Name: מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-14T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: למד מדידת טמפרטורת גוף בעכברים באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתי פסיבי ואלרגיה למזון. שיטה זו מאפשרת מחקר בלתי פולשני ומדויק ללא הרדמה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

במחקר Kawakami מעבדה נתמכה על ידי NIH מענקים: R01 AR064418-01A1, HL124283-01-R01, R21 AI 115534-01, ו R41AI124734-01.

ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של מכון הויה לאלרגיה ואימונולוגיה.
1. עכבר מדידה טמפרטורת גוף במהלך ההרדמה
<ol><li>הנח את העכבר בתיבת אינדוקציה הרדמה. עזים ומתנגד באמצעות 1 ליטר/דקה זרימת החמצן עם 5% איזופלוריין. הערה: ההרדמה היא מאושרת כאשר העכבר מפסיק התנועה הרצונית, היה משותק עבור מעל גיל 30 s. לחלופין, קצב הנשימה הצג, וברגע עכברים נושמים-נשימה 1 לכל כל 2 s או יותר, הוא אישר ההרדמה.</li>
	<li>להחזיק את העכבר על ידי העורף של הצוואר עם האצבע והאגודל והחזק את הזנב עם אצבע הזרת על מנת לחשוף את הבטן התחתונה.</li>
	<li>מקם את חיישן מד חום אינפרא אדום מתחת בבטן התחתונה תוך החזקת את העכבר עם הגוף שלו במקביל לקרקע. הערה: שטוח המשטח החיצוני של המדחום (לא השטח של החיישן) צריך להיות כ 2-5 מ מ מהמשטח של הבטן. התוצאה שכפל של טמפרטורות נמדד בזמן עכברים הם לא מרדימים (המתוארת בסעיף 2). חשוב לקבוע אתר היעד של הבטן. מכוון בין שתי פטמות העליון מאפשר תוצאות עקביות.</li>
	<li>החזק על ההדק כדי למדוד את הטמפרטורה. להבטיח את קיום יציבה העכבר על מד חום.</li>
</ol>2. העכבר מדידה טמפרטורת גוף ללא הרדמה
<ol><li>הרם את העכבר עד אמצע הזנב.</li>
	<li>
לחשוף את הבטן של העכבר.
	<ol>
<li>לאפשר את העכבר כדי לשמור על משטח ישר-קצה, כגון השפה של הכלוב פתוח או כלוב-העליון עם לרדווד. הערה: פעולה זו מאפשרת את העכבר כדי למתוח את הגוף העליון ולחשוף את הבטן.</li>
		<li>לחילופין, לאפשר את העכבר כדי להחזיק ישר-הקצה העליון של המדחום, הפוך את העכבר לשבת על משטח שטוח החיצוני של המדחום עם הבטן שלה רק על חיישן אינפרה אדום. הערה: בכל עת שכפות רגליו האחוריות מונחות על פני השטח של המדחום, ודא כי כפות הרגליים הם לא הפרעה החיישן מהמשטח בטן. מדי חום עם הרגל חסימה למדוד לך חום נמוך מזה של הבטן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>החזק על ההדק כדי למדוד את הטמפרטורה. הערה: עכברים נוטים לנוע; תשמרי על מדידת באותו המיקום של הגוף באופן עקבי על ידי לקיחת מידות הטמפרטורה כאשר עכברים הם יחסית פחות נייד</li>
</ol>3. פסיבי אנפילקסיס מערכתית7
<ol><li>
יום 0: לרגש עם אימונוגלובולין E (IgE).
	<ol>
<li>להכין µL 200 (לכל עכבר) של אנטי-dinitrophenyl (DNP) IgE-ריכוז של µg/mL 100 ב- PBS.</li>
		<li>Intraperitoneally להזריק µL 200 של IgE אנטי-dinitrophenyl (DNP) המבושלות שלב 3.1.1 או PBS בלבד (PBS בלבד היא הפקד שלילי). שימוש במחט 26 גרם להזרקה. לבצע זריקות לרוחב רק האמצע, בערך בין שתי הפטמות נחות ביותר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
יום 1: לגרום אנפילקסיס עם DNP-HSA.
	<ol>
<li>להכין µL 100 (לכל עכבר) של DNP-HSA-ריכוז של 10 מ"ג/מ"ל ב- 0.9% NaCl.</li>
		<li>עזים ומתנגד העכברים כפי שמתואר בשלב 1.1.</li>
		<li>למדוד את טמפרטורת הגוף משתמש בטכניקה המתוארת בשלב 1.</li>
		<li>מזריקים לווריד µL 100 של DNP-HSA מוכן בשלב 3.2.1. שימוש במחט 30 G להזרקה. לבצע הזריקות על הסינוס ורידים retroorbital. הכנס את המחט בצד המדיאלי של העין בזווית של רדוד, מכוון מאחורי העין.</li>
