פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס

דלקת מפרקים ניוונית היא אחת ההפרעות המתישות הנפוצות ביותר בקרב האוכלוסייה המבוגרת. כיום, אין תרופה מוגדרת עבור הגורמים הבסיסיים של דלקת מפרקים ניוונית. פרוטוקול קליני זה מתאר הליך חדשני לטיפול מבטיח, זעיר פולשני ואלטרנטיבי בדלקת מפרקים ניוונית בברך האנושית על ידי התחדשות סחוס כמו רקמה.

דלקת מפרקים ניוונית היא אחת ההפרעות המתישות הנפוצות ביותר בקרב האוכלוסייה המבוגרת. כיום, אין תרופה מוגדרת עבור הגורמים מדגיש של דלקת מפרקים ניוונית. פרוטוקול קליני זה הוא הליך חדשני לטיפול מבטיח, זעיר פולשני ואלטרנטיבי בדלקת מפרקים ניוונית בברך על ידי התחדשות רקמה דמוית סחוס.

הכניסו את המטופל לחדר ניתוח עם ברדס בדרגה A, והכניסו אותו או אותה למצב על-חושי. נקה את אזור הבטן של המטופל עם 5%betadine-povidine יוד לעטוף את המטופל באמצעות טכניקה סטרילית, חשיפת האזור הנקי של הבטן עבור שאיבת שומן. כחמישה סנטימטרים תופת- צדדית מן הטבור, הרדמה שני אתרים, אחד בצד שמאל והשני בצד ימין של הטבור של חתך להתבצע.

באמצעות שני מיליליטר של 2% לידוקאין ללא אפינפרין עם מחט 25-מד 1.5 אינץ ' במזרק חמישה מיליליטר על ידי הזרקת כל אתר ברמה האפידרמלית. הרדמה באתר החתך להתבצע באמצעות חמישה מיליליטר של פתרון tumescent ו 10 מזרק מיליליטר ואת המחט 25-מד 1.5 אינץ'. בצע שני חתכים של 0.5 ס"מ כחמישה סנטימטרים מתחת לטבור באופן משני על ידי צביטת העור כדי להעלות את עומק הרמה התת עורית.

באמצעות להב מספר 11, לעזור לעור הרים לחדור דרך לרמה תת עורית אבל לא לחדור דרך דופן הבטן. על ידי שימוש 20 ס"מ 60-מד cannula, הרדמה את הרמה התת עורית של כל אזור הבטן התחתונה אשר יש שאיבת שומן עם 700 כדי 800 מיליליטר של פתרון tumescent. לאחר סיום חדירה של הבטן התחתונה כולה עם פתרון tumescent, להכין מנגנון שאיבת שומן על ידי חיבור 3.0 מילימטר cannula מחובר 60 מיליליטר או 30 מזרק מיליליטר עבור שאיבת שומן ידנית או שתוכנן במיוחד 3.0 מילימטר cannula מחובר ערכת צנטריפוגה.

מזרק מערכת סגור שפותח על ידי עצמנו ואושר על ידי ה-FDA CDRH לצורך שמירה על סטריליות מחובר למכונת ואקום עבור שאיבת שומן בסיוע ואקום. בצע שאיבת שומן כדי להשיג 100 עד 110 גרם של רקמת שומן למעט פתרון tumescent. בעת ביצוע שאיבת שומן, רקמת שומן יושג יחד עם פתרון tumescent אבל צריך להיות מופרדים והוסרו.

כדי להפריד את הפתרון tumescent הראשון על ידי כוח הכבידה, רקמת השומן בערכת צנטריפוגה ניתן להעביר מזרק 60 מיליליטר ולהנחות את המזרק למטה. לדוגמה, חלק הפתיחה של המזרק נמצא בתחתית. על ידי המתנה של חמש עד שש דקות, רקמת השומן ותופס tumescent יופרדו.

הסר את הנוזל בתחתית המזרק על ידי לחיצה על החלק העליון של בוכנה מזרק. בצע את השלבים לעיל תשע עד 11 עד סך של 100 גרם עד 110 גרם של שומן רקמת שומן שאפתן לכל ברך נצבר. לאחר הפרדת פתרון tumescent על ידי כוח הכבידה וצבירת 50 גרם עד 55 גרם של שאפתן השומנים לכל 60 מיליליטר ערכת צנטריפוגה מערכת סגורה סטרילית, מניחים את שתי ערכות צנטריפוגה לתוך דלי מיכל צנטריפוגה להסתובב ב 1600 G במשך חמש דקות, עיבוי השומנים שאפתן והפרדת נוזל מן רקמת השומן.

תהליך זה מעבת עוד יותר את השומנים השואבים ועשוי לייצר שמן שומני במקרים מסוימים. נזהרים לא לרעוד, מסירים את מכסה הבטיחות ואת התקע בתחתית ערכת הצנטריפוגה. הסר את הנוזל התחתון על ידי דחיפה איטית למטה על גבי הבוכנה של ערכת הצנטריפוגה.

