גבוהות בתוספת מבוך מבחן משולב עם וידאו מעקב תוכנה כדי לחקור את האפקט נוגד חרדה של תוספי תזונה קטוגנית אקסוגני

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקור שינויים ברמת החרדה של מודלים בעלי חיים מכרסם. מוגברות וגם מבוך במבחן (EPM), המשמש יחד עם וידאו מעקב תוכנה, מספק שיטה אמינה לתעד את ההשפעה של טיפולים שונים נוגד חרדה פוטנציאליים בתרחישים מעבדה פרה.

מבוך פלוס מוגבה היא שיטה לתעד את ההשפעה של טיפולים שונים שעלולים להיות אקסיוליטיים על מודלים מכרסמים במעבדה בצורה אנושית יותר בהשוואה לשיטות אחרות. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא המסתמך על נטייתו האינסטינקטיבית של המכרסם הן לחללים חשוכים והן לחללים סגורים, בנוסף לפחד הבלתי מותנה מגבהים והימנעות ממרחבים פתוחים. קולין פארק, משתף פעולה מהמעבדה שלי, יעזור להדגים את ההליך.

מספר ימים לפני הבדיקה, לטפל בבעלי החיים על ידי לקטוף אותם על ידי פלג הגוף העליון שלהם מחזיק אותם לרגע כדי להתאקלם לנסיין. לאחר מכן, למדוד את משקל הגוף של בעלי החיים לפני תחילת כל טיפולים כדי לקבוע את חישוב המינון לטיפול. לאחר מכן, היכרות עם בעלי החיים לשיטת gavage intragastric באמצעות מים על ידי gavage במשך חמישה ימים לפני תוספי קטון.

לצורך חרדה, השתמש במבוך פלוס מוגבה או מנגנון EPM, מנגנון בצורת פלוס עם ארבע זרועות עם שתיים פתוחות ושתיים סגורות. האר את מנגנון EPM באמצעות תאורה עקיפה מהתקרה במקום להאיר אותו ישירות. ודא שכל ארבע הזרועות מוארות באופן דומה.

חבר את מפתח ההתקנה של תוכנת המעקב אחר תנועה ליציאת USB 2.0 והתקן את התוכנה. לאחר מכן, לתקן את המצלמה מעל אזור הניסוי, ולהבטיח שזה יישאר ללא תנועה למשך הניסוי. לבסוף, הגדר ניסוי חדש במערכת התוכנה למעקב אחר תנועה באמצעות מדריך ההוראות.

שים את החיה באזור הניסוי. לאחר מכן, התחל את תהליך רכישת הנתונים על-ידי לחיצה על לחצן 'התחל' בלוח הבקרה של השעה. בחדר הבדיקות אוספים את נתוני ה- EPM בשתי דרכים, באופן ידני ובשימוש בתוכנה.

הצופים העיוורים מופרדים על ידי וילון. המתן עד ל- ene של הקלטת תהליך המעקב או לחץ על לחצן העצור בלוח הבקרה של הזמן. לאחר מכן, הסר את החיה מאזור הניסוי.

לבסוף, כדי לגשת לכלי הניתוח לחץ על לחצן הניתוח בסרגל מסייע הניסויים. בחר גירסאות ניסויים ומרווחי זמן כדי לנתח ולהפיק דוח. התחל בהעברת החולדות בכלוב הביתי שלהן לחדר הניסויים 30 דקות לפני תחילת הניסוי.

מניחים חולדה בצומת של ארבע הזרועות של ה-EPM מול הזרוע הפתוחה מול הניסוי. הפעל את תוכנת מעקב וידאו, כמו גם להקליט באופן ידני את ההתנהגות של החיה במשך חמש דקות. לאחר מכן, אם החיה נופלת מה- EPM, להרים אותו ולמקום אותו בחזרה על אותה נקודה של EPM שבו הוא נפל.

אל תכלול בניתוח את הנתונים ההתנהגותיים של בעל חיים זה. בתום הבדיקה בת חמש הדקות, עצרו את תוכנת המעקב אחר וידאו. מוציאים את החיה מה-EPM, ומ מניחים אותה בחזרה בכלוב הביתי שלה.

לבסוף, לנקות את ה-EPM עם חומר ניקוי חיטוי ואחריו מי ברז. יבש את המנגנון במגבות נייר. לאחר האכלה כרונית, חולדות בקבוצת KSMCT בילו באופן משמעותי יותר זמן בזרועות הפתוחות בהשוואה לקבוצת הביקורת.

קבוצת KS בילתה זמן רב יותר באופן משמעותי במרכז בהשוואה לקבוצת הביקורת. ופחות זמן מושקע בזרועות סגורות בקבוצות LKE, KSS, KSMCT בהשוואה לשליטה. חולדות בקבוצות KSS ו- KSMCT נסעו מרחקים ארוכים יותר באופן משמעותי בזרועות הפתוחות.

בעוד החולדות בקבוצות LKE, KS ו- KSMCT הראו באופן משמעותי פחות מרחק שנסעו בזרועות הסגורות בהשוואה לקבוצת הביקורת. יתר על כן, לאחר שבעה ימים של gavage אוראלי הזמן בילה בזרועות הפתוחות היה גדול יותר בקבוצת KE אבל ירד במרכז עבור KE, KS, ו KSMCT קבוצות. גם מספר הכניסות לזרועות הסגורות היה נמוך משמעותית לאחר שבעה ימי ניהול בקבוצות KE ו-KS.

חשוב מאוד למקם את כל החולדות על הציוד באונור עקבי בצומת הפונה הרחק מהנסיין. הסתערות EPM על מכרסמים היא שיטה מתאימה ורגישה לחקור את ההשפעה של טיפולים שונים המשפיעים על אזורי המוח המעורבים באפקט האקסיוליטי ובמנגנוני הפעולה.