		<li>לאחר ההזרקה, הצב והעכברים בכלובים בודדים. ודא כי העכברים לשחזר מן ההרדמה. שים לב כי הם מתעוררים ולהיות ניידים בהתנדבות.</li>
		<li>למדוד את חום הגוף באמצעות מד חום אינפרא אדום ולבחון את פעילותם בכל 10 דקות במשך 70 דקות.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. העכבר מודל של מזון אלרגיה8,9
הערה: התרשים מוצג באיור2.
<ol><li>
יום 0: לרגש העכברים עם ביצית/אלום.
	<ol>
<li>להכין µL 100 (לכל עכבר) של ביצית (0.5 mg/mL), אלום (10 mg/mL) ביחד ב- PBS. מערבולת על ההגדרה נמוכה במשך 30 דקות.</li>
		<li>עזים ומתנגד העכברים כפי שמתואר בשלב 1.1.</li>
		<li>באמצעות מחט 26 גרם, מזריקים intraperitoneally העכבר כל 100 µL של ביצית/אלום תערובת מוכנה בשלב 4.1.1. הערה: מערבולת התערובת ביצית/אלום שוב, בקצרה לפני כל זריקה, הכי טוב לוודא תערובת homogenized. ראה שלב 3.1.3 לפרטים באתר הזרקת.</li>
		<li>לאחר ההזרקה, עכברים המקום בחזרה בכלובים המקורי שלהם. ודא כי העכברים לשחזר מן ההרדמה. שים לב כי הם מתעוררים ולהיות ניידים בהתנדבות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
יום 14: מבצע רגישות עולה השני עם ביצית/אלום.
	<ol>
<li>חזור על שלבים 4.1.1 4.1.2, 4.1.3.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
בימים 28-46: אתגר העכברים עם ביצית בכל יום אחר.
	<ol>
<li>להכין µL 100 (לכל עכבר) של ביצית-ריכוז של 250 מ"ג/מ"ל ב- PBS. הערה: התערובת צריכה להיעשות על ידי בעדינות להתנדנד הלוך ושוב ביד מאשר עם מערבולת כדי למזער את היווצרות בועה.<ol>
<li>אם בעזרת מעכבי אלרגיה למזון, להכין את מעכבי9. להכין µL 100 (לכל עכבר) של מעכב-ריכוז של 1 מ"ג/מ"ל ב- PBS. דבר זה מאפשר משלוח של 100 µg של מעכב עבור כל עכבר. הערה: לא יעלה על 100 µL של מעכב לכל העכבר, כפי העכברים מסוגלים רק לטפל µL 200 נפח gavage סה כ במהלך יום אתגר אחד. ככל 100 µL נחוצים גם האתגר ביצית, 100 µL הוא המספר המירבי מומלץ נפח לשימוש מעכב.</li>
		</ol>
</li>
		<li>עזים ומתנגד העכברים כפי שמתואר בשלב 1.1.</li>
		<li>אורלי gavage כל עכבר עם 100 µL של הפתרון ביצית (25 מ"ג של ביצית ב 100 µL ל- PBS gavaged לכל עכבר) הוכנה בשלב 4.3.1.<ol>
<li>אם משתמש מעכבי, לנצל אותן טכניקות שמתואר השלבים הבאים gavage מעכב (או שליטה PBS) מוכן בשלב 4.3.1.1 30 דקות לפני האתגר ביצית. לאחר 30 דקות, להמשיך הלאה לשלב הבא.</li>
			<li>שימוש במחט gavage עם מזרק 1 מ"ל. לקחת את µL 100 של ביצית לתוך המזרק.</li>
			<li>את המחט לתוך הפה; לאחר מכן, לכוון את המחט לכיוון שמאל או צד ימין של הגרון, החלק בעדינות את המחט דרך הוושט. מזריקים µL 100 של ביצית. הערה: כדי להבטיח כי המחט אינה לקנה, להתבונן פעיל נושם לפני הזרקת ביצית. גם התנגדו החדרת המחט מוקדם אם היא נכנסה קנה הנשימה ולא הוושט.</li>
		</ol>
</li>
		<li>למקם את העכברים שלהם בכלובים בודדים. לשימוש התבוננות קלה באיכות צואה, כלובים ללא מצעים.</li>
		<li>ודא ההתאוששות מן ההרדמה. שים לב כי העכברים להתעורר ולהיות ניידים בהתנדבות.</li>
		<li>למדוד את חום הגוף של העכברים-timepoints 10, 20, 40 ו- 60 דקות בטכניקה המתוארת בסעיף 2.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Finkelman, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaphylaxis%3A+lessons+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Anaphylaxis: lessons from mouse models.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 120 (3), Quiz 516-507 506-515 (2007).</li>
<li>Lee, J. K., Vadas, P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21668816">Anaphylaxis: mechanisms and management.</a> Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. 41 (7), 923-938 (2011).</li>