על מזרק נפרד 60 מיליליטר, להמיס 10 מיליגרם של קולגן, חמישה מיליגרם קולגן ספציפי עבור רקמת חיבור, וחמישה מיליגרם של קולגן ספציפי עבור רקמת שומן עם 50 מיליליטר של מלוחים נורמליים. מערבבים כ 25 עד 30 מיליליטר של שאפתן מרוכז שומנים עם קולגן מומס, חמישה מיליגרם של קולגן ספציפי עבור רקמת חיבור, וחמישה מיליגרם של קולגן ספציפי עבור רקמת שומן ביחס של אחד לאחד, נפח לנפח, על ידי חיבור 60 מיליליטר syringe ערכת צנטריפוגה באמצעות מחבר מיוחד. מערבבים היטב כדי לדחוס את ההכנה שאפתן קולגן על ידי דחיפת התוכן בין מזרק 60 מיליליטר ערכת צנטריפוגה באמצעות מוט או דוחף.

מעבירים את תערובת השומנים והקולגנס בחזרה למזרק 60 מיליליטר. חבר כל מזרק 60 מיליליטר המכיל את התערובת עם homogenizer רקמה המכיל להבים. חבר מזרק ריק של 60 מיליליטר לקצה השני של ההומוגנר.

לדחוף את התערובת למזרק 60 מיליליטר האחר דרך homogenizer במשך ארבע עד שש פעמים, וכתוצאה מכך חיתוך וכריתה של שאפתן השומנים. מעבירים את שאפתן השומנים הומוגני ואת תערובת קולגן בחזרה ערכת צנטריפוגה 60 מיליליטר באמצעות מחבר מיוחד. מניחים את ערכות הצנטריפוגה במיכל כדי להיות ממוקם באינקובטור שחומם מראש ב 37 מעלות צלזיוס.

הדגירה שתי ערכות צנטריפוגה עם תערובת הומוגנית ב 37 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות תוך סיבוב ב 45 סל"ד. לאחר 40 דקות של דגירה, להסיר את המיכל מן החממה בצורה סטרילית. לאחר מכן להסיר את ערכות צנטריפוגה למקם אותם במכונת צנטריפוגה.

צנטריפוגה את תערובות ב 800 G במשך חמש דקות כדי להפריד את רקמת השומן נגזר SVF. לאחר הצנטריפוגה, העל-טבעי, הכולל קולגנאז ורקמות שומן מתעכלות מוסר מכל ערכת צנטריפוגה על ידי הסרת מכסה המזרק על גבי הבוכנה והצבת מזרק 30 מיליליטר על פתח הבוכנה באמצעות חיבור מזרק-מנעול. לחץ לאט על חלק החבית של מזרק 30 מיליליטר עבור supernatant למלא לתוך מזרק 30 מיליליטר.

לחץ למטה את חבית מזרק 30 מיליליטר כל הדרך אל האחרון שלושה עד ארבעה מיליליטר של החלק התחתון של ערכת צנטריפוגה, משאיר רק את שלושת עד ארבעה מיליליטר האחרונים של SVF נגזר רקמת שומן. העל-טבעי מושלך. הסר את המזרק 30 מיליליטר מהחלק העליון של הבוכנה ולמלא את המזרק עם 5% דקסטרוז רינגרינג הנקה פתרון, הידוע גם בשם D5LR.

על ידי חיבור מזרק 30 מיליליטר מלא D5LR בחלק העליון של פתח הבוכנה, למלא את ערכות צנטריפוגה המכילים שלושה עד ארבעה מיליליטר של SVF נגזר רקמת שומן עם D5LR עד 55 מיליליטר. לאחר מכן להסיר את המזרק 30 מיליליטר, כובע פתיחת הבוכנה, צנטריפוגה ערכות צנטריפוגה שוב ב 300 G במשך כארבע דקות. חזור על שלבים מספר 17 למספר 21 עבור סך של ארבע שטיפה.

לאחר הצנטריפוגה הרביעית, על מנת להשיג את ה- SVF הסופי להזרקה, הסר את מכסה הבטיחות ואת התקע בפתיחה התחתונה של ערכת הצנטריפוגה מבלי לרעוד או לסובב את ערכת הצנטריפוגה. חבר מזרק 20 מיליליטר לפתיחה התחתונה של ערכת הצנטריפוגה באמצעות מחבר שתוכנן במיוחד. משוך את הבוכנה של מזרק 20 מיליליטר מספר פעמים קדימה ואחורה כדי לנער את התאים שהתיישבו בתחתית ערכת הצנטריפוגה.

