר מזרק של 60 מ ל (או של 30 מ ל) עבור שאיבת שומן ידני או של בצינורית שתוכנן במיוחד 3.0 מ מ מחובר צנטריפוגה קיט, מזרק סגור-מערכת לצורך שמירה על העקרות, מחובר למכונה ואקום עבור שאיבת שומן בסיוע ואקום.</li>
	<li>לבצע שאיבת שומן כדי להשיג 100-110 גרם של רקמת שומן לא כולל פתרון בפוליצר. בעת ביצוע שאיבת שומן, רקמת שומן ניתן להשיג יחד עם הפתרון בפוליצר, אשר צריכים להיות מופרדים ו הוסר.</li>
	<li>כדי להפריד את הפתרון בפוליצר, תחילה על ידי כוח המשיכה, להעביר את רקמת שומן בערכה צנטריפוגה מזרק 60 מ ל ולמקם את המזרק למטה (דהיינו, שהחלק של המזרק נמצאת בתחתית). מאת מחכה 5-6 דקות, יופרדו את רקמת שומן ונוזלים בפוליצר. הסר את הנוזלים בחלק התחתון של המזרק על-ידי לחיצה על החלק העליון של הבוכנה מזרק.</li>
	<li>בצע את השלבים לעיל 1.9-1.11 עד סך של 100-110 גרם של רקמת שומן (lipoaspirates) לכל ברך שנצבר.</li>
</ol>2. הכנת התערובת עולה/ECM עם מערכת סגורה סטרילי
<ol><li>לאחר הפרדת הפתרון בפוליצר על-ידי כוח הכבידה ולאסוף 50-55 גר' lipoaspirates לכל כל ערכה צנטריפוגה 60 מ ל, מערכת סגורה סטרילי, למקם את ערכות צנטריפוגה 2 לתוך צנטריפוגה מיכל דלי ספין-x 1600 g עבור 5 דקות, עיבוי lipoaspirates, הפרדת הנוזלים מן ובינות לרקמה. זה תהליך נוסף וידחוס, lipoaspirates יכולות להפיק שמן שומני במקרים מסוימים.</li>
	<li>והיזהר לא לנער, להסיר את המכסה הבטיחותי ואת התקע בחלק התחתון של ערכת צנטריפוגה.</li>
	<li>הסר את הנוזלים התחתון על ידי לאט לוחץ על ראש הבוכנה של ערכת צנטריפוגה.</li>
	<li>על המזרק נפרדת 60 מ ל, להמיס 10 מ ג של collagenase (5 מ"ג של collagenase ספציפיות עבור רקמת חיבור24 ) ו- 5 מ"ג של collagenase מסוימת של רקמת שומן25, 50 מ של תמיסת מלח.</li>
	<li>מערבבים כ 25-30 מ של lipoaspirate מרוכז עם collagenase המומס (5 מ"ג של collagenase ספציפיות עבור רקמת חיבור) ו- 5 מ"ג של collagenase ספציפיות עבור רקמת שומן ביחס של 1:1 (v: v) על-ידי חיבור המזרק 60 מ ל ערכת צנטריפוגה באמצעות מחבר מיוחדים.</li>
	<li>ביסודיות מערבבים את lipoaspirate מרוכז, את collagenase על ידי דחיפת התכנים בין המזרק 60 מ ל ערכות צנטריפוגה באמצעות מוט או סוחר.</li>
	<li>להעביר את התערובת את lipoaspirate, את collagenase חזרה מזרקים 60 מ.</li>
	<li>התחבר כל מזרק 60 מ ל המכיל את התערובת עם מהמגן רקמות אשר מכיל את הלהבים.</li>
	<li>להתחבר עם מזרק ריק 60 מ ל הקצה השני של מהמגן.</li>
	<li>לדחוף את התערובת אל המזרק 60 מ ל אחרים דרך מהמגן 4-6 פעמים, וכתוצאה מכך הביתור ועל הא של lipoaspirate.</li>
	<li>העבר את lipoaspirate homogenized ואת התערובת collagenase לחזור 60 מ ל ערכות צנטריפוגה דרך מחבר מיוחדים</li>
	<li>מקם את ערכות צנטריפוגה במיכל שימוקם בתוך אינקובטור כי כבר מחומם מראש ב- 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>דגירה צנטריפוגה שתי ערכות עם התערובת homogenized ב 37 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות תוך כדי סיבוב ב 45 rpm.</li>
	<li>לאחר 40 דקות של דגירה, להסיר את המכולה החממה בצורה סטרילית. לאחר מכן, להסיר את ערכות צנטריפוגה, מקם אותם בתוך מכונת צנטריפוגה.</li>
	<li>Centrifuge את תערובות ב x 800 גרם במשך 5 דקות להפריד את רקמת שומן-derived SVF.</li>
	<li>לאחר לצנטריפוגה, להסיר את תגובת שיקוע (אשר כולל collagenase, מתעכל רקמת שומן) של כל ערכות צנטריפוגה על-ידי הסרת הכיפה מזרק על ראש הבוכנה והצבת מזרק 30 מ על הבוכנה פתיחה באמצעות מזרק נעל חיבור.</li>
	<li>לאט לאט לחץ כלפי מטה החלק חבית של המזרק 30 מ עבור תגובת שיקוע למלא לתוך המזרק 30 מ.</li>
	<li>לחץ על הקנה מזרק 30 מ ל כל הדרך mL 3-4 האחרון של החלק התחתון של ערכת צנטריפוגה, להשאיר רק את האחרון 3-4 מ של רקמת שומן-derived SVF. תגובת שיקוע נמחקת.</li>
	<li>הסר את המזרק 30 מ ל מהחלק העליון של הבוכנה ולמלא את המזרק עם דקסטרוז 5% בתמיסת הרטמן (D5LR).</li>
	<li>על-ידי הצמדת את המזרק 30 מ ל מלא D5LR על ראש הבוכנה פתיחה, למלא את ערכות צנטריפוגה, המכילים 3-4 מיליליטר SVF נגזר רקמת שומן, עם D5LR עד 55 מ ל.</li>
	<li>הסר את המזרק 30 מ ל, קאפ על הבוכנה, centrifuge ערכות צנטריפוגה שוב ב 300 x גרם במשך 4 דקות.</li>
	<li>חזור על הצעדים 2.17-2.21 סך של 4 כביסות. Collagenase בשימוש הוא xenogenic. לכן, רוב collagenase יוסר על ידי 4 כביסות. עם זאת, לאישור ה-FDA, כוונון של הפרוטוקול ייתכן שיהיה צורך להסיר לחלוטין את שאריות collagenase באמצעי האחסון הסופי, למרות הכמות הנוכחית של משקעים collagenase עשוי להיות מספיק זניח של חולים שאין להם יותר קליני תופעות לוואי.</li>
	<li>לאחר צנטריפוגה 4th , על מנת לקבל את SVF הסופי להזרקה, להסיר את כובע הבטיחות ואת התקע ליד הפתח התחתון של ערכת צנטריפוגה, מבלי לרעוד או לכבות את הקיט צנטריפוגה.</li>
	<li>לצרף מזרק 20 מ"ל בתחתית ערכת צנטריפוגה לפתוח באמצעות מחבר שתוכנן במיוחד.</li>
	<li>למשוך את הבוכנה של המזרק מספר פעמים הלוך ושוב לזעזע את התאים התיישבו על החלק התחתון של ערכת צנטריפוגה.</li>
	<li>להסיר את האחסון הכולל הרצוי של SVF המכיל גם את השיקופיים וגם את ה-ECM יחד עם תאים ורקמות אחרות (בדרך כלל כ 3-4 מ"ל של כל ערכה צנטריפוגה לזריקות משותפת הברך).</li>
</ol>3. PRP הכנה עם סטרילי טכניקה
<ol><li>בעת הכנת את השיקופיים ואת ה-ECM, צייר 30 מ של דם עצמיים עם 2.5 מ של פתרון דקסטרוז ציטראט קרישה.</li>
	<li>להעביר את הדם נמשך ערכות צנטריפוגה 60 מ.</li>
	<li>Centrifuge הדם מצוירות ב x 730 גרם במשך 5 דקות ולהסיר את תגובת שיקוע לתוך ערכה חדשה של צנטריפוגה 60 מ. Centrifuge את תגובת שיקוע ב x 1300 גרם במשך 4 דקות, והתוצאה היא 3-4 מיליליטר PRP.</li>
	<li>ממש לפני הזריקה, להוסיף 3% (w/v) סידן כלורי ביחס של 10:2 (PRP: סידן כלורי, v: v) PRP כדי להפעיל אותו.</li>
	<li>להוסיף 0.5% (w/v) HA, בדומה לפיגום, PRP מופעל עם סידן כלורי. אלה השיקופיים עם ה-ECM, יחד עם PRP, מופעל על ידי סידן כלורי, HA מסמלת את התערובת עולה/ECM.</li>
</ol>4. טיפול המבוסס על תערובת ASC/ECM
<ol><li>לנקות את הברך של המטופל עם betadine 5%, לעטוף את זה בצורה סטרילית.</li>
	<li>ימשש הקדמי של הברך עבור מרחב משותף בין עצמות הטיביאלי, הירך.</li>
	<li>עזים ומתנגד ההזרקה שטחי עם לידוקאין מדולל (1 מ"ל של לידוקאין 1% מדולל עם 4 מ"ל של תמיסת מלח) מן העור רק מחוץ הקפסולה משותפת.</li>
	<li>עזים ומתנגד בתוך הקפסולה משותפת עם ropivacaine מדולל (1 מ"ל 0.75% ropivacaine מדולל עם 3 מ"ל של תמיסת מלח).</li>
	<li>לערבב 2 מ"ל של HA עד mL 6-8 של SVF הכלול מזרק 20 מ"ל המחבר מזרק-כדי-מזרק.</li>
	<li>באמצעות מחבר מזרק-כדי-מזרק, להוסיף 0.4 מ של סידן כלורי 3-4 מיליליטר עצמיים PRP זה הוכן כבר ולהיות מוכן בתוך מזרק 5-mL.</li>
	<li>משלבים 3.5-4.5 מ ל PRP/סידן כלורי מזרק 5 מ ל 8-10 מ"ל של HA/SVF תערובת של מזרק בפטרת באמצעות מזרק-כדי-מזרק מחבר.</li>
	<li>מיד להזריק את התערובת (בערך 12-15 מ"ל) לאט לאט לתוך המפרק tibio-הירך הקדמי של הברכיים באמצעות מחט בקוטר 18 מ מ 38 עם או ללא הדרכה אולטרסאונד.</li>
	<li>אחרי הזריקה, חבוש ההזרקה עם לחץ על ידי קיפול גאזה כותנה 4 x 4 4 פעמים הצבת קלטות על הגזה 4 x 4 מקופל.</li>
	<li>להנחות את המטופל להישאר עדיין במשך 60 דקות לאפשר את התא מצורף.</li>
	<li>להנחות את המטופל כדי להגביל פעילות מינימלית של 1 שבוע אחרי השחרור מהמרפאה.</li>
	<li>חזור אל הקליניקה שלוש זריקות נוספים של PRP מופעל על ידי סידן כלורי מעל 3 שבועות.</li>
</ol>5. שלאחר הטיפול לעקוב
<ol><li>להעריך החולה בשבוע של 2, 4 ו- 16 (18 או 22) כאב שיפור במונחים של סולם חזותי אנלוגי (VAS) ושיפור תפקוד מבחינת פיזיותרפיה פרמטרים. לקבוע מדד דירוג פונקציונלי (ו'), ווס, טווח התנועה (ROM) כמו שתואר לעיל26,27.</li>
	<li>בצע את החולה על ידי שלאחר הטיפול MRI 3 חודשים לאחר הטיפול.</li>
</ol>