<li>Newsom, D. M., Bolgos, G. L., Colby, L., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+body+surface+temperature+measurement+and+conventional+methods+for+measuring+temperature+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+Topics+in+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Comparison of body surface temperature measurement and conventional methods for measuring temperature in the mouse.</a> Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 43 (5), 13-18 (2004).</li>
<li>Wong, J. P., Saravolac, E. G., Clement, J. G., Nagata, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+hypothermia+model+for+study+of+respiratory+tract+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Development of a murine hypothermia model for study of respiratory tract influenza virus infection.</a> Laboratory Animal Science. 47 (2), 143-147 (1997).</li>
<li>Quimby, J. M., Olea-Popelka, F., Lappin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+digital+rectal+and+microchip+transponder+thermometry+in+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Comparison of digital rectal and microchip transponder thermometry in cats.</a> Journal of American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 402-404 (2009).</li>
<li>Mei, J., Riedel, N., Grittner, U., Endres, M., Banneke, S., Emmrich, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+temperature+measurement+in+mice+during+acute+illness%3A+implantable+temperature+transponder+versus+surface+infrared+thermometry%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Body temperature measurement in mice during acute illness: implantable temperature transponder versus surface infrared thermometry.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3526(2018).</li>
<li>Doyle, E., Trosien, J., Metz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocols+for+the+induction+and+evaluation+of+systemic+anaphylaxis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Protocols for the induction and evaluation of systemic anaphylaxis in mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1032, 133-138 (2013).</li>
<li>Brandt, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+are+required+for+experimental+oral+allergen-induced+diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigations%22%5BJournal%5D)">Mast cells are required for experimental oral allergen-induced diarrhea.</a> The Journal of Clinical Investigations. 112 (11), 1666-1677 (2003).</li>
<li>Ando, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histamine-releasing+factor+enhances+food+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigations%22%5BJournal%5D)">Histamine-releasing factor enhances food allergy.</a> The Journal of Clinical Investigations. 127 (12), 4541-4553 (2017).</li>
<li>Brandt, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+IL-4%2FIL-13+signaling+to+alleviate+oral+allergen-induced+diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Targeting IL-4/IL-13 signaling to alleviate oral allergen-induced diarrhea.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 123 (1), 53-58 (2009).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

