Name: מודל Murine של וירוס דנגה-הנגרמת חריפה דלקת קרום המוח-כמו מחלה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: למדו פרוטוקול להדבקת עכברי ICR תת-חסרי חסינות בנגיף דנגה בטיטר נמוך ליצירת מודל דלקת קרום מוח. שיטה זו מאפשרת מחקר מנגנוני נוירופתוגנזה וסינון מועמדים לטיפול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה היה נתמך על ידי מענקים ממשרד המדע והטכנולוגיה (MOST107-2321-B-038-001) ואת מימון הפנים הפנימי 106TMU-CIT-01-2, טאיפיי, טייוואן.

פרוטוקולים ניסיוניים של מחקר בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים וועדת המשתמש של המרכז הרפואי הביטחון הלאומי (מספר IACUC: 16-261), על פי ההנחיות שנקבעו על ידי משרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן.
1. הליך זיהום
<ol><li>להכין DENV2 לא מותאם (זן PL046) מניות9 (התקבל במקור מן המרכזים לבקרת מחלות בטייוואן, החל 2.5 x 107 אל 1 x 109 pfu/mL).</li>
	<li>לדלל את המניה וירוס 1 x 106 pfu עם רוזוול פארק הזיכרון מכון (RPMI) 1640 בינוני לנפח הכולל של 40 μl.</li>
	<li>מילוי מזרק אחד 0.3 mL מצויד עם מחט של 30 גרם עם 10 μL (2.5 x 105 pfu) של וירוס מדולל, ולמלא 0.3 עוד מזרק מדגם mL מצויד במחט 30 G עם 30 μl (7.5 x 105 pfu) של וירוס מדולל.</li>
	<li>
להחזיק את 7 יום בן היניקה העכבר ICR ולנהל את השלבים הבאים.
	<ol>
<li>עבור הזרקת גרם, להחזיק את העכבר בתנוחה נוטה על ידי לחיצה על מאורקל בין האצבע המדד והאגודל, ו תאיים להזריק 10 μL של וירוס מדולל לאזור למדא, הנקודה בהצטלבות של משונן ותפר למדוגת . שישה עשרה</li>
		<li>לאחר הזרקת גרם, להחזיק את העכבר במצב פרקדן באמצעות האצבע המדד והאגודל ו intraperitoneally להזריק 30 μl של וירוס מדולל בעדינות לתוך הabdomenl murine. הערה: כדי להימנע מקניבליזם, 75% אלכוהול משמש ליצירת אובדן זמני של תחושת הריח של האם. בנוסף, הציע לכסות את הציפוי בצואה ובשתן של אימם.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הניחו את עכברי היניקה בחזרה בכלובים שלהם והמתינו 5 דקות כדי לבדוק את בטיחות הגירוי שלהם עם האוויקות של עכברים, כולל הליכה וחלב אם יניקה. הערה: לרוב, עכברים להפגין הגירוי הרגיל של פעילות הפוסט, אין נראה כל השפעות מזיקות בעקבות האתגר הטכני. במהלך ניסוי זה, החיות היו מתוחזקים על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים וועדת המשתמש של המרכז הרפואי הביטחון הלאומי, טייוואן.</li>
	<li>להעריך את ההתקדמות היומית של העכברים במונחים של משקל הגוף (באמצעות איזון יקרוגרם), מחלה נגיפית חריפה של דלקת קרום המוח (על ידי מחלה הבקיע כפי שמתואר בסעיף 2), ושיעור ההישרדות9,10,11 ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. ניקוד מחלות
<ol><li>לעקוב אחר כיתה של דלקת קרום המוח הנגיפית חריפה כמו. הקצאת ניקוד של 0 לעכברים בריאים; 1 לעכברים עם תסמיני מחלה קלה, כולל ירידה במשקל, ניידות מופחתת וכיוון גוף הגיבן; 2 לעכברים המוצגים התקף ללימבי; 3 לעכברים את החולשה הלימבית התערוכה, כולל נע עם קושי האיבר הקדמי או חולשה האיבר האחורי; 4 לשיתוק; . חמש למוות הערה: לאחר הניקוד מגיע 3, תסמיני המחלה נחשבים להתפתח במהירות.</li>
	<li>להתוות את הניקוד של המחלה, על פי שלב 2.1, עבור כל יום כדמות עקומה מבוססת באמצעות ממוצע ± SD של תוצאות המבחן היומי בכל קבוצה.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

הזיהום denv זוהה ב-cn של מטופלים חמורים דנגה3,17, מציע את האפשרות של ביטוי של דלקת קרום המוח נגיפי חריפה התרחשה במהלך פתוגנזה דנגה. כאן, אנו מדווחים על מודל vivo murine של זיהום DENV לחקר מעורבות של התפקוד העצמי של ה-CN דנגה, במיוחד עם דגש על DENV המושרה דלקת קרום המוח ויראלי כמו מחלות. לעומת הדגמים הקודמים, במיוחד עבור זיהום אחד במסלול (לעירוי בלבד, תוך הצפק בלבד, או גרם בלבד), סיכוייו גבוה מאוד (1 x 108 pfu) של denv מנוצל עכברים המוסמכת. עם זאת, ב עכ...

DENV, וירוס המועברות על ידי משפחת פליורידיי , מכיל גנום ה-RNA הגיוני מקודד שלושה חלבונים מבניים נגיפי (capsid, טרום קרום, מעטפה) ו שבעה חלבונים לא מבניים ויראלי (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B , ו-NS5). ארבעת סוגי הסרווים של DENV (DENV1-4), אשר להדביק כ 390,000,000 אנשים מדי שנה, לגרום נטל גלובלי אף על פי ממשלות ביים מאמצים משמעותיים לקראת וקטור יתושים ושליטה מחלות1. כיום, חיסונים להגנה ותרופות אנטי-ויראליות טיפוליות בשלבי פיתוח ודורשות אימות לטווח ארוך יותר2. בתחום הקליני, למרות חולה דנגה עם זיהום של ה-CN הוא נדיר, זה צריך להיות בחקר נוסף כדי להבין את הגיוון של פיתוח מחלת דנגה3. יש צורך בחקירה ובאימות נוספים; בעיקר, ארגון הבריאות העולמי (אשר) כלל את המעורבות של ליקוי המוח, כגון ליקוי קוגניטיבי, עוויתות, אנצפלופתיה, ודלקת קרום המוח, בסיווג חמור דנגה3,4. בניית מודלים בעלי חיים של זיהום DENV היא הכרחית לחקר נוירופתוגנזה של זיהום DENV.
ליצירת זיהום ה-CN של DENV, מספר מחקרים ביצעו מסלולים שונים של זיהום DENV, כולל (1) גרם חיסונים של C57BL/6 עכברים שקיבלו 4 x 103 פלאק-להרכיב יחידות (pfu) של DENV3 המותאם ל5, 6, (2) הצפק פנימי של עכברים balb/c שקיבלו 7 x 104 pfu של מבחנה נוירומותאמת DENV47, (3) גרם החיסון של עכברים שוויצריים שקיבלו 1 x 105 pfu של vivo neuroadapted DENV18, ו (4) גרם ו-הצפק משותפת של עכברי מוצצים ICR שהתקבלו 1 x 106 pfu של לא מותאם DENV29. על פי ממצאי מחקרים אלה5,6,7,8,9, הזיהום denv בעכברים התוצאה שכפול נגיפי במוח, המוביל נגיפי חריפה תסמונות של דלקת קרום המוח, שינויים התנהגותיים מלווים בשיתוק איברים וחוסר יציבות, מערכת העצבים העצבית והדלקת, דליפת פלזמה כללית ומקומית באמצעות מחסום הדם-מוחי (BBB) וללא השפעה. כל התוצאות ממחקרים אלה5,6,7,8,9 הראו את היכולת של denv להדביק את המוח ואת אינדוקציה של דלקת קרום המוח הנגיפי חריפה כמו מחלה לאחר הידבקות.
בהתבסס על הממצאים הנוכחיים שלנו9,10,11,12,13,14,15, יצרנו מודל murine של זיהום denv כמו ב vivo פלטפורמה כדי לבחון את היעילות הטיפולית של סוכני ממוקדות/גורמים נגד שכפול נגיפי, כמו גם רעילות נוירו. כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול מנוצל כדי ליצור העכבר icr מוסמך החוצה כדי ללמוד זיהום של הפונקציה וכלה לפקח על פיתוח נזקי עם הרבה הקצבאות שנגרמו על ידי denv. התוצאות מציגות את ההתקדמות המשמעותית של המחלה כמו דלקת קרום המוח בעכברים נגועים DENV באופן תלוי זמן.

<table><tbody><tr><td>מכון הזיכרון רוזוול פארק 1640 בינוני (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>וירוס מדלל</td></tr><tr><td>0.3 מ"ל מזרק אינסולין&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>הזרקה תוך מוחית ותוך צפקית</td></tr><tr><td>Microbalance</td><td>METTLER TOLEDO's LabX</td><td>AL104</td><td>עכבר משקל</td></tr><tr><td>DENV2 לא מותאם (זן PL046)</td> <td>המרכזים לבקרת מחלות של טייוואן-עכבר</td><td></td> <td>מדביק</td></tr><tr><td>המכון לחקר הסרטן (ICR) עכבר יונק</td><td>BioLASCO טייוואן ושות', בע"מ</td> <td>-</td> <td>מודל העכברים שלנו</td></tr></tbody></table>

מודל murine של וירוס דנגה-הנגרמת חריפה דלקת קרום המוח-כמו מחלה

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

וירוס דנגה (DENV), וירוס המועבר על-ידי היתושים המועברים על ידי יתוש, עלול לגרום למחלה חמורה הידועה בשם קדחת דנגה מדמם, אשר מאופיין על ידי סיבוכים קטלניים עקב דליפת פלזמה, מיימת, היתוך, מצוקה נשימתית, . דימום חמור וליקוי איברים כמה מקרים של זיהום DENV להציג ביטויים נוירולוגיים; עם זאת, מחקרים לא חקרו באופן נוירופתוגנזה המושרה של DENV יותר. במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול להשתמש חיסוני מוסמך ICR (המכון לחקר הסרטן) העכבר לחקירת אינדוקציה של מערכת העצבים המרכזית (CN) זיהום עם DENV, ואחריו את ההתקדמות של דלקת קרום המוח נגיפי חריפה כמו מחלה.

חמור קדחת דנגה הקשורים סיבוכים נוירולוגיים דווחו בחולים עבור פתוגנזה דנגה4. למרות המקרים האלה הם נדירים במרפאה, יצירת מודל מורלא מוסמך של זיהום DENV ניתן להשתמש לא רק לימוד immunopathogenesis אלא גם לחקירת זיהום של הפונקציה, נוירודלקת, נוירורעילות, ו ויראלי חריפה מחלה כמו דלקת קרום המוח. במחקר זה, על פי המודל הנוכחי שלנו9,10,11,12,</...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת ICR מוסמך (המכון לחקר הסרטן) מודל murine של זיהום מערכת העצבים המרכזית כדי להציג את ההתפתחות של נוירופתיה. ניטור ויראלי חריפה הפרעות נצאליטיות על ידי עשרות מחלה זהה יכול להתבצע על מראה דנגי וירוס המושרה נוירופתיה ב vivo.

מודל Murine של וירוס דנגה-הנגרמת חריפה דלקת קרום המוח-כמו מחלה

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

פרוטוקול זה של מודל מחלה אתה רואה זיהום וירוס דנגי במוח להפוך פלטפורמה in vivo להקרנת וקטורים ויראליים מארחים הקשורים נוירופתוגנזה. שלא כמו מודלים קודמים, המודלים שלנו משתמשים בכלים של הזיהום עם טיטר ויראלי נמוך, כדי להדביק את המכון immunocompetent לחקר הסרטן יונק עכברים עבור אינדוקציה של הולדת מחלה דמוית אנצפליטית. הדגמת ההליך תהיה לינג-ג'ינג שן, מועמד לדוקטורט מהמעבדה שלי.לפני תחילת הליך ההדבקה, לדלל וירוס דנגי לא מותאם שני מלאי, כדי אחד פעמים 10 כדי לוח החמישי להרכיב יחידות לכל 40 microliters של ריכוז בינוני RPMI 1640. לאחר מכן, לטעון מזרק אחד 0.3 מיליליטר מצויד מחט 30 מד עם 10 microliters של וירוס מדולל. ומזרק אחד של 0.3 מיליליטר המצויד במחט 30 מד, עם 30 מיקרוליטרים של וירוס לכל בעל חיים.למסירה בין-מערכתית של הנגיף, לחצו על הנביאה שבין האגודל לאצבע המורה כדי לרסן בעדינות עכבר בן שבעה ימים של המכון לחקר הסרטן במצב נוטה ולהזריק את נפח ה-10 מיקרוליטר של הנגיף המדולל לאזור למדה, בצומת התפר הסגיטלי והלדואידי. לאחר הזרקת intercerebral, להשתמש באגודל ובאצבע המורה להחזיק את העכבר במצב supine, בעדינות תוך ניתוחית, להזריק את נפח 30 microliter של וירוס מדולל, לתוך הבטן מורין. לקבלת ניקוד של התקדמות המחלה, להקצות ציון של אפס עד חמש לכל עכבר מחוסן מדי יום, על פי הציון של מחלות דלקת המוח נגיפית חריפה, ולתכנן את הציונים עבור כל יום כדמות מבוססת עקומה, באמצעות פלוס הממוצע מינוס סטיית התקן של ציוני המבחן היומי בכל קבוצה.בהשוואה לשינויים במשקל הגוף שנמדדו בעכברים מחוסנים מדומים ובינוניים בלבד, בעלי חיים מחוסנים של נגיף דנגי מפגינים ירידה במשקל הגוף בכל נקודת זמן במהלך הניסוי. בנוסף, בעלי חיים נגועים בנגיף דנגי מדגימים עלייה משמעותית בתותבות הגב של תחושת הבטן, התקפים לימביים, חולשה לימבית, שיתוק ומוות בהשוואה לתסמינים המוצגים על ידי בעלי חיים מחוסנים מדומים. ואכן, עכברים נגועים דנגי להפגין ירידה תלוית זמן בשיעורי ההישרדות כי הוא לא נצפה בבעלי חיים מחוסנים מדומה, המאשר את הקמתו של מודל זיהומיות של וירוס דנגי בתוך מערכת העצבים המרכזית המדגים את ההתקדמות של מחלות דלקת המוח נגיפית חריפה כמו בעכברים.לנקב את האתר הלא נכון עלול לגרום חסימת מחט על ידי הציון ואת הצפה של פתרון הנגיף מחוץ לראש, וכתוצאה מכך זריקה נכשלה זיהום נכשל. בעקבות ההליך, דגימות מוח ניתן לקצור עבור נזק פתולוגי, חדירת תאים חיסוניים, וניתוח שכפול ויראלי על ידי המטוקסילין ו אאוסין הכתמת זרימת ציטומטריה, ו assay היווצרות פלאק, בהתאמה. מודל המורין החיסוני שלנו, מספק פלטפורמה לחקר המנגנונים הפתוגניים של הידבקות בנגיף דנגי, לפיתוח חיסונים נגד וירוס דנגי, או תרופות נגד וירוסים דנגי.וירוס דנגי הוא פתוגן ברמה ביו-בטיחותית 2, וככזה, יש להשלים את כל הניסויים בנגיף זה במעבדה מוסמכת בתחום הביו-בטיחות של בעלי חיים.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

וידאו זה מדגים את הניקוד אינדוקציה קליני במודל חיה של טרשת נפוצה: כרוני, relapsing Encephalomyelitis אוטואימונית ניסיונית התובע חולדות. המחלה, הנגרמת על ידי חולדות מחסנת עם תחליב המכיל חוט השדרה שלם חולדה adjuvant פרוינד של שלמה, מציג סימנים קליניים דומים מחלות אנושיות.

אינדוקציה ניקוד קליני כרוני, relapsing Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית

שימוש בלוציפראז ובמערכות הדמית vivo (IVIS) כרומן האמצעי לזיהוי נקודתי קצה מחלה לפני התפתחויות קליניות להתרחש. IVIS אפשר לנו לחזות בזמן אמתו את הפלישה של וירוסי אנצפליטיים מעל ימים מרובים, מתן מודל מחלה מדויקת יותר למחקר עתידי. זה גם אפשר לנו לזהות את התכונות המגנות הפוטנציאליות של תרופות אנטי וחיסונים מהר יותר ממודלים של בעלי חיים מנוצלים כיום. היכולת לנצל חיות בודדות מעל נקודתי זמן מרובות מבטיחה דרישות מופחתות בבעלי חיים, עלויות ותחלואה הכוללת לבעלי החיים מנוצלים להבטיח אמצעי הומני יותר ויותר...

איתור vivo מערכות הדמיה (IVIS) של וירוס אנצפליטים נוירו פולשנית

הסרטון מדגים השראת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי על ידי הזרקת שילוב של גליקופרוטאינים אוליגודנדרוציטים מיאלין ושחפת מיקובקטריום בלתי פעילה. המודל מאפשר לחוקרים לחקור מנגנוני מחלה ולבחון התערבויות טיפוליות.

אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

סרטון זה מדגים את הדור של מודל עכבר עם זיהום CNS. גור יונק מוזרק עם הנגיף הן תוך גולגולתית והן intraperitoneally. הנגיף מתפשט, מדביק את מערכת העצבים המרכזית וגורם למוות תאי עצב ודלקת. הגור מוערך עבור סימפטומים של זיהום עם התקדמות המחלה.

יצירת מודל מורין עם זיהום במערכת העצבים המרכזית

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

סרטון זה מדגים את השראת השראת התקפים הנגרמים על ידי טיפול בעכבר שנדבק בנגיף דלקת המוח העכברי של טיילר (TMEV). העכבר הנגוע, שיש לו נוירונים מעוררי יתר, חשוף לגירויים פיזיים חיצוניים. חשיפה זו גורמת למתח, מה שמוביל לפעילות חשמלית חריגה בתאי העצב, מה שגורם להתקפים.

טיפול בהתקפים הנגרמים על ידי עכבר

וירוסים שפעת A (IAVs) הם חשובים פתוגנים הנשימה האנושית. כדי להבין את פתוגניות של IAVs וכדי לבצע בדיקות פרה גישות חיסון הרומן, חייתיים מחקה פיזיולוגיה אנושית נדרשים. כאן, אנו מתארים שיטות להערכת iav ב פתוגנזה, התגובות ההורמונאלית, יעילות החיסון באמצעות מודל של העכבר של זיהום.

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

כאן נתאר שיטת יצירת מודל של Zika הנוצרות על-ידי וירוס microcephaly עכבר. פרוטוקול זה כולל שיטות חיסון גרם עובריים neonatal, מבוגר-שלב של הנגיף Zika.

יצירת מודלים העכבר עבור וירוס Zika-induced הפרעות נוירולוגיות באמצעות הזרקת גרם אסטרטגיות: עובריים Neonatal, למבוגרים

הפרוטוקול המוצג כאן מאפשר רבייה של חיקוי נרחב של חומר אפור של שתי ההמיספרות הקליפתיות בחולדות אגוטי אפלות זכריות בוגרות. השיטה כוללת השתלה תוך-מוחית של קטטר, חיסון תת-אקליני נגד מיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין, והזרקה תוך-מוחית של תערובת ציטוקינים פרו-דלקתית דרך הצנתר המושתל.

מודל חולדה של דמיאלינציה קליפת המוח הנרחבת הנגרמת על ידי הזרקה תוך מוחית של ציטוקינים פרו דלקתיים

המטרה של הפרוטוקול היא להדגים את הטכניקות המשמשות לחקירת מחלה נגיפית על ידי בידוד וכימות וירוס Zika, מאיברים מרובים בעכבר לאחר ההדבקה.

בידוד וקוונפיקציה של וירוס Zika ממספר איברים בעכבר

זיהום תוך-מוחי בנגיף האנצפלומיאליטיס מורין (TMEV) בעכברי C57BL/6 משכפל רבים מהתסמינים הקליניים המוקדמים והכרוניים של דלקת המוח הנגיפית ואפילפסיה שלאחר מכן בחולים אנושיים. מאמר זה מתאר את זיהום הנגיף, הסימפטומים וההיסטופתולוגיה של מודל TMEV.

מודל לאפילפסיה של אטיולוגיה זיהומית באמצעות וירוס Murine Encephalomyelitis של Theiler

למדו פרוטוקול להדבקת עכברי ICR תת-חסרי חסינות בנגיף דנגה בטיטר נמוך ליצירת מודל דלקת קרום מוח. שיטה זו מאפשרת מחקר מנגנוני נוירופתוגנזה וסינון מועמדים לטיפול.

מודל Murine של וירוס דנגה-הנגרמת חריפה דלקת קרום המוח-כמו מחלה

גלה סרטונים נוספים