Name: גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: למדו פרוטוקול ניהול אוראלי בזחלי Galleria mellonella לחקר תגובות מערכת החיסון המולדת. שיטה זו מאפשרת ניתוח אינטראקציות חיידקיות ללא ניסיון קודם ומספקת חלופה אתית למודלי מכרסמים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומן על ידי את DFG (SPP1656), קבוצת אימון המחקר DFG 1708, את Bundesministerium לדנציג Bildung und Forschung (BMBF), ומרכז גרמנית עבור זיהום מחקר (DZIF).

<ol><li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD%3A+lessons+from+mouse+infection+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li>
<li>Muniz, L. R., Knosp, C., Yeretssian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+antimicrobial+peptides+during+homeostasis%2C+infection%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Intestinal antimicrobial peptides during homeostasis, infection, and disease.</a> Frontiers in Immunology. 3, 310(2012).</li>
<li>Ivanov, I. I., Honda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+commensal+microbes+as+immune+modulators%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Intestinal commensal microbes as immune modulators.</a> Cell Host Microbe. 12 (4), 496-508 (2012).</li>
<li>Ayres, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammasome-microbiota+interplay+in+host+physiologies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Inflammasome-microbiota interplay in host physiologies.</a> Cell Host Microbe. 14 (5), 491-497 (2013).</li>
<li>Champion, O. L., Titball, R. W., Bates, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+G.+mellonella+Larvae+to+Provide+Reliable+and+Reproducible+Results+in+the+Study+of+Fungal+Pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fungi+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Standardization of G. mellonella Larvae to Provide Reliable and Reproducible Results in the Study of Fungal Pathogens.</a> Journal of Fungi (Basel). 4 (3), (2018).</li>
<li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Insect Science. , (2016).</li>
<li>Buchmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+Innate+Immunity%3A+Clues+from+Invertebrates+via+Fish+to+Mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Evolution of Innate Immunity: Clues from Invertebrates via Fish to Mammals.</a> Frontiers in Immunology. 5, 459(2014).</li>
<li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galleria+mellonella%3A+A+Novel+Invertebrate+Model+to+Distinguish+Intestinal+Symbionts+From+Pathobionts%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Galleria mellonella: A Novel Invertebrate Model to Distinguish Intestinal Symbionts From Pathobionts.</a> Frontiers in Immunology. 9 (2114), (2018).</li>
<li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. , 1-16 (2016).</li>
<li>Bolouri Moghaddam, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+the+Galleria+mellonella+innate+immune+system+is+maximized+by+the+co-presentation+of+diverse+antimicrobial+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The potential of the Galleria mellonella innate immune system is maximized by the co-presentation of diverse antimicrobial peptides.</a> Biological Chemistry. 397 (9), 939-945 (2016).</li>
<li>Casanova-Torres, A. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Signaling+and+Antimicrobial+Peptide+Expression+in+Lepidoptera%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">Immune Signaling and Antimicrobial Peptide Expression in Lepidoptera.</a> Insects. 4 (3), 320-338 (2013).</li>
<li>Mukherjee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galleria+mellonella+as+a+model+system+for+studying+Listeria+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Galleria mellonella as a model system for studying Listeria pathogenesis.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (1), 310-317 (2010).</li>
<li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunological+and+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunological and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li>
<li>Miyata, S., Casey, M., Frank, D. W., Ausubel, F. M., Drenkard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+Galleria+mellonella+caterpillar+as+a+model+host+to+study+the+role+of+the+type+III+secretion+system+in+Pseudomonas+aeruginosa+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Use of the Galleria mellonella caterpillar as a model host to study the role of the type III secretion system in Pseudomonas aeruginosa pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2404-2413 (2003).</li>
<li>Waidmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteroides+vulgatus+protects+against+Escherichia+coli-induced+colitis+in+gnotobiotic+interleukin-2-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Bacteroides vulgatus protects against Escherichia coli-induced colitis in gnotobiotic interleukin-2-deficient mice.</a> Gastroenterology. 125 (1), 162-177 (2003).</li>
<li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+Mobilome-Driven+Genome+Diversification+in+Mouse+Gut-Associated+Bacteroides+vulgatus+mpk%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Extensive Mobilome-Driven Genome Diversification in Mouse Gut-Associated Bacteroides vulgatus mpk.</a> Genome Biology and Evolution. 8 (4), 1197-1207 (2016).</li>
<li>Hermann-Bank, M. L., Skovgaard, K., Stockmarr, A., Larsen, N., Molbak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Gut+Microbiotassay%3A+a+high-throughput+qPCR+approach+combinable+with+next+generation+sequencing+to+study+gut+microbial+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">The Gut Microbiotassay: a high-throughput qPCR approach combinable with next generation sequencing to study gut microbial diversity.</a> BMC Genomics. 14, 788(2013).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OmpA+variants+affecting+the+adherence+of+ulcerative+colitis-derived+Bacteroides+vulgatus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+and+Dental+Science%22%5BJournal%5D)">OmpA variants affecting the adherence of ulcerative colitis-derived Bacteroides vulgatus.</a> Journal of Medical and Dental Science. 57 (1), 55-64 (2010).</li>
<li>Freitak, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+maternal+transfer+of+bacteria+can+mediate+trans-generational+immune+priming+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">The maternal transfer of bacteria can mediate trans-generational immune priming in insects.</a> Virulence. 5 (4), 547-554 (2014).</li>
<li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Research. 29 (9), 45(2001).</li>
<li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4392(2012).</li>
<li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4392(2012).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