הפרוטוקול המתואר הוקמה במטרה מדידת טמפרטורת הגוף ללא השימוש בהרדמה. למרות שלו בקלות יחסית עם איזו טמפרטורה ניתן להשיג קריאת, ישנם מספר אזהרות להכיל טכניקה זו, בנוסף ההשפעות ברורה יותר כגון: טיפול שונות בטמפרטורות הסביבה והמתח.
ראשית, על מנת לשמור על טמפרטורות עקבי לאורך כל הניסוי, המיקום שבו הטמפרטורה נמדדים חייב להיות מראש באמצעות ציוני דרך אנטומיים, ועל החוקרים להיות אפשרות לשכפל את המדידה של הגוף אמר מיקום. על-ידי אבטחת forepaws של העכבר על משטח ישר-קצה, כגון שפתו של כלוב או על הקצה של המדח...

מדידת טמפרטורת הגוף כבר חלק חיוני של פיקוח על ההשפעות של אנפילקטי הסימפטומים אצל בעלי חיים מודלים1,2. הבדלי טמפרטורה נמדדו באופן מסורתי על ידי בדיקה רקטלית מדחומים עכברים3,4. עם מדידות אלה, החוקרים באופן אמין מצטייר הבדלי טמפרטורה בין משתנים; עם זאת, שיטה זו היא הליך זמן רב וגורם מצוקה לעכברים, אשר יכול להגביר את טמפרטורת הגוף. בדיקה רקטלית יכולה גם לגרום קורע ולדלקת הרירית3. יתר על כן, צריך עכשיו העכברים כדי בצורה הומאנית את הגשוש רקטלית כדי למדוד את טמפרטורת3. זהו תהליך איטי, והיא אוסרת על המידה של טמפרטורות רצופים בתוך תקופה קצרה של זמן. יתר על כן, עכברים פעילות פנוטיפים לא יכול להיות שנצפו במהלך תקופה זו עד מההרדמה הוא לחלוטין נשחק, וזה תהליך גוזלת זמן אחר. לאחרונה, שיטות אחרות אמין כדי למדוד את חום הגוף השתמשו subcutaneously מושתל משדר אינפרא-אדום פסיבי תגיות או משדרי הרדיו הכוללים5,63,חיישן טמפרטורה. למרות שהן מתקבלות כפי המנהג אידיאלי על ידי כמה חוקרים, שיטות אלה הם לא בשימוש נרחב בגלל עלויות ראשוניות גבוהות ומצוקה לעכברים, עקב השתלה כירורגית של חיישן טמפרטורה מתחת לעור או חלק אחר של הגוף.
כדי להדגים כי הפרש הטמפרטורות הוא שיקוף מדויק של סימפטומים מחלת מודל1,2, עכברים חייב להיות ער במהלך מדידת טמפרטורה ולהיות מסוגל לחזור פעילותם פנוטיפי נורמלי מיד לפני ואחרי המדידה. לשם כך, חיפשנו שיטה שבה זה יכול להיעשות.
מטרתנו הייתה למדוד במדויק ובזול העכבר טמפרטורת הגוף, ללא הצורך בהרדמה, ללא הגבלות על פעילות, כדי לאפשר התבוננות פנוטיפים התנהגותיים במהלך ואחרי הזמן של מדידת טמפרטורה. כדי להשיג מטרה זו, היה ברור כי שיטה פחות פולשנית מאשר הטמפרטורה רקטאלית רגילה רגשים היה נדרש. מדחום אינפרא אדום שימשו במשך עשרות שנים ברפואה קלינית, במיוחד ברפואת ילדים כדי להשיג קריאת הטמפרטורות מדויק. זה כבר שיטה חלופית שמותר לה קלינאים להשיג במהירות ובדייקנות מדידות טמפרטורה בתינוקות וילדים בררן כי הם פעיל ניידים. עלינו ליישם את אותה טכניקה בעכברים, פיתחו שיטה מוצלחת כדי להשיג טמפרטורות ללא הרדמה. חשוב לציין, אנו מראים כי בשיטה זו הוא מסוגל משכפל את התוצאות ומבוססת אנפילקסיס מערכתית פסיבי לגבי שינויי טמפרטורה, בעוד גם היכולת לצפות את הפעילות של העכבר במהלך המדידה. יתר על כן, אנו משתמשים באותה השיטה כדי להעריך את חום הגוף של עכברים אלרגיות מזון, כשחקרו בו-זמנית תסמינים אחרים, כדי להדגים כי טמפרטורת הגוף הוא אכן של שיקוף מדויק של רמת פעילות, ותפקיד הכוללת של עכבר.