<ol><li>Arnoczky, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+a+meniscus.+Biologic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Orthopaedics+and+Related+Research%22%5BJournal%5D)">Building a meniscus. Biologic considerations.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. (367 Suppl), S244-S253 (1999).</li>
<li>Barry, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+therapy+in+joint+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Novartis+Foundation+Symposium%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell therapy in joint disease.</a> Novartis Foundation Symposium. 249, 86-241 (2003).</li>
<li>Usuelli, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+in+orthopaedic+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22British+Medical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells in orthopaedic pathologies.</a> British Medical Bulletin. 124 (1), 31-54 (2017).</li>
<li>Zhang, H. N., Li, L., Leng, P., Wang, Y. Z., Lv, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uninduced+adipose-derived+stem+cells+repair+the+defect+of+full-thickness+hyaline+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Traumatology%22%5BJournal%5D)">Uninduced adipose-derived stem cells repair the defect of full-thickness hyaline cartilage.</a> Chinese Journal of Traumatology. 12 (2), 92-97 (2009).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-228 (2001).</li>
<li>Baer, P. C., Geiger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+mesenchymal+stromal%2Fstem+cells%3A+tissue+localization%2C+characterization%2C+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity.</a> Stem Cells International. 2012, 812693(2012).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cell%3A+a+better+stem+cell+than+BMSC%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cell: a better stem cell than BMSC.</a> Cell Biochemistry and Function. 26 (6), 664-675 (2008).</li>
<li>Bellei, B., Migliano, E., Tedesco, M., Caputo, S., Picardo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+non-enzymatic+methods+for+harvesting+adipose-derived+stem+from+lipoaspirate%3A+technical+considerations+and+clinical+implications+for+regenerative+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Maximizing non-enzymatic methods for harvesting adipose-derived stem from lipoaspirate: technical considerations and clinical implications for regenerative surgery.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10015(2017).</li>
<li>Pak, J., Lee, J. H., Park, K. S., Jeong, B. C., Lee, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+Cartilage+in+Human+Knee+Osteoarthritis+with+Autologous+Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+and+Autologous+Extracellular+Matrix%5BTitle%5D)+AND+%22BioResearch+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Regeneration of Cartilage in Human Knee Osteoarthritis with Autologous Adipose Tissue-Derived Stem Cells and Autologous Extracellular Matrix.</a> BioResearch Open Access. 5 (1), 192-200 (2016).</li>
<li>Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+Adipose-derived+Stromal+Vascular+Fraction+%28AD-SVF%29+Cell+Biology+and+Use+on+the+Basis+of+Cellular%2C+Chemical%2C+Structural+and+Paracrine+Components%3A+A+Concise+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Prolotherapy%22%5BJournal%5D)">Understanding Adipose-derived Stromal Vascular Fraction (AD-SVF) Cell Biology and Use on the Basis of Cellular, Chemical, Structural and Paracrine Components: A Concise Review.</a> Journal of Prolotherapy. 4, e855-e869 (2012).</li>
<li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).</li>
<li>Korean Food and Drug Administration (KFDA). Cell therapy: Rules and Regulations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22KFDA%22">KFDA</a>. , (2009).</li>
<li>Pak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+human+bones+in+hip+osteonecrosis+and+human+cartilage+in+knee+osteoarthritis+with+autologous+adipose-tissue-derived+stem+cells%3A+a+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Case+Reports%22%5BJournal%5D)">Regeneration of human bones in hip osteonecrosis and human cartilage in knee osteoarthritis with autologous adipose-tissue-derived stem cells: a case series.</a> Journal of Medical Case Reports. 5, 296(2011).</li>
<li>Pak, J., Chang, J. J., Lee, J. H., Lee, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+reporting+on+implantation+of+autologous+adipose+tissue-derived+stem+cells+with+platelet-rich+plasma+into+human+articular+joints%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Musculoskeletal+Disorders%22%5BJournal%5D)">Safety reporting on implantation of autologous adipose tissue-derived stem cells with platelet-rich plasma into human articular joints.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 14, 337(2013).</li>
<li>Pak, J., Lee, J. H., Kartolo, W. A., Lee, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+Regeneration+in+Human+with+Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells%3A+Current+Status+in+Clinical+Implications%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Cartilage Regeneration in Human with Adipose Tissue-Derived Stem Cells: Current Status in Clinical Implications.</a> BioMed Research International. 2016, 4702674(2016).</li>
<li>Pak, J., Lee, J. H., Lee, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+biological+approach+to+treat+chondromalacia+patellae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel biological approach to treat chondromalacia patellae.</a> PLoS One. 8 (5), e64569(2013).</li>
<li>Pak, J., Lee, J. H., Lee, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+repair+of+damaged+meniscus+with+autologous+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Regenerative repair of damaged meniscus with autologous adipose tissue-derived stem cells.</a> BioMed Research International. 2014, 436029(2014).</li>
<li>Aust, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yield+of+human+adipose-derived+adult+stem+cells+from+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Yield of human adipose-derived adult stem cells from liposuction aspirates.</a> Cytotherapy. 6 (1), 7-14 (2004).</li>
<li>De Ugarte, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+multi-lineage+cells+from+human+adipose+tissue+and+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Comparison of multi-lineage cells from human adipose tissue and bone marrow.</a> Cells Tissues Organs. 174 (3), 101-109 (2003).</li>
<li>Guilak, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+analysis+of+the+differentiation+potential+of+human+adipose-derived+adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Clonal analysis of the differentiation potential of human adipose-derived adult stem cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 206 (1), 229-237 (2006).</li>
<li>Mitchell, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotype+of+human+adipose-derived+cells%3A+temporal+changes+in+stromal-associated+and+stem+cell-associated+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers.</a> Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Liberase TL information available from Sigma Millipore online. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/05401020001?lang=en&region=US">https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/05401020001?lang=en&region=US</a> (2018).</li>
<li>Liberase TM information available from Sigma Millipore online. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/Libtmro?lang=en&region=US">https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/Libtmro?lang=en&region=US</a> (2018).</li>
<li>Childs, J. D., Piva, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychometric+properties+of+the+functional+rating+index+in+patients+with+low+back+pain%5BTitle%5D)+AND+%22European+Spine+Journal%22%5BJournal%5D)">Psychometric properties of the functional rating index in patients with low back pain.</a> European Spine Journal. 14 (10), 1008-1012 (2005).</li>
<li>Price, D. D., McGrath, P. A., Rafii, A., Buckingham, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+validation+of+visual+analogue+scales+as+ratio+scale+measures+for+chronic+and+experimental+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The validation of visual analogue scales as ratio scale measures for chronic and experimental pain.</a> Pain. 17 (1), 45-56 (1983).</li>
<li>Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+highly+defined+proteases+for+the+isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells.</a> Regenerative Medicine. 3 (5), 705-715 (2008).</li>
<li>D'Ambrosi, R., Indino, C., Maccario, C., Manzi, L., Usuelli, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+Microfractured+and+Purified+Adipose+Tissue+for+Arthroscopic+Management+of+Osteochondral+Lesions+of+the+Talus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Autologous Microfractured and Purified Adipose Tissue for Arthroscopic Management of Osteochondral Lesions of the Talus.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), e56395(2018).</li>
<li>Packer, J. D., Chang, W. T., Dragoo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+vibrational+energy+to+isolate+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+Reconstructive+Surgery-Global+Open%22%5BJournal%5D)">The use of vibrational energy to isolate adipose-derived stem cells.</a> Plastic Reconstructive Surgery-Global Open. 6 (1), e1620(2018).</li>
<li>Hanke, C. W., Bernstein, G., Bullock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+tumescent+liposuction+in+15%2C336+patients.+National+survey+results%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatologic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Safety of tumescent liposuction in 15,336 patients. National survey results.</a> Dermatologic Surgery. 21 (5), 459-462 (1995).</li>
<li>Illouz, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complications of liposuction.</a> Clinics in Plastic Surgery. 33 (1), 129-163 (2006).</li>
<li>Dixit, V. V., Wagh, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unfavourable+outcomes+of+liposuction+and+their+management%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Unfavourable outcomes of liposuction and their management.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 46 (2), 377-392 (2013).</li>
<li>Lehnhardt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+and+lethal+complications+of+liposuction%3A+a+review+of+72+cases+in+Germany+between+1998+and+2002%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Major and lethal complications of liposuction: a review of 72 cases in Germany between 1998 and 2002.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 121 (6), 396e-403e (2008).</li>
<li>Iyer, S. S., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+mesenchymal+stem+cells%3A+novel+concept+for+future+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Biological+Therapy%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells: novel concept for future therapies.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 8 (5), 569-581 (2008).</li>
<li>Zhang, J., Middleton, K. K., Fu, F. H., Im, H. J., Wang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HGF+mediates+the+anti-inflammatory+effects+of+PRP+on+injured+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HGF mediates the anti-inflammatory effects of PRP on injured tendons.</a> PLoS One. 8 (6), e67303(2013).</li>
<li>Li, N. Y., Yuan, R. T., Chen, T., Chen, L. Q., Jin, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+platelet-rich+plasma+and+latissimus+dorsi+muscle+flap+on+osteogenesis+and+vascularization+of+tissue-engineered+bone+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Effect of platelet-rich plasma and latissimus dorsi muscle flap on osteogenesis and vascularization of tissue-engineered bone in dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 67 (9), 1850-1858 (2009).</li>
<li>Parsons, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+effect+of+platelet+rich-plasma+on+the+fracture+healing+process%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+bone+and+joint+surgery.+British+volume%22%5BJournal%5D)">The biological effect of platelet rich-plasma on the fracture healing process.</a> The Journal of bone and joint surgery. British volume. 91-B, 293(2009).</li>
<li>Wu, W., Chen, F., Liu, Y., Ma, Q., Mao, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+injectable+tissue-engineered+cartilage+by+using+platelet-rich+plasma%3A+experimental+study+in+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Autologous injectable tissue-engineered cartilage by using platelet-rich plasma: experimental study in a rabbit model.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 65 (10), 1951-1957 (2007).</li>
<li>Cooper, T. W., Eisen, A. Z., Stricklin, G. P., Welgus, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+collagenase+inhibitor%3A+characterization+and+subcellular+localization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived collagenase inhibitor: characterization and subcellular localization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (9), 2779-2783 (1985).</li>
<li>Uzuki, M., Sawai, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+the+affinity+of+sodium+hyaluronate+of+various+molecular+weights+for+degenerated+cartilage%3A+a+histochemical+study+using+hyaluronic+acid+binding+protein%5BTitle%5D)+AND+%22International+Congress+Series%22%5BJournal%5D)">A comparison of the affinity of sodium hyaluronate of various molecular weights for degenerated cartilage: a histochemical study using hyaluronic acid binding protein.</a> International Congress Series. 1223, 279-284 (2001).</li>
<li>Pagano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+morphometric+description+of+adipose+tissue+during+weight+changes%3A+a+quantitative+tool+for+assessment+of+tissue+texture%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular and morphometric description of adipose tissue during weight changes: a quantitative tool for assessment of tissue texture.</a> International Journal of Molecular Medicine. 14 (5), 897-902 (2004).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בשנת 2001, צוק ואח. תאי גזע בודד של רקמת שומן על-ידי פירוק קולגן המטריצה עם collagenase6. לאחר מכן, הקבוצה העלתה כי אלה בתאי גזע מבודד את רקמת שומן יכול להפוך הסחוס ורקמות אחרות של והמזודרם במקורם, להוכיח כי אלה בתאי גזע היו mesenchymal במקורם.
באופן דומה, ההליך שהוצגו במאמר זה הוא פרוטוקול ששונה כדי להחיל את השיטה דומה בחולים אנושיים. השינוי העיקרי של הפרוטוקול הוא שילוב של מערכת סגורה מזרקים תוך קבלת ועיבוד של lipoaspirates על מנת לצמצם את מגע האוויר תוך שמיר...