הסר את הנפח הכולל הרצוי של ה- SVF המכיל הן ASTs והן ECM יחד עם תאים ורקמות אחרים. בדרך כלל כשלושה עד ארבעה מיליליטר מכל ערכת צנטריפוגה להזרקות מפרק הברך. עשינו 30 מיליליטר של דם אוטולוגי יחד עם 2.5 מיליליטר של תותבת דקסטרוז ציטראט נוגד קרישה.

ואז הדם שנמשך הועבר לערכות חבית צנטריפוגה 60 מיליליטר. לאחר מכן הוא היה צנטריפוגה ב 730 כוח הכבידה במשך חמש דקות. והעל-טבעי הוסר והוכנס בערכת חבית צנטריפוגה חדשה של 60 מיליליטר.

על-טבעי היה צנטריפוגה ב 1350 כוח הכבידה במשך ארבע דקות, קבלת 4.4 מיליליטר של PRP. לנקות את הברך של המטופל עם 5% betadine ולעטף אותו בצורה סטרילית. יש למפות את החלקים הקטנים של הברך עבור מרחב המפרקים שבין עצמות הירך והטיביאלי.

הרדמה באתר ההזרקה באופן שטחי עם לידוקאין מדולל, מיליליטר אחד של 1% לידוקאין מדולל עם ארבעה מיליליטר של מלוחים רגילים, מן העור ממש מחוץ כמוסה משותפת. לאחר מכן הרדמה את החלק הפנימי של כמוסה משותפת עם ropivacaine מדולל, אחד מיליליטר 0.75% ropivacaine מדולל עם שלושה מיליליטר של מלוחים רגילים. מערבבים שני מיליליטר של HA לשישה עד שמונה מיליליטר של SVF הכלולים במזרק 20 מיליליטר דרך מזרק למחבר מזרק.

על ידי שימוש במזרק למחבר מזרק, להוסיף 0.4 מיליליטר של סידן כלורי לשלושה עד ארבעה מיליליטר של PRP אוטולוגי שכבר הוכן ולהיות מוכן במזרק חמישה מיליליטר. שלב 3.5 עד 4.5 מיליליטר PRP סידן כלוריד במזרק חמישה מיליליטר עם שמונה עד 10 מיליליטר של תערובת HA-SVF במזרק 20 מיליליטר דרך מזרק למזרק מחבר. מיד להזריק את התערובת, על 12 עד 15 מיליליטר, לאט לתוך מפרק הירך הטיביאלי-הירך של הברך, באמצעות מחט 38 מילימטר 18-מד עם או בלי הדרכה אולטרסאונד.

לאחר ההזרקה, תחבושת באתר ההזרקה בלחץ על ידי קיפול גזה כותנה 4x4 ארבע פעמים והצבת קלטות מעל גזה 4x4 מקופלת. הורה למטופל להישאר בשקט במשך 60 דקות כדי לאפשר חיבור לתא. יש להורות למטופל להגביל את הפעילות למינימום של שבוע לאחר השחרור מהמרפאה.

חזור למרפאה לשלוש זריקות נוספות של PRP המופעלות על ידי סידן כלורי במשך שלושה שבועות. חולה בשלב 3 OA קיבל את הטיפול כמתואר בסעיף הפרוטוקול. לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASV-ECM, הכאב וה-ROM של המטופל השתפרו.

בשבוע ה -16, הכאב של המטופל ROM השתפר באופן משמעותי יותר מ 70% טיפול MRI, נלקח לאחר השבוע ה -16, הראה את העובי המוגבר של רקמה דמוית סחוס בצד המדיאלי של הברך. מטופל נוסף בשלב 3 OA קיבל את הטיפול כמתואר בסעיף הפרוטוקול. לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASV-ECM, הכאב וה-ROM של המטופל השתפרו.

בשבוע ה -18, הכאב ROM השתפר באופן משמעותי ל 80% MRI חוזר נלקח לאחר השבוע ה -18 הראה עלייה בגובה של רקמה דמוית סחוס בצד המדיאלי של הברך. החולה השלישי עם שלב 3 OA קיבל את הטיפול כמתואר בסעיף הפרוטוקול. לאחר השבוע השני של הזרקת תערובת ASV-ECM, הכאב של המטופל ROM השתפר בכ 50% על ידי השבוע ה -22, הכאב ROM השתפר באופן משמעותי מעל 80% MRI חוזר נלקח לאחר השבוע ה -22 הראה עלייה בגובה הרקמה דמוית הסחוס בצד המדיאלי של הברך.

נכון לעכשיו אין טיפול מרפא זמין לטיפול OA. עם זאת, הזרקה מקולקלת של טיפול בתאי גזע עם ASCs ו- ECM הומוגני יחד עם HA ו- PRP אנלוגי המופעל עם סידן כלורי עשוי לספק חלופה לטיפול הנוכחי בטיפול בברך OA.