<table><tbody><tr><td>מדחום אינפרא אדום ללא מגע</td><td>SinoPie</td><td>DT-8861</td><td></td></tr><tr><td>אנטי דיניטרופניל (DNP) IgE</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8406-.2MG</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide 30 G מחט</td><td>BD</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>מחט PrecisionGlide 26 G&nbsp;</td><td>מזרק BD</td><td>305111</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Dinitrophenyl - אלבומין סרום אנושי</td><td>Biosearch Technologies</td><td>D-5059-10</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin מחלבון ביצת עוף</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5503-50G</td><td></td></tr><tr><td>Imject Alum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>77161</td><td></td></tr><tr><td>מחטי האכלה לבעלי חיים, חד פעמי</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-208-87</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון

Mouse Body Temperature Measurement Using Infrared Thermometer During Passive Systemic Anaphylaxis and Food Allergy Evaluation

מדידה טמפרטורת גוף העכבר היא בעלת חשיבות עליונה על חקירת אלרגיה וסימפטומים אנפילקטי. פי הטבעת זונדי טמפרטורות משותף, הם הוכחו להיות מדויק ולא יקר ערך בהקשר זה. עם זאת, שיטה זו של מדידת טמפרטורה דורש העכברים עכשיו כדי להכניס את המכשיר ללא פציעה של החיה. זה מגביל את היכולת להתבונן אחרים פנוטיפים של העכבר בו-זמנית. על מנת לחקור פנוטיפים אחרים תוך מדידת טמפרטורה, הגששים רקטלי אינן אידיאלי, שיטה נוספת היא הרצויה. כאן, אנחנו מציגים שיטה לא פולשנית של מדידת טמפרטורה זה בדרישת הדרישה העכבר הרדמה תוך שמירה על אמינות שווה כדי הגששים רקטלי מדידת טמפרטורת הגוף. אנו משתמשים מד חום אינפרא אדום שמזהה טמפרטורות פני הגוף בטווחים בין 2 ל- 150 מ מ. שיטה זו של מדידת טמפרטורת הגוף הוא מצליח בצורה אמינה שכפול מגמות שינוי טמפרטורה במהלך מערכת פסיבית אנפילקסיס ניסויים בעכברים. אנו מראים כי טמפרטורות פני הגוף הינם כ 2.0 ° C נמוך יותר בדיקה רקטלית מדידות, אך מידת ירידת טמפרטורה בעקבות המגמה זהה. יתר על כן, אנו משתמשים באותה השיטה כדי להתבונן עכברים במודל אלרגיה למזון כדי להעריך את רמות טמפרטורה והפעילות בו זמנית.

אנפילקסיס מערכתית פסיבית: להזרקה הרביעי, שבוע 10 עכברים BALB/c הנשי הישן היו מרדימים. לפני הזריקה, מדדנו את חום הגוף שלהם (Video 1) כפי שמתואר בשלב 1. איור 1 מציג את המגמה טמפרטורה של שתי האוכלוסיות לאחר ההזרקה הרביעי. העכבר רגיש-IgE הראה ירידה טמפרטורה מקסימלית של 3.0 מעלות צלזיוס ב 20 דקות, בעוד העכבר שליטה PBS היה טיפה המרבי של 1.1 ° C-20 דקות7. יתר על כן, במהלך תהליך זה, פעילות הציונים הוערכו בהתבסס על הניידות של ה...

כאן אנו מציגים שיטה חדשה כדי למדוד במדויק את הבדלי טמפרטורה גוף פסיבי אנפילקסיס מערכתית (PSA), מזון אלרגיה העכבר מודלים באמצעות מד חום אינפרא אדום... הליך זה שוכפל במדויק בתוצאות ה-PSA הקודמת.

Mouse body temperature measurement is of paramount importance for investigating allergies and anaphylactic symptoms. Rectal probes for temperature ...

מתודולוגיה זו מסייעת לטפל בשאלות מפתח בתחום האלרגיה והאימונולוגיה, במיוחד אלה הנוגעות לפנוטיפים שעשויים להיות קשורים לשינויים בטמפרטורת הגוף. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא זולה, לא פולשנית, ואינו דורש הרדמה. ההשלכות של טכניקה זו מאפשרות לחוקרים להפחית את הלחץ והכאב של עכברים במהלך מדידת הטמפרטורה תוך ביטול ההשפעות של הרדמה, ו / או לדמיין פנוטיפים התנהגותיים.כדי למדוד את טמפרטורת גוף העכבר לאחר הרדמה, לאשר הרדמה על ידי קצב הנשימה או חוסר תנועה ולתפוס את העכבר על ידי העורף של הצוואר עם אצבע ואגודל אינדקס והזנב עם אצבע זרת. תוך החזקת העכבר במקביל לפני השטח של ספסל המעבדה, מניחים חיישן מדחום אינפרא אדום מתחת לבטן התחתונה עם המשטח השטוח החיצוני של המדחום במרחק של שניים עד חמישה מילימטרים מפני השטח של הבטן בין שתי הפטמות העליונות. ואז לדכא את ההדק של המדחום כדי למדוד את הטמפרטורה של החיה, דואג לשמור על העכבר ואת המדחום יציב.כדי למדוד את טמפרטורת גוף העכבר ללא הרדמה, להרים את העכבר עד אמצע הזנב ולחשוף את הבטן. אפשר לעכבר להיאחז במשטח קצה ישר עם התרפסות שלו ולהחזיק את ההדק כדי למדוד את הטמפרטורה. לחלופין, אפשר לעכבר להיאחז בקצה הישר העליון של המדחום ולהפוך את העכבר לשבת על פני השטח השטוחים החיצוניים של המדחום עם הבטן שלו ממש מעל חיישן אינפרא אדום במהלך מדידת הטמפרטורה.עבור רגישות אנפילקסיס מערכתית פסיבית להשתמש מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט מד 26 להזריק 200 microliters של Anti-Dinitrophenol מוכן טרי, או DNP, IgE ב PBS, לתוך הצפירה של כל חיה הנמען רק צדי עד קו האמצע בין הפטמות הנחותות ביותר והשני הנחות ביותר. 24 שעות לאחר ההזרקה, למדוד את טמפרטורת הגוף של כל חיה הנמען כפי שהוכח, טען מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט 30 מד עם 100 microliters של אלבומין סרום אנושי DNP מוכן טרי. כדי לגרום לאנפילקסיס מערכתי פסיבי, הכנס את המחט בצד המדיאלי של העין בזווית רדודה המכוונת מאחורי העין, והזרק את כל נפח הפתרון דרך הווריד לסינוס הוורידי רטרו-מסלולית.לאחר מכן מניחים את העכבר לבד בכלוב התאוששות עם ניטור עד שיקום מלא, ולמדוד את טמפרטורת הגוף ופעילות כל 10 דקות במשך 70 דקות. עכברים רגישים IgE להדגים ירידה בטמפרטורה מקסימלית של שלוש מעלות צלזיוס ב 20 דקות בעוד עכברים שליטה PBS להפגין ירידה מקסימלית של 1.1 מעלות צלזיוס בתוך אותה תקופה לאחר האתגר. תצפיות התנהגותיות יכולות להתבצע גם בבעלי חיים שאינם הרדמה כדי להעריך את הקשר בין טיפות הטמפרטורה שנצפו לבין פעילות העכבר.באתגר זה של אלרגיה למזון עכברים, קבוצת הביקורת PBS הראתה ירידה משמעותית בטמפרטורה 10 דקות לאחר האתגר בהשוואה לקבוצת המעכבים 2CA שטופלו. הערכת ציוני הפעילות וירידה בטמפרטורה מאתגר אלרגיה למזון זה חשפה מתאם מובהק סטטיסטית בין שתי קבוצות הנתונים. בעקבות הליך זה, ניסויים אחרים מעורבים מדידות טמפרטורת הגוף של העכבר יכול להתבצע כדי לענות על שאלות נוספות לגבי פנוטיפים התנהגותיים הקשורים לשינוי טמפרטורת הגוף.

mouse-body-temperature-measurement-using-infrared-thermometer-during

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מדידות חוזרות של הפיזיולוגיה מכרסם הנשימה דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר רצויות, אבל בדרך כלל לא ריאלי. כאן אנו מתארים את שיטת הדיר עבור בעל פה intubating עכברים המאפשר מדידות חוזרות של דרכי הנשימה ואת hyperreactivity דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר.