גזע mesenchymal (MSCs) ידועים יש את היכולת להתחדש הסחוס1,2,3,4,5,6. הם יכולים לקבל בקלות ממקורות שונים: מח עצם, דם טבורי, רקמת שומן בקרב רבים אחרים. בין מקורות אלה, רקמת שומן הוא המקור היחיד שבו ניתן להשיג מספר מספיק של MSCs ללא כל הרחבה תרבות להתחדש הסחוס הגדרות קליניים7,8. מח עצם אוטולוגי סטרומה השבר בכלי הדם (SVF) ניתן להשיג בקלות גם כן. אולם, מספר תאי גזע הכיל במח המורחב-תרבות הוא נמוך מאוד7,8. דם טבורי עשוי להכיל מספר מספיק של MSCs. עם זאת, דם טבורי אינה מקור זמין SVF עצמיים.
שיטות רבות של רקמת שומן עיבוד כדי להשיג SVF זמינים עבור יישומים קליניים. בין אלה, השיטה של קבלת MSCs של רקמת שומן באמצעות collagenase, שפותחה ומאושר על-ידי צוק. et al. 5 , 6, מקובל מאוד. שיטה זו של שימוש collagenase שונתה ליישומים קליניים באורטופדיה. כדי להחיל הגדרות קליני, המערכת להיות מערכת סגורה כדי לשמור על העקרות תוך שמירה על הנוחות. שינוי מסוים אחד שהוצגו במאמר זה כרוך המגון lipoaspirates. Lipoaspirates בגודל קטן מתעכלים מהר יותר גדולים כי הם וכתוצאה מכך התפלגות לא אחידה של רקמת שומן יחסית. יתר על כן, אלה lipoaspirates בגודל גדול יותר עשויה לייצר סיבי הרקמות זה יכול סותמים את מזרקים ומחטים בעת ביצוע משותף זריקות9,10. על מנת למנוע בעיות אלה, lipoaspirates עשוי להיות הומוגני על ידי חיתוך לקמץ את lipoaspirates לפני הדגירה עם collagenase. SVF וכתוצאה מכך נגזר רקמת שומן עשויה להכיל יותר אחיד מטריצה חוץ-תאית (ECM) בהשוואה lipoaspirates שאינם הומוגני11. ה-ECM רעוע הכלול את SVF יפעלו כמו לגרדום12.
בשנת 2009, כבר מותר SVF נגזר רקמת שומן עצמיים על ידי המזון קוריאנית סמים המינהל (KFDA) כאשר מעובד בתוך מתקן רפואי עם עיבוד מינימלי על ידי רופא13. לאחר מכן, יש כבר מנוצל SVF נגזר רקמת שומן עצמיים כסוכן פוטנציאל לשיפור הפונקציות הברך בחולי דלקת מפרקים ניוונית (OA) על ידי פוטנציאל התחדשות רקמות הסחוס כמו10,14,15 , 16 , 17 , 18 . 
בשנת 2011, פאק הראה לראשונה כי נגזר רקמת שומן בתאי גזע (השיקופיים) הכלול SVF רקמת שומן-derived יכול לשפר את הברך פונקציות פוטנציאל התחדשות רקמות הסחוס כמו בחולי OA אנושי כאשר הזריקו טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) 14. בנוסף, פאק. et al. דיווחו על נתוני בטיחות בחולים 91 מעורבים 2013. את שיעור היעילות הממוצע דיווח נתוני בטיחות זה היה 67%15. כתוצאה מכך, מחקרים נוספים על ידי פאק. et al. הראה הברך משופרת פונקציות שעשויות להיות עקב התחדשות רקמות הסחוס כמו בחולים עם מניסקוס דמעה לבין chondromalacia patellae10,16,17 ,18. מבוסס על מאמרים דיווח, זה ידוע כי מספר תאי גזע הכלול 100 גרם של רקמת שומן מעובד על-ידי הפרוטוקול שהוצג במאמר זה עשויים לנוע בין 1,000,000-40,000,000 בהתאם המטופלים מאפיינים8, 19 , 20 , 21 , 22 , 23.
כאן, אנו מציגים את פרוטוקול קליני של OA בברך האדם באמצעות SVF נגזר רקמת שומן עצמיים עם HA, PRP מופעל עם סידן כלורי. הגרסה הראשונה של פרוטוקול קליני זה, הכוללים מערכת סגורה, ידנית כדי לשמור על העקרות, דווח ב- 201114. פרוטוקול זהה אופטימלי, שמירה על עקרות, ודיווח10,2013 ו ריו דה ז'ניירו15. . הנה, פרוטוקול ממוטבת מוצג. סקירה סכמטי של הפרוטוקול מוצג באיור1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58363/58363fig1.jpg"> איור 1: סקירה סכמטי של הפרוטוקול. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58363/58363fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

<table><tbody><tr><td><חזק>חומר</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% בטדין (פובידון-יוד)&nbsp;</td><td>פירסון ושות', בע"מ</td><td></td><td></td>657400260</tr><tr><td>2% לידוקאין&nbsp;</td><td>דאהאן פרמצבטיקה</td><td></td><td></td>670603480</tr><tr><td>תמיסת גידול&nbsp;</td><td>מיונגמון פארם בע"מ</td><td>N01BB01</td><td>התמיסה הורכבה מ-500 מ"ל תמיסת מלח רגילה, 40 מ"ל 2% לידוקאין, 20 מ"ל 0.5% מרקאין ו-0.5 מ"ל אפינפרין 1:1000.</td></tr><tr><td>ציון מחקר Liberase TL ו-TM&nbsp;</td><td>רוש מדע יישומי</td><td>5401020001</td><td></td></tr><tr><td>D5LR</td><td>Dahan Pharm. Co., Ltd.</td><td>645101072</td><td>דקסטרוז 5% בתמיסת רינגר חבית&nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת דקסטרוז ציטראט נוגד קרישה&nbsp;</td><td>פנוואל בע"מ</td><td>NDC:0942-0641</td><td>התמיסה הורכבה מ-0.8% חומצת לימון, 0.22% נתרן ציטראט ו-0.223% דקסטרוז.</td></tr><tr><td>3% (w/v) סידן כלורי&nbsp;</td><td>חברת התרופות צ'ונגוואי</td><td></td><td></td>644902101</tr><tr><td>0.5% (w/v) HA (חומצה היאלורונית)</td> <td>Dongkwang pharm. ושות', בע"מ</td><td></td><td></td>645902030</tr><tr><td>0.25% Ropivacaine</td><td>Huons ושות', בע"מ</td><td>670600150</td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.0 מ"מ צינורית&nbsp;</td><td>WOOJU מכשירים רפואיים ושות'</td><td></td><td></td>ML30200</tr><tr><td>מזרק Luer-Lock 60 מ"ל</td><td>BD (Becton Dickinson)&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>309653 ערכת חבית צנטריפוגה&nbsp;</td><td>CPL ושות', בע"מ</td><td>30-0827044</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר רקמות המכיל להבים</td><td>CPL Co., Ltd.</td><td>30-0827045</td><td></td></tr><tr><td>מערבל חממה מסתובב</td><td>Medikan Co., Ltd</td><td>MS02060092</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Hanil Scientific Inc.</td><td>CE1133</td><td></td></tr><tr><td>הדמיית תהודה מגנטית</td><td>פיליפס מערכות רפואיות בע"מ</td><td>18068</td><td></td></tr><tr><td>מערכת הדמיית אולטרסאונד</td><td>סמסונג מדיסון ושות', בע"מ</td><td>CT-LK-V10-ICM-09.05.2007</td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