המודל mellonella ג הוא מודל נפוצות להערכת גורמים התקפה אלימה חיידקי זיהום סיסטמי הגישה21. מאז רבים פתוגנים וחיידקים להיכנס המארח דרך תוואי אוראלי מושבת או זיהום, תובנות חדשות צריך להימצא להעריך mellonella ג כמודל עבור קולוניזציה אוראלי ולדלקת.
האפשרות האחורי mellonella ג בין 15-37 ° C הוא יתרון גדול שכן מודלים יונקים ביותר לשמור על חום הגוף של 37 ° C5. הזחלים mellonella ג ניתן לרכוש מהספקים השונים, אך הממסד של ...

Microbiome מעיים היא מרכיב חיוני לצורך תחזוקה של הומאוסטזיס, כרוכה בשתי תגובות מערכת החיסון מולדים, מסתגלת1,2. הקהילה commensal microbiota מאופיינת המרכיבים השונים commensal הראשי: אנחנו חיים איתם בסמביוזה המקנים השפעות מועילות על ידי פונקציות חשובות immunomodulatory, ו pathobionts זה יכולות להיות השפעות מזיקות ועוצמתיים מארחת, לקדם, לעורר דלקת מעיים3,4. מחקרים רבים בנושא אנחנו חיים איתם בסמביוזה ו pathobionts והשפעתם על המערכת החיסונית מארח התפרסמו בעיקר לומדת תגובות מערכת החיסון מסתגלת.
מאז מחקרים אלה כרוכים חיות רבות החקירות והגנה על החלפה של בהמות המשמשות לניסויים היא גוברת טובת הציבור, אנו שואפים למצוא מודל חלופי כדי לאפשר הקרנה של בקטריאלי שונה immunogenic מאפיינים. חרקים, במיוחד mellonella גלריה (galleria), הם מודל חלופי בשימוש נרחב במחקר זיהום. Mellonella ג משלב יתרונות שונים כגון עלויות נמוכות, תפוקה גבוהה; זה מאפשר אוראלי מנהלה של חיידקים, תוואי החשיפה טבעי, וזה מאפשר זיהום סיסטמי5,6. Mellonella ג נוסף מאפשר הדגירה ב 37 מעלות צלזיוס, אשר טמפרטורת הגוף הפיזיולוגיות של יונקים ו אופטימום בשביל התקפה אלימה חיידקי גורם ביטוי5. היתרון העיקרי של mellonella ג הוא מערכת החיסון המולדת שנשמרת זה מאפשר את מאפליה של האני-עצמי ושל מקודד מגוון של קולטנים זיהוי דפוס כמו apolipophorin או hemolin opsonin6, 7. על זיהוי חיידק, mellonella ג ניתן מפעילים שונים התגובות החיסון במורד הזרם ההורמונאלית. זה יכול לגרום תגובות סטרס חמצוני, מפרישים מינים חמצן תגובתי (ROS) הכוללת את הפעילות של NOS (סינתאז אוקסידאז חנקתית) ו- NOX (nadph ל אוקסידאז)6,8. בנוסף, mellonella ג מפעילה תגובה פפטיד מיקרוביאלית חזק (אמפר), כשהתוצאה היא ההפרשה של תערובת של מגברים שונים כגון gloverin, moricin, cecropin או gallerimycin כמו defensin6, 89,,10. באופן כללי, מגברים יש ירידה לפרטים מארח די רחבה נגד חיידקים גראם גראם שליליים ופטריות ויש לספק מענה חזק מאז חרקים חסרים כל תגובה מסתגלת10. Gloverin המגבר פעיל נגד חיידקים ופטריות, מעכב הממברנה החיצונית היווצרות6,11. Moricins התערוכה תפקידם מיקרוביאלית נגד חיידקים גראם גראם שליליים על ידי לחדור את הקרום ויוצרים9,נקבובית11. Cecropins לספק פעילות נגד חיידקים ופטריות, permeabilize את קרום באופן דומה כמו9,moricins10. Gallerimycin הוא פפטיד דמוי defensin עם תכונות אנטי פטרייתי9. מעניין, נמצא כי השילוב של cecropin ו- gallerimycin היה פעילות סינרגטיים נגד e. coli10.
בשל אופיים קל לשימוש mellonella ג הזחלים הם מודל זיהום שמרבים להשתמש בו כדי להעריך פתוגניות חיידקי. בפרט, מחקרים הנתונים המתקבלים ג mellonella לתאם עם נתונים שהושגו עכברים מהתמיכה של הכוח של מודל זה מארח חלופי. התברר כי הכי פתוגניים אשר נגרמו מהזנים אליהם של ליסטריה במודל זיהום של עכברים להוביל גם שיעורי התמותה גבוהים יותר mellonella ג לאחר זיהום סיסטמי. עוד יותר, פחות ארסית אשר נגרמו מהזנים אליהם התברר להיות גם פחות ארסית המודל של mellonella ג 12. תצפיות דומות שנעשו עם הפטריות פתוגניים האנושי קנדידה אלביקנס. התקפה אלימה של שונות אלביקנס ג זנים יש להיות מוערך על-ידי זיהום סיסטמי ובפיקוח עוקבות של הישרדות זחל. זני avirulent העכבר היו גם avirulent או הייצוגיים מופחתת התקפה אלימה ב mellonella ג, ואילו זנים מידבק עכבר להוביל גם גבוהה התמותה זחל13. המודל mellonella ג נוסף ניתן להשתמש כדי לזהות גורמים פתוגניות של מערכת הפרשת סוג 3 של Pseudomonas aeruginosa14.
מאז רוב החקירות מעורבים mellonella ג התמקדו הגורמים התקפה אלימה באמצעות גישה זיהום סיסטמי היינו מעוניינים במיוחד לספק שיטה מתאימה לניתוח של המעי commensals ב פיטום אוראלי מודל שבו אנחנו ניתן להחיל מינון שונות של חיידקים לכל הזחלים, לא רק להתבונן שיעור התמותה הזחל אך לנתח המחפשים אחר תגובות מערכת החיסון המולדת כדי לשמור על הומאוסטזיס מעיים.
השיטה שלנו מסייע להגדיל את השימוש mellonella ג כמודל חלופי מאז אנו משלבים את היישום של חיידקים וניתוח של RNA הביטוי. זה שימושי לא רק לחזק את המשמעות של מחקרים פתוגנזה חיידקי כאשר כולל הניתוח של תגובות חיסוניות לאחר ניהול אוראלי, לא רק את התצפית של שיעורי תמותה לאחר זיהום סיסטמי. השיטות שלנו מאפשר הניתוח של המאפיינים immunogenic של בקטריאלי פתוגניים שאינם commensals, שכן הוא מספק תנאים מורכבים יותר מאשר תרבית תאים על-ידי המציע מכשול המעי באורגניזם חי.

<table><tbody><tr><td>צינורות 1.5 מ"ל</td><td>Eppendorf</td><td>0030120086</td><td></td></tr><tr><td>100 bp סולם DNA&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15628019</td><td></td></tr><tr><td>1-Bromo-3-Chloropropane (BCP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B9673</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"ל צינורות</td><td>Eppendorf</td><td>0030120094</td><td></td></tr><tr><td>2x Mangomix</td><td>Bioline</td><td>BIO-25033</td><td>Colony PCR</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות</td><td>Greiner Bio-One</td><td>210 261</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Biozym</td><td>840004</td><td></td></tr><tr><td>שעוות דבורים</td><td>Mixed-Store.de</td><td>&nbsp;-</td><td></td></tr><tr><td>מרק עירוי לב מוח</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>CM1135</td><td></td></tr><tr><td>CloneJET PCR ערכת שיבוט</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1232</td><td>וקטור שיבוט לשברי 16S</td></tr><tr><td>גריסי</td><td>תירס Osterm&uuml; hle Naturkost GmbH</td><td>306</td><td>גידול אורגני</td></tr><tr><td>Difco LB Agar, מילר (Luria-Bertani)</td><td>Becton Dickinson</td><td>BD</td><td></td></tr><tr><td>Difoco LB Broth, מילר (Luria-Bertani)</td><td>Becton Dickinson</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>ערכת הסרת DNA ללא DNA&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>244510</td><td>&nbsp; עיכול דנאז</td></tr><tr><td>שמרים מיובשים</td><td>רפונזל</td><td>&nbsp;-</td><td>גידול אורגני</td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט (DPBS) של Dulbecco</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14040</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>VWR</td><td>20821.330</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>W252506</td><td></td></tr><tr><td>דבש</td><td>Osterm&uuml; Naturkost GmbH</td><td>487</td><td></td></tr><tr><td>איזופרופנול&nbsp;</td><td>VWR</td><td>20842.330</td><td></td></tr><tr><td>Lightcycler 480 Instrument II</td><td>Roche מערכות מולקולריות</td><td>5015278001</td><td></td></tr><tr><td>LightCycler 480 Multiwell Plate 96,</td><td>לבן Roche מערכות מולקולריות</td><td>4729692001</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מיקרו-מזרק ידנית עם תצוגה דיגיטלית</td><td>מכשירים מדויקים בעולם</td><td>DMP</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Fine+ U-100 מזרק אינסולין 0.3 x 8 מ"מ</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>324826</td><td>טיט למתן אוראלי</td></tr><tr><td>, לא מזוגג</td><td>VWR</td><td>410-9327&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-400-518</td><td></td></tr><tr><td>מים ללא נוקלאז'ים&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10977035</td><td></td></tr><tr><td>שקיות Oxoid AnaeroGen&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>AN0025A</td><td>איכות וכמות של פסי RNA</td></tr><tr><td>PCR</td><td>Biozym</td><td>710970</td><td></td></tr><tr><td>עלי, משטח שחיקה לא מזוגג</td><td>VWR</td><td>410-9324&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>אנזים הגהה של Phusion&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F553S</td><td></td></tr><tr><td>פריימרים</td><td>ביומרים</td><td>&nbsp;-</td><td></td></tr><tr><td>PureYield פלסמיד Miniprep System</td><td>Promega</td><td>A1222</td><td></td></tr><tr><td>QuantiFast SYBR Green PCR kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>204056</td><td>qPCR למדידת מספר עותק חיידקי</td></tr><tr><td>QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>204156</td><td>qRT-PCR למדידות ביטוי גנים</td></tr><tr><td>ערכת שעתוק הפוך של QuantiTect&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>205311</td><td>cDNA סינתזה</td></tr><tr><td>צינורות בדיקת Qubit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32856</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsHS DNA kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32851</td><td>כימות של דגימות פלסמיד ו-cDNA פלואורומטר</td></tr><tr><td>Qubit Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>Q33226</td><td>כימות דגימות פלסמיד ו-cDNA</td></tr><tr><td>RNase-ExitusPlus</td><td>AppliChem</td><td>A7153</td><td></td></tr><tr><td>מעכב Rnasin Ribonuclease</td><td>Promega</td><td>N2511</td><td></td></tr><tr><td>אבקת חלב דל שומן</td><td>Sucofin</td><td>&nbsp;-</td><td></td></tr><tr><td>SYBR בטוח DNA ג'ל כתם</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>S33102</td><td></td></tr><tr><td>מגיב TRI&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T9424</td><td></td></tr><tr><td>סירת שקילה</td><td>VWR</td><td>10803-148</td><td></td></tr><tr><td>קמח חיטה</td><td>Osterm&uuml; hle Naturkost GmbH</td><td>6462</td><td>גידול אורגני</td></tr></tbody></table>

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים study commensal-induced

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

החקירה של הפוטנציאל immunogenic של חיידקים commensal על המערכת החיסונית המארח הוא מרכיב חיוני אחד כאשר הלומדים אינטראקציות מארח-חיידק מעיים. היא מבוססת היטב commensals שונים התערוכה פוטנציאל שונים כדי לעורר את המערכת החיסונית מעיים של המארח. בחקירות אלה כרוכים בעלי חוליות, בעיקר מכרסמים. מאז לחששות הגוברים אתית מקושרים עם ניסויים מעורבים בעלי חוליות, יש ביקוש גבוה למודלים תחליפים הגעה.
כאן, אנו מספקים מודל הניהול אוראלי Galleria mellonella באמצעות חיידקים פתוגניים שאינם commensal והערכה אפשרי של הפוטנציאל immunogenic של commensals על המערכת החיסונית mellonella ג . נדגים כי mellonella ג הוא מודל חלופי הגעה חלופיות שימושי המאפשר הניתוח של commensals עם פוטנציאל immunogenic שונים כגון בקטריודיס vulgatus ו- Escherichia coli. מעניין, החיידקים הציג אין השפעה הרג על הזחלים, בדומה יונקים. תגובות מערכת החיסון של mellonella ג היו דומות עם חוליות תגובות מערכת החיסון המולדת, לערב ההוקרה של חיידקים וייצור של מולקולות מיקרוביאלית. אנו מציעים כי mellonella ג היה מסוגל להחזיר את האיזון microbiota הקודם, אשר כידוע אנשים יונקים בריאים. למרות מתן תגובות מערכת החיסון מולדים דומות mellonella ג והן חולייתנים, mellonella ג הנמל לא מערכת חיסונית אדפטיבית. מאז מרכיבי מערכת החיסון המולדת ובדוקים אבולוציונית ששומרו, המודל מאפשר ניתוח prescreening, הראשון של מאפיינים immunogenic חיידקי.

המודל זיהום hemolymph mellonella ג בשימוש נרחב כדי לנתח את הגורמים התקפה אלימה של מגוון ענק של פתוגנים. רוב המדידות כוללים הניתוח של הזחלים התמותה, אשר היא שיטה קלה למדי. יחד עם זאת, שיטה זו לא לאפשר מסקנות לגבי תגובות מערכת החיסון באופן כללי וקשר את התוצאות של תגובות חיסוניות mellonella ג עם מנגנונים חיסוניים חוליות. המודל המינהל אוראלי mellonella ג לעומת רק לעתים רחוקות משמש עבור זיהום אוראלי או התיישבות הזחלים בשל הקשיים להשגת המינון המדויק זיהום<sup class="x...

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור מודל הניהול אוראלי בעזרת הזחלים mellonella גלריה (galleria) , כיצד לאפיין המושרה תגובות מערכת החיסון המולדת. באמצעות פרוטוקול זה, חוקרים ללא ניסיון מעשי תהיה אפשרות להשתמש mellonella ג שיטת פיטום.

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

הפרוטוקול שלנו מרחיב את השימוש ב- G.mellonella ממודל זיהום מערכתי למודל המאפשר ניהול חיידקים דרך המסלול האוראלי הטבעי. G.mellonella הוא מודל חלופי מתאים מכרסמים בניתוח סימני ההיכר שונים של אינטראקציות מיקרו פוסט innate כמו הזחלים יכולים לשמש חיידקים פתוגניים אנושיים. התחל בהעברת הביצים המוטות על ידי עש בוגר לשתי קופסאות ליטר המכילות מצע עש שעווה, ב 30 מעלות צלזיוס, בחושך.לאחר שבוע עד שבועיים, להעביר 25 גרם של זחל המכיל מצע לתוך מצע טרי, כאשר זחלים קטנים זעירים הופכים גלויים. לסנכרן את הזחלים לאחר שבועיים בהתאם לגודלם, לקבוצות של 30 עד 40 זחלים במיכלי שני ליטר חדשים על מצע עש שעווה. לאחר שבועיים, בחר זחלים לניסוי לפי משקל.שימוש רק בזחלים חיוורים ומהירים עם מסה של 180 עד 200 מיליגרם. כדי להאכיל בכוח את הזחלים, לטעון מזרק אינסולין עם מחט קהה לב ליישום אוראלי, עם אחד פעמים 10 עד החיידק השביעי לכל 10 microliters של DPBS לכל זחל. טען את המזרק לתוך משאבת מיקרו-מזרק.המתן לזחל כדי לפתוח את חלקי הפה שלו לפני החדרת המזרק בזהירות בין הזחלים ואספקת החיידקים. כאשר כל הזחלים ניזונים, הדגירה את בעלי החיים בחושך ב 37 מעלות צלזיוס, בין שעה ל 24 שעות. לעיבוד זחלים, לנקות מכסה המנוע בטיחות עם אתנול וריסוס ריאגנט למניעת זיהום RNase.הצמד להקפיא את הזחל החי בחנקן נוזלי. הומוגניזציה של כל זחל קפוא באמצעות מרגמה ועלי ונפח קטן של חנקן נוזלי. כאשר הופק הומוגונט אבקה, להעביר את homogenate לסירת המתנה חד פעמית ולחכות החנקן הנוזלי להתאדות.כאשר כל הזחלים כבר homogenized, לערבב את homogenates אבקת עם מיליליטר אחד של TRIzol בצינור שני מיליליטר. להחגירה את התערובת בטמפרטורת החדר במשך שעה אחת. בסוף הדגירה, גלולה הומוגנית על ידי צנטריפוגה.העבר את העל-טבעי לצינור חדש. מערבבים את העל-טבעי עם 200 מיקרוליטרים של 1-ברומו-3-כלורופרופן, או BCP. מערבולת ודגירה במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, ואחריו דגירה של 10 דקות על קרח.בסוף הדגירה השנייה, צנטריפוגה BCP הוסיף תגובה ולהעביר את השכבה השקופה העליונה לתוך צינור חדש, שני מיליליטר. לזרז את RNA של השכבה העליונה שהועברה עם 500 microliters של isopropanol על ידי ערבוב והפך את הצינור במשך חמש דקות. ואז לאסוף את RNA לזרז על ידי צנטריפוגה.לשטוף את גלולת RNA מזרז עם 500 microliters של 75% אתנול ולייבש את RNA במשך חמש עד 10 דקות בטמפרטורת החדר. כאשר האתנול התאדה, להוסיף 100 microliters של מעכבי ריבונוקלאאז במים ללא גרעין גלולת RNA מיובשת, בזהירות מערבולת הצינור עד גלולה מומס לחלוטין. למדוד את איכות וכמות RNA לפי פרוטוקולים סטנדרטיים, להבטיח כי יחס 260 כדי 280 הוא כ 2, ואת היחס 260 כדי 230 הוא בטווח של שניים עד 2.2.לאחר מכן השתמש חמישה מיקרוגרם של RNA מבודד עבור עיכול DNase וניתוח ביטוי גנים, על פי פרוטוקולים סטנדרטיים. G.mellonella הוא מסוגל לנקות את הכוח הראשוני האכיל עומס חיידקי עד חיידקים לא ניתן לגילוי. עם מספרי העתקת הגנים של שנות ה-16 הן של B.vulgatus והן של E.coli ירד באופן משמעותי בתוך 24 שעות.קומנסל מנוהל זחלי G.mellonella לגרום ביטוי גנים RNA של גנים שונים סמן חסינות innate. לדוגמה, מולקולות זיהוי LPS, אפוליפופורין והמולין באים לידי ביטוי בדרך כלל יותר בזחלים מנוהל E.coli לעומת B.vulgatus מנוהל זחלים. כמו כן, הייצור של מיני חמצן וחנקן תגובתי מווסתים בחוזקה על האכלת כוח E.coli בהשוואה B.vulgatus, כמו גם ביטוי גנים GST נוגד חמצון.בנוסף, ביטוי פפטיד מיקרוביאלי דיפרנציאלי הוא המושרה חזק יותר לאחר ניהול E.coli מאשר בתגובה B.vulgatus כוח האכלה. זכור להשתמש רק בריא, לבן, במהירות נע זחלים, להשתמש בסבלנות במהלך האכלה בכוח, כדי למנוע הדגשת הזחלים לכלול את כל הפקדים הדרושים. ההפעלה של סמנים חיסוניים G.mellonella ניתן לקבוע ישירות על ידי בדיקות פעילות RUS או GST ואת השפע של ANPs ניתן לקבוע על ידי בדיקות עיכוב צמיחה חיידקי.טכניקה זו יכולה לשמש ככלי הקרנה עבור חיידקים קומנסליים ופתוגניים ולחקור סימביומים מעיים ופתוביומים ללא הקרבה של בעלי חוליות רבים. השתמש תמיד בציוד המגן האישי המתאים בעת עבודה עם חנקן נוזלי, BCP או חומרים TRIzol.

a-galleria-mellonella-oral-administration-model-to-study-commensal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

זיהום haemocolic אוראלי ותוך של זחלים של עש השעווה הגדולה...

החרקים<em&gt; גלרית mellonella</em&gt; כדגם זיהום רב עצמה כדי לחקור פתוגנזה קטריאלי

הזחל של עש mellonella Galleria שעווה הוקם לאחרונה כמודל vivo בללמוד זיהום pneumophila הלגיונלה. הנה, אנחנו מדגימים טכניקות בסיסיות לאפיין את הפתוגנזה של הלגיונלה בזחלים, כוללים חיסון, מדידה של אלימות ושכפול חיידקים, כמו גם הפקה וניתוח של hemocytes הנגוע.

שימוש<em&gt; Mellonella Galleria</em&gt; כאורגניזם מודל לחקר<em&gt; הלגיונלה pneumophila</em&gt; זיהום

Mellonella גלריה (galleria) משמש מודל הגעה עבור המופץ קנדידה. כאן, אנחנו מפרטים את הזיהום פרוטוקול ולספק נתונים התומכים לאפקטיביות של הדגם.

לדוגמא Galleria mellonella Waxworm זיהום קנדידה המופץ

גלריה מלאבלה הוקמה לאחרונה כמודל מבחינה מוסרית, זולה, ומקובלת מבחינה אתית עבור קומפלקס השחפת של החיידק . כאן אנו מתארים ולהדגים את הצעדים שננקטו כדי ליצור זיהום מוצלח של G. מלובלה עם biלומילאוקטריה בואוויס bcg lux.

השימוש חסרי חוליות גלריה מלאבלה כמודל זיהום לחקור את מתחם שחפת של פטרת

מחקר זה מציג מסגרת מתוקננת לאופטימיזציה של מודלים של זיהום G. mellonella לשימוש בהערכה אנטי-מיקרוביאלית פרה-קלינית. יישום מודל G. mellonella כחלק מצנרת פיתוח אנטי-מיקרוביאלית פרה-קלינית עשוי להפחית את מספר התרכובות הלא יעילות המתקדמות לניסויים קליניים.

Galleria mellonella כמודל סינון אנטי-מיקרוביאלי

הנגיף הסינציאלי הנשימתי האנושי (HRSV) יכול לגרום לברונכיוליטיס חמורה בתינוקות צעירים. חלק מהפתוגנזה של מחלת HRSV חמורה נגרמת על ידי התגובה החיסונית של המארח. גירוי של תאי חיסון אנושיים ראשוניים עם HRSV מספק מערכת מודל מהירה וניתנת לשחזור לחקר הפעלה של מסלולים דלקתיים וזיהום.

מודל במבחנה לחקר התגובות החיסוניות של תאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי לזיהום בנגיף סינציאלי נשימתי אנושי

בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטות להעברה יעילה של קווי תאי מקרופאגים של עכברים עם siRNAs באמצעות מערכת המעבורת Amaxa Nucleofector 96-well, לעורר את המקרופאגים עם ליפופוליסכריד ולנטר את ההשפעות על ייצור ציטוקינים דלקתיים.

באמצעות RNA-התערבות לחקר התגובה החיסונית המולדת בהמקרופאגים עכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירה והדמיה של זיהום חיידקי מקומי בשלפוחית האוטית של דג הזברה.

הדמיה לא פולשנית של התגובה החיסונית המולדת בדגם דג הזברה הזחל של<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; זיהום

גירוי עצב הוואגוס הוכח כבעל יעילות חזקה להפחתת דלקת היקפית. כאן, אנו מציגים פרוטוקול גירוי עצב תועה שונה המאפשר בדיקות נוספות של המנגנונים האנטי דלקתיים הכולינרגיים בתגובות דלקתיות מוגבלות.

הגברת Recovery Time וירידה מינהל LPS לחקר העצב התועה מנגנוני גירוי בתגובות דלקתיות מוגבל

גישה זו מתוארת זיהוי בזמן אמת של התגובה החיסונית מולדת ופצעו עורית, Staphylococcus aureus זיהום של עכברים. מאת LysM בהשוואת-EGFP עכברים (אשר מחזיקים נויטרופילים פלורסנט) עם LysM-EGFP crossbred immunodeficient עכבר זן, נוכל לקדם את ההבנה שלנו של זיהום ופיתוח של גישות כדי להילחם זיהום.

דגם העכבר כדי להעריך מולדת התגובה החיסונית לזיהום Staphylococcus aureus

למדו פרוטוקול ניהול אוראלי בזחלי Galleria mellonella לחקר תגובות מערכת החיסון המולדת. שיטה זו מאפשרת ניתוח אינטראקציות חיידקיות ללא ניסיון קודם ומספקת חלופה אתית למודלי מכרסמים.

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced

גלה סרטונים נוספים