הפיך, לא פולשני שיטת ההתנגדות מדידות דרכי הנשימה ואת נוזל שטיפה ברונכואלוואולרית דגימה של עכברים

מודלים העכבר ניסיוני של אסטמה אלרגית להציע אפשרויות חדשות ללימוד בהיווצרות המחלה ופיתוח ותרופות חדשות. דגמים אלה מתאימים גם לגורמים השולטים מדידה תגובה חיסונית אלרגית, דלקת בדרכי הנשימה, ו פתופיזיולוגיה ריאתי.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

סרטון זה מדגים פרוטוקול לזיהוי אימונוגלובולין E ספציפי לסרום באמצעות מערכת כימילומינסנציה מבוססת מחסניות מיקרופלואידיות. סרום IgEs אינטראקציה עם אלרגנים שונים משותקים באזור התגובה של המחסנית, אשר מזוהים לאחר מכן עם נוגדנים מצומדים peroxidase anti-IgE ומצע chemiluminescent, המאפשר זיהוי בו זמנית של IgEs ספציפיים לאלרגנים מרובים.

מערכת זיהוי מבוססת מחסניות מיקרופלואידיות עבור אימונוגלובולין E ספציפי לאלרגן

מדידות פון פריי אלקטרוניות הן אלטרנטיבה יעילה ומשופרת לחוטי פון פריי הקלאסיים, מכיוון שהן מאפשרות מדידה מהירה ומדויקת של שינויים בספי הנסיגה המכאניים של מכרסמים לגירוי לחץ המופעל ברציפות לפני ואחרי אירוע דלקתי.

מדידת שינויים במגע רגישות בכף הרגל האחורית של עכברים באמצעות מנגנון אלקטרוני פון פריי

תגובות אלרגיות, המתאפיינות בהפעלת תאי מאסט ובזופילים, מונעות על ידי הקישור הצולב של IgE והשחרור של מתווכים מעודדי דלקת. הערכה כמותית של תגובות אלרגיות יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בצבע כחול אוונס לעקוב אחר שינויים בחדירות כלי דם לאחר אתגר אלרגן.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

המתואר הוא הכנת חלקיקים liposomal antigenic והשימוש שלהם עירור תאי B הפעלה במבחנה וב -vivo. תגובות נוגדנים חזקים ועקביים הוביל את הפיתוח של מודל חדש של אלרגיה לבוטנים. הפרוטוקול עבור יצירת ליפוזומים antigenic ניתן להרחיב אנטיגנים שונים ומודלים חיסונים.

ליפוזומים antigenic לדור של נוגדנים מחלות ספציפיות

מאמר זה מציג פרוטוקול לגילוי סרום ספציפי אימונוגלובולין E עם מערכת chemiluminescence המבוסס על מחסנית microfluidic והערכת תועלתו באיבחונים אלרגיה.

יישום של טכנולוגיה Microfluidic ביו-שבב על סרום לזהות אלרגן ספציפיים אימונוגלובולין E (sIgE)

מבחן ההפעלה הבזופילי הוא מבחן אבחון משלים במבחנה להערכת תגובות אלרגיות בתיווך IgE המבוסס על זיהוי הפעלת בזופיל בנוכחות גירוי מסוים באמצעות מדידת סמני הפעלה על ידי ציטומטריה של זרימה.

בדיקת הפעלת בזופיל לאבחון אלרגיה

עכברים וחולדות מושתלים בניתוח במשדרי טמפרטורה מרוחקים ולאחר מכן מורגלים לסביבת הבדיקה ולהליך. שינויים בטמפרטורת השרירים נמדדים בתגובה לגירויים פרמקולוגיים או קונטקסטואליים בכלוב הביתי או במהלך פעילות גופנית שנקבעה (כלומר, הליכה על הליכון במהירות קבועה).

מדידת תרמוגנזה של שרירי השלד בעכברים ובחולדות

כאן אנו מציגים פרוטוקול למדידת פעילות רקמת השומן החום לאחר ארוחה בבני אדם ובחיות מעבדה.

תרמוגרפיה אינפרא אדומה לאיתור שינויים בפעילות רקמת השומן החומה

למד מדידת טמפרטורת גוף בעכברים באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתי פסיבי ואלרגיה למזון. שיטה זו מאפשרת מחקר בלתי פולשני ומדויק ללא הרדמה.

מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון

גלה סרטונים נוספים