Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in <em>Bacillus subtilis</em> Spores

Juan Wen; Raymond Pasman; Erik  M.M. Manders; Peter Setlow; Stanley Brul

doi:10.3791/59388

ויזואליזציה של Germinosomes, את הקרום הפנימי בנבגים Bacillus subtilis

JoVE Journal
Bioengineering

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Bioengineering

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

ויזואליזציה של Germinosomes, את הקרום הפנימי בנבגים Bacillus subtilis

Full Text

10,612 Views

08:58 min

April 15, 2019

DOI: 10.3791/59388-v

Juan Wen¹, Raymond Pasman¹, Erik M.M. Manders*^2,3, Peter Setlow*⁴, Stanley Brul*¹

¹Molecular Biology and Microbial Food Safety, Swammerdam Institute for Life Sciences,University of Amsterdam, ²Van Leeuwenhoek Centre for Advanced Microscopy, Swammerdam Institute for Life Sciences,University of Amsterdam, ³Confocal.nl BV., ⁴Dept. of Molecular Biology and Biophysics,UConn Health

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

קולטן germinant אשכול חלבונים ב- 'germinosomes' בתוך הקרומית הפנימית של Bacillus subtilis נבגים. אנו מתארים פרוטוקול באמצעות מיקרוסקופ ברזולוציה סופר כתב פלורסנט חלבונים כדי להמחיש germinosomes. הפרוטוקול מזהה החולקות הממברנה הפנימית נבג מוכתמים מעדיפים לצבוע הממברנה FM4-64.

מיקרוסקופ תאורה מובנה ברזולוציית-על, 3D-SIM, היא טכניקה חדשנית להדמיה של חלבוני כתב פלואורסצנטיים של אשכולות קולטני נביטה בממברנות נבגים. באמצעות הליכים אלה, פתרון ללא תחרות של לוקליזציה נביט ונבגים פנימיים השומנים ניתן להשיג. הטכניקה תוכח על ידי דוקטורנט חואן וון וסטודנט לתואר שני במדעים ריימונד פסקמן מהמעבדה שלנו.

לפני תחילת ההליך, לנקות כיסויים דיוק גבוה עם חומצה הידרוכלורית טוחה אחת במשך 30 דקות באמבט מים רועד בעדינות, ואחריו שתיים, חמש דקות שוטף במים מסוג אולטרה 1. לאחר הכביסה השנייה, מניחים את הכיסויים ב 100% אתנול במשך כשלוש דקות לפני ייבוש כיסויים ואימות הבהירות שלהם. לאחר מכן, מיקרוסקופ זכוכית נקי מחליק עם 70% אתנול למשך דקה אחת לפני שהוא מאפשר לשקופיות להתייבש ולאמת את הבהירות שלהן.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos