Name: Assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: למדו שיטת מבחן תחרות צלחת להערכת דיכוי מחלות ב-Rhizoctonia solani באמצעות קומפוסט חי. שיטה זו מאפשרת סינון מהיר של חומרי קומפוסט לבקרה ביולוגית של פתוגנים בקרקע.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ורמונט החקלאי ניסוי תחנת תחרותי הפתח תוכנית VT-HO1609 מימנה את המחקר. פאנג לין השתמש בשיטת במסגרת עבודת הדוקטורט שלה טרשת נפוצה ב אוניברסיטת ורמונט6.

1. מכינים מראש
<ol><li>תרבות פטרייתי מאסטר (מבחן האורגניזם)<ol>
<li>סדר מן האוסף סוג התרבות האמריקאית, מיקרוביולוגיה אוסף9, לפי teleomorph Thanatephorus הקוקומריס (פרנק) (בקרת האוויר 10154) או מאיה 4031.</li>
		<li>לחלופין: לאסוף מבודד מקומיים כפי שנעשה על ידי המחברים. אחרים-שתילים, צנון אדום (צנון sativus) עובד טוב כמו צמח פיתיון; לאסוף את אדמת ממיקום ידוע יש היסטוריה של המתלים-off או שורש ריקבון הנגרם על ידי רבי solani. לזרוע זרעים בקרקע ולבודד מן השורש נגעים כאשר השתילים הם בני 3-4 שבועות.<ol>
<li>להסיר את השתילים האדמה ולשטוף עם מים מהברז. חפשו רקמות חום באזור hypocotyl בין העלים השורש (איור 1).</li>
			<li>השימוש סכין גילוח יחיד, להב לחתוך קטעים 1 ס מ של hypocotyl או שורש יש צבע חום. להשתמש מלקחיים מחוטא-להבה לטבול את מקטעי בריכוז 10% של מלבין ביתי 1 דקות, ואחריו 10 s שטיפה במים סטריליים. הערה: החלק העליון והחלק התחתון של צלחת פטרי סטריליות הם מיכלים שימושי עבור שלב זה.</li>
			<li>שימוש מחוטא-להבה מלקחיים כדי להעביר את הצמח חתיכות הפנימי של מגבת נייר כדי פאט יבש ולאחר מכן מקם על פני צלחת פטרי עם אגר מים (15 גרם ב 1 ליטר).</li>
			<li>מניחים על צלחת פטרי בתוך מיכל פלסטיק עם מכסה, דגירה בטמפרטורת החדר (כ 20 ° C). לנגב את הפנים של המכולה עם 10% באקונומיקה או 75% אתנול, לתת לו אוויר יבש לפני הוספת המנה.</li>
			<li>שמור מבודד אחסון לטווח ארוך על מדיה מינימלי של אגר כשהתירס מלוכסנים (17 גרם ב 1 ליטר) (ב 5 ° C).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58767/58767fig1.jpg"> איור 1: תסמיני המחלה. קרקע המכילה solani רבי התוצאה אחידה נביטה הממסד (משמאל). הסימפטומים על צנון שתילים להופיע נגעים חום-hypocotyl (מימין). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58767/58767fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<ol start="2"><li>השתמש פלטות אגר דקסטרוז תפוחי אדמה (39 גרם ב 1 ליטר) עבור inoculum עבור זה וזמינותו צלחת.<ol>
<li>ימסדו תרבות הבת של תרבות Rhizoctonia על אגר דקסטרוז תפוח אדמה אחד או יומיים לפני וזמינותו, כדי להבטיח זה מבוסס על הצלחת תרבות לפני וזמינותו. התחל את התרבות הבת העברת חלק קטן (קוטר 10 מ מ) solani ר מהתרבות מאסטר במרכז צלחת טריים של תפוחי אדמה דקסטרוז אגר (איור 2). הערה: תא למינארי או לנקות ספסל מעבדה עם אתנול באקונומיקה או 75% 10% כדי למזער את הסיכון של זיהום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>אוטוקלב תאים 25 מ ל מבחנות עם aliquots 10 מ"ל של מים מזוקקים (2 x מספר דוגמאות).</li>
</ol>2. הכנת דוגמאות למבחן
<ol><li>להוסיף שתי דגימות 0.5 ג'י עצמאית של כל מדגם מבחן קומפוסט 10 מ"ל מים בלוק במבחנות 25 מ. לנער את המבחנות בן לילה.<ol>
<li>תווית צינורות הבדיקה עם מספרים ייחודי, כל חבר של הזוג (הפניה) או B (דוגמה).</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר 24 שעות, להוסיף 1.5 גר' אגר רגיל 90 מ ל מים מזוקקים ב mLconical 125 שתי מבחנות.</li>
	<li>אוטוקלב בשתי מבחנות חרוט עם אגר, המדגם A של כל זוג למשך 20 דקות עם סביבה הפליטה איטי.</li>
	<li>לאחר החיטוי, מקם את המבחנות חרוט עם אגר לתוך אמבט מים 45 ° C עד שיגיעו שיווי משקל (כ- 30 דקות). אל תשים שום slurries מדגם באמבט מים עד זה יש מקורר עד 45 מעלות צלזיוס.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58767/58767fig2.jpg"> איור 2: איור של פרוטוקול. פקקים של רבי solani ממוקמים על בצלחות פטרי המכילות תמצית מים קומפוסט. הקוטר של צמיחה mycelial נמדד לאחר 1-2 ימים בעזרת מיקרוסקופ סטריאו לשיפור רזולוציה וניגודיות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58767/58767fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<ol start="5"><li>שופכים את slurry קומפוסט (הפניה בלוק) מדגם A לתוך אגר מותכת בקבוקי שתייה צידניות אגר A. מערבולת כדי לפזר קומפוסט לתוך אגר.</li>
	<li>שופכים את slurry קומפוסט (דוגמה חיה) מדגם B לתוך אגר מותכת בקבוקי שתייה צידניות אגר B. מערבולת כדי לפזר קומפוסט לתוך אגר.</li>
	<li>שופכים את התערובת של כל הבקבוק לתוך חמש צלחות פטרי פלסטיק שאינן 100 מ מ קוטר.</li>
	<li>תן הלילה קריר הצלחות אז אגר מתקשה.</li>
</ol>3. מוסיפים את האתגר Rhizoctonia
<ol><li>באמצעות הטכניקה aseptic, להעביר כל זוג של פלטות אגר מדגם בגודל שווה חתיכות של רבי solani (3-5 מ"מ corkborer עובד טוב להקים חתיכות בגודל שוות). סעו חתיכות של המושבה השוליים החיצוניים של המושבה כדי להבטיח תפטיר הוא גדל באופן פעיל. הערה: תא למינארי או לנקות ספסל מעבדה עם אתנול באקונומיקה או 70%-10%.</li>
	<li>תקופת דגירה הלוחות בטמפרטורת החדר של 1-2 ימים עד הגידול המושבה מגיע בערך בחצי הדרך לקצה של הלוחות A.</li>
</ol>4. למדוד רבי solani צמיחה
<ol><li>למדוד הרדיוס של תפטיר כל צלחת על 1 מ מ הקרובה עם סרגל ברור שטוח באמצעות מיקרוסקופ סטריאו עם תאורה המשודרת. הערה: תאורה עקיפה או כהה בשדה זה מקל לראות ולמדוד את hyphae שקוף. בשלב זה, אזורי של דיכוי יהיה גלוי סביב קומפוסט שברי בצלחת B אם הקומפוסט הוא מדכאים.</li>
	<li>להקליט את הרדיוס ב-3 מקומות לכל צלחת, לחשב ממוצע של שלושת לשמש כאמצעי נציג.</li>
	<li>הפחת הממוצע של הלוחות B מן הלוחות A. אם B &lt; ואז יש חיידקים לוחית B כי הם מדכאים את המחלה solani ר .</li>
	<li>לחלק את רדיוס רשע לפי מספר ימי אתגר לבטא יחידות של דיכוי יחסית כמו קצב, תפטיר מ מ ליום.</li>
</ol>

<ol><li>Gonzalez Garcia, G., Onco, M. A. P., Susan, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review.+Biology+and+systematics+of+the+form+genus+Rhizoctonia%5BTitle%5D)+AND+%22Spanish+Journal+of+Agricultural+Research%22%5BJournal%5D)">Review. Biology and systematics of the form genus Rhizoctonia.</a> Spanish Journal of Agricultural Research. 4 (1), 55-79 (2006).</li>
<li>Bonanomi, G., Antignani, V., Pane, C., Scala, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+soilborne+fungal+diseases+with+organic+amendments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Suppression of soilborne fungal diseases with organic amendments.</a> Journal of Plant Pathology. 89, 311-324 (2007).</li>
<li>Noble, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+and+benefits+of+soil+amendment+with+composts+in+relation+to+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Australasian+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Risks and benefits of soil amendment with composts in relation to plant pathogens.</a> Australasian Plant Pathology. 40, 157-167 (2011).</li>
<li>Wichuk, K. M., McCartney, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compost+stability+and+maturity+evaluation+-+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Civil+Engineering%22%5BJournal%5D)">Compost stability and maturity evaluation - a literature review.</a> Canadian Journal of Civil Engineering. 37, 1505-1523 (2010).</li>
<li>Alfano, G., Lustrato, G., Lima, G., Vitullo, D., Ranalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+composted+olive+mill+wastes+to+predict+potential+plant+disease+suppressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Characterization of composted olive mill wastes to predict potential plant disease suppressiveness.</a> Biological Control. 3, 199-207 (2011).</li>
<li>Fang, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biological+indicators+of+compost-mediated+disease+suppression+against+the+soilborne+plant+pathogen+Rhizoctonia+solani%22">Biological indicators of compost-mediated disease suppression against the soilborne plant pathogen Rhizoctonia solani</a>. , University of Vermont. M.S. Thesis (2015).</li>
<li>Bonanomi, G., Antignani, V., Capodilupo, M., Scala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+characteristics+of+organic+soil+amendments+that+suppress+soilborne+plant+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Identifying the characteristics of organic soil amendments that suppress soilborne plant diseases.</a> Soil Biology and Biochemistry. 42, 136-144 (2010).</li>
<li>Neher, D. A., Fang, L., Weicht, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecoenzymes+as+indicators+of+compost+to+suppress+Rhizoctonia+solani%5BTitle%5D)+AND+%22Compost+Science+and+Utilization%22%5BJournal%5D)">Ecoenzymes as indicators of compost to suppress Rhizoctonia solani.</a> Compost Science and Utilization. 25 (4), 251-261 (2017).</li>
<li>American Type Culture Collection. ATCC® Mycology Culture Guide. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx">https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx</a> (2018).</li>
<li>Berns, A. E., Phillip, H., Narres, H. -D., Burauel, P., Vereecken, H., Tappe, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gamma-sterilization+and+autoclaving+on+soil+organic+matter+structure+as+studied+by+solid+state+NMR%2C+UV+and+fluorescence+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Soil+Science%22%5BJournal%5D)">Effect of gamma-sterilization and autoclaving on soil organic matter structure as studied by solid state NMR, UV and fluorescence spectroscopy.</a> European Journal of Soil Science. 59, (2008).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

אנחנו יודעים ממחקרים קודמים, כי composts מסוימים יעילים דיכוי solani רבי , כי ההשפעות מדכאים הם עקב חיידקים חיים של קומפוסט, לא את המאפיינים והאביוטיים של קומפוסט6,8. השימוש autoclaving כאמצעי ' להרוג ' microbiota ביקורת כי זה משפיע הפחמן הכימיה של מדיה10. השווינו את השימוש autoclaving כדי סינון ואקום באמצעות נייר וטמן מס ' 1. טיפולים שלא היו לא מסונן ולא בלוק הראה הדיכוי הגדול של רבי solani הצמיחה6</sup...

Rhizoctonia מייצג את מתחם רחב של פטריות, של אילו Donk הקוקומריס Thanatephorus (פרנק) (anamorph = Rhizoctonia solani Kühn) היא המחלה גורמת root רוט, המתלים-off1. Rhizoctonia solani הוא של פתוגן אגרסיבי, saprophyte שיכולים לשרוד כמו sclerotia תחת בתנאי סביבה קיצוניים1. כתוצאה מכך, יש פיזור גלובלי והוא יכול לגרום למחלה על מגוון רחב של צמחים מארחים כולל סולניים, קטניות, מורכבים מצליבים וכתוצאה מכך רציני הפסדים כלכליים.
קומפוסט יש את היכולת הנמל סוכנים/מוצרים חדשים עבור מסוימים פתוגנים צמח2. עם זאת, לא כל composts דומים ולא משפיעים על כל הפתוגנים באופן דומה3. עץ מבוססי פחמן יש ליגנין גבוה יותר כדי תאית יחסי מאשר חציר או קש-פחמן המבוסס composts. רבי solani מעדיף זמינים פחמן נמצא קש. לעומת זאת, פטריות הדברה ביולוגית, כגון Trichoderma spp., יעילים יותר אם פחמן זמין פחות בקלות. מועיל פטריות וחיידקים לדשן יכול לדכא במחלות צמחים באמצעות תחרות, אנטגוניזם או ויסות גדילה הצמח3. הבדיקה המוצעת מזהה בעיקר אנטגוניזם שנוצרו על-ידי ייצור של אנטיביוטיקה, ecoenzymes או chelators הפוגעים בזכויות הפתוגן.
צמח bioassays הם תקן הזהב כדי לקבוע אם composts טובה או להרתיע גידול הצמח4. עם זאת, צמח bioassays הן זמן רב (שבועות עד חודשים) כדי להשלים את אשר עשוי להיות יותר זמן ממה הרצוי והוא דורש עוד עבודה כדי לחלץ צמחים בעלי שורשים כדי לכמת את החומרה של מערכות השורשים. וזהובה חזקים, אך מהיר יותר (ימים) מבחני יהיה אידיאלי עבור תוכניות בקרת איכות. המטרה של המאמר היא להפגין בדיקה מדויקת ומהירה יחסית כדי לנבא פוטנציאל המדכא של קומפוסט. השיטה הייתה בדוגמת אחרי אלפאנו. et al. 5 עם שתי חריגות, תמציות קומפוסט היו מדולל, אגר מים שימש במקום תפוחי אדמה דקסטרוז אגר (PDA). Solani ר גדל במהירות במדיה אגר מים פשוט ואילו PDA קידום התפתחותם של חיידקים ופטריות אחרים מזוהמים תרבות6.
זה וזמינותו צלחת מגישה כמחוון של דיכוי שחל על מגוון של פתוגנים צמח לשרוד בקרקע כמו saprophytes כולל solani ר7, Alternaria מוקדם פגע רע, Fusarium ווילט, כימשון root רוט Pythium root רוט. הצלחת התחרות וזמינותו שימושי למסך מגוון של מוצרים דשן המכיל קהילות של חיידקים זה לשמש הדברה ביולוגית סוכנים של פתוגנים בקרקע. וזמינותו היה אחד האינדיקטורים הכי עקבי של דיכוי המחלה ב קומפוסט מסחרי-מוצרים-6,-8. המוצרים נבחרו שלהם וריאציה מתכון, בגרות, ואת תהליך הייצור.

<table><tbody><tr><td>בקבוק חרוטי מזכוכית צרת צוואר הניתן לחיטוי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>10-040D</td><td>125 מ"ל</td></tr><tr><td>מבחנות זכוכית הניתנות לחיטוי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-925J</td><td>25 מ"ל</td></tr><tr><td>אגר מגורען מיובש</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>DF0145-17-0</td><td>500 גרם</td></tr><tr><td>כמות כפפות עמידות בחום</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>MEMGG1314WL</td><td>מספר מותגים זמינים</td></tr><tr><td>פרפילם (רצועות ברוחב 2-3 ס"מ)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>PM992 13-374-16</td><td>5 או 10 ס"מ רוחב עבודה</td></tr><tr><td>צלחות פטרי פוליסטירן חד פעמיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>R80116</td><td>מגיע בשרוולים של 20/ea או מארזים של 500</td></tr><tr><td>תפוחי אדמה מיובשים דקסטרוז אגר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>DF0013-15-8</td><td>מגיע בכמויות של 100, 500 ו-2000 גרם</td></tr><tr><td>שייקר הדדי ספסל</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>1227Y31</td><td>דגמים אחרים יעבדו</td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>ThermoScientific</td><td>S37363</td><td>5L</td></tr><tr><td>סרגל שקוף לשימוש כללי, שטוח, לפחות 10 ס"מ</td><td>כל</td><td></td><td>שימוש כלל מטרי</td></tr><tr><td>ATCC תרבות ATCC</td><td>אוסף תרבות סוג אמריקאי</td><td>ATCC 10154</td><td>teleomorph Thanatephorus cucumeris (פרנק) (ATCC 10154) או MYA 4031;</td></tr><tr><td>קלטת מעבדה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>15935</td><td>ניתן לחיטוי ונשלף, 1 אינץ' רחב מועדף</td></tr><tr><td>עמיד במים</td><td>סמן משרד או אספקה מדעית</td> טיפ <td>עדין שארפי</td><td>כתוב מספר מדגם על קלטת</td></tr></tbody></table>

assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות

A Plate Competition Assay As a Quick Preliminary Assessment of Disease Suppression

המטרה הייתה לפתח, לייעל את פשוט, זול ויעיל bioassay לזהות מחלה היכולת המדכא של קומפוסט ספציפיים כנגד קטילת פטריות Rhizoctonia solani. Solani ר הוא. חיידק של מגוון רחב של צמחים מארחים ברחבי העולם. הפטרייה שרד בקרקעות כמו saprophyte, גדל במהירות במדיה אגר מים פשוטים. צלחת וזמינותו היא שיטה מהירה כדי להשוות composts ליכולתם להאט את הצמיחה של ר' solani. וזמינותו מופיע גם עם דיכוי של פתוגנים אחרים פטרייתי קטילת לשרוד כמו saprophytes בקרקעות כגון Alternaria מוקדם פגע רע, Fusarium ווילט, כימשון root רוט Pythium root רוט.

קומפוסט סיים צריך להיות יציב, בוגר, שני התנאים אשר משמשים לסירוגין, כך שזה יכול להיות בבטחה הארוזים מועברים, ואת לא לגרום תופעות לוואי במהלך שלו יסתיים השתמש4. יציבות היא התנגדות הפירוק, בדרך כלל נקבע באמצעות מדדי פעילות מיקרוביאלית. מידות כלליות של נשימה מיקרובית יכול למדוד קומפוסט יציבות אך לא בהכרח מחלה דיכוי של פתוגן אגרסיבי ושל saprophyte כגון רבי solani7. מחקר זה התמקד בגרות אשר יסיק החומר מוכן לשימוש מסוים, ...

המוצג הוא פרוטוקול עבור assay תחרות הצלחת לזהות אם קומפוסט ספציפי הוא עשוי להכיל חיידקים ופטריות לדיכוי צמיחה של Rhizoctonia solani.

Assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות

The goal was to develop and optimize a simple, affordable, and effective bioassay to detect disease suppressive ability of a specific compost against ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח הקשורות לשליטה הביולוגית של פתוגנים צמחיים המועברים באדמה. תקן הזהב לבדיקת חומרים כמו קומפוסט הוא לקבל bioassay צמח כדי לבדוק אם זה רעיל לצמחים. עם זאת, זה לוקח שלושה שבועות.שיטה זו יכולה להיעשות בערך יומיים עד שלושה ימים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא פשוטה, סבירה ויעילה. מבחן זה הוא סינון מהיר של קומפוסט ספציפי כדי לדכא את הצמיחה של Rhizoctonia סולאני.עם זאת, ניתן להשתמש בהגם נגד פתוגנים צמחיים אחרים המועברים באדמה, כגון פוסריום, פיתיום ופיטופתוראס. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית משום שהיא דואגת לבודד ולשמור על תרבות טהורה של פטרייה תוך הימנעות מזיהום. הפגנת הליך הבידוד תהיה טיילור Readyhough, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי.אמה רייט, סטודנטית לתואר ראשון מהמעבדה שלי, תדגים את התחרות. כדי להתחיל, לזרוע זרעי צנון אדום באדמה ידוע שיש היסטוריה של מחלה הנגרמת על ידי R.solani. לאחר שלושה עד ארבעה שבועות, מוציאים את השתילים מהאדמה, ושטיפתם במי ברז.בעזרת סכין גילוח, חותכים מקטעים באורך סנטימטר אחד של ההיפוקוטיל והשורש בצבע חום. לאחר מכן, השתמש במטסים מעוקרים בלהבה כדי לטבול את המקטעים בתווית אקונומיקה של 10% למשך דקה אחת. לאחר מכן, לשטוף את המקטעים במים סטריליים.לאחר מכן, השתמש במדפים מעוקרים בלהבה כדי להעביר את המקטעים למגבת נייר. טופחים את הקטעים יבשים, ומעבירים אותם לצלחת פטרי עם אגר מים. מניחים את צלחת פטרי בתוך מיכל עם מכסה, ו דגירה את המקטעים בטמפרטורת החדר.כדי להקים תרבות בת, להעביר את אחד הקטעים למרכז צלחת טרייה של תפוח אדמה dextrose אגר. לאחר מכן, אוטוקלאב 25 מיליליטר מבחנות המכילות 10 מיליליטר של מים. הוסיפו שתי דגימות של 0.5 גרם של כל דגימת בדיקה לזוג מבחנות אוטומטיות עם 10 מיליליטר של מים סטריליים, ונערו את המבחנות בן לילה.לאחר 24 שעות, מוסיפים 1.5 גרם של אגר רגיל ו 90 מיליליטר של מים מזוקקים לזוג בקבוקי חרוט. לאחר autoclaving את flasks, למקם אותם לתוך 45 מעלות צלזיוס אמבט מים במשך 30 דקות. לאחר מכן, יוצקים את דגימת הייחוס autoclaved ואת המדגם החי לתוך אגר מותך.יוצקים את תערובות מכל בקבוק לתוך חמש מנות פטרי. כדי להגן על המיקרואורגניזמים הילידים, חשוב לא להוסיף את הקומפוסט בזמן שהגר חם מדי. לכן, לאפשר אגר להתקרר ל 45 מעלות צלזיוס לפני הוספת הקומפוסט.באמצעות טכניקה אספטית, להעביר חתיכות של R.solani לכל זוג צלחות מדגם. לאחר מכן, הדגירה את הצלחות בטמפרטורת החדר במשך יום עד יומיים. לבסוף, השתמש בסרגל ברור ושטוח ובמיקרוסקופ סטריאו כדי למדוד את רדיוס המיסליום בכל לוח למילימטר הקרוב ביותר.בפרוטוקול זה, תמציות קומפוסטים חיים דיכאו את הצמיחה R.solani באופן משמעותי יותר מאשר דגימות autoclaved, המוכיחים כי ההשפעה הייתה מיקרוביאלית ולא מבוססת חומרים מזינים. דיכוי נמדד כירידה בצמיחה בהשוואה לשליטה האוטומטית. הצמיחה לא הושפעה ממשך ההבשלה או הריפוי של הקומפוסט.הצמיחה הושפעה באופן משמעותי על ידי שיטת קומפוסט ומרכיבי מתכון, במיוחד עם vermicompost, תהליכי רוח, ומתכונים עם קליפת עץ. לאחר התפתחותה, טכניקה זו עשויה להיות מועמדת לאישור מסחרי של קומפוסט עבור תכונות מדכאות מחלות.

a-plate-competition-assay-as-quick-preliminary-assessment-disease

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Tregs הם מדכאי עוצמה של מערכת החיסון. קיים מחסור של סמנים משטח ייחודי להגדיר אותם, ולכן, הגדרות של Tregs הם פונקציונליים בעיקר. כאן אנו מתארים...

אנושי במבחנה דיכוי ככלי מיון עבור הכרה של מדינת מוקדם של חוסר איזון החיסון

בסרטון זה, אנו מתארים בדיקת קשירה תחרותית מבוססת ציטומטריה של זרימה כדי לזהות את האינטראקציות בין קולטן CXC Chemokine Receptor 4 (CXCR4) לבין הליגנד הטבעי CXC Chemokine Ligand 12 (CXCL12) המסומן באופן פלואורסצנטי, בנוכחות מולקולה קטנה המכוונת ל-CXCR4. דגירה של תאים המבטאים CXCR4 עם ריכוזי מולקולות קטנות נמוכות יותר מאפשרת לקשירה מסוימת של CXCR4-CXCL12, אשר יורדת בהדרגה עם עלייה הדרגתית בריכוזי מולקולות קטנות.

בדיקת קשירה תחרותית לזיהוי תרכובות המשבשות אינטראקציות קולטן-ליגנד

סרטון זה מדגים בדיקה לסינון תרכובות אנטי-מיקרוביאליות שמחסלות ביעילות ביופילמים באמצעות לוחית יתד. המתודולוגיה מנטרת את המצב המטבולי של הביופילם לאחר הטיפול בתרכובות מיקרוביאליות, מה שמקל על קביעת ריכוז מיגור הביופילם המינימלי.

בדיקת ביופילם של צלחת יתד להקרנת חומרים אנטיבקטריאליים

אנו מתארים assay איכותי לפקח תחרות חיידקים מתווכת על...

Assay חזותי לפקח תחרות קטריאלי T6SS בתיווך

כאן אנו מתארים cytotoxicity הסלולרי ומבחני infectivity סיבוב בודדים המאפשרים סינון המהיר ומדויק של תרכובות כדי לקבוע cytotoxicity הסלולרי (CC 50) וIC 50 ערכים נגד WT וסמים עמידים HIV-1.

הקרנה מהירה של HIV ההפוך טרנסקריפטאז וintegrase המעכבים

עמידות לתרופות לטיפולים ממוקדים היא נרחבת והצורך לזהות מנגנונים של התנגדות - לפני או אחרי הופעה קלינית - היא קריטי להדרכת אסטרטגיות ניהול קליניות חלופיות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגזירה כמה קווים עמידים לתרופות במבחנה עם רצף לזרז גילוי המנגנונים אלה.

הטמעה של<em&gt; במבחנה</em&gt; תרופות מבחני התנגדות: למקסם את הפוטנציאל לחשיפת מנגנוני התנגדות קלינית רלוונטיים

כתב יד זה מתאר שיטה CRISPR-Cas9 מבוססי מקובצים באופן קבוע Interspaced קצר Palindromic חוזר (CRISPR) לחקירה פשוט ומהיר של התפקיד של גנים מרובים המועמד בהתפשטות תאים לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) ב במקביל. טכניקה זו היא מדרגית, יכול להיות מיושם במבנים אחרים סרטן התא גם כן.

החקירה של תלות גנטית באמצעות מבחני תחרות המבוססות על CRISPR-Cas9

שיטת ההרג הזה opsonophagocytic משמש כדי להשוות את היכולת של תאים חיסוניים phagocytic להגיב ולהרוג חיידקים בהתבסס על טיפולים שונים ו/או תנאים. באופן קלאסי, assay הזה משמש תקן זהב להערכת אפקטור פונקציות של נוגדנים שהועלו נגד חיידק בשם opsonin.

Opsonophagocytic הריגה הנועד להעריך תגובות אימונולוגי נגד פתוגנים חיידקיים

בהינתן כי GPCRs הם מטרות druggable אטרקטיבי, gpcr ליגנד הקרנה היא הכרחית ובכך לזיהוי תרכובות עופרת ולמחקרים de aniטיזציה. לקראת מאמצים אלה, אנו מתארים את פרסטו-טנגו, פלטפורמת משאב מקור פתוח המשמש ליצירת פרופיל סימולטני של גיוס β-arrestin2 ארעי ב כ 300 GPCRs באמצעות שיטת העיתונאי מבוסס TEV.

חקירה מקבילה של גיוס β-Arrestin2 עבור ליגיון הקרנה בקנה מידה מוקטן של הסרט באמצעות שיטת הטנגו-פרסטו

מערכת ניתוח זרימה לבדיקות מולטיפלקס מבוססות חרוזים המספקת קריאה של שני עיתונאים שימשה לפיתוח בדיקות נטרול סרולוגיות ונוגדנים מולטיפלקס שיכולות למדוד בו זמנית נוגדני IgG ו- IgM מנטרלים עבור SARS-CoV-2.

בדיקת נטרול מהירה, מולטיפלקס כפולה IgG ו- IgM SARS-CoV-2 עבור מערכת ניתוח זרימה מבוססת חרוזים מרובי קסים

למדו שיטת מבחן תחרות צלחת להערכת דיכוי מחלות ב-Rhizoctonia solani באמצעות קומפוסט חי. שיטה זו מאפשרת סינון מהיר של חומרי קומפוסט לבקרה ביולוגית של פתוגנים בקרקע.

Assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות

גלה סרטונים נוספים