Name: ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט Erythroid אבות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 46 s
Description: למד תכנות ישיר של שושלת מפיברובלסטים של עכברים לתאי אב אריתרואידיים. שיטה זו מאפשרת מניפולציה של גורמי שעתוק לחקר גורל תאים אריתרואידיים וייצור תאי דם אדומים מחוץ לגוף.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים אוולין וואנג והייד גרגורי (מכון וייטהד, Cambridge, MA) על שיבוט, הארווי Lodish (מכון וייטהד) למתן רבים פלסמידים משמש ליצירת ספריית retroviral. אנו מודים Kavitha Siva, סופי Singbrant (המחלקה לרפואה מולקולרית, ריפוי גנטי, אוניברסיטת לונד), גוראן קרלסון, סאנג'י שמיט (המחלקה להמטולוגיה מולקולארית, אוניברסיטת לונד) על תפקידיהם בתיאור של ייצור iEP. אנחנו רוצים גם להכיר ולהודות ג'וליאן Pulecio (מרכז של רפואה רגנרטיבית, ברצלונה פארק מחקר ביו-רפואית), ויולטה זהורית-אסטרדה (רוקפלר אוניברסיטה, ניו יורק), קארל Walkley (המכון למחקר רפואי סנט וינסנט, מחלקת רפואה, בית החולים סנט וינסנט, אוניברסיטת מלבורן), רעיה אנחל (קטלאנית במוסד לחולי ומחקר ללימודים מתקדמים, ברצלונה), ענבר G. עמי הולצמן (מכון רחבה של מכון מסצ'וסטס של טכנולוגיה, הרווארד, קיימברידג ) על תרומתם קודמת לעבודה זו. עבודה זו נתמכה על ידי קרן Söderberg רגנר (כדי ג'יי); מחקר שוודי המועצה (כדי ג'יי); Stiftelsen Olle Engkvist Byggmästare (כדי ג'יי); העמותה השבדית לחקר אסטרטגי (כדי ג'יי); הקרן של אקא Wiberg (כדי ג'יי); מענק אינטגרציה מארי קירי (כדי ג'יי).

1. הקמה ותחזוקה של זנב העכבר הראשי עצה פיברובלסט תרבויות
<ol><li>להכין מאכלים מצופים ג'לטין (ממליץ על צלחת 10 ס מ עבור אחד זנב) על ידי ציפוי המשטח 0.1% ג'לטין המקננת המנות למשך כ 20 דקות ב 37 º C. האחות הפתרון ג'לטין מתוך קערה ולאפשר לו להתייבש במשך שעתיים לפחות.</li>
	<li>המתת חסד העכברים מאת נקע בצוואר הרחם. להסיר את הזנב עם מספריים, חיתוך בבסיס הזנב. שים את הזנב ב- saline פוספט באגירה של Dulbecco (DPBS) עם 2% סרום שור עוברית (FBS) עד מוכן לשימוש. הערה: לקבלת תוצאות מיטביות, זנבות צריך לקחת מן העכברים בסביבות גיל 6 עד 8 שבועות. ניתן לקחת מלוגנו עכברים שגילן עולה על 8 שבועות של גיל, עם זאת, כמו עידן עכברים, את יכולת התפשטות fibroblasts ואת היעילות של התכנות ירידה11זנבות.</li>
	<li>ביצוע כל השלבים הבאים של פרוטוקול זה ברדס תרביות רקמה בתנאים סטריליים. להכין פתרון טריפסין מדוללת של 0.02% טריפסין-EDTA ב DPBS ולהוסיף 5 מ"ל לתוך צלחת נייר 10 ס מ.</li>
	<li>לשטוף את הזנב, תחילה ב-70% אתנול, ולאחר מכן ב- DPBS. בקערה, מניחים את הזנב שטוח ולהשתמש מלקחיים שיצמיד אותו למקום. לעשות חתך על הזנב לאורך ציר האורך מהבסיס לקצה.</li>
	<li>לתפוס את הזנב עם זוג מלקחיים והחזק אותו אנכית. באמצעות זוג מלקחיים השני, אחיזה על העור לצד החתך בבסיס של הזנב, לקלף אותו. לעשות זאת משני צידי החתך עד העור יכול לקלף ומשיכה כלפי מטה לכיוון קצה הזנב.</li>
	<li>החזק את הזנב קלופים עם מלקחיים מעל המנה המכיל את הפתרון טריפסין, לחתוך את הזנב לחתיכות כ 1 ס מ ארוך. את החתיכות הזנב בפתרון טריפסין, להשתמש במספריים קטע את החלקים לחתיכות קטנות יותר. דגירה החלקים הזנב בפתרון טריפסין ב 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. הערה: קטן יותר החלקים המועדפות כדי לספק כל חתיכה פני שטח גבוהה יחס נפח.</li>
	<li>להרוות את טריפסין באמצעות 2 כרכים של פיברובלסט הרחבה (את פליקס) בינונית (high-גלוקוז Dulbecco ששינה נשר בינוני (DMEM) עם 15% FBS, 2 מ מגלוטמין, חומצות אמינו שאינן הכרחיות (NEAA), 100 U/mL פניצילין/סטרפטומיצין).</li>
	<li>לאסוף את כל התוכן של המנה לתוך שפופרת 50 מ ל צנטריפוגה ב × 350 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. וארוקן את תגובת שיקוע, resuspend השברים הזנב ב 10 מ"ל של מדיום את פליקס טריים.</li>
	<li>להעביר חלקים הזנב בינוני מאכל מצופה ג'לטין, דגירה-37 מעלות צלזיוס ב 5% CO2 ו- 4% O2, הוספת בינוני את פליקס טריים כל יומיים. הערה: לאחר חמישה עד שבעה ימים, הזנב שברי שיש המצורפת בתחתית של המנה, fibroblasts ניתן לראות מתרחק מהם.</li>
	<li>ברגע אשכולות של fibroblasts הם הבחינו, לנער בעדינות את המנה כדי לסלק את הזנב חתיכות וארוקן את המדיום ואת כל שברי עצם עוזב את fibroblasts מחובר לצלחת. הוסף חדש בינוני את פליקס, תרבות של fibroblasts עד confluent.</li>
	<li>כדי להבטיח שום זיהום fibroblasts על ידי אבות hematopoietic, לבטל את התאים מהצלחת באמצעות טריפסין x 1-EDTA עבור 5 דקות ולאסוף את התאים. לרוקן עבור תאים המבטאים סמנים hematopoietic (CD117, CD5, CD45R (B220), CD11b, אנטי-Gr-1 (Ly-6G/ג), 7-4, וטר-119) באמצעות מערכת הפרדה מגנטית10.</li>
</ol>2. הרטרווירוס הפקה
<ol><li>זרע אריזה retroviral תאים על 2.5 × 104 תאים/cm2 (2.0 × 106 תאים עבור תבשיל 10 ס מ) צלחת שטופלו תרביות רקמה (על-ידי ואקום-גז פלסמה) ותרבות לילה ב- high-גלוקוז DMEM עם 10% FBS, 10 מ מ נתרן פירובט, 100 U/mL פניצילין/סטרפטומיצין-CO 37 ° C ו-5%2.</li>
	<li>למחרת בבוקר, לשנות את המדיום DMEM עם תוספים לא באמצעות לחצי מנפח נהגה תרבות בין לילה (5 מ"ל על צלחת 10 ס מ). אחר הצהריים, בדוק התאים הם 70-80% confluent להתחיל על תרביות תאים.</li>
	<li>עבור כל גורם התיכנות, Gata1, Tal1, Lmo2, ו- c-Myc, להכין תערובת 2:1 של הביטוי וקטור (pMX), המסייע וקטור (המכיל גנים איסור פרסום ו pol). תבשיל 10 ס מ של fibroblasts, לשימוש µg 6 של הביטוי וקטור ו- 3 µg של המסייע וקטור בנפח סופי של 100 µL DMEM בינוני.</li>
	<li>עבור כל גורם התיכנות, להכין µL 300 בטמפרטורת החדר (RT) DMEM בשפופרת פוליסטירן סטרילי ולהוסיף בזהירות µL 27 של ריאגנט תקנים מסחרי. הערה: הכימית תרביות תאים מוטב שינתן RT לפני השימוש, יש להוסיף ישירות לתוך המדיום כמו המאפיינים אלקטרוסטטית של המתחם יכול לעשות את זה להיצמד לקיר פלסטיק של הצינור.</li>
	<li>להוסיף את תערובת פלסמיד לתוך תרביות תאים המכילים ריאגנט הצינורית, מערבולת בקצרה, דגירה התערובת ריאגנט-DNA תרביות תאים למשך 15 דקות ב- RT. בקצרה מערבולת התערובת ולהוסיף אותו dropwise התאים retroviral אריזה כך תרביות תאים מיקס ריאגנט-DNA אחיד מורחים את התרבות, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.</li>
	<li>24 שעות לאחר תרביות תאים, לשנות את המדיום DMEM עם 20% FBS ו פניצילין U/mL 100/סטרפטומיצין.... 48 שעות לאחר תרביות תאים, לאסוף את תגובת שיקוע ולסנן אותו דרך מסנן גודל הנקבוביות מזרק 0.22 מיקרומטר. הערה: supernatants ויראלי יכול להיות קפוא-80 מעלות, נשמרים עד נדרש, למרות התמרה חושית יעילה יותר אם תגובת שיקוע ויראלי טרי משמש.</li>
</ol>3. התמרה חושית GTLM ו- iEP קציר
<ol><li>זרע הזנב עצה fibroblasts-1 × 104 תאים/cm2 ב- 0.1% ג'לטין מצופה מראש מנות במדיום את פליקס, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה.</li>
	<li>למחרת, להכין תערובת התמרה חושית כדלקמן.<ol>
<li>להוסיף נפח 1 של תגובת שיקוע נגיפי עבור כל גורם התיכנות בתוספת 4 µg/mL של זיהום retroviral ריאגנט (40%) 6 כרכים של פליקס בינונית (60%).</li>
		<li>תבשיל 10 ס מ של fibroblasts, הוסיפו 1 מ"ל של כל תגובת שיקוע ויראלי (וירוסים × 4 = 4 מ"ל) בתוספת 4 µg/mL של זיהום retroviral ריאגנט 6 מ של בינוני את פליקס, נותן סך של 10 מ"ל התמרה חושית תערובת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>וארוקן את פליקס בינוני מתרבות פיברובלסט ולהחליף אותו עם התערובת התמרה חושית. דגירה של התמרה חושית במשך 4 שעות ב 37 מעלות צלזיוס בתנאים ובשפתיים (5% CO2 ו- 4% O2).</li>
	<li>וארוקן את התערובת התמרה חושית ולהחליפו בינוני התיכנות טריים (ללא סרום הרחבה בינונית (SFEM), 100 U/mLPenicillin/סטרפטומיצין, 100 ננוגרם למ"ל תאי גזע מאתר פקטור (mSCF), 10 ננוגרם למ"ל מאתר אינטרלוקין-3 (IL3), 2 רקומביננטי האנושי U/mL אריתרופויאטין (hrEPO), ו- 100 ננומטר דקסאמתאזון).</li>
	<li>תקופת דגירה של יופי 8 37 מעלות צלזיוס בתנאים שתקבעו, הוספת בינוני התיכנות טריים כל יומיים. אחרי חמש-שמונה ימים, התכנות מוצלחת תניב אשכולות של תאים יש תלושים מהצלחת.</li>
	<li>כדי לאסוף מחדש תאים עבור ניתוח, בעדינות פיפטה למעלה ולמטה כדי לקצור אותם ישירות מתוך קערה. הקציר fibroblasts untransduced להשוואה, לנתק את התאים מהצלחת באמצעות טריפסין x 1-EDTA ולאסוף.</li>
</ol>

<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+We+Really+Vastly+Outnumbered%3F+Revisiting+the+Ratio+of+Bacterial+to+Host+Cells+in+Humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Are We Really Vastly Outnumbered? Revisiting the Ratio of Bacterial to Host Cells in Humans.</a> Cell. 164 (3), 337-340 (2016).</li>
<li>Lujan, E., Chanda, S., Ahlenius, H., Sudhof, T. C., Wernig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+conversion+of+mouse+fibroblasts+to+self-renewing%2C+tripotent+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Direct conversion of mouse fibroblasts to self-renewing, tripotent neural precursor cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (7), 2527-2532 (2012).</li>
<li>Szabo, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21057492">Direct conversion of human fibroblasts to multilineage blood progenitors.</a> Nature. 468 (7323), 521-526 (2010).</li>
<li>Pereira, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+a+hemogenic+program+in+mouse+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of a hemogenic program in mouse fibroblasts.</a> Cell Stem Cell. 13 (2), 205-218 (2013).</li>
<li>Batta, K., Florkowska, M., Kouskoff, V., Lacaud, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+reprogramming+of+murine+fibroblasts+to+hematopoietic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct reprogramming of murine fibroblasts to hematopoietic progenitor cells.</a> Cell Reports. 9 (5), 1871-1884 (2014).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+fibroblasts+into+bipotential+hepatic+stem+cells+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Reprogramming fibroblasts into bipotential hepatic stem cells by defined factors.</a> Cell Stem Cell. 13 (3), 328-340 (2013).</li>
<li>Hendry, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+transcriptional+reprogramming+of+adult+cells+to+embryonic+nephron+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Direct transcriptional reprogramming of adult cells to embryonic nephron progenitors.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 24 (9), 1424-1434 (2013).</li>
<li>Vierbuchen, T., Wernig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+lineage+conversions%3A+unnatural+but+useful%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Direct lineage conversions: unnatural but useful.</a> Nature Biotechnology. 29 (10), 892-907 (2011).</li>
<li>Capellera-Garcia, S., Flygare, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+lineage+reprogramming%3A+a+useful+addition+to+the+blood+cell+research+toolbox%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Hematology%22%5BJournal%5D)">Direct lineage reprogramming: a useful addition to the blood cell research toolbox.</a> Expert Review of Hematology. 10 (2), 107-109 (2017).</li>
<li>Capellera-Garcia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+Minimal+Factors+Required+for+Erythropoiesis+through+Direct+Lineage+Conversion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Defining the Minimal Factors Required for Erythropoiesis through Direct Lineage Conversion.</a> Cell Reports. 15 (11), 2550-2562 (2016).</li>
<li>Mahmoudi, S., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+reprogramming%3A+a+two-way+street%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinions+in+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Aging and reprogramming: a two-way street.</a> Current Opinions in Cellular Biology. 24 (6), 744-756 (2012).</li>
<li>Singbrant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+couples+erythropoiesis%2C+B-lymphopoiesis%2C+and+bone+homeostasis+within+the+bone+marrow+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin couples erythropoiesis, B-lymphopoiesis, and bone homeostasis within the bone marrow microenvironment.</a> Blood. 117 (21), 5631-5642 (2011).</li>
<li>Heinrich, A. C., Pelanda, R., Klingmuller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+visualization+and+conditional+mutations+in+the+erythroid+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A mouse model for visualization and conditional mutations in the erythroid lineage.</a> Blood. 104 (3), 659-666 (2004).</li>
<li>Gautier, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-expression+profiles+and+transcriptional+regulatory+pathways+that+underlie+the+identity+and+diversity+of+mouse+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages.</a> Nature Immunology. 13 (11), 1118-1128 (2012).</li>
<li>Psaila, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiling+of+human+megakaryocyte-erythroid+progenitors+identifies+distinct+megakaryocyte+and+erythroid+differentiation+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiling of human megakaryocyte-erythroid progenitors identifies distinct megakaryocyte and erythroid differentiation pathways.</a> Genome Biology. 17 (1), 83(2016).</li>
<li>Pulecio, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+Conversion+of+Fibroblasts+to+Megakaryocyte+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct Conversion of Fibroblasts to Megakaryocyte Progenitors.</a> Cell Reports. 17 (3), 671-683 (2016).</li>
<li>Kurita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+immortalized+human+erythroid+progenitor+cell+lines+able+to+produce+enucleated+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Establishment of immortalized human erythroid progenitor cell lines able to produce enucleated red blood cells.</a> PLoS One. 8 (3), 59890(2013).</li>
</ol>

המחברים יש שאין ניגודי אינטרסים לדווח.

ביטוי של קוקטייל ארבע-factor, GATA1, TAL1, LMO2, ו- c-MYC (GTLM), מספיקה לתכנת fibroblasts מאתר ואנושי ישירות אל iEPs10. התאים היו erythroid דמה מאוד בונה פיד ה אבות erythroid במונחים של מורפולוגיה, פנוטיפ, ביטוי גנים ויכולת המושבה יוצרי. ממצא זה אם יאשר הרציונל של שימוש ישיר התכנות ככלי להגדרת גורמים התפתחותיים ב- hematopoiesis. כדי לתמוך את תוקפו של שיטה זו, iEPs גם ניתן להפיק באמצעו...

תאי דם אדומים (RBCs) חיוניים כל החולייתנים ותשלימו 84% של כל התאים של הגוף האנושי1 מעובריים לחיים הבוגרים, הבריאות שלנו תלויה מאוד מדויק ההסדרה של RBC הומאוסטזיס. ייצור שוטף של בוגר RBCs במהלך פיתוח לבגרות מכונה אריתרופויזה. האתגר העיקרי במחקר אריתרופויזה הוא להגדיר הרגולטורים מאסטר זה שננהל את התפתחות RBC והבורר בין אריתרופויזה פרימיטיביים ומוחלטת. השושלת ישירה התכנות של אבות erythroid מהווה הזדמנות להבין עוד יותר erythroid פיתוח בתוך vivo.
השושלת ישירה התכנות (DLR), הידוע גם בשם transdifferentiation, הוא התהליך של התכנות סוג תא אחד ישירות לתוך אחר, תוך עקיפת pluripotent ושלבים קדמון multipotent. DLR שימש עד כה כדי לייצר סוגי תאים רבים כולל עצבית2,4,hematopoietic3,5, הכבד6 נפרוטית7, ובתאים. עבור ביולוגים התפתחותיים, DLR הפך כלי חשוב חוקר היבטים של שושלת היוחסין ומחויבות התמיינות סופנית תהליכים8,9. DLR ניתן להשלים ולהחליף חלקית ויוו ללימודי הבנה מנגנונים של גורל לקביעת גורמים במהלך הפיתוח. פרוטוקול DLR עבור התכנות אבות erythroid המתואר במאמר זה מספק השדה שיטה ללא תשלום עבור מחקרים התפתחותיים של אריתרופויזה.
בעבר הראו כי ביטוי קוקטייל ארבע-factor, GATA1, TAL1, LMO2, ו- c-MYC (GTLM), מספיקה לתכנת fibroblasts מאתר והן אנושיים ישירות אל erythroid המושרה אבות (iEPs) 10. erythroid היו GTLM תאים דומים במידה רבה bona פיד ה אבות erythroid פרימיטיבית במובן של ביטוי של מורפולוגיה, פנוטיפ, ג'ין-10. לפיכך iEPs מוגבלת יכולת התפשטות, התבגרת. דומים לאלו transiently מיוצר העובר מוקדם לפני התחלתה של אריתרופויזה סופית nucleated אריתרוציטים. על-ידי ביצוע שינויים בתנאים התיכנות (למשל, נקודת מוטציות בגן התכנות גורמים או גורמים אחרים), אפשר להבין איך זה יוביל לשינויים erythroid פיתוח ובידול. אנחנו למשל הראו כי תוספת של Klf1 או Myb GTLM במסיבת הקוקטייל משתנה התבנית ביטוי גלובין בעיקר עובריים (פרימיטיבי) כדי בעיקר למבוגרים (סופית). ממצא זה מאשר את החוקיות של השימוש DLR ככלי להגדרת גורמים התפתחותיים ב אריתרופויזה.
כאן, אנחנו חלוקה לרמות את התהליך של יצירת iEPs של עכבר זנב עצה fibroblasts (TTF). התוצאות נציג שלנו, ביצענו את התכנות על fibroblasts מן העכברים שושלת היוחסין-עקיבה erythroid (Epor- Cre R26- eYFP) אשר אקספרס החלבון הניאון צהוב (eYFP) של לוקוס Rosa26 כל התאים את זה הביעו את הקולטן אריתרופויאטין, המאפשר ויזואליזציה קל של מחויבות השושלת erythroid. באמצעות שיטה זו, YFP חיובי (EpoR +) תאים נוכחים מוקדם ככל חמישה ימים לאחר התמרה חושית. פרוטוקול זה, מציע לכן, טכניקה חזקה ומהירה לדור של erythroid אבות במבחנה.

<table><tbody><tr><td>DMEM ללא נתרן פירובט</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30022.01</td><td>אמצעי תרבית לתאי PhGP</td></tr><tr><td>DMEM עם נתרן פירובט</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30243.01</td><td>אמצעי תרבית לפיברובלסטים בקצה הזנב</td></tr><tr><td>StemSpan Serum Free Expansion Media (SFEM)</td><td>טכנולוגיות תאי גזע</td><td>9650</td><td>מדיית תכנות מחדש&nbsp;</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי HyClone</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30071.03HI</td><td>גורם גדילה</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין HyClone (100x)</td><td>GE Life Sciences</td><td>SV30010</td> חומצות אמינו <td>אנטיבויוטיות</td></tr><tr><td>לא חיוניות (100x)</td><td>Thermo Fisher</td><td>11140050</td><td>SNL Media מסופקת עם</td></tr><tr><td>חומר דיסוציאציה</td> תאים זה של<td>Trypsin HyClone (1x)</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30042.01</td></tr><tr><td>פקטור תאי גזע של עכברים (mSCF)</td><td>פרוטק</td><td>250-03</td><td>נוסף לתכנות מחדש</td></tr><tr><td>של מדיה רקומביננטית עכברית Il-3</td><td>פפרוטק</td><td>213-13</td><td>נוסף לתכנות מחדש של מדיה</td></tr><tr><td>אריתרופוייטין אנושי רקומביננטי (hrEPO)</td><td>פפרוטק</td><td>100-64</td><td>נוסף לתכנות מחדש של מדיה</td></tr><tr><td>דקסמתזון</td><td>סיגמא</td><td>50-02-2&nbsp; &nbsp;</td><td>נוסף לתכנות מחדש של מדיה</td></tr><tr><td>ג'לטין מעור חזיר</td><td>סיגמא</td><td>9000-70-8&nbsp;</td><td>מפורק ב- dH2O ומשמש לציפוי צלחות. יש לוודא סטריליות לפני השימוש.</td></tr><tr><td>Blasticidin S hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>3/9/3513</td><td>אנטיביוטיקה לבחירה. משפיע הן על תאים פרו-והן על תאים אוקריוטיים</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td><td>Ge Life Sciences</td><td>SH30850.03</td><td>משמש לשלבי כביסה</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Merck</td><td>TR-1003-G</td><td>זיהום / טרנספקציה&nbsp; מגיב</td></tr><tr><td>FuGENE HD Transfection Reagent</td><td>Promega</td><td>E2311</td><td>מגיב טרנספקציה לקו תאים PhGP</td></tr><tr><td>Millex-GP יחידת מסנן מזרק 0.22 ומיקרו; m</td><td>Merck</td><td>SLGP033RS</td><td>משמש לסינון וירוסים סופרנטנט</td></tr><tr><td>BD אמרלד מזרק היפודרמי</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>מק"ט: 307736</td><td>משמש לסינון וירוס סופרנטנט</td></tr><tr><td>100 מ"מ צלחת תרבית</td><td>קורנינג</td><td>430167</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>צלחת 6 בארות</td><td>פלקון</td><td>10799541</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>תכשיטן מלקחיים #5</td><td>Sklar</td><td>66-7642</td><td>משמש ל טיפול בשברי זנב קטנים</td></tr><tr><td>מספריים איריס Sklarlite</td><td>Sklar</td><td>23-1149</td><td>משמש לחיתוך הזנב לחתיכות קטנות</td></tr><tr><td>ערכת דלדול תאים שושלת, עכבר</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-858</td><td>לדלדול תאים המטופויאטיים בתרביות פיברובלסטים</td></tr><tr><td>CD117 MicroBeads, עכבר</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-224</td><td>לדלדול תאים המטופויאטיים בתרביות</td></tr> <tr><td>פיברובלסטיםתאי PheonixGP</td><td>ATCC</td><td>CRL-3215</td><td>קו תאי אריזה רטרו-ויראלי</td></tr><tr><td>וקטור EcoPAC (pCL-Eco)&nbsp;</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP2-29540</td><td>וקטור עוזר רטרו-ויראלי המכיל גנים gag ו-pol</td></tr><tr><td>pMX-Gata1</td><td>משובט במעבדה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMX-Tal1</td><td>משובט במעבדה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMX-Lmo2</td><td>משובט במעבדה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pMX-cMyc</td><td>משובט במעבדה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת CellSens Standard 1.6&nbsp;</td><td></td><td></td><td>תוכנה לניתוח ציטוספין</td></tr></tbody></table>

ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט erythroid אבות

Direct Lineage Reprogramming of Adult Mouse Fibroblast to Erythroid Progenitors

Erythroid תא מחויבות ובידול המשך ההפעלה של שושלת היוחסין מוגבלת לרשת תעתיק בניצוחו של קבוצה של גורל קביעת והתבגרותו גורמים. קודם לכן יצאנו כדי להגדיר את ערכת מינימלי של הגורמים הדרושים להדרכת התפתחות תאי הדם האדומים באמצעות ישיר לשושלת התכנות של fibroblasts לתוך erythroid המושרה אבות/מבשרי (iEPs). הראנו את ביטוי של Gata1, Tal1, Lmo2ו- c-Myc (GTLM) יכול במהירות להמיר מאתר ואנושי fibroblasts ישירות אל iEPs הדומים פיד ה בונה תאים erythroid במונחים של מורפולוגיה, פנוטיפ, ביטוי גנים. בכוונתנו כי iEPs יספק כלי יקר ערך ללמוד אריתרופויזה ותא תקנה הגורל. כאן נתאר את תהליך stepwise המרת fibroblasts קצה הזנב מאתר iEPs דרך שעתוק מונחה גורם ישיר לשושלת התכנות (DLR). בדוגמה זו, אנו מבצעים את התכנות ב fibroblasts מן השושלת-עקיבה erythroid עכברים המבטאים החלבון הניאון צהוב (YFP) תחת השליטה של אריתרופויאטין קולטן ג'ין (EpoR) המקדם, המאפשר ויזואליזציה של תא erythroid אינדוקציה הגורל על התכנות. בעקבות פרוטוקול זה, שניתן לתכנת fibroblasts לתוך iEPs בתוך חמש עד שמונה ימים.
אמנם עדיין ניתן לבצע שיפורים לתהליך, אנו מראים כי בתיווך GTLM התכנות הוא תהליך מהיר וישיר, מניב תאים בעלי מאפיינים של פיד ה bona קדמון erythroid ותאי מבשר.

כאן אנו מציגים עבור הייצור של iEPs מ fibroblasts למבוגרים באמצעות שעתוק מקדם מונחה-DLR פרוטוקול לשחזור. נוכל להעריך את התא התכנות באמצעות cytometry זרימה, המושבה יוצרי מבחני ג'ין ביטוי ניתוח. על מנת לסייע החזיית ההמרה לגורל erythroid, ביצענו את התכנות על fibroblasts מן העכברים שושלת היוחסין-עקיבה erythroid (Epor- Cre R26- eYFP) אשר מבטאים את החלבון הניאון צהוב (eYFP) מתוך מיקומה Rosa26 בתאים כל המבטאים את הקולטן אריתרופויאטין (Epor, Cre והגיון אלל אחד ש...

כאן אנו מציגים שלנו פרוטוקול עבור הפקת המושרה אבות erythroid (iEPs) מן העכבר fibroblasts למבוגרים באמצעות מונחי-פקטור שעתוק ישיר לשושלת התכנות (DLR).

ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט Erythroid אבות

Erythroid cell commitment and differentiation proceed through activation of a lineage-restricted transcriptional network orchestrated by a group of cell ...

תכנות מחדש של שושלת היוחסין מתאי פיברובלסט לתאי אב אריתרויד. זוהי שיטה חדשה שפיתחנו במעבדה שלנו כדי לחקור טוב יותר את התהליכים של ויסות שעתוק הקובע גורל תא אריתרופיד. היתרון העיקרי בשימוש בתכנות מחדש של שושלת ישרה כדי ללמוד פיתוח הוא שזו טכניקה פשוטה מאוד.אז בהשוואה, למשל, אובדן של מחקרים פונקציה בתוך עכברים נוקאאוט, כאן אנחנו יכולים בקלות רבה לתפעל את הגורם, לבטא אותו יתר על כן בנקודת זמן מסוימת, ולאחר מכן בקלות לקבל מספיק חומר כדי ללמוד השפעות במורד הזרם כגון שינויים כרומטין או שינויים ביטוי גנים. בעוד שיטה זו מתמקדת בתכנות מחדש של פיברובלסטים קצה הזנב של העכבר לאבות אריתרואידים, ניתן להחיל אותה גם על סוגי תאים פיברובלסטים אחרים, ועל אורגניזמים אחרים כולל בני אדם. ההשלכות של טכניקה זו להרחיב לכיוון רפואת עירוי גם כי זה סולל את הדרך לייצור של תאי דם אדומים במבחנה.הדגמת ההליך תהיה אלבן ג'והנסון מקיום המחקר שלי. התחל על ידי כיסוי פני השטח של הכלים עם 0.1% ג'לטין. דגירה אותם ב 37 מעלות צלזיוס במשך כ 20 דקות.שאף את תוסף הג'לטין ואפשר למנות להתייבש. השתמש במספריים כדי לחתוך בבסיס הזנב של עכבר המתת סנפיר כדי להסיר אותו. הנח את הזנב ב- DPBS עם 2%FBS עד שהוא מוכן לשימוש.במכסה המנוע של תרמת הרקמה בתנאים סטריליים, הכינו פתרון טריפסין מדולל של 0.02% טריפסין EDTA ב-DPBS והוסיפו 5 מיליליטר לצלחת לא צותתה של 10 ס"מ. במכסה המנוע של תרבות הרקמות, לשטוף את הזנב מספיק 70%אתנול בצינור 15 מיליליטר כדי לכסות אותו ולאחר מכן ב DPBS. מניחים את הזנב שטוח בצלחת ולהשתמש מדפים להחזיק אותו במקום.השתמש באזמל כדי לבצע חתך על הזנב לאורך ציר האורך שלו מהבסיס לקצה. השתמש בזוג מעצורים כדי לתפוס את הזנב ולהחזיק אותו אנכית ולהשתמש בזוג שני כדי לאחוז בעור ליד החתך בבסיס הזנב ולקלף אותו בחזרה. בצע זאת משני צידי החתך עד שניתן יהיה לקלף את העור על ידי משיכת כלפי מטה לכיוון קצה הזנב.החזק את הזנב קלוף עם מדפים מעל המנה המכילה את פתרון טריפסין. השתמש מספריים ניתוח לחתוך את הזנב לחתיכות קטנות. השתמש מספריים כדי לפצל את החלקים האלה בתווית טריפסין לחתיכות קטנות עוד יותר ולאחר מכן דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.כדי להתרווה טריפסין, להוסיף שני כרכים של מדיום FEX, DMEM עם תוספי מזון ואנטיביוטיקה. לאסוף את כל התוכן של המנה לתוך צינור 50 מיליליטר. צנטריפוגה הצינור ב 350 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס.שאף את העל-טבעי והוסף מחדש את גלולת המכילה את שברי הזנב ב-10 מיליליטר של מדיום FEX טרי. מעבירים את ההשעיה לתבשיל מצופה ג'לטין. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% פחמן דו חמצני ו 4% חמצן, הוספת מדיום FEX טרי כל יומיים.שימו לב לתרבות לאחר חמישה עד שבעה ימים, שבהם שברי הזנב מחוברים בתחתית המנה, ופיברובלסטים מתרחקים מהם. לאחר אשכולות של fibroblasts גלויים, בעדינות לנער את המנה כדי לנתק חתיכות הזנב. שאפו את המדיום עם כל שברי העצם, והשאירו את הפיברובלסטים מחוברים לצלחת.הוסף 10 מיליליטר של מדיום FEX טרי ותרבות fibroblasts עד confluent. כדי להבטיח כי אין זיהום על ידי אבי hematopoietic בתרבות fibroblast, לנתק את התאים מהצלחת באמצעות טריפסין EDTA כמתואר בכתב היד. מוסיפים מדיום ואוסף את התאים ומוסיפים חרוזים מגנטיים עם נוגדנים.השתמש במערכת הפרדה מגנטית כדי להסיר תאים המבטאים סמנים hematopoietic. הכללת שלב זה היא חיונית לחלוטין משום שהיא מבטלת את כל HSPCs שעשויים להיות נוכחים בתרבות ולכן הסבירות של כל חיובי כוזב ביום הניתוח FACS. תאי אריזה רטרו-ויראליים של זרעים בערך 25,000 תאים לס"מ מרובע על צלחת שטופלה בתרבות הרקמה.הדגירה את התאים DMEM גלוקוז גבוה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני לילה. בבוקר שלמחרת, הסר את המדיה והוסף מחצית מאמצעי האחסון המשמש לתרבות בן לילה של DMEM ללא תוספים. אחר הצהריים, לבדוק את התאים עבור 70 עד 80% confluency הנדרש עבור transfection.התחילו את ההטעה על-ידי הכנת תערובת של 2 ל-1 של שישה מיקרוגרם של ה-PMX של וקטור הביטוי ושלושה מיקרוגרם של וקטור המסייע המכיל גנים של Gag, Pol ומעטפה עבור כל גורם תכנות מחדש. לאחר מכן, עבור כל גורם תכנות מחדש, הוסף 300 מיקרוליטרים של DMEM בטמפרטורת החדר בצינור פוליסטירן סטרילי. לאחר מכן הוסיפו בזהירות 27 מיקרוליטרים של רהט מסחרי בטמפרטורת החדר ישירות לתוך המדיום כדי למנוע מגע עם קיר הצינור.מוסיפים את תערובת הפלסמיד לתוך רגנט transfection המכיל צינור. מערבולת לזמן קצר להחגירה את התערובת במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. מערבולת תערובת הדנ"א של רגנט הטרנזיקציה שוב.מוסיפים אותו dropwise לתאי האריזה רטרו-ויראלי, כך שהוא מתפשט באופן שווה על פני התרבות דגירה ב 37 מעלות צלזיוס. 24 שעות לאחר ההמרה, הסר את המדיום והוסף DMEM עם 20%FBS ו- 100 יחידות למיליליטר פניצילין סטרפטומיצין. 48 שעות לאחר ההמרה, לאסוף את supernatant ולסנן אותו דרך מסנן מזרק בגודל נקבובית 0.22 מיקרומטר.התחל את ההעתקה על ידי זריעת fibroblasts קצה הזנב ב 10, 000 תאים לסנטימטר מרובע על 0.1% ג'לטין מצופה מראש כלים במדיום FEX. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. בעת ביצוע שלב זה, חשוב להוסיף את ארבעת העל-טבעיים הרטרו-ויראליים ביחס שווה כדי להבטיח שכל ארבעת הטרנסג'נים יתרמו באופן שווה לתהליך התכנות מחדש.ביום שלמחרת, להכין תערובת transduction על ידי הוספת תחילה נפח אחד של על טבעי ויראלי עבור כל גורם תכנות מחדש בתוספת ארבעה מיקרוגרם למיליליטר של reagent זיהום רטרו-ויראלי לשישה כרכים של מדיום FEX. לאחר מכן, שאפו את מדיום ה-FEX מתרבות הפיברובלסט והוסיפו את תערובת ההעתקה. דגירה תגובת ההמרה במשך ארבע שעות ב 37 מעלות צלזיוס בתנאים היפוקסיים ב 5%פחמן דו חמצני ו 4% חמצן.לאחר ארבע שעות, שאפו את תערובת ההתמרה והוסיפו מדיום תכנות טרי. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס בתנאים היפוקסיים במשך שמונה ימים, הוספת בינוני תכנות טרי כל יומיים. שימו לב לתכנות מחדש מוצלח עם אשכולות תאים שהניבו מנותקים מהלרשת.כדי לקצור תאים מתוכנתים מחדש מהצלחת לניתוח נוסף, בעדינות pipette אותם למעלה ולמטה ולאחר מכן לאסוף את התאים. לאחר תכנות מוצלח של iEPs, תאים חיוביים YFP ניתנים לצפייה כבר חמישה ימים לאחר ההתמרה. הם הופכים עגולים, להרים מפני השטח של הלוח, להתחיל להרכיב אשכולות, ולהציג מורפולוגיה דמוית מבשר אריתרואיד.המוגלוביניזציה של תאים מסוימים ניכרת על ידי כתמי בנצידין חיוביים. שבר קטן מבטא את סמן פני השטח הספציפי לאניתרויד TER-119. ביום השמיני, ניתן לראות אשכולות גדולים וחיוביים ל-YFP.יום שמונה iEPs יש פנוטיפ אריתרויד מובחן יותר מאשר יום חמש iEPs. הם קטנים משמעותית, צברו יותר המוגלובין, ומרגנים ביטוי מוגבר של TER-119. ניתוח ביטוי גנים על ידי qPCR של iEPs שנאספו ביום שמונה מראה כי הם כמעט לסגור את הביטוי של גנים fibroblast יש upregulated גנים אריתרואידים רבים.לאחר ביצוע בדיקות BFU-e להרכבת מושבה על התאים המתוכנתים מחדש, יום שמונה iEPs יוצרים שני סוגים של מושבות, אדום מובהק ולא אדום בעליל. בעוד תאים מהמושבות האדומות הציגו מורפולוגיה אריתרובלסט, תאים מהמושבות הלא אדומות לא. בערך אחד מכל 1,000 יום חמישה iEPs יצרו מושבות אדומות בעוד רק אחד מכל 10, 000 מושבות נוצרו מהיום שמונה iEPs.יעילות תכנות מחדש של fibroblasts קצה הזנב או TTFs מושפע מספר המעבר. TTFs שעברו תשע פעמים הראו ירידה דרמטית ביכולת לייצר אשכולות של iEPs בהשוואה לתאים שעברו שלושה פעמים. יתר על כן, תנאי תרבות שונים יכולים להשפיע על היעילות של תכנות מחדש.TTFs מתומרים בתרבות נורמוקסיה הם הרבה יותר איטי לתכנת מחדש אשכולות IEP נצפו לאחר 10 ימים במקום חמישה עד שמונה ימים. לאחר הליך זה, ניתן להחיל שיטות כגון בדיקה יוצרת מושבה, ניתוח qPCR ו- FACS כדי לקבוע את מצב ההידול בין התאים. מאז התפתחותה, טכניקה זו סוללת את הדרך לחוקרים בתחום אריתרופויז בהבנת המעבר בין תאים אריתרואידיים פרימיטיביים ומוחלטים בעכבר ובאדם.

direct-lineage-reprogramming-adult-mouse-fibroblast-to-erythroid

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

וידאו זה מציג את התהליך להפקת המושרה בתאי גזע pluripotent באמצעות lentivirus ועין מתנהלת המבטאים Oct4, Sox2, c-myc ו Klf4.

יצירת iPS תאים MEFS דרך ביטוי מאולץ של סוקס-2, אוקטובר-4, c-myc, ו Klf4

אנו מציגים פרוטוקול תכנות מחדש יעיל של האדם התאים הסומטיים אל האדם המושרה בתאי גזע pluripotent (hiPSC) באמצעות וקטורים retroviral קידוד Oct3 / 4, Sox2, Klf4 ו-c-myc (OSKM) וזיהוי של hiPSC לתכנות מחדש בצורה נכונה על ידי צביעה חיה עם Tra למוצרי 1-81 נוגדנים.

בחירה בידוד מושבות של בתאי גזע pluripotent מושרה לתכנות מחדש של Fibroblasts למבוגרים

מיקוד תאי מוח תושב לשושלת תכנות מחדש ישיר מציע נקודות מבט חדשות לתיקון מוח. כאן אנו מתארים פרוטוקול של איך להכין את התרבויות מועשרים עבור pericytes מוח תושב מהמבוגר קליפת המוח האנושית ולהמיר אותם לתאי עצב הנגרמים על ידי ביטוי בתיווך רטרווירוס של שעתוק גורמי Sox2 וAscl1.

שושלת תכנות מחדש של תאי שמקורם בpericyte של המוח האנושי למבוגרים לנוירונים מושרה

ניתן לתכנת מחדש פיברובלסטים עובריים של עכבר לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים ביעילות נמוכה על ידי ביטוי מאולץ של גורמי שעתוק Oct-4, Sox-2, Klf-4, c-Myc. המתווכים הנדירים של תגובת התכנות מחדש מבודדים FACS באמצעות תיוג עם נוגדנים כנגד יצרני פני התא Thy-1.2, Ssea-1 ו-Epcam.

טיהור מרקר פני תא בתיווך של התשומות לייצור תאי iPS מדגם אפשר לתכנת עכבר

דור של תאי גזע pluripotent מושרה מספק סיכויים מרתקים לגזירה של השתלות אוטולוגית. עם זאת, ההתקדמות במדינת pluripotent מחדש בידול מייגע עדיין מעכבת תרגום קליני. כאן אנו מתארים את הגזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה הישירה שלהם לתאים עצביים מושרה ובידול שלאחר מכן לשושלות עצביות.

גזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה ישירה שלהם לתאים להרחבה עצבי אב

הפרוטוקול המתואר כאן מפרט את השראת תוכנית המוגנית בפיברובלסטים עובריים של עכברים באמצעות ביטוי יתר של קבוצה מינימלית של גורמי שעתוק. טכנולוגיה זו עשויה להיות מתורגמת למערכת האנושית כדי לספק פלטפורמות למחקר עתידי של המטופואיזה, מחלות המטולוגיות והשתלת תאי גזע המטופויאטיים.

תכנות מחדש עכבר עוברי פיברובלסטים עם גורמי שעתוק כדי לגרום תכנית Hemogenic

בעוד מחלחלים מקרופאגים הם גויסו ללא הרף רקמות מבוגר מ מבשר במחזור, מקרופאגים תושב זרע הרקמה שלהם במהלך הפיתוח, שם הם מתוחזקים ללא קלט נוסף של אבות. אבות של מקרופאגים תושב זוהו לאחרונה. כאן, אנו מציגים שיטות למיפוי גורל גנטי של אבות מקרופאגים תושב.

זיהוי של אבות אריתרומיאלואידים צאצאיהם בעובר עכבר על ידי זרימת cytometry

כאן אנו מציגים שיטה חזקה לתכנת fibroblasts עובריים הראשי לתוך cardiomyocytes פונקציונלי. דרך ביטוי של GATA4, Hand2, Mef2c, Tbx5, מיר-1, ומיר-133 (GHMT2m) לצד עיכוב של TGF-β איתות. פרוטוקול שלנו יוצרת מכות cardiomyocytes מוקדם ככל 7 ימים שלאחר התמרה חושית עם עד 60% יעילות.

דיכוי של Pro-fibrotic איתות Potentiates בתיווך גורם התכנות של העכבר מתחלקים Fibroblasts לתוך Cardiomyocytes המושרה

פרוטוקול זה ממחיש את האינדוקציה של תוכנית המטוגניים בתוך הגוף האנושי פיברותקיעות על ידי ביטוי נאכף של הגורמים שעתוק GATA2, GFI1B ו-FOS כדי ליצור גזע המטפאות ובתאי קדמון.

הומוגניים מתיכנות מראש של האדם פיברותקיעות על ידי ביטוי שנאכף של גורמים שעתוק

כאן, אנו מתארים מערכת תכנות מחדש ישירה ממוטבת עבור מלנוציטים ומערכת אריזה מרוכזת של וירוסים ביעילות גבוהה המבטיחה תכנות מחדש ישיר חלק.

תכנות מחדש ישיר של פיברובלסטים של עכברים למלנוציטים

למד תכנות ישיר של שושלת מפיברובלסטים של עכברים לתאי אב אריתרואידיים. שיטה זו מאפשרת מניפולציה של גורמי שעתוק לחקר גורל תאים אריתרואידיים וייצור תאי דם אדומים מחוץ לגוף.

ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט Erythroid אבות

גלה סרטונים נוספים