דלקת מפרקים ניוונית (OA) הוא אחד של הפרעות מתישה הנפוץ ביותר. לאחרונה, ניסיונות רבים נעשו כדי לשפר את הפונקציות של הברכיים באמצעות צורות שונות של גזע mesenchymal (MSCs). ב קוריאה, תרכיזים מח עצם ו חוט נגזר דם בתאי גזע אושרו על ידי המזון קוריאנית סמים המינהל (KFDA) עבור התחדשות הסחוס. בנוסף, כבר מותר של רקמת שומן-derived סטרומה וסקולרית שבר (SVF) על ידי KFDA לזריקות משותפת בחולים אנושיים. SVF נגזר רקמת שומן עצמיים מכיל מטריצה חוץ-תאית (ECM) בנוסף בתאי גזע mesenchymal. ECM מפריש ציטוקינים שונים, אשר, יחד עם חומצה היאלורונית (HA), טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) מופעל על ידי סידן כלורי, עשוי לסייע MSCs כדי להתחדש הסחוס ולשפר את הברך פונקציות. במאמר זה הצגנו פרוטוקול לשיפור הברך פונקציות על-ידי התחדשות רקמות הסחוס כמו בחולים אנושיים עם OA. התוצאה של הפרוטוקול דווחה לראשונה בשנת 2011 ולאחריו מספר פרסומים נוספים. הפרוטוקול כרוך שאיבת שומן כדי לקבל lipoaspirates עצמיים מעורבבים עם collagenase. תערובת זו lipoaspirates-collagenase ואז לחתוך, הומוגני להסיר גדול סיבי רקמת זה ייתכן סותמים את המחט במהלך ההזרקה. לאחר מכן, התערובת מודגרת להשיג SVF נגזר רקמת שומן. וכתוצאה מכך נגזר רקמת שומן SVF, המכיל גם רקמת שומן-derived MSCs וגם שרידי ECM, מוזרק הברכיים של חולים, בשילוב עם HA ומופעל סידן כלורי PRP. כלולים שלושה מקרים של חולים שטופלו באמצעות פרוטוקול שלנו וכתוצאה מכך שיפור של כאבי ברכיים, נפיחות, טווח התנועה יחד עם המגנטית ראיות רקמת סחוס hyaline דמוי.

שלושה מטופלים (אחד נקבה בת 87 עם שלב 3 OA, אחד זכר בן 68 עם שלב 3 OA, נקבה אחת בת 60 עם שלב 3 OA) ללא כל העבר משמעותי ההיסטוריה הרפואית הציגה למרפאה עם כאב ברכיים מתמיד, נחשק עבור פוטנציאל עצמיים רקמת שומן-derived SVF טיפול. כל החולים שלושה היה הברך שלהם נבדק על ידי מומחה לכירורגיה אורטופדית היו מציעים לי החלפת ברך הכולל (TKR), היו מוכנים לעבור את הניתוח. לפני ההליך, כל החולים שלושה קיבלו מספר זריקות של סטרואידים ו HA ללא שום שיפור ממושך.
<p class="jove_content" fo:keep-together.withi...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר של רקמת שומן-derived סטרומה וסקולרית שבר ויישומו לשיפור הברך פונקציות על-ידי התחדשות רקמות הסחוס כמו בני אדם חולים עם דלקת מפרקים ניוונית.

פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

דלקת מפרקים ניוונית היא אחת ההפרעות המתישות הנפוצות ביותר בקרב האוכלוסייה המבוגרת. כיום, אין תרופה מוגדרת עבור הגורמים הבסיסיים של דלקת מפרקים ניוונית. פרוטוקול קליני זה מתאר הליך חדשני לטיפול מבטיח, זעיר פולשני ואלטרנטיבי בדלקת מפרקים ניוונית בברך האנושית על ידי התחדשות סחוס כמו רקמה.דלקת מפרקים ניוונית היא אחת ההפרעות המתישות הנפוצות ביותר בקרב האוכלוסייה המבוגרת. כיום, אין תרופה מוגדרת עבור הגורמים מדגיש של דלקת מפרקים ניוונית. פרוטוקול קליני זה הוא הליך חדשני לטיפול מבטיח, זעיר פולשני ואלטרנטיבי בדלקת מפרקים ניוונית בברך על ידי התחדשות רקמה דמוית סחוס.הכניסו את המטופל לחדר ניתוח עם ברדס בדרגה A, והכניסו אותו או אותה למצב על-חושי. נקה את אזור הבטן של המטופל עם 5%betadine-povidine יוד לעטוף את המטופל באמצעות טכניקה סטרילית, חשיפת האזור הנקי של הבטן עבור שאיבת שומן. כחמישה סנטימטרים תופת- צדדית מן הטבור, הרדמה שני אתרים, אחד בצד שמאל והשני בצד ימין של הטבור של חתך להתבצע.באמצעות שני מיליליטר של 2% לידוקאין ללא אפינפרין עם מחט 25-מד 1.5 אינץ ' במזרק חמישה מיליליטר על ידי הזרקת כל אתר ברמה האפידרמלית. הרדמה באתר החתך להתבצע באמצעות חמישה מיליליטר של פתרון tumescent ו 10 מזרק מיליליטר ואת המחט 25-מד 1.5 אינץ'. בצע שני חתכים של 0.5 ס"מ כחמישה סנטימטרים מתחת לטבור באופן משני על ידי צביטת העור כדי להעלות את עומק הרמה התת עורית.באמצעות להב מספר 11, לעזור לעור הרים לחדור דרך לרמה תת עורית אבל לא לחדור דרך דופן הבטן. על ידי שימוש 20 ס"מ 60-מד cannula, הרדמה את הרמה התת עורית של כל אזור הבטן התחתונה אשר יש שאיבת שומן עם 700 כדי 800 מיליליטר של פתרון tumescent. לאחר סיום חדירה של הבטן התחתונה כולה עם פתרון tumescent, להכין מנגנון שאיבת שומן על ידי חיבור 3.0 מילימטר cannula מחובר 60 מיליליטר או 30 מזרק מיליליטר עבור שאיבת שומן ידנית או שתוכנן במיוחד 3.0 מילימטר cannula מחובר ערכת צנטריפוגה.מזרק מערכת סגור שפותח על ידי עצמנו ואושר על ידי ה-FDA CDRH לצורך שמירה על סטריליות מחובר למכונת ואקום עבור שאיבת שומן בסיוע ואקום. בצע שאיבת שומן כדי להשיג 100 עד 110 גרם של רקמת שומן למעט פתרון tumescent. בעת ביצוע שאיבת שומן, רקמת שומן יושג יחד עם פתרון tumescent אבל צריך להיות מופרדים והוסרו.כדי להפריד את הפתרון tumescent הראשון על ידי כוח הכבידה, רקמת השומן בערכת צנטריפוגה ניתן להעביר מזרק 60 מיליליטר ולהנחות את המזרק למטה. לדוגמה, חלק הפתיחה של המזרק נמצא בתחתית. על ידי המתנה של חמש עד שש דקות, רקמת השומן ותופס tumescent יופרדו.הסר את הנוזל בתחתית המזרק על ידי לחיצה על החלק העליון של בוכנה מזרק. בצע את השלבים לעיל תשע עד 11 עד סך של 100 גרם עד 110 גרם של שומן רקמת שומן שאפתן לכל ברך נצבר. לאחר הפרדת פתרון tumescent על ידי כוח הכבידה וצבירת 50 גרם עד 55 גרם של שאפתן השומנים לכל 60 מיליליטר ערכת צנטריפוגה מערכת סגורה סטרילית, מניחים את שתי ערכות צנטריפוגה לתוך דלי מיכל צנטריפוגה להסתובב ב 1600 G במשך חמש דקות, עיבוי השומנים שאפתן והפרדת נוזל מן רקמת השומן.תהליך זה מעבת עוד יותר את השומנים השואבים ועשוי לייצר שמן שומני במקרים מסוימים. נזהרים לא לרעוד, מסירים את מכסה הבטיחות ואת התקע בתחתית ערכת הצנטריפוגה. הסר את הנוזל התחתון על ידי דחיפה איטית למטה על גבי הבוכנה של ערכת הצנטריפוגה.על מזרק נפרד 60 מיליליטר, להמיס 10 מיליגרם של קולגן, חמישה מיליגרם קולגן ספציפי עבור רקמת חיבור, וחמישה מיליגרם של קולגן ספציפי עבור רקמת שומן עם 50 מיליליטר של מלוחים נורמליים. מערבבים כ 25 עד 30 מיליליטר של שאפתן מרוכז שומנים עם קולגן מומס, חמישה מיליגרם של קולגן ספציפי עבור רקמת חיבור, וחמישה מיליגרם של קולגן ספציפי עבור רקמת שומן ביחס של אחד לאחד, נפח לנפח, על ידי חיבור 60 מיליליטר syringe ערכת צנטריפוגה באמצעות מחבר מיוחד. מערבבים היטב כדי לדחוס את ההכנה שאפתן קולגן על ידי דחיפת התוכן בין מזרק 60 מיליליטר ערכת צנטריפוגה באמצעות מוט או דוחף.מעבירים את תערובת השומנים והקולגנס בחזרה למזרק 60 מיליליטר. חבר כל מזרק 60 מיליליטר המכיל את התערובת עם homogenizer רקמה המכיל להבים. חבר מזרק ריק של 60 מיליליטר לקצה השני של ההומוגנר.לדחוף את התערובת למזרק 60 מיליליטר האחר דרך homogenizer במשך ארבע עד שש פעמים, וכתוצאה מכך חיתוך וכריתה של שאפתן השומנים. מעבירים את שאפתן השומנים הומוגני ואת תערובת קולגן בחזרה ערכת צנטריפוגה 60 מיליליטר באמצעות מחבר מיוחד. מניחים את ערכות הצנטריפוגה במיכל כדי להיות ממוקם באינקובטור שחומם מראש ב 37 מעלות צלזיוס.הדגירה שתי ערכות צנטריפוגה עם תערובת הומוגנית ב 37 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות תוך סיבוב ב 45 סל"ד. לאחר 40 דקות של דגירה, להסיר את המיכל מן החממה בצורה סטרילית. לאחר מכן להסיר את ערכות צנטריפוגה למקם אותם במכונת צנטריפוגה.צנטריפוגה את תערובות ב 800 G במשך חמש דקות כדי להפריד את רקמת השומן נגזר SVF. לאחר הצנטריפוגה, העל-טבעי, הכולל קולגנאז ורקמות שומן מתעכלות מוסר מכל ערכת צנטריפוגה על ידי הסרת מכסה המזרק על גבי הבוכנה והצבת מזרק 30 מיליליטר על פתח הבוכנה באמצעות חיבור מזרק-מנעול. לחץ לאט על חלק החבית של מזרק 30 מיליליטר עבור supernatant למלא לתוך מזרק 30 מיליליטר.לחץ למטה את חבית מזרק 30 מיליליטר כל הדרך אל האחרון שלושה עד ארבעה מיליליטר של החלק התחתון של ערכת צנטריפוגה, משאיר רק את שלושת עד ארבעה מיליליטר האחרונים של SVF נגזר רקמת שומן. העל-טבעי מושלך. הסר את המזרק 30 מיליליטר מהחלק העליון של הבוכנה ולמלא את המזרק עם 5% דקסטרוז רינגרינג הנקה פתרון, הידוע גם בשם D5LR.על ידי חיבור מזרק 30 מיליליטר מלא D5LR בחלק העליון של פתח הבוכנה, למלא את ערכות צנטריפוגה המכילים שלושה עד ארבעה מיליליטר של SVF נגזר רקמת שומן עם D5LR עד 55 מיליליטר. לאחר מכן להסיר את המזרק 30 מיליליטר, כובע פתיחת הבוכנה, צנטריפוגה ערכות צנטריפוגה שוב ב 300 G במשך כארבע דקות. חזור על שלבים מספר 17 למספר 21 עבור סך של ארבע שטיפה.לאחר הצנטריפוגה הרביעית, על מנת להשיג את ה- SVF הסופי להזרקה, הסר את מכסה הבטיחות ואת התקע בפתיחה התחתונה של ערכת הצנטריפוגה מבלי לרעוד או לסובב את ערכת הצנטריפוגה. חבר מזרק 20 מיליליטר לפתיחה התחתונה של ערכת הצנטריפוגה באמצעות מחבר שתוכנן במיוחד. משוך את הבוכנה של מזרק 20 מיליליטר מספר פעמים קדימה ואחורה כדי לנער את התאים שהתיישבו בתחתית ערכת הצנטריפוגה.הסר את הנפח הכולל הרצוי של ה- SVF המכיל הן ASTs והן ECM יחד עם תאים ורקמות אחרים. בדרך כלל כשלושה עד ארבעה מיליליטר מכל ערכת צנטריפוגה להזרקות מפרק הברך. עשינו 30 מיליליטר של דם אוטולוגי יחד עם 2.5 מיליליטר של תותבת דקסטרוז ציטראט נוגד קרישה.ואז הדם שנמשך הועבר לערכות חבית צנטריפוגה 60 מיליליטר. לאחר מכן הוא היה צנטריפוגה ב 730 כוח הכבידה במשך חמש דקות. והעל-טבעי הוסר והוכנס בערכת חבית צנטריפוגה חדשה של 60 מיליליטר.על-טבעי היה צנטריפוגה ב 1350 כוח הכבידה במשך ארבע דקות, קבלת 4.4 מיליליטר של PRP. לנקות את הברך של המטופל עם 5% betadine ולעטף אותו בצורה סטרילית. יש למפות את החלקים הקטנים של הברך עבור מרחב המפרקים שבין עצמות הירך והטיביאלי.הרדמה באתר ההזרקה באופן שטחי עם לידוקאין מדולל, מיליליטר אחד של 1% לידוקאין מדולל עם ארבעה מיליליטר של מלוחים רגילים, מן העור ממש מחוץ כמוסה משותפת. לאחר מכן הרדמה את החלק הפנימי של כמוסה משותפת עם ropivacaine מדולל, אחד מיליליטר 0.75% ropivacaine מדולל עם שלושה מיליליטר של מלוחים רגילים. מערבבים שני מיליליטר של HA לשישה עד שמונה מיליליטר של SVF הכלולים במזרק 20 מיליליטר דרך מזרק למחבר מזרק.על ידי שימוש במזרק למחבר מזרק, להוסיף 0.4 מיליליטר של סידן כלורי לשלושה עד ארבעה מיליליטר של PRP אוטולוגי שכבר הוכן ולהיות מוכן במזרק חמישה מיליליטר. שלב 3.5 עד 4.5 מיליליטר PRP סידן כלוריד במזרק חמישה מיליליטר עם שמונה עד 10 מיליליטר של תערובת HA-SVF במזרק 20 מיליליטר דרך מזרק למזרק מחבר. מיד להזריק את התערובת, על 12 עד 15 מיליליטר, לאט לתוך מפרק הירך הטיביאלי-הירך של הברך, באמצעות מחט 38 מילימטר 18-מד עם או בלי הדרכה אולטרסאונד.לאחר ההזרקה, תחבושת באתר ההזרקה בלחץ על ידי קיפול גזה כותנה 4x4 ארבע פעמים והצבת קלטות מעל גזה 4x4 מקופלת. הורה למטופל להישאר בשקט במשך 60 דקות כדי לאפשר חיבור לתא. יש להורות למטופל להגביל את הפעילות למינימום של שבוע לאחר השחרור מהמרפאה.חזור למרפאה לשלוש זריקות נוספות של PRP המופעלות על ידי סידן כלורי במשך שלושה שבועות. חולה בשלב 3 OA קיבל את הטיפול כמתואר בסעיף הפרוטוקול. לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASV-ECM, הכאב וה-ROM של המטופל השתפרו.בשבוע ה -16, הכאב של המטופל ROM השתפר באופן משמעותי יותר מ 70% טיפול MRI, נלקח לאחר השבוע ה -16, הראה את העובי המוגבר של רקמה דמוית סחוס בצד המדיאלי של הברך. מטופל נוסף בשלב 3 OA קיבל את הטיפול כמתואר בסעיף הפרוטוקול. לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASV-ECM, הכאב וה-ROM של המטופל השתפרו.בשבוע ה -18, הכאב ROM השתפר באופן משמעותי ל 80% MRI חוזר נלקח לאחר השבוע ה -18 הראה עלייה בגובה של רקמה דמוית סחוס בצד המדיאלי של הברך. החולה השלישי עם שלב 3 OA קיבל את הטיפול כמתואר בסעיף הפרוטוקול. לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASV-ECM, הכאב של המטופל ROM השתפר בכ 50% על ידי השבוע ה -22, הכאב ROM השתפר באופן משמעותי מעל 80% MRI חוזר נלקח לאחר השבוע ה -22 הראה עלייה בגובה הרקמה דמוית הסחוס בצד המדיאלי של הברך.נכון לעכשיו אין טיפול מרפא זמין לטיפול OA. עם זאת, הזרקה מקולקלת של טיפול בתאי גזע עם ASCs ו- ECM הומוגני יחד עם HA ו- PRP אנלוגי המופעל עם סידן כלורי עשוי לספק חלופה לטיפול הנוכחי בטיפול בברך OA.

clinical-protocol-producing-adipose-tissue-derived-stromal-vascular

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של שומן הנגזר מתאי סטרומה lipoaspirate ויצירת 4 calvarial פגם קריטי בגודל מ"מ להעריך התחדשות שלד.

תיקון של דגם פגם Calvarial הקריטי בגודל תאי שומן באמצעות נגזרת סטרומה נקטפו מן Lipoaspirate

ב2001, חוקרים באוניברסיטת UCLA תאר את בידודה של אוכלוסייה של תאי גזע בוגרים, המכונה תאי גזע שמקורם בשומן או ASCs, מרקמת שומן. מאמר זה מתאר את הבידוד של ASCs מlipoaspirates באמצעות פרוטוקול עיכול ידני, האנזימטית באמצעות collagenase.

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

ניתן להגדיר את הטרוגניות השעתוק בתוך תאי סטרומה שמקורם בשומן אנושי ברמת התא הבודד באמצעות סמני פני התא וגנים אוסטאוגניים.  אנו מתארים פרוטוקול המשתמש בזרימה ציטומטרית לבידוד תת-אוכלוסיות תאים עם פוטנציאל אוסטאוגני מוגבר, אשר עשוי לשמש לשיפור שחזור השלד הגולגולתי.

בידוד וההעשרה של אדם שומן המופק מתאי סטרומה לOsteogenesis משופר

מטרת מחקר זה היא לדווח פרוטוקול לטיפול ארתרוסקופיים של נגעים osteochondral טאלוס באמצעות microfractured ומטוהרים נגזר שומן בתאי גזע.

Microfractured עצמיים, רקמת שומן מטוהרים לניהול ארתרוסקופיים של נגעים Osteochondral טאלוס

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשיג סטרומה השבר בכלי הדם של רקמת שומן באמצעות סדרה של תהליכים מכניים, הכוללים תחליב centrifugations מרובים.

Micronization מכני של Lipoaspirates לטיפול רגנרטיבית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מתודולוגיה משופרת לבידוד ADSC וכתוצאה מכך תפוקה תאית אדירה עם רווח בזמן בהשוואה לספרות. מחקר זה מספק גם שיטה פשוטה להשגת מספר גדול יחסית של תאים בני קיימא לאחר שימור בהקפאה לטווח ארוך.

טכניקה לקבלת תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן ואפיון שבר כלי דם סטרומלי בשימור בהקפאה ארוכת טווח

מקטע כלי דם סטרומה מבודד מכנית (SVF) בשילוב עם הידרוג'ל פיברין מציע נשאות קלה ויעילה לתאי סטרומה ברי קיימא שמקורם בשומן עבור אינדיקציות שונות, כולל הנדסת רקמות או מטרות ריפוי פצעים. כאן, אנו מציגים את ההכנה של מבנה מכני SVF (mSVF)-פיברין הידרוג'ל למחקר תרגומי ויישום קליני.

השילוב של מקטע כלי דם סטרומה מבודד מכנית והידרוג'ל פיברין: פרוטוקול עיבוד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שיכול להפוך רקמת שומן אוטולוגית לחומרים מרכיבי שומן שונים בעלי תכונות ותפקודים פיזיקוכימיים שונים.

פיצול רקמת שומן חדשני להפיכת שומן לרכיבים מיוחדים

קרצינומה הקשורים fibroblasts (CAFs) עשיר myofibroblasts להציג בתוך stroma הגידול, לשחק תפקיד מרכזי נהיגה התקדמות הגידול. פיתחנו מודל הגידול coimplantation xengraft עבור ניסיוני להפקת CAFs מן fibroblasts החלב האנושי. הפרוטוקול מתאר כיצד להקים myofibroblasts CAF כי תרכוש את היכולת לקדם tumourigenesis.

הדור ניסויית של קרצינומה-Associated Fibroblasts (CAFs) מ Fibroblasts החלב אנוש

microdissection הליזר הוא טכניקה המאפשרת התאוששות של תאים נבחרים מכמויות זעירות של parenchyma. כאן אנו מתארים פרוטוקול לרכישת איי לבלב אנושיים מדגימות ניתוחיות שתשמש למחקרי transcriptomic. הפרוטוקול שלנו משפר את autofluorescence הפנימית של תאי הביתא אדם, ובכך להקל האוסף שלהם.

פרוטוקול משופר עבור microdissection הליזר של איי לבלב אנושיים מדוגמאות כירורגים

חקור פרוטוקול קליני לייצור שבר סטרומלי וסקולרי מרקמת שומן לטיפול בדלקת מפרקים ניוונית בברך. שיטה זו מאפשרת התחדשות רקמת סחוס ושיפור תפקודי הברך בחולים.

פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס

גלה סרטונים